FILOGENIA DE EUPATORIUM (ASTERACEAE: EUPATORIEAE) BASADA EN REPLICAS ALEATORIAS DE LA REGIÓN ESPACIADORA TRANSCRIPTA INTERNA (ITS) Gerson Fernando Peña Díaz Cod. 2020489 Introducción Eupatorium, es un género formado por unas 36-60 especies de plantas de flor (dependiendo del sistema de clasificación), distribuidas en América del Norte y de Eurasia. Suelen ser plantas vivaces, con tallos erectos, hojas opuestas y capítulos florales de color blanco, azulado o púrpura. Algunas especies se cultivan en jardinería, de otras se extraen principios medicinales y algunas son malas hierbas peligrosas. Según King y Robinson: se restringe a 42 especies de plantas herbáceas, distribuidas en el norte, y agrupadas en cuatro distintos grupos. El presente estudio consiste en analizar dos segmentos de 140 y 80 pares de bases (pb) con 10 y 9 replicas respectivamente dentro de la secuencia nuclear ITS de 276 pb de forma aleatoria, para observar si las topologías para todos los casos se presenta de la misma manera y si este resultado está influenciado por la cantidad de pb presentes en cada secuencia (¿a mayor pares de bases, mayor reconstrucción de la topología?), adicionalmente se observará la topología de la secuencia ITS 276 pb en busca de nodos no soportados, y se contrastará con la posible observación de grupos frecuentes en las topologías individuales, debido a que grupos no soportados pero frecuentes son recuperados coherentemente en la topología. Metodología Se utilizaron 21 especies de la tribu Eupatoriinae, y se analizaron con la secuencia de la región espaciadora transcripta interna (ITS) del ADN nuclear ribosomal y dos outgroup (anexo 1). Se realizaron dos análisis, segmentando la secuencia inicial (ITS) de 276 pb de la siguiente manera: a. Una región de 140 pb, con 10 replicas de forma aleatoria (A,B,C,D,E,F,G,H,I,J) y b. Una región de 80 pb con 9 replicas de forma aleatoria (a,b,c,d,e,f,g,h,i), (anexo 2). Las secuencias se obtuvieron del GenBank mediante el programa R 2.9.2 (Gentleman y Ihaka, 2008), (anexo 2). Luego estas fueron transportadas al programa Muscle ver. 3.6 (Edgar, 2005), donde se alinearon y editaron en el programa Seaview ver. 4.1 (Galtier, 1996).La selección del modelo de evolución se realizó con R 2.9.2 (Gentleman y Ihaka, 2008), posteriormente se hizo un análisis de likelihood en PhyML 3.0 (Guindon y Gascuel, 2008), el tipo de búsqueda de árboles usada fue NNI y SPR, con un bootstrap no paramétrico de 1000 replicas. Este proceso se realizó para cada una de las replicas, obteniendo así un total de 20 análisis. Resultados y Discusión Debido a que la información genética de un organismo varía con el tiempo, se hizo necesario observar los modelos evolutivos para cada una de nuestras secuencias encontrando que para la secuencia de 276 pb de ITS el modelo evolutivo correspondía a Kimura + Gamma (K80+Γ), para las replicas de 140 pb, presentaban Kimura + Invariante y Kimura + Gamma (K+Γ y K+I), y para las replicas de 80 pb se encontró tanto los dos modelos antes mencionados, como el modelo de Felsenstein de 1984+Gamma (F84+ Γ), (anexo 2), ayudándonos a entender como las secuencias de ADN fijan los nucleótidos a través de su historia evolutiva. En PhyML, se pudo evidenciar la topología para nuestra secuencia de 276 pb la hipótesis propuesta por King y Robinson, y corroborada por Gregory y Edward, 2000, donde separa a Eupatorium (y este a su vez en 3 grupos) y Eupatoriadelphus, por grupos geográficos (anexo 3 y 4). Para nuestros análisis por replica se puede evidenciar en las topologías observadas que hay una marcada presencia del clado de Eupatoriadelphus, con valores altos de bootstrap (anexo 5), a excepción de las replicas C y d. Para el clado de “Traganthes” donde se encuentra los taxa: E. cannabinum I y II se observa en la mayoría de las topologías con altos valores de bootstrap, a excepción de las replicas b y c (anexo 5). En el clado de Eurasia se pudo observar que este solo se recupera en su totalidad en la replica d, pero con un valor de bootstrap muy bajo, además se puede ver en la mayoría de las replicas una relación estrecha entre los miembros de este clado, E. sp China, E. chinense I y II, cabe destacar que se pudieron observar valores muy bajos de estos miembros pero esto solo ocurrió en las replicas de 80 pb. Para el clado de “Uncasia” la topología obtenida de la secuencia de ITS con 276 pb, se observó una relación solo en los taxa: E. mikanioides, E. perfoliatum, E. sessilifolium, E. leucolepisno, lo cual no es del todo concordante con lo obtenido por Gregory y Edward, 2000, ya que en sus resultados ellos adicionan los taxa: E. rotundifolium, E. album,y E. altissimum. Con base a lo antes mencionado se puede evidenciar, la existencia de los tres grupos para Eupatorium: “Traganthes”, “Uncasia”, Eurasia Y la independencia de Eupatoriadelphus (anexo 4), corroborando así la hipótesis estudiada por Gregory y Edward, 2000. Además podemos decir que no se cumple la regla de que a mayor pares de bases, mayor reconstrucción de la topología, ya que en el set de replicas b. (anexo 2), se observó la presencia de tres de los cuatro grupos descritos por Gregory y Edward, 2000, además fue el único que reconstruyó el clado completo de Eurasia, probablemente por presentar regiones conservadas con altas tasas evolutivas, estableciendo relaciones filogenéticas a niveles taxonómicos bajos(Jorge Salgado 2008) Un punto también importante es la aparición de una relación entre el clado de Eupatoriadelphus con el clado de “Traganthes”, el cual se observó en algunas de los replicas realizadas (A, B, C, D, J, c) mas no en la topología general del ITS con 276 pb. Bibliografía Edgar, Robert C. 2005. MUSCLE: multiple sequence alignment with high accuracy and high throughput, Nucleic Acids Research 32(5), 1792-97. Galtier, N., Gouy, M. and Gautier, C. (1996) SeaView and Phylo_win, two graphic tools for sequence alignment and molecular phylogeny. Comput. Applic. Biosci., 12, 543548. Gentleman, R., y Ihaka, R., 2008. R Data Import/Export version 2.7.0. the Statistics Department of the University of Auckland. Guindon S., Gascuel O., 2008. “A simple, fast and accurate algorithm to estimate large phylogenies by maximum likelihood”. Systematic Biology. Salgado, J., 2008. Exploración filogenético de Berberis basada en los genes ITS y rbcL y su historia de colonización de los paramos. Universidad de los Andes, Facultad e ciencias biologicas. ANEXOS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Taxon Dubautia latifolia Helianthus divaricatus Eupatoriadelphus dubium Eupatoriadelphus fistulosum Eupatoriadelphus maculatus Eupatoriadelphus purpureus Eupatoriadelphus steelei Eupatorium album Eupatorium altissimum Eupatorium canna1 Eupatorium canna2 Eupatorium capilli1 Eupatorium capilli2 Eupatorium chinense1 Eupatorium chinense2 Eupatorium cuneifolium Eupatorium hyssopifolium Eupatorium leucolepis Eupatorium mikanioides Eupatorium perfoliatum Eupatorium rotundifolium Eupatorium sessilifolium Eupatorium spChina ITS AF061900 AF047954 AF177799 AF177800 AF177798 AF177802 AF177801 AF177816 AF177811 AF177806 AF177805 AF177803 AF177804 AF177807 AF177808 AF177810 AF177812 AF177817 AF177818 AF177814 AF177815 AF177813 AF177787 Anexo 1. Accesos al GenBank de cada una de los taxa utilizados. 1 y 2 corresponden a los Outgroup; del 3 al 23 corresponde a nuestro ingroup. Replica a. A B C D E F G H I J pb 1-138 10-148 30-168 60-198 80-218 90-228 100-238 110-248 120-258 138-276 Modelo K80+Γ K80+Γ K80+Γ K80+I K80+I K80+I K80+I K80+Γ K80+Γ K80+Γ Replica b. a b c d e f g h i ITS pb 1-80 40-120 60-190 80-160 100-180 110-190 150-230 180-260 190-270 276 Modelo K80+Γ K80+Γ F84+Γ F84+Γ K80+Γ K80+Γ F84+Γ K80+Γ K80+Γ K80+Γ Anexo 2. Replicas realizadas a partir de la secuencia de ITS de 276 pb, las letras en mayúscula corresponden a secuencias de 140pb (a.) y las letras en minúsculas corresponden a secuencias de 80 pd (b.). Adicionalmente se observan los modelos para cada una de las replicas. Grupo Eupatorium America del Norte “Traganthes” America del Norte “Uncasia” Eurasia Eupatoriadelphus Especie E. capillifolium I E. capillifolium II E. cuneifolium E. rotundifolium E. album E. altissimum E. mikanioides E. perfoliatum E. sessilifolium E. hyssopifolium E. leucolepis E. cannabinum I E. cannabinum II E. spChina E. chinense I E. chinense II E. dubium E. fistulosum E. maculatus E. purpureus E.s steelei Anexo 3. Hipótesis propuesta por King y Robinson. Separando Eupatoriadelphus de Eupatorium, y este a su vez presenta tres grupos: “Traganthes”, “Uncasia” , Eurasia . Anexo 4. Topología obtenida de PhyML, con la secuencia de ITS con 276 pb. Además se observan los grupos propuestos por King y Robinson: Color Azul: Clado de Urasia; Fucsia: “Uncasia”; Verde: “Traganthes” y Naranja: Eupatoriadelphus. Anexo 5. Nomenclatura para cada uno de las topologías obtenidas del bootstrap en PhyML, con su correspondiente nombre verdadero. Nomenclatura D_latifolia H_divaricatus Euphu_dubium Euphu_fistulosum Euphu_maculatus Euphu_purpureus Euphu_steelei Erium_album Eium_altissimum Erium_cannaI Erium_cannaII Erium_capilliI Erium_capilliII Erium_chinenseI Erium_chinenseII Erium_cuneifolium Eium_hyssopifolium Erium_leucolepis Erium_mikanioides Erium_perfoliatum Erium_rotundifolium Erium_sessilifolium Erium_spChina Taxon Dubautia latifolia Helianthus divaricatus Eupatoriadelphus dubium Eupatoriadelphus fistulosum Eupatoriadelphus maculatus Eupatoriadelphus purpureus Eupatoriadelphus steelei Eupatorium album Eupatorium altissimum Eupatorium cannabinum I Eupatorium cannabinum II Eupatorium capillifolium I Eupatorium capillifolium II Eupatorium chinense I Eupatorium chinense II Eupatorium cuneifolium Eupatorium hyssopifolium Eupatorium leucolepis Eupatorium mikanioides Eupatorium perfoliatum Eupatorium rotundifolium Eupatorium sessilifolium Eupatorium spChina Topologías Replicas A. (Erium_can1:0.0000002837,(Erium_can2:0.0000003981,(H_divarica:0.3696573729,D_latifoli:0. 5964249194)866:0.6120273505)65:0.0000002837,((Erium_spCh:0.0000004830,(Erium_chi1:0. 0137149252,Erium_chi2:0.0000004469)491:0.0065063082)728:0.0184177936,(((Euphu_fist:0. 0000003765,(Euphu_purp:0.0000000001,(Euphu_macu:0.0164581263,(Euphu_stee:0.1135186 468,Euphu_dubi:0.0000003065)222:0.0000003075)353:0.0063905265)154:0.0000002947)731: 0.0641987693,(Erium_cap1:0.0000004158,Erium_cap2:0.0000000001)833:0.0138983108)266: 0.0135135074,(Erium_sess:0.0132653577,(((Erium_cune:0.0345041415,Erium_albu:0.006627 1873)28:0.0000005826,(Erium_rotu:0.0222022203,(Eium_altis:0.0130667909,Erium_perf:0.014 0299480)64:0.0000002806)4:0.0000002572)1:0.0000003961,(Erium_mika:0.0436570366,(Eiu m_hysso:0.0499485186,Erium_leuc:0.0000018697)528:0.0202678003)55:0.0000005700)8:0.0 000002636)171:0.0066286037)169:0.0096510332)259:0.0276158257). B. (D_latifoli:0.3372948376,H_divarica:0.2493888925,(Erium_can2:0.0000000001,(Erium_can1:0. 0000008525,((Erium_spCh:0.0000005562,(Erium_chi1:0.0160931078,Erium_chi2:0.000000879 1)531:0.0078157103)784:0.0216253939,(((Euphu_fist:0.0000002997,(Euphu_purp:0.00000000 01,(Euphu_stee:0.1265381775,(Euphu_macu:0.0181226271,Euphu_dubi:0.0000007788)441:0. 0000008001)298:0.0076421232)163:0.0000006439)812:0.0711266824,(Erium_cap1:0.000000 0001,Erium_cap2:0.0000000001)977:0.0436523297)168:0.0138968662,(Erium_albu:0.007864 3424,((Erium_perf:0.0161694745,(Eium_hysso:0.0562675767,(Erium_mika:0.0437323098,Eriu m_cune:0.0264328409)80:0.0000008041)120:0.0062896916)29:0.0000005220,(Erium_sess:0. 0157251155,(Erium_rotu:0.0250938414,(Eium_altis:0.0117018547,Erium_leuc:0.0246908481)5 31:0.0117390334)22:0.0000008305)15:0.0000008305)23:0.0000007548)211:0.0078932581)23 7:0.0113424177)358:0.0321124668)119:0.0000000001)882:0.2915908908). C. (Erium_sess:100.0000000000,(Euphu_purp:0.0000000001,(Euphu_fist:0.0000000001,(Euphu_ macu:0.0279450469,Euphu_dubi:0.0000009488)554:0.0077860531)156:0.0000000001)560:0.0 043870556,(Euphu_stee:0.1493071433,((Erium_cap1:0.0000000001,Erium_cap2:0.000000000 1)960:0.0458459771,(((Erium_can1:0.0000005034,(Erium_can2:0.0000000001,(D_latifoli:0.373 4793297,H_divarica:0.3209543948)431:0.2064574985)41:0.0000005034)160:0.0326109324,(E rium_spCh:0.0000006024,(Erium_chi1:0.0162769878,Erium_chi2:0.0000008454)585:0.007902 6395)781:0.0218677796)112:0.0115033248,((Eium_altis:0.0116773842,Erium_leuc:0.0448558 596)350:0.0119793345,(Erium_rotu:0.0350138079,(Erium_perf:0.0163490697,(Erium_albu:0.0 160493370,(Erium_cune:0.0274589423,(Erium_mika:0.0449114775,Eium_hysso:0.059931588 1)143:0.0000051471)84:0.0059875398)6:0.0000007201)21:0.0000007295)8:0.0000004438)18 0:0.0080457518)32:0.0127338210)303:0.0752083088)54:0.0032183678). D. (Erium_can1:0.0000003715,(Erium_can2:0.0000000001,H_divarica:0.8842710504)81:0.00000 03072,((Erium_albu:0.0137542248,(Erium_sess:0.0134903313,((Erium_mika:0.0205192989,Eri um_leuc:0.0310122185)421:0.0070941022,(Erium_rotu:0.0312814390,(Erium_perf:0.01391938 10,(Erium_cune:0.0258653910,(Eium_hysso:0.0515637035,Eium_altis:0.0201668639)24:0.000 0005623)6:0.0000005275)8:0.0000003072)0:0.0000003392)6:0.0000002773)22:0.0000003658 )147:0.0067368180,((Erium_spCh:0.0000008063,(Erium_chi1:0.0000003288,Erium_chi2:0.000 0000001)623:0.0065801926)822:0.0203028176,((Erium_cap1:0.0000000001,Erium_cap2:0.00 00000001)939:0.0391259061,(D_latifoli:0.6920305757,(Euphu_stee:0.0973943558,(Euphu_pur p:0.0000000001,(Euphu_fist:0.0000000001,(Euphu_macu:0.0249881034,Euphu_dubi:0.000000 3484)538:0.0065389735)167:0.0000000001)523:0.0050274583)737:0.0316653356)292:0.0376 267730)167:0.0119716271)66:0.0000004935)262:0.0276667207). E. (Erium_cap1:0.0104382998,Erium_cap2:0.0000005330,(Erium_albu:0.0000006408,((Erium_ca n1:0.0000011013,Erium_can2:0.0349272846)208:0.0110068946,(Erium_spCh:0.0000000002,( Erium_perf:0.0000000001,(Erium_chi1:0.0000000001,(Eium_hysso:0.0459330911,((Erium_cun e:0.0000000001,(Euphu_stee:0.0715679768,(Euphu_macu:0.0108993187,(Euphu_fist:0.00000 07070,(Euphu_dubi:0.0000000001,Euphu_purp:0.0000000001)212:0.0000005986)269:0.00000 07070)657:0.0185352405)537:0.0307997557)35:0.0000000001,((Erium_sess:0.0235182831,(E rium_rotu:0.0000007058,(D_latifoli:0.1348313914,H_divarica:0.2022458262)466:0.0455967366 )261:0.0058714779)130:0.0053999572,(Eium_altis:0.0358845515,(Erium_chi2:0.0000000001,( Erium_mika:0.0000005678,Erium_leuc:0.0517992699)546:0.0114350554)24:0.0000000001)1:0 .0000009044)1:0.0000005553)1:0.0000005134)1:0.0000004905)2:0.0000004753)1:0.0000004 753)11:0.0000004643)377:0.0114918534)791:0.0468360711). F. (D_latifoli:0.2730266872,H_divarica:0.3869133624,((Erium_can1:0.0000000001,Erium_can2:0. 0262510559)597:0.0000000001,((Euphu_stee:0.1279329566,(Euphu_macu:0.0094941453,(Eu phu_dubi:0.0000005698,(Euphu_purp:0.0000000001,Euphu_fist:0.0000005587)141:0.0000004 479)191:0.0000005417)623:0.0164986984)635:0.0888814702,((Erium_spCh:0.0000004466,(Er ium_chi1:0.0000004931,Erium_chi2:0.0000000001)576:0.0086856023)718:0.0176783357,((Eiu m_hysso:0.0732345818,(Erium_sess:0.0175511104,Erium_cune:0.0208813011)21:0.00000042 91)5:0.0000008742,(Eium_altis:0.0448348969,((Erium_mika:0.0266061908,Erium_leuc:0.0397 279587)390:0.0090413627,(Erium_perf:0.0180279604,(Erium_albu:0.0000005941,(Erium_rotu: 0.0193230461,(Erium_cap1:0.0088541268,Erium_cap2:0.0000004456)902:0.0646469680)291: 0.0097584823)212:0.0086821743)16:0.0000005757)1:0.0000010048)3:0.0000004656)46:0.00 88652039)17:0.0000011353)154:0.0271142579)518:0.1133085846). G. (Erium_cap1:0.0180232466,Erium_cap2:0.0000015953,(Erium_rotu:0.0194159442,(Erium_albu :0.0000005069,((Erium_sess:0.0178265281,(((D_latifoli:0.3464062369,(Euphu_stee:0.1143366 547,(Euphu_fist:0.0000003177,(Euphu_macu:0.0093955454,(Euphu_purp:0.0000000001,Euph u_dubi:0.0000008543)177:0.0000006354)138:0.0000003177)581:0.0203889260)609:0.023487 6144)490:0.0506068269,(Eium_altis:0.0298633106,Erium_leuc:0.0378462881)302:0.01850488 13)15:0.0000005317,(((Erium_can1:0.0000000001,Erium_can2:0.0266452348)432:0.00875727 34,(Eium_hysso:0.0625781646,Erium_mika:0.0272918888)123:0.0000010208)182:0.00863887 56,(Erium_perf:0.0139449610,Erium_cune:0.0000048269)398:0.0129469237)19:0.0000008552 )9:0.0000005130)13:0.0000005764,(H_divarica:0.4768159367,(Erium_spCh:0.0000010549,(Eri um_chi1:0.0000009943,Erium_chi2:0.0000000001)497:0.0088188252)314:0.0000005696)341: 0.0089641624)184:0.0087471091)225:0.0083827380)926:0.0673432073). H. (Euphu_dubi:0.0000000001,Euphu_macu:0.0084432983,(Euphu_fist:0.0000002839,(Euphu_pu rp:0.0000003089,(Euphu_stee:0.0907392904,(D_latifoli:0.3329006725,((Erium_albu:0.0000004 629,(Erium_cap1:0.0161775213,Erium_cap2:0.0000013377)887:0.0587559237)453:0.0079497 968,((Erium_cune:0.0000020670,Erium_perf:0.0123662354)389:0.0116470745,((Erium_rotu:0. 0167939878,((Erium_can1:0.0000000001,Erium_can2:0.0239029894)489:0.0078510094,(Eium _hysso:0.0464774424,Erium_mika:0.0161894622)111:0.0000008387)205:0.0075989147)54:0. 0001573766,((Eium_altis:0.0154273544,Erium_leuc:0.0337586348)399:0.0197798747,(Erium_ sess:0.0159971774,(Erium_chi2:0.0000000001,(Erium_spCh:0.0000000001,(H_divarica:0.4437 130995,Erium_chi1:0.0000004097)142:0.0000004097)60:0.0000000001)444:0.0080310023)38: 0.0000006432)6:0.0000009119)11:0.0000006219)62:0.0000006219)561:0.0651635305)591:0. 0137606194)797:0.0337156078)177:0.0000003089)96:0.0000005057). I. (Euphu_dubi:0.0000000001,(Euphu_purp:0.0000000001,(Euphu_macu:0.0084743119,Euphu_fi st:0.0000002911)185:0.0000002911)192:0.0000000001,(Euphu_stee:0.0666841800,(D_latifoli: 0.2955180789,((Erium_sess:0.0160013853,(Eium_altis:0.0328864638,(Erium_cune:0.0000008 895,(Erium_chi1:0.0000006710,(Erium_chi2:0.0000000001,(H_divarica:0.4968150372,Erium_s pCh:0.0000000001)110:0.0000000001)88:0.0000000001)383:0.0080062635)16:0.0000009053) 9:0.0000008743)3:0.0000004470,(((Erium_mika:0.0154856640,Erium_leuc:0.0373251589)469: 0.0082125819,(Erium_perf:0.0162293295,Eium_hysso:0.0458006584)142:0.0000004564)495:0 .0078355782,(Erium_rotu:0.0083050816,((Erium_can1:0.0000000001,Erium_can2:0.02391037 38)620:0.0159569644,(Erium_albu:0.0000004793,(Erium_cap1:0.0329627109,Erium_cap2:0.0 000006977)954:0.0578958054)435:0.0081280402)175:0.0077186579)8:0.0000005146)5:0.000 0009412)496:0.0493297412)637:0.0186143376)831:0.0359458570). J. (D_latifoli:0.1573901770,H_divarica:0.2618182600,((Euphu_stee:0.0418878817,(Euphu_macu: 0.0077774702,(Euphu_fist:0.0000003010,(Euphu_dubi:0.0000000001,Euphu_purp:0.00000000 01)261:0.0000004890)357:0.0000004870)848:0.0278237093)716:0.0236942432,(Erium_cune: 0.0000000001,(((Erium_rotu:0.0081679452,(Erium_sess:0.0244466778,(Erium_mika:0.007819 0090,(Erium_perf:0.0000005245,(Eium_hysso:0.0212338178,Erium_leuc:0.0485326366)513:0. 0290715988)121:0.0000005375)528:0.0079439878)281:0.0076223148)19:0.0000005533,((Eriu m_chi1:0.0000000001,Erium_chi2:0.0000000001)68:0.0000005848,(Erium_spCh:0.000000000 1,Eium_altis:0.0327037258)64:0.0000000001)25:0.0000006040)11:0.0000006040,((Erium_can 2:0.0240569463,Erium_can1:0.0000006543)451:0.0077812501,(Erium_albu:0.0000004641,(Eri um_cap1:0.0508394738,Erium_cap2:0.0000004908)966:0.0670721036)373:0.0079349385)285 :0.0077125745)40:0.0000005614)436:0.0323972513)787:0.0889039877). a. (((((((((((Erium_sess:0.0166668849,Erium_rotu:0.0051889059)595:0.0046732528,((Euphu_mac u:0.0208242689,(Euphu_stee:0.0444975593,Euphu_dubi:0.0000007086)147:0.0000004562)29 5:0.0087706160,(Euphu_purp:0.0000000001,Euphu_fist:0.0000007104)258:0.0000009437)712 :0.0273009711)38:0.0000009428,Eium_altis:0.0000000001)14:0.0000009557,Erium_albu:0.00 88671890)4:0.0000004173,(Erium_cap2:0.0000000001,Erium_cap1:0.0000009299)584:0.0087 146888)4:0.0000006870,(Erium_perf:0.0000000001,(Erium_mika:0.0280712845,Erium_cune:0. 0193837650)123:0.0000041688)23:0.0000017899)167:0.0085481319,(Erium_leuc:0.00001385 54,Eium_hysso:0.0186190261)470:0.0094208756)177:0.0090050283,Erium_chi1:0.009156910 4)231:0.0085733626,(Erium_spCh:0.0000000001,Erium_chi2:0.0000000001)499:0.000000868 5)403:0.0178002032,(Erium_can2:0.0000000001,Erium_can1:0.0000009703)476:0.000001172 3)909:0.1855612971,H_divarica:0.0181632040,D_latifoli:0.2118500548). b. (Euphu_fist:0.0000000001,Euphu_purp:0.0000000001,(((Euphu_dubi:0.0000000001,Euphu_m acu:0.0217428597)372:0.0089344766,(Euphu_stee:0.0633248581,Erium_sess:100.000000000 0)508:0.0572310633)146:0.0000011161,(Erium_cap1:0.0000000001,(Erium_cap2:0.00000000 01,(Erium_rotu:0.0213962268,((((H_divarica:0.1007909685,D_latifoli:0.4096346394)548:0.2414 831423,(Erium_can2:0.0000002681,Erium_can1:0.0000001634)647:0.0000001634)176:0.0283 923569,(Erium_spCh:0.0000006327,(Erium_chi1:0.0194196896,Erium_chi2:0.0000005027)426 :0.0090884582)641:0.0146458849)105:0.0153556495,(Eium_altis:0.0090348815,(Erium_cune: 0.0326708292,(Erium_albu:0.0093095759,(Erium_mika:0.0292188384,(Erium_perf:0.00000000 01,(Eium_hysso:0.0440690901,Erium_leuc:0.0000015626)623:0.0283445674)66:0.000000000 1)17:0.0000000001)11:0.0000000001)20:0.0000006142)192:0.0093286173)38:0.0087516013) 142:0.0096826072)30:0.0000000001)371:0.0507195960)252:0.0000000001). c. 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(Euphu_purp:0.0000004502,D_latifoli:1.0432266265,((Euphu_dubi:0.0000000001,((Erium_cap1 :0.0000000001,Erium_cap2:0.0000000001)927:0.0642970309,(((Erium_spCh:0.0000006397,(E rium_chi1:0.0000004819,Erium_chi2:0.0000000001)544:0.0120274186)721:0.0255330935,(Eri um_can1:0.0000000001,Erium_can2:0.0000000001)697:0.0246831827)59:0.0000008621,(Eriu m_perf:0.0268082799,((Erium_sess:0.0067941413,Erium_rotu:0.0453311061)294:0.00523330 69,((Erium_leuc:0.0263454440,(H_divarica:1.6365117436,Eium_altis:0.0000290880)214:0.018 5693056)273:0.0195680617,(Erium_albu:0.0000000001,(Erium_mika:0.0324861382,(Eium_hys so:0.0756378942,Erium_cune:0.0287708546)53:0.0000072437)108:0.0087278295)9:0.000000 8368)1:0.0000007383)1:0.0000006435)41:0.0121423476)226:0.0239291829)448:0.108605756 0)48:0.0000006860,(Euphu_fist:0.0000004587,(Euphu_stee:0.1608424669,Euphu_macu:0.000 0000001)104:0.0000000001)50:0.0000005193)60:0.0000004502). e. (Erium_albu:0.0000007973,(Erium_rotu:0.0253435334,(Erium_cap1:0.0000000001,Erium_cap2 :0.0000000001)949:0.0645154695)223:0.0095559854,((Eium_hysso:0.0408481965,(Erium_can 2:0.0000000001,(Erium_can1:0.0000010930,Erium_mika:0.0344007138)82:0.0000010930)51:0 .0000006945)217:0.0100461374,(Erium_sess:0.0105668444,((Erium_leuc:0.0260209274,(H_di varica:0.9561892335,Eium_altis:0.0000075493)350:0.0153033331)265:0.0159804289,(((D_latif oli:0.5473408852,(Euphu_stee:0.1403272252,(Euphu_purp:0.0000002094,(Euphu_fist:0.00000 10078,(Euphu_dubi:0.0000002797,Euphu_macu:0.0124109097)134:0.0000002797)134:0.0000 006283)448:0.0158669958)484:0.0162272734)500:0.0546426423,(Erium_spCh:0.0000008477, (Erium_chi1:0.0000006109,Erium_chi2:0.0000000001)459:0.0103316751)336:0.0103312604)5: 0.0000006323,(Erium_perf:0.0176241381,Erium_cune:0.0000154439)363:0.0152039707)3:0.0 000006323)3:0.0000006148)4:0.0000005703)173:0.0105197775). f. (Euphu_dubi:0.0000000001,Euphu_purp:0.0000000001,(Euphu_fist:0.0000009699,(Euphu_ma cu:0.0108429769,(Euphu_stee:0.0458579237,((Erium_mika:0.0000005346,Erium_leuc:0.04324 04252)597:0.0107614669,((Eium_altis:0.0233688868,(Erium_sess:0.0225082041,(Eium_hysso :0.0418318232,((Erium_albu:0.0000006148,(Erium_cap1:0.0227961416,Erium_cap2:0.000002 0113)779:0.0346077102)416:0.0107893265,(Erium_rotu:0.0000017629,H_divarica:0.29821075 16)368:0.0111471711)8:0.0000009018)1:0.0000004901)0:0.0000006026)0:0.0000000001,((Eri um_cune:0.0000009480,(Erium_can2:0.0335217199,(Erium_can1:0.0000005701,D_latifoli:0.20 28578826)76:0.0000004452)183:0.0106690774)8:0.0000011199,((Erium_perf:0.0000006577,E rium_chi1:0.0000000001)45:0.0000006577,(Erium_spCh:0.0000000001,Erium_chi2:0.0000011 421)30:0.0000005882)15:0.0000004722)1:0.0000005830)21:0.0000005579)549:0.0389548604 )672:0.0211106110)308:0.0000009699)220:0.0000008143). g. (Erium_cap1:0.0104382998,Erium_cap2:0.0000005330,(Erium_albu:0.0000006408,((Erium_ca n1:0.0000011013,Erium_can2:0.0349272846)208:0.0110068946,(Erium_spCh:0.0000000002,( Erium_perf:0.0000000001,(Erium_chi1:0.0000000001,(Eium_hysso:0.0459330911,((Erium_cun e:0.0000000001,(Euphu_stee:0.0715679768,(Euphu_macu:0.0108993187,(Euphu_fist:0.00000 07070,(Euphu_dubi:0.0000000001,Euphu_purp:0.0000000001)212:0.0000005986)269:0.00000 07070)657:0.0185352405)537:0.0307997557)35:0.0000000001,((Erium_sess:0.0235182831,(E rium_rotu:0.0000007058,(D_latifoli:0.1348313914,H_divarica:0.2022458262)466:0.0455967366 )261:0.0058714779)130:0.0053999572,(Eium_altis:0.0358845515,(Erium_chi2:0.0000000001,( Erium_mika:0.0000005678,Erium_leuc:0.0517992699)546:0.0114350554)24:0.0000000001)1:0 .0000009044)1:0.0000005553)1:0.0000005134)1:0.0000004905)2:0.0000004753)1:0.0000004 753)11:0.0000004643)377:0.0114918534)791:0.0468360711). h. (Euphu_stee:0.0196374642,(D_latifoli:0.2550559524,(Euphu_macu:0.0000000001,(Euphu_pur p:0.0000005382,(Euphu_dubi:0.0000000001,Euphu_fist:0.0000000002)179:0.0000000001)187: 0.0000005960)726:0.0206711307)43:0.0000010955,(H_divarica:0.4955723045,(Erium_cune:0. 0000000001,(((Erium_can1:0.0000006067,Erium_can2:0.0261776493)474:0.0081600093,(Eriu m_albu:0.0000005503,(Erium_cap1:0.0585076460,Erium_cap2:0.0000007637)859:0.04573355 62)346:0.0085192756)249:0.0080920976,(Erium_rotu:0.0000000001,(Erium_spCh:0.00000000 01,((Erium_sess:0.0171329501,((Eium_hysso:0.0235273683,Erium_leuc:0.0228915815)762:0. 0295465405,(Erium_perf:0.0000004535,Erium_mika:0.0000000001)324:0.0000000001)551:0.0 084781450)267:0.0078377203,(Eium_altis:0.0266930168,(Erium_chi2:0.0000000001,Erium_ch i1:0.0000000001)51:0.0000000001)13:0.0000004832)5:0.0000000001)7:0.0000005603)9:0.000 0000001)32:0.0000006461)516:0.0399731509)317:0.0157059374). i. (Euphu_macu:0.0000000001,Euphu_fist:0.0000000001,(Euphu_purp:0.0000000001,(Euphu_du bi:0.0000007127,(D_latifoli:0.2836102276,(Euphu_stee:0.0245106179,(H_divarica:0.43608477 34,((Erium_chi2:0.0000000001,Erium_cune:0.0000010254)41:0.0000000001,((Erium_spCh:0.0 000000001,Erium_chi1:0.0000000001)42:0.0000008366,(Erium_rotu:0.0000000001,(Eium_altis :0.0344865469,((Erium_sess:0.0219604854,(Erium_mika:0.0000010309,(Erium_perf:0.000000 5016,(Eium_hysso:0.0150171627,Erium_leuc:0.0297623324)805:0.0405498012)167:0.000000 5328)503:0.0108678169)240:0.0097480784,(Erium_albu:0.0000004958,(Erium_can2:0.033710 4248,(Erium_can1:0.0000005759,(Erium_cap1:0.0780301073,Erium_cap2:0.0000013436)827: 0.0467089670)142:0.0000005759)267:0.0102069900)128:0.0102131701)5:0.0000004905)0:0. 0000004661)0:0.0000006219)6:0.0000005727)469:0.0525414500)380:0.0212299272)84:0.000 0015357)724:0.0277744420)192:0.0000006861)150:0.0000005139). ITS 276 pb (Euphu_stee:0.0653790815,(Euphu_purp:0.0000000001,(Euphu_fist:0.0000001861,(Euphu_m acu:0.0103690980,Euphu_dubi:0.0000001673)590:0.0029954333)207:0.0000000001)806:0.00 95532834,((D_latifoli:0.2449916074,H_divarica:0.4649038162)857:0.2571119064,(Erium_cune: 0.0110012873,((Eium_altis:0.0190175815,(((Erium_can1:0.0000001905,Erium_can2:0.009330 2328)786:0.0188589308,(Erium_spCh:0.0000001671,(Erium_chi1:0.0061662165,Erium_chi2:0. 0000002307)568:0.0030102991)774:0.0080030068)258:0.0077248119,(Erium_sess:0.0159302 837,((Eium_hysso:0.0327082920,Erium_leuc:0.0223493878)601:0.0172697718,(Erium_perf:0. 0063065315,Erium_mika:0.0224996538)218:0.0000002259)513:0.0031620590)316:0.0028494 380)6:0.0000002757)4:0.0000002668,(Erium_albu:0.0061809276,(Erium_rotu:0.0105734355,( Erium_cap1:0.0194191217,Erium_cap2:0.0000002037)977:0.0374300229)365:0.0027537463) 139:0.0030485079)105:0.0031048143)418:0.0419904935)839:0.0195711074).