MEDIO DE CULTIVO Bacteriología General _ Catálogo 1211 ___________________________________________________ BASE DE AGAR THAYER MARTIN USO Los medios de cultivo elaborados a partir de esta base, se utilizan para el aislamiento de bacterias de los géneros Neisseria, Haemophilus y Gardnerella. De acuerdo a los ingredientes adicionados, se pueden preparar los siguientes medios: Gelosa Chocolate: Base de Agar Thayer Martin + Hemoglobina Gelosa Chocolate con Polienriquecimiento: Base de Agar Thayer Martin+Hemoglobina+Polienriquecimiento (Catálogo 1214-P) Thayer Martin (selectivo para Neisseria): Base de Agar Thayer Martin+Hemoglobina+Polienriquecimiento+Inhibidor (Catálogo 1211-P) PRINCIPIO La peptona proporciona los nutrientes necesarios para el desarrollo de los microorganismos, los fosfatos controlan el pH del medio, y el almidón neutraliza sustancias tóxicas, como ácidos grasos presentes en el agar. Sembrar en la superficie del medio de cultivo una zona pequeña masivamente y a partir de ésta aislar por estría cruzada. Incubar en atmósfera de CO2 (Técnica de la vela) 48 h a 35ºC. Una prueba que contribuye a identificar las colonias del género Neisseria consiste en demostrar la producción de oxidasas, vertiendo unas gotas de solución al 0.5% de N:N: dimetilparafenilendiamina. Una reacción positiva se manifiesta por la aparición de una coloración rosada que posteriormente se oscurece, dando lugar a la muerte de las bacterias en la colonia. Agar Almidón de maíz Cloruro de sodio FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA 10.0 Fosfato dipotásico 1.0 Fosfato monopotásico 5.0 Peptona especial pH 7.2 ± 0.2 4.0 1.0 15.0 PREPARACION Rehidratar 36 g del medio en 500 ml de agua destilada para obtener una doble concentración. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para disolverlo por completo. En otro matraz disolver 10 g de hemoglobina en 500 ml de agua destilada (suspensión al 2%). Ambos preparados se esterilizan en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 15 minutos. Enfriarlos aproximadamente a 45°C. Vaciar la hemoglobina (Cat. 3011) a la base en condiciones de esterilidad y mezclar perfectamente. Al mismo tiempo se prepara el polienriquecimiento GC (Cat. 1603) y el inhibidor VCNT (Cat. 1605) de acuerdo a las instrucciones del marbete en condiciones de esterilidad y se adicionan a la mezcla anterior homogeneizando suavemente. Vaciar en cajas de Petri estériles. Conservar en refrigeración de 2 a 8ºC. CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO Haemophilus influenzae Neisseria gonorrhoeae CEPA ATCC 49247 ATCC 49226 o ENCB-450 DIBICO S.A. DE C.V. MEXICO, D.F. CRECIMIENTO Bueno Bueno 3 MEDIO DE CULTIVO Bacteriología General _ Catálogo 1211 ___________________________________________________ BIBLIOGRAFIA Martin, Billings, Hackney and Thayer, Public. Health Reports, 83 : 361, 1967 Bailey and Scott,s. Diagnostic Microbiology, 5th Edition, 1978 Manual of Clinical Microbiology, 2nd Edition, 1974. American Society for Microbiology, Washington, D. C. Preparation of transgrow, Sept. 15, 1971 Venereal Disease Research Lab. C. D. C., Atlanta, GA. Lenette, E. H. (de). 1969 Diagnostic Procedures for viral and Rickettsial Infections. APHA., Washington, D. C. Quality Assurance for Commercialy prepared microbiological culture media. Second Edition Approved Standard. NCCLS M22 A2 Vol.16 No. 16 pp 8, 1996. Washington, D. C. PRESENTACION No. Cat. 1211 1211-E Deshidratado 1000 g Deshidratado 500 g No. Cat. 1211-A 1211-B DIBICO S.A. DE C.V. MEXICO, D.F. Deshidratado 450 g Deshidratado 100 g 3