Microscopia Introducción •

Microscopia
• Introducción
Los procesos tecnológicos han posibilitado la investigación cada vez más profunda de la materia viva y los
procesos vitales. Por ello el microscopio que data de finales del siglo XVI, desempeño un papel fundamental
contribuyendo a la elaboración de hipótesis y teorías que condujeron a duraderas polémicas.
El microscopio, es un instrumento óptico destinado a observar de cerca objetos extremadamente diminutos, la
combinación de sus lentes produce el efecto de la que se mira, aparezca con dimensiones extraordinariamente
aumentadas haciéndose perceptible lo que no lo es a simple vista.
• Objetivos
• Determinar el estudio de la microscopia
• Conocer las diferentes clases de microscopio
• Determinar las partes del microscopio
• Marco Teórico
_Microscopia: Es la exploración mediante el microscopio, de elementos pequeños que no son observables a
través del ojo desnudo. La microscopia en cuanto ha permitido descubrir los microbios de las enfermedades
infecciosas y conocer la intima estructura celular de los órganos y de los tejidos, ha proporcionado unos
servicios extraordinarios al área de salud.
Microscopia óptica:
• Microscopio óptico compuesto.−
Sistema óptico
♦ OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.
♦ OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.
♦ CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
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♦ DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
♦ FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
Sistema mecánico
♦ SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
♦ PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.
♦ CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular,..
♦ REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos.
♦ TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que
consigue el enfoque correcto.
Manejo y uso del Microscopio Óptico
• Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. Si el
microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones.
• Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
• Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la
preparación es de bacterias.
• Para realizar el enfoque:
• Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto debe
hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en
la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
• Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el
macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque
fino.
• Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un
poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la
imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. El
objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de
percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite
de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.
• Empleo del objetivo de inmersión:
• Bajar totalmente la platina.
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• Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a
visualizar y donde habrá que echar el aceite.
• Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40.
• Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
• Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.
• Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En
ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
• Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y la
preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
• Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el objetivo
40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la
platina y repetir la operación desde el paso 3.
• Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor
aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se
debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.
• Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica. Comprobar también
que el objetivo 40x está perfectamente limpio.
• Microscopio de campo claro.−
Consiste en una fuente luminosa, un condensador que enfoca los rayos de luz sobre la muestra una platina
sobre la cual se coloca la muestra, un objetivo y un ocular a través del cual se puede observar directamente el
espécimen.
La utilidad del microscopio óptico reside en su capacidad de magnificación y lo que es más importante, su
capacidad de resolver detalles estructurales. El poder de resolución es la capacidad de una lente o sistema
óptico de producir imágenes separadas de objetos que se encuentran muy próximos.
• Microscopio de contraste de fase.−
Permite observar células y tejidos sin colorear y por eso resulta especialmente útil para el examen de células
vivas y cortes gruesos de material plástico no coloreados.
Existen pequeñas diferencias del índice de refracción en diferentes partes de la célula y en distintas partes de
una muestra de tejido. La luz que pasa por regiones de mayor índice de refracción experimenta una deflexión
y queda fuera de fase con respecto al haz principal de las ondas de luz.
Modificaciones del microscopio de contraste de fase son:
_Microscopio de interferencia: Permite también la cuantificación de la masa de un tejido
_Microscopio de interferencia diferencial: Útil especialmente para estudiar las propiedades de superficie de
las células y otros elementos biológicos
• Microscopio de fluorescencia.−
Permite detectar moléculas que fluorescen, es decir, que emiten luz de longitud de onda, que se encuentra
dentro del espectro visible, cuando son expuestas a la luz ultravioleta. Se usa este microscopio para revelar
moléculas fluorescentes naturales como la vitamina A, pero como este tipo de moléculas no es numeroso, su
aplicación mas difundida es para revelar una fluorescencia agregada a sustancia, como en el caso de la
detección de antígenos o anticuerpos en procedimientos de coloración inmunecito química.
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• Microscopio de barrido con focal.−
Es un sistema relativamente nuevo se usa para estudiar la estructura de sustancias biológicas.
En este microscopio se utiliza un rayo láser de iluminación que es fuertemente convergente y por lo tanto
produce un punto de barrido muy poco profundo. La luz que emerge del punto es dirigida a un tubo foto
multiplicado, donde es analizada. Se utiliza un sistema de espejos para mover el rayo láser a través del
espécimen iluminando un solo punto por vez.
Se registren los datos de cada punto y se guardan en una computadora, luego se puede llevar la información a
un monitor de alta resolución para crear una imagen visual. Su ventaja es su capacidad de tomar imágenes de
la muestra en cortes ópticos muy finos.
• Microscopio de luz ultravioleta.−
Se utiliza una fuente de luz ultravioleta y depende de la absorción de esa luz por las moléculas de la muestra.
Sus resultados se registran fotográficamente.
No es posible examinar en forma directa el espécimen en el ocular, ya que la luz ultravioleta daña la retina.
Este método sirve para detectar ácidos nucleicos, específicamente bases puricas y pirimidicas del nucleótido.
También es útil para detectar proteínas que contienen ciertos aminoácidos.
• Microscopio de polarización.−
Es una simple modificación del microscopio óptico, pero el espécimen es atravesado por luz paralizada y se
usa otro polarizador que se hace rotar para detectar la orientación molecular en muestra de tejidos.
Microscopía Electrónica:
• Microscopio electrónico de transmisión (MET).−
Se utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz visible para producir una imagen.
Los electrones deben pasar a través de la muestra y chocar luego con la placa fotográfica. La formación de la
imagen en el microscopio electrónico depende del hecho de que algunos electrones no atraviesan el espécimen
y en consecuencia, no llegan a la placa fotográfica, sino que experimentan una deflexión provocada por
sustancias de alta densidad que encuentran normalmente en la muestra o han sido agregadas a ellas durante el
proceso de fijación y tinción.
• Microscopio electrónico de barrido.−
En este los electrones no atraviesan la muestra en el proceso de formación de imágenes. En cambio, se explora
la superficie de la muestra desplazando un haz de electrones, estos, al reflejarse de la superficie son recogidos
por un detector y procesados de manera tal que puede verse en imagen tridimensional en una pantalla de
televisión.
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Partes de un microscopio:
1.− Pie o base; da estabilidad
2.− Columna; sirve para sostener las diferentes partes
3.− Platina; allí se coloca el objeto que se quiere estudiar
4.− Carro; colocado sobre la platina permite desplazar la preparación
5.− Brazo; sirve para tomar el microscopio y se encuentran dos tornillos reguladores
6.− El tornillo macrométrico; para efectuar movimientos verticales grandes que permiten un enfoque rápido
7.− El tornillo micrométrico; permite movimientos lentos para afinar y precisar el enfoque
8.− El tubo; esta unido al brazo, en su parte superior hay un orificio donde se coloca el ocular y en la parte
inferior se encuentra el revolver
9.− Revólver; donde van enroscados los objetivos
10.− Ocular, esta en la parte superior del tubo, cumple la función de aumentar la imagen
11.− Objetivos; son una serie de lentes montados sobre cilíndricos de diferentes tamaños que se enroscan en
el revólver
12.− Espejo; permite dirigir la luz ya sea natural o artificial
13.− Condensador; es un sistema de lentes situado debajo de la platina que permite variar la iluminación del
campo y concentrar la luz sobre el objeto en observación
14.− Diafragma o iris; es un disco situado en la parte inferior del condensador que regula la cantidad de luz
Mantenimiento y precauciones
• Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación,
asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con
su funda.
• Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se
ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un
armario para protegerlo del polvo.
• Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de
filtro o, mejor, con un papel de óptica.
• No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
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• Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con
pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasará el
papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el
objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol−acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo
de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.
• No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina, revólver y
condensador).
• El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para
prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del
mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.
• Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido, secarlo con un
paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.
• Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al acabar el
curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.
• Conclusión
Los diferentes tipos de microscopio y sus diversos usos y funcionamientos, en la actualidad develan al hombre
muchas formas y explicaciones de aquellos elementos pequeños que encierran un sin número de utilidades
para el campo de la salud.
En la UCEBOL, los laboratorios cuentan con la presencia de microscopios ópticos o de campo claro.
• Bibliografía
_Irving, N. Sax / Richard J, Lewis, Sr. Diccionario de química y de productos químicos, ediciones Omega,
S.A.
_Dr. SEGATORE, Luiqi, Dr. PoloGianangelo, Diccionario Médico, Editorial Teidé, Quinta Edición.
_ http://www.joseacortes.com/practicas/microscopio.htm
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