PCR-Látex

PCR-Látex
Proteína C-Reactiva. Ensayo de aglutinación en porta.
Sin dilución previa de la muestra.
Sólo para uso "in vitro".
Conservar de 2 a 8 °C.
INTRODUCCIÓN
La Proteína C-Reactiva (PCR) es una proteína de fase aguda, presente
en el suero de pacientes sanos, la cual puede incrementarse
significativamente en la mayoría de los procesos infecciosos bacterianos
y virales, tejidos dañados, inflamación y neoplasias malignas.
El incremento de la concentración de esta proteína se produce despúes
de unas horas de desarrollarse la enfermedad pudiendo alcanzar niveles
de 300 mg/L de 12 a 24 horas.
APLICACIÓN PROPUESTA
El método es válido para la determinación de PCR en suero humano.
MATERIAL NECESARIO
Micropipetas de 50 μL y 100 μL.
FUNDAMENTO DEL MÉTODO
El método se fundamenta en una reacción de aglutinación de una
suspensión de partículas de látex poliestireno sensibilizadas con
anticuerpos altamente purificados de anti-proteina C-reactiva. La
aglutinación es visible a una concentración de PCR en suero igual o
superior a 6 mg/L.
CONTENIDO
R1 Látex
Tapa blanca
Partículas de látex recubiertas con IgG de
cabra en tampón borato 50 mmol/L
Contiene azida sódica 0,95 g/L
Cód. 1200301: 2,5 mL
Cód. 1200302: 5 mL
R2 Control Positivo Concentración de PCR 40 mg/L. Suero
Tapa roja
humano en tampón glicina 150 mmol/L .
Contiene azida sódica 0,95 g/L
R3 Control Negativo Concentración de PCR 0 mg/L. Suero
Tapa azul
de conejo en tampón glicina 150 mmol/L
Contiene azida sódica 0,95 g/L
Portas para látex
Cód. 1200301: 8 x 6 portas
Cód. 1200302: 16 x 6 portas
Palillos
Cód. 1200301: 1 paquete x 25
Cód. 1200302: 2 paquete x 25
CALIBRACIÓN
La sensibilidad del reactivo de látex está estandarizada frente al Patrón
Internacional de Proteínas CRM 470 de BCR.
PREPARACIÓN Y ESTABILIDAD
El R1 es una suspensión de partículas de látex. Debe homogeneizarse,
con una suave agitación, antes de ser utilizado.
Los goteadores dispensan una gota de volumen aproximado de 50 μL
que es el idóneo para una buena sensibilidad.
Los reactivos se deben conservar de 2 a 8 °C, no deben congelarse. En
estas condiciones los componentes mantendrán su funcionalidad hasta
la fecha de vencimiento indicada en la etiqueta .
MUESTRA
Utilizar suero. Los sueros, conservados de 2 a 8 ° C, mantienen su
actividad durante 2 días.
No utilizar sueros hemolizados ni contaminados. No utilizar sueros
altamente lipémicos pues podrían dar una aglutinación no específica.
Las muestras con resto de fibrina deben ser centrifugadas antes de la
prueba.
TÉCNICA
Método cualitativo
1.-Atemperar el reactivo y los controles a temperatura ambiente. La
sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.
2.-Homogeneizar el R1 Látex, con agitación suave.
3.-Comprobar la funcionalidad del reactivo mediante los controles
positivo y negativo (ver procedimiento a continuación).
4.-Dosificar 50 μL (1 gota) de suero muestra a analizar en un círculo
del porta, SIN DILUIR (Ver Nota1).
5.-Añadir, al lado de la anterior, una gota de R1 Látex.
6.- Mezclar las dos gotas con un palillo y extenderlas por todo el círculo.
Emplear palillos distintos para cada muestra y usarlos por ambos
extremos.
7.-Colocar el porta en el agitador rotatorio (80-100 RPM) y observar
la aparición o ausencia de aglutinación exactamente al cabo de 2
minutos. El exceso del tiempo de reacción podría dar lugar a resultados
falsos positivos. En caso de no tener el agitador rotatorio la agitación
se puede hacer manual en forma rotatoria y lentamente.
INTERPRETACIÓN
-La presencia de aglutinación indica un nivel de PCR igual o superior a
6 mg/L en la muestra.
-La ausencia de aglutinación indica un nivel de PCR inferior a 6 mg/L
en la muestra.
En el método semicuantitativo se define el título como la dilución mayor
que da resultado positivo.
Método semicuantitativo
1. Realizar diluciones sucesivas 1/2 de la muestra con solución salina
(NaCL 9 g/L).
2. Proceder para cada dilución como en la prueba cualitativa.
CÁLCULOS
La concentración aproximada de PCR en la muestra del paciente se
obtiene aplicando la siguiente fórmula:
6 x n° dilución
mg/L
6x2
12
6x4
24
6x8
48
6 x 16
96
VALORES DE REFERENCIA
Hasta 6 mg/L
CARACTERÍSTICAS FUNCIONALES
-Límite de detección: 6 mg/L.
-Valor de prozona: Negativo hasta 1600 mg/L.
-Sensibilidad diagnóstica: > 95 %.
-Especificidad diagnóstica: > 96 %
-Interferencias:
Interfiere el factor reumatoideo a partir de 100 UI/mL.
No interfieren: Bilirrubina 342 μmol/L.
Hemoglobina 10 g/L.
Lípidos 10 g/L.
PRECAUCIONES
El control positivo es un suero humano. Aunque no se ha detectado
la presencia de antígeno HBs, HCV, ni anticuerpos anti-HIV, debe ser
manipulado con la misma precaución que un suero muestra.
Contiene pequeñas cantidades de azida sódica. Evítese el contacto con
la piel dañada y las mucosas.
NOTAS
1. Una concentración muy elevada de PCR en la muestra puede dar lugar
a resultados falsos negativos. Se reecomienda re-ensayar la muestra con
un volumen de 20 μL.
2. El diagnóstico clínico no debe realizarse con los resultados de un único
ensayo, sino que deben considerarse al mismo tiempo los datos clínicos
del paciente.
BIBLIOGRAFÍA
1. Lars-Olof Hanson et al. «Current Opinion in infeccion diseases»,
1997; 10: 196-201
2. MM. Pepys. The Lancet, 1981; March 21: 653-656.
3. Yoshitsugy Hokama et al. Journal of Clinical Laboratory Status,
1987; 1: 15-27.
4. Yuong DS. Effects of drugs on clinical laboratory test; 4th ed.AACC
Press; 1995.
PRESENTACIÓN
Cód.: 1200301
Cód.: 1200302
48 Determ.
96 Determ.
Emisión 04, Enero/2004
CENTIS DIAGNOSTICOS. Ave. Monumental y Carretera La Rada, km 3 1/2, Guanabacoa, C. Habana, Cuba
Teléfonos: (53-7) 6829563 al 70, (53-7) 6829524, Fax: (53-7) 8669821, e-mail: comercial@centis.edu.cu
NP 7424