MUESTRAS DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR

MUESTRAS DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
1.0 INTRODUCCIÓN
Las vías respiratorias altas se extienden desde los orificios nasales hacia la laringe
y comprende la nasofaringe y la orofaringe,a, los senos paranasales, trompa de
Eustaquio y el oído medio.
Las infecciones del tracto respiratorio superior más frecuentes son: laringitis,
faringitis, epiglotitis, sinusitis, otitis externa y media, difteria, tos ferina, angina de
Vincent y candidiasis oral.
Es fundamental conocer la flora comensal para la interpretación de los resultados
de laboratorio.
2.0 FLORA NORMAL DEL TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
-Streptococcus spp (alfa, beta, no hemolíticos)
-Neisseria spp.
-Haemophilus spp.
-Corynebacterium spp.
-Staphylococcus spp
-Micrococcus spp.
-Veillonella spp.
-Peptostreptococcus spp.
-Actynomyces spp.
-Mycoplasma spp.
-Bacteroides spp.
-Fusobacterium spp.
-Candida spp.
3.0 FARINGITIS
La principal causa de faringitis es por Streptococcus pyogenes (grupo A). Otras
bacterias que se incluyen son: Streptococcus grupo C, G, y Arcanobacterium
(Corynebacterium) haemolyticum.
El examen de rutina de laboratorio debe incluir métodos para el diagnóstico de
Streptococcus grupo A que sean sensibles ya que un número bajo de esta bacteria puede
indicar no solo colonización sino representar una infección, además es importante
detectarlo por la reemergencia de la fiebre reumática aguda y la posibilidad de un shock
tóxico like.
El estudio de Neisseria meningitidis generalmente se hace con propósitos
epidemiológicos.
El estudio de faringitis gonocócica debe ser solicitada en forma específica por el
médico.
Corynebacterium diphtheriae se debe buscar sólo cuando se solicita
expresamente.
FLUJOGRAMA Nº 1 : SECRECION FARINGEA
DIFTERIA
( C. diphteriae)
FARINGITIS
( S. GRUPO A )
FARINGITIS
GONOCOCICA
TORULA (2)
TORULA
SILICA GEL
AMIES STUART
TRANSPORTE NUTRITIVO
TORULA
AMIES STUART
O SILICA GEL
LABORATORIO
REFERENCIA
PAS
AGAR SANGRE TELURITO*
AGAR TINSDALE
PAS
ANGINA DE
VINCENT
TORULA
THAYER - MARTIN
GRAM
35 ºC CO 2 x 72 HORAS
INCUBAR
35ºC x 18-24-48 HORAS*
INCUBAR 35-37 ºC
18-24 HORAS
OBS. COLONIAS
OBS. COLONIAS
T. GRAM
OBS.
β-HEMOLISIS
T. GRAM
DIAG.
PRESUNTIVO:
PRUEBAS
BIOQUIMICAS
DIAG.
DEFINITIVO
DIAG.
DEFINITIVO
T. GRAM
-UTILIZAC.DE CARBOHIDRATOS
T. OXIDASA
-DET. DE B- LACTAMASA
CATALASA ( - )
(-)
LABORATORIO
DE REFERENCIA
INCUBAR
18-24 HRS
DIAG.
PRESUNTIVO:
-SUSCEPTIBILIDAD
BACITRACINA 0,04µ
NHDM
DIAG.
DEFINITIVO:
SEROLOGIA
-PYR
PAS: Placa agar sangre
NHDM:No hubo desarrollo microbiano
FLUJOGRAMA Nº2 : SECRECION NASOFARINGEA
Bordetella
pertusssis
IFD
ASPIRADO NASOFARINGEO
N. meningitidis
(PORTADORES )
Haemophilus
influenzae
SEMBRAR AL
LADO DEL PACIENTE
NASOFARIANGEA
ASPIRACION
CULTIVO:
SEMBRAR INMEDIATAMENTE
AL LADO DEL PACIENTE
REGAN-LOWE
35 ºC
SEMBRAR AL LADO
DEL PACIENTE
THAYER MARTIN
AMIES STURAT
CHOCOLATE SUPLEMENTADO
35ºC CO2
24-48 HRS.
INCUBAR
35ºC CO2
OBS. COLONIAS
18-24 HRS
( HUMEDAD )
HASTA 7 DIAS
OBS. COLONIAS
T. DE GRAM
T. DE GRAM
OXIDASA
ACCION SOBRE
CARBOHIDRATOS
GRAM
FACTORES X y V
OXIDASA
B LACTAMASA
SEROLOGIA
DIAG. DEFINITIVO
DIAG. DEFINITIVO
INMUNOFLUORESCENCIA
SEROLOGIA
ENVIO AL LAB. DE
REFERENCIA PARA
CONFIRMACIÓN
ENVIO AL LAB. DE
REFERENCIA PARA
CONFIRMACIÓN
IDENTIFICACIÓN
DEFINITIVA: SEROLOGÍA
TABLA 1: OTRAS MUESTRAS TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
S.PARANASAL
SEC.OTICA
MUCOSA
ES
BUCAL
DIAGNÓSTICO
Sinusitis
Otitis
Otitis
Candidiasis
MUESTRA
TIPO MUESTRA
Punción
media
externa
Timpanocente Tórula
sis
AGENTE
ETIOLÓGICO
S. pneumoniae
H. influenzae
Anaerobios
Neisseria
B. catarrhalis
S. aureus
S. pneumoniae
S. aureus
H. influenzae
B.catarrhalis
Bacilos GAnaerobios
oral
Tórula
P. aeruginosa Candida
Otras
albicans
bacterias
aerobias
T.Gram *
T.Gram *
T.Gram *
T.Gram *
Sabureaud
PAS
PAS
PAS
30ºC hasta 5
ACHO (CO2) ACHO (CO2) M.Conkey
35ºC-48 hrs días
Cult.
Cult.
Anaerobios
Anaerobios
35ºC-48 hrs
35ºC-48 hrs
PAS: Placa agar sangre cordero 5%, ACHO: Placa agar chocolate, * Anexo 1
(Tinciones).
PROCEDIMIENTO
4.0 TOMA DE MUESTRA
4.1. SECRECIÓN FARÍNGEA
4.1.1 Cultivo corriente
a.- Deprimir la lengua con bajalengua.
b.- Frotar con una tórula la pared posterior de la faringe y las amígdalas tocando
cualquier exudado.
c.- Evitar tocar la lengua, úvula y pared de la boca.
4.1.2 Cultivo para Corynebacterium diphtheriae
a.- Deprimir la lengua con bajalengua. Si se advierte la presencia de pseudomembrana,
tomar dos muestras con tórula del borde de la misma presionándola sin romper.
b.- Poner ambas tórulas en un tubo estéril. Si el transporte de las muestras al laboratorio
es superior a cuatro horas, se recomienda enviarlas en un tubo con silica gel. Una de
ellas debe ser usada para la tinción de Gram. En caso de sospecha de difteria cutánea,
tomar muestra de la zona de la piel afectada además de una muestra faríngea.
c.- Hacer tinción de Gram. Si se observan bacilos grampositivo de morfología
característica, el laboratorio debe entregar un informe preliminar que diga “bacilos
grampositivos difteromorfos."
4.1.3 Cultivo para Neisseria meningitidis
Tomar la muestra con tórula por detrás de la úvula en la porción nasal de la
faringe.
4.2. ASPIRADO NASOFARÍNGEO
a.- Lavarse cuidadosamente las manos y luego colocarse guantes estériles.
b.- Romper el sobre que contiene el kit de aspiración y conectar el final del tubo con
diámetro menor a una sonda de aspiración.
c.- Conectar el otro extremo de diámetro mayor a la bomba de vacío.
d.- Introducir la sonda, sin aspirar, por una fosa nasal hasta la nasofaringe y retirarla
aspirando.
e.- Repetir el procedimiento en la otra fosa nasal.
f.- Aspirar el suero fisiológico a través del tubo colector para arrastrar toda la secreción.
g.- Homogeneizar la muestra agitando el tubo con la mano.
h.- Colocar la tapa al tubo que contiene la muestra.
i.- Procesar según flujograma Nº 2.
4.3 LARINGITIS
a.- Laringitis aguda habitualmente es de etiología viral.
b.- Los cultivos bacterianos raramente son orientadores excepto para descartar difteria o
infección estreptocócica basándose en la clínica.
4.4 EPIGLOTITIS
a.- Causada habitualmente por Haemophilus influenzae tipo b, ocurre principalmente en
niños de 2 a 6 años.
b.- El diagnóstico de esta infección debe ser hecho clínicamente ya que está
contraindicado tomar muestra de la epiglotis, pues puede provocar una oclusión de la
vía aérea.
c.- Si se hace un procedimiento en la vía aérea, en ese momento se puede tomar
muestra.
d.- En muchos casos hay una bacteriemia y esto puede apoyar el diagnóstico.
4.5 SINUSITIS
a.- Sinusitis bacteriana frecuentemente es de origen endógeno, causada por organismos
que están normalmente en el tracto respiratorio superior. Agentes más comunes se
muestran en la Tabla 1.
b.- La única muestra apropiada para el laboratorio es el aspirado mediante jeringa de la
cavidad sinusal. Se debe hacer cultivo aerobio y anaerobio.
c.- Rechazar líquidos de lavado o tórulas de fosas nasales o nasofaringe, ya que éstas
contendrán mucha flora normal y será muy difícil diferenciar el agente causal.
4.6 OTITIS MEDIA
a.- Es una infección común en niños. Agentes más comunes se muestran en la Tabla 1.
b.- La muestra del oído medio se toma mediante tímpanocentesis por un especialista, y
se debe cultivar para aerobios y anaerobios. Si hay descarga en el canal externo se debe
hacer cultivo sólo para aerobios.
4.7 OTITIS EXTERNA
Para tímpano intacto, limpiar el conducto auditivo externo con solución jabonosa,
y recolectar la secreción con aspiración con jeringa. Para tímpano roto, colectar la
secreción con tórula flexible usando espéculo.
a.- Pseudomonas aeruginosa es la causa más frecuente de otitis externa u “otitis del
nadador” aún cuando hay otras bacterias aerobias que pueden causarla, por lo tanto sólo
se debe hacer cultivo aerobio.
b.- En estos cultivos pude haber contaminantes de la piel los cuales no deben ser
tomados en cuenta.
4.8 OTRAS PATOLOGÍAS
4.8.1 CANDIDIASIS ORAL
a.- La infección por levaduras de la mucosa bucal, lengua y orofaringe, habitualmente es
producida por Candida albicans y es común en recién nacidos y adultos
inmunosuprimidos (Ej.VIH-SIDA).
b.- El diagnóstico se hace fácilmente por observación directa de la muestra en KOH al
10% o tinción de Gram (Anexo Tinciones). La muestra se toma con dos tórulas, una
para directo y la otra muestra para cultivo.
4.8.2 ANGINA DE VINCENT
a.- Borrelia vincentii y Fusobacterium spp, están asociados con esta infección que se
caracteriza por la ulceración de la faringe o encías. Es infrecuente en niños, pero sí se
presenta en adultos que tienen una mala higiene bucal, stress o una enfermedad
sistémica grave.
b.- El diagnóstico de laboratorio se hace mediante tinción de un extendido directo
obtenido mediante lo descrito en el punto 4.1.b, con fucsina diluida 1:10 en agua, o con
violeta de genciana. La presencia de muchas espiroquetas y fusiformes además de
polimorfonucleares confirma la infección.
5.0 DETECCIÓN DE PORTADORES
5.1 DETECCIÓN DE PORTADORES DE Staphylococcus aureus
a.- Tomar muestra de fosas nasales, faringe, axila y periné y sembrarlas en medio
selectivo como agar sangre, feniletilalcohol o agar sal manitol que permita recuperar
poca cantidad de S aureus.
b.- Incubar, aislar e identificar S. aureus de acuerdo a los procedimientos de rutina.
c.- Guardar las cepas aisladas por si solicitan estudios posteriores.
d.- En el informe sólo se indica presencia o ausencia de S. aureus en cada muestra.
5.2 DETECCIÓN DE PORTADORES DE Neisseria meningitidis
a.- Tomar muestra de la garganta y nasofaringe, con tórula por detrás de la úvula en la
porción nasal de la faringe. Habitualmente en la muestra de nasofaringe se obtiene
mayor número de organismos. Sembrar en un medio selectivo como Thayer Martin.
b.- Emplear los procedimientos habituales para toma de muestra, transporte, incubación,
aislamiento e identificación de N. meningitidis. (ver capítulo correspondiente).
c.- Guardar las cepas de N. meningitidis por si solicitan estudios posteriores.
d.- Informar sólo la presencia o ausencia de N. meningitidis y el grupo serológico.
6.0 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
a.- En una secreción faríngea corriente se debe informar la presencia o ausencia de
Streptococcus β hemolítico.
b.- En caso de búsqueda de faringitis gonocócica, se debe informar como “Hubo o no
desarrollo de Neisseria gonorrhoeae”. Si hay sobre desarrollo de flora normal o cultivo
invadido por levaduras, solicitar nueva muestra.
c.- La investigación dirigida a otros patógenos específicos, debe ser informando como
presencia o ausencia de los mismos
7.0 REFERENCIAS
1. Ballows A, Shadomy H. J. eds. Manual of Clinical Microbiology. 5th de.
Washington D.C.ASM, 1991.
2. Isenberg H. Clinical Microbiology Procedures Handbook. Vol 1, 1993.
3. Murray, Baron, Pfaller, Tenover, Yolken. Manual of Clinical Microbiology. 6th
de.Washington D.C.ASM, 1995.
4. Murray, Baron, Pfaller, Tenover, Yolken. Manual of Clinical Microbiology. 7th ed.
Washington D.C. ASM, 1999.
5. Vandepitte, K. Engback, P. Piot y C. C. Henck Basic Laboratory Procedures in
Clinical Bacteriology. WHO 1991.
MUESTRAS DEL TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR
1.0 GENERALIDADES
Las infecciones del tracto respiratorio inferior, es decir las que comprometen:
tráquea, bronquios, bronquiolos, alvéolos y/o parénquima pulmonar, constituyen en
Chile la primera causa de mortalidad infantil tardía y una de las primeras causas de
muerte por infección nosocomial.
El diagnóstico etiológico de estas infecciones no es fácil debido a que la muestra
clínica necesariamente pasa a través de la orofaringe, lugar donde se puede contaminar
con numerosas especies bacterianas, salvo aquellas muestras que se obtienen
directamente desde el sitio de la lesión.
2.0 TIPOS DE MUESTRAS
-Expectoración
-Aspirado traqueal
-Lavado bronquial
-Boncoscopía (cepillado bronquial, lavado broncoalveolar)
-Biopsia bronquial
-Biopsia pulmonar
3.0 PROCEDIMIENTO
3.1 EXAMEN MICROSCÓPICO
Preparar un extendido de la muestra y hacer tinción de Gram (Anexo Tinciones)
para evaluar si hay contaminación orofaríngea, indicada por la presencia de células
escamosas; si la secreción es del tracto respiratorio inferior, indicada por la presencia de
leucocitos ( las muestras obtenidas de pacientes transplantados de Médula Osea u otro
pacientes inmunosuprimido puede no contener leucocitos) y la presencia del patógeno
probable indicado por el organismo predominante asociado con leucocitos.
3.2 INTERPRETACIÓN DE LA TINCIÓN DE GRAM
a.- Cuantificar el número de células escamosas examinando 10 campos con objetivo
10x.
b.- Interpretar la calidad de la muestra de acuerdo a Tabla 1.
c.- Informar: si hay presencia de un microorganismo predominante, si no hay
microorganismos predominantes o si hay ausencia de microorganismos.
d- Use los resultados de la tinción de Gram para guiarse en la interpretación de las
placas de cultivo.
TABLA 1: CLASIFICACIÓN DE LA MUESTRA DE EXPECTORACIÓN POR
TINCIÓN DE GRAM
GRUPO
Nº de células por campo
Leucocitos
Células Epiteliales
6
< 25
< 25
5
> 25
< 10
4
> 25
10 – 25
3
> 25
> 25
2
10 – 25
> 25
1
< 10
> 25
Se recomienda no cultivar los Grupo 1,2,3
3.3
FLUJOGRAMA PARA EL EXAMEN DE MUESTRAS DEL
TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR SEGÚN OBSERVACIÓN DE TINCIÓN
DE GRAM
Cantidad de células epiteliales (C.E.)y polimorfonucleares(PMN)
MUESTRAS DE
LB, CP, BB,LBA;BP (*)
(sin importar cantidad
C.E 10-25
de células epiteliales)
PMN>25 por campo
ESPUTO
C.E > 25 por campo
PMN 10-25 por campo
MUESTRA NO
APTA PARA CULTIVO
(solicitar nueva muestra).
CULTIVAR E
INVESTIGAR
Streptococcus α hemolítico:
investigar S.pneumoniae
Streptococcus β hemolítico:
investigar Streptococcus Grupo A
bacilos gramnegativos
Staphylococcus
levaduras
hongos
Micobacterias
Nocardia.
Estudiar solo si es predominante:
Haemophilus
Moraxella
(*)
LB = Lavado bronquial
CB = Cepillado bronquial
BB = Biopsia bronquial
LBA= Lavado broncoalveolar
AP = Aspirado pulmonar
LBA y CB sembrar en forma cuantitativa y establecer niveles de corte.
3.4 SIEMBRA DE LAS MUESTRAS
a.- Sembrar muestras en agar sangre, agar chocolate suplementado, agar Mac Conkey
(opcional).
b.- Incubar agar sangre y agar chocolate a 35ªC en atmósfera con 5-7% de CO2. Agar
Mac Conkey y tioglicolato ( solo en muestras no contaminadas con flora oral) en
atmósfera normal.
c.- Examinar las placas a las 24 hrs. de incubación, si no hay desarrollo visible, incubar
por 24 hrs. adicionales. El tioglicolato incubarlo hasta 5 días antes de descartar.
d.- Si hay desarrollo, hacer identificación del microorganismo patógeno.
3.5 CEPILLADO BRONQUIAL Y LAVADO BRONQUIOALVEOLAR
Lavado Bronquial y Cepillado Bronquial son muestras tomadas por
broncoscopía, el cual es un método seguro para obtener secreciones directamente de los
bronquios y alvéolos, pero debe ser realizado por personal entrenado, es un método caro
de obtención de muestras, que se contamina con flora de la porción superior del aparato
respiratorio y no exento de complicaciones. Por lo anterior es poco realista utilizar este
método de rutina en todo paciente con infección de las vías respiratorias inferiores y
debe reservarse para casos seleccionados, tales como pacientes con patología crónica o
refractaria o aquellos casos de pacientes inmunocomprometidos en los cuales el
diagnóstico etiológico no pueda establecerse con muestras de expectoración. Los
cultivos obtenidos por broncoscopía para agentes bacterianos habituales causantes de
neumonias son considerados comparables, pero no mejor que los cultivos obtenidos de
expectoración obtenida con criterios citológicos aceptables.
3.51 Toma de Muestra
La broncoscopía se realiza con el paciente sentado o recostado y el instrumento
se pasa a través de las fosas nasales o por vía oral. Se aplica antestesia local por
nebulización o aplicación tópica con xilocaína u otro equivalente. Los anestésicos
tópicos tienen propiedades antibacterianas, pero los estudios disponibles muestran que
esto no afecta el recobrar microorganismos si la muestra es procesada dentro de dos
horas de obtenida.
3.52 Procesamiento
Las muestras para estudios microbiológicos son consideradas en dos categorías:
a) Categoría N° 1: Incluye estudios para detectar microorganismos que no tienen
problemas de interpretación, a pesar de contaminación con flora de la vía aérea
superior. Esto inlcuye agentes micóticos oportunistas, parásitos, Legionella spp. y
Mycobacterias.
Para lavado bronquioalveolar: Se instilan 20 ml de suero fisiológico, luego se
aspiran a 50-100 mm de Hg para recolectar el líquido de lavado. El procedimiento
se repite 5 veces con un total de 100 ml de suero instilado, del cual se recupera
alrededor de 40-70 ml.
Aproximadamente 15 ml se necesitan para cultivo de bacterias aerobias, Legionella
spp., Nocardia spp., hongos, mycobacterias y virus.
Para estudio de bacterias habituales, las muestras de LBA son enviadas al
laboratorio en cantidad mínima de 1 ml de solución salina estéril. Mezclar con
vortex para resuspender previo a la siembra y sembrar en PAS, ACHO, Mac
Conkey y tioglicolato usando un asa calibrada de 0.01 ml o pipeta de 10 Ul.
Incubar a 35° C con 5-7% CO2 hasta por 48 horas. El tioglicolato incubar hasta 5
días.
Recuentos de bacterias de >104 son considerados significativos.
b) Categoría N° 2: Esta incluye el estudio de microorganismos que pueden ser parte
de la flora oral. Los cultivos de rutina se le pueden realizar de manera similar a la
expectoración, y estos también tienen el problema de contaminación con flora bucal.
No se deben realizar estudios para bacterias anaerobias.
Se pueden lograr mejor rendimiento utilizando un cepillo protegido, el cual es
dirigido directamente hacia la zona en que hay secreción purulenta, el cual cuando
es retirado es puesto en un tubo que contiene 1 ml de ringer lactato estéril, el cual es
mezclado con un vórtex. Se inocula 0.01 ml en PAS; ACHO, Mac Conkey y
tioglicolato, permite el estudio para bacterias anaerobias.
Incubar durante 48 horas. El tioglicolato incubar hasta 5 días.
Recuentos de colonias de >103 son considerados significativos, dado que estos
representan alrededor de 106/ml de la solución original.
3.5 Informe Semicuantitativo
- Si no hay crecimiento:
-Si hay crecimiento de 1-2 colonias:
-Si hay crecimiento de 3-10 colonias:
-Si hay crecimiento mayor a 10 colonias
-Si hay colonias presentes:
en un área 1° y 2° de inoculación.
No hubo desarrollo microbiano.
Muy escaso desarrollo microbiano.
Escaso desarrollo microbiano.
Moderado desarrollo microbiano.
Abundante desarrollo microbiano.
Si un organismo es observado en la tinción de Gram del caldo (caldo no sub
cultivado o sin desarrollo en el sub cultivo), informar microorganismo observado
solamente por tinción del caldo).
Si un microorganismo está solo presente en el sub cultivo del caldo informar
microorganismo aislado de caldo solamente.
3.54 Informe Cuantitativo
-N° de colonias (<10)= <103
-N° de colonias (10-100)=103-104
-N° de colonias (100-1000)=104-105
-N° de colonias(>1000)=>105
3.6 Cultivo cuantitativo de aspirados
Ventilación Mecánica
endotraqueales en paciente en
La neumonia asociada a ventilación mecánica se define como la neumonia en un
paciente en ventilación mecánica luego de 48 horas. Durante años se utilizó para su
diagnóstico los criterios de Johanson et al de 1972, el cual incluye criterios no
específicos, por lo que se recomienda el uso de criterios microbiológicos
cuantitativos para el diagnóstico de Neumonia Asociada a Ventilación Mecánica
(NAVM). El uso del cultivo cuantitativo del aspirado endotraqueal tiene una
sensibilidad y especificidad diagnósticas comparables a las estrategias diagnósticas
basadas en estudios fibrobroncoscópicos y tiene la ventaja de la universalidad de su
aplicación, bajo costo independencia de equipos humanos y técnicos restringidos.
Se recomienda informar los recuentos microbiológicos de todas las especies
bacterianas potencialmente patógenas y que su lectura sea interpretada utilizando al
menos dos puntos de corte ( <103 y > 106 ufc/ml). Este enfoque permite dar mayor
flexibilidad al grupo tratante sobre interpretación de la etiología polimicrobiana
presente en algunos casos y sobre la decisión de dirigir el estudio hacia causas
potenciales y/o suspender el tratamiento antibiótico cuando el recuento sea muy
bajo.
No se recomienda su solicitud cuando se ha realizado un cambio en la terapia
antimicrobiana en la últimas 72 horas, por cuanto el estudio cuantitativo puede verse
afectado.
Esta dirigido hacia algunas etiologías bacterianas.
No existe experiencia significativa sobre estudios diagnósticos invasivos y no
invasivos en el reconocimiento de la NAVM en pediatría. El cultivo cuantitativo del
aspirado endotraqueal puede ser aplicado, aunque su lectura sólo puede ser realizada
por extrapolación, utilizando los puntos de corte descritos para los adultos.
3.61 Indicaciones de cultivo de AET
Se recomienda realizar cultivo cuantitativo de AET a todo paciente con sospecha de
NAVM, conectado en un tiempo mayor de 48 horas y que presente criterios clínicos
y radiológicos y en el que no se haya realizado un cambio en el tratamiento
antimicrobiano en las últimas 72 horas.
3.62 Toma de Muestra
Se debe tomar una muestra en forma estéril, utilizando sonda de aspiración
introducida por el tubo endotraqueal (TET), conectado en el otro extemo a un
colector o trampa estéril. Debe ser realizado por un profesional entrenado.
La muestra no se debe diluir y debe ser enviada de inmediato al laboratorio.
3.62 Procesamiento
-Diluir la muestra a la mitad con suero fisiológico estéril(dilución1:2).
-Homogeneizar con perlas de vidrio y agitador durante 2 minutos.
-Extraer 100 Ul y diluir en 9,9 ml de suero fisiológico y agitar ( dilución 1:100).
-Rotular una placa de agar sangre y Mac conkey como A y el otro set como B.
-Sembrar 100 Ul (0,1 ml) en el set de placas A ( dilución final 1:2000).
-Sembrar 10 Ul (0,01 ml ) en el set de placas B ( Dilución final 1:20.000).
-Incubar a 35° C en atmósfera aeróbica hasta 72 horas.
La muestra puede también ser sembrada en ACHO para la detección de
Haemophilus influenzae en caso de NAVM de inicio precoz.
La tinción de Gram de este tipo de muestras tiene un rendimiento limitado, ya que
no permite predecir que tipo de microorganismos tendrá un recuento significativo.
3.63 Informe de Laboratorio
La emisión del informe debe incluir un detalle de cada microorganismo aislado, con
su recuento y antibiograma correspondiente. La presentación de los potenciales
agentes identificados es necesaria debido a que cerca de un tercio de los casos tienen
aislamientos polimicrobianos.
- Set Placas A:
1 colonia: equivale a 2000 ufc/ml (2x103).
5 colonias: equivale a 10.000 ufc/ml (1x104).
50 colonias equivale a 100.000 ufc/ml ( 1x105).
-Set de placas B:
1 colonia: equivale a 20.000 ufc/ml (2x104).
5 colonias : equivale a 100.000 ufc/ml ( 1x105).
50 colonias equivale: 1.000.000 (>1x106).
4.0 INTERPRETACIÓN DE LOS CULTIVOS
El desarrollo de un microorganismo potencialmente patógeno en forma
predominante, asociado a una buena calidad de muestra tiene valor diagnóstico cuando
el cuadro clínico es compatible.
5.0 REFERENCIAS
1. Ballows A, Shadomy H. J. eds. Manual of Clinical Microbiology. 5th de.
Washington D.C.ASM, 1991.
2. Cumitech 7A. Diagnóstico de Laboratorio de Infecciones del tracto respiratorio
bajo.Septiembre,1987
3. Isenberg.H. Clinical Microbiology Procedures Handbook. Vol 1, 1993.
4. Murray, Baron, Pfaller, Tenover, Yolken. Manual of Clinical Microbiology. 6th de.
Washington D.C.ASM, 1995.
5. Murray, Baron, Pfaller, Tenover, Yolken. Manual of Clinical Microbiology. 7th ed.
Washington D.C. ASM, 1999.
6. Vandepitte, K. Engback, P. Piot y C. C. Henck Basic Laboratory Procedures in
Clinical Bacteriology. WHO 1991.
7. Documento "Consenso diagnóstico de la Neumonia Asociada a Ventilación
Mecánica". Sochinf
8. Clinical Micobiology procedures Handbook. Isemberg H. Volumen N° 1. 1.15.
9. Ventilator- Associated Pneumonia or Not? Contemporay Diangosis. Mayhall Glen.
Emerging Iinfectious Diseases. Vol 7;, N° 2 Marzo- Abril 2001.