repaso_aguas_2015

Microbiología
del agua
Cátedra Microbiología
Habitan en:
• Aguas naturales
• Aguas dulces
• Estuarios
• Aguas saladas
• Aguas termales
Cátedra Microbiología
• Virus
• Bacterias
• Algas
• Protozoos
• Hongos
microscópicos
Los microorganismos del agua son::
Característicos de la masa de
agua natural
TRANSITORIOS
Entran al agua en forma
intermitente, procedentes de:
•El aire
•El suelo
•Procesos industriales
•Procesos domésticos
Cátedra Microbiología
INDÍGENAS
PAPEL DE LOS MICROORGANISMOS
EN EL AGUA
Cátedra Microbiología
Reciclaje de nutrientes por
microorganismos
Cátedra Microbiología
• Son la base de las cadenas tróficas
acuáticas
• Reciclan la materia haciéndola disponible
para otros organismos
• Mineralización
• Producción de proteína microbiana
• Mayor productividad por metro cuadrado
en el agua que en el suelo.
Cátedra Microbiología
Papel de los microrganismos
en el reciclaje nutrientes
Bacterias que causan
cambios organolépticos en
el agua
Cátedra Microbiología
Bacterias que obstruyen
conducciones de agua
Principalmente:
ferrobacterias
y sulfobacterias
Cátedra Microbiología
Ferrobacterias
Filamentosas
4FeCO3 + O2 + 6H2O  4FeOH + 4CO2 + 40 cal
Soluble
insoluble
precipita en la
membrana
celular
En medio ácido + ferrocianato de K  azul de prusia
Cátedra Microbiología
Oxidan carbonato ferroso  Hidróxido férrico
• Grandes depósitos
geológicos de Fe
• Canalizaciones y
conducciones
donde
frecuentemente
produce
obstrucciones
• El FeOH
precipitado forma
costras en el
interior de tuberías
de hierro en aguas
ricas en este
elemento
Cátedra Microbiología
Hábitat de las ferrobacterias:
• Grandes depósitos
geológicos de Fe
• Canalizaciones y
conducciones
donde
frecuentemente
produce
obstrucciones
• El FeOH
precipitado forma
costras en el
interior de tuberías
de hierro en aguas
ricas en este
elemento
Cátedra Microbiología
Hábitat de las ferrobacterias:
Obtienen energía
oxidando Fe++ (soluble)

Fe+++ (insoluble)

Coloración pardo bermellón
en el agua
Cátedra Microbiología
Crenothrix, Leptothrix, Gallionella

Cátedra Microbiología
Ferrobacterias:
• Leptothrix
• Crenothrix
• Gallionella
Sphaerotilus:
• No es ferrobacteria
obligada. Oxida
también Mn++Mn+++
• Tampoco es autótrofa
obligada
• Origen: hidrotermal y volcánico
• Características de aguas poluídas ricas en
H2S
• Intervienen en procesos de
descomposición orgánica:
• Oxidando el H2S
• Liberando E para biosíntesis
Thiothrix, Beggiatoa (anaerobia
H2S
facultativa, principal causante de obstrucciones)
+ 1/2 O2 ________________> S + H2O +
41 cal
Cátedra Microbiología
Sulfobacterias
Bacterias que
producen color en
el agua
Bacterias que al oxidar Fe++ y Mn++
producen indirectamente alteraciones
de color en el agua
Cátedra Microbiología
El hierro contenido en sus aguas
promueve la actividad oxidante de
las bacterias
Cátedra Microbiología
La producción de color en el
agua es importante en
abastecimientos provenientes
de pozos
Origen del olor y del sabor:
bacterias y otros microorganismos
Cátedra Microbiología
Bacterias que
producen olor y
sabor en el agua
• Mercaptanos
• Gas sulfhídrico
• Subproductos
aminados
• Ácidos grasos, etc
Olor intenso
en el agua
Cátedra Microbiología
Productos de
descomposición de
bacterias
anaerobias:
Sabor en el agua
Se acentúa con la
cloración,
especialmente si
es producido por
compuestos
fenólicos
Cátedra Microbiología
• Desechos
• Microorganismos
(bacterias)
El sabor
Utilizan su nitrógeno a expensas del cual
aumentan sus poblaciones

Olor y sabor en el agua
Cátedra Microbiología
Actinomycetos:
Promueven la descomposición de:
• Plantas acuáticas
• Algas (Anabaena, Oscillatoria,
Aphanizomenon, diatomeas)
produce olor a tierra
en:
• el agua
• el suelo
• en cultivo
• El cloro libre
intensifica este olor
• Producen olor y sabor en
el agua:
• Crenothrix
(ferrobacteria)
• Beggiatoa
(Sulfobacteria)
Cátedra Microbiología
• Streptomyces
Origen de la
microbiota
microbiana en el
agua
Cátedra Microbiología
• La microbiota del
agua atmosférica es
proporcionada por el
aire y es lavada con • La microbiota de las
la lluvia en las
aguas subterráneas
partículas
es afectada por
procesos de filtración
Cátedra Microbiología
Origen de la flora microbiana
• del aire
• del arrastre
superficial de tierra
• de vertimientos
domésticos e
industriales
Cátedra Microbiología
• La microbiota de las
aguas
superficiales
llega al agua
periódicamente
Cátedra Microbiología
Distribución de los
microorganismos en el
medio acuático
Cátedra Microbiología
• Los
microorganismos
pueden estar a
cualquier
profundidad
• Hasta en las fosas
oceánicas
• Las capas superiores y los sedimentos
del fondo albergan las mayores
poblaciones de microorganismos,
particularmente en aguas profundas
Cátedra Microbiología
• Floración: crecimiento
excesivo, explosivo
• Dan color aparente al
agua: rojo, pardo,
verde, ambar,
amarillo
• Oscillatoria erytrea
Mar Rojo
Microorganismos
bentónicos
• Algunos forman
biopelículas
Cátedra Microbiología
Microorganismos
planctónicos
ZONA
LITORAL
Bentos:
Fotótrofas y
hetrótrofas
Planton: Fotótrofas y hetrótrofas
Epiliton: heterótrofas bentónicas
sobre partículas
Nivel de compensación
Oxidantes del Azufre
ZONA LIMNÉTICA
ZONA PROFUNDA
Sedimentación
Bentos: hetrótrofas,
muchas anaeróbicas
Cátedra Microbiología
Microorganismos planctonicos y bentónicos
( fotosíntéticos y heterótrofos )
Aguas bien
aireadas,
metabolismo
oxidativo. Gran
variedad cualitativa
pero no cuantitativa
de especies
Sistema fluvial
Predominio de bacilos
gram-negativos anaerobios
facultativos. Reducción de
N03-. Reducción de Mn y de
Fe(lll) puede liberar P
soluble. Poblaciones de
diatomeas y clorofíceas.
Potencial de
oxidoreducción
Cátedra Microbiología
Dominio de las
algas verdeazuladas,
flagelados y
bacterias
micro
aerófilas.
Producción de CH4,
FeS. Etapas
terminales: ausencia
de eucariotas
excepto protozoos
anaerobios (Bodo
spp.), y
ocasionalmente
metazoos como
Tubifex spp. Muy
pocas especies.
Cesa la nitrificación, producción de H2 y
productos de la fermentación. Reducción de
S04 2- Afloramiento de bacterias fototróficas
que crecen con H2S.Producción de FeS a
partir de Fe (lll) reducido.
Predominio completo de anaerobios y
desaparición de microaerófilos y la mayoría
de anaerobios facultativos
No se utiliza la
enumeración de
bacterias de cada
comunidad, porque:
• Es difícil por los métodos
sofisticados que requiere
• La comunidad bacteriana
varían mucho y rápido
ante cambios
ambientales.
• Es más sencillo
identificar y
enumerar
pequeños
invertebrados
bénticos o
algas perifíticas.
Cátedra Microbiología
Hay una diversidad de pruebas para intentar
supervisar la calidad del agua
Aguas residuales
La polución tiene lugar cuando compuestos o
ambiente acuático y cambian sus propiedades y
con ellas se pierde el equilibrio produciéndose
una variación en la distribución y composición
de la comunidad.
Cátedra Microbiología
microorganismos indeseables penetran en el
• Produciendo enfermedades
• Creando una biomasa estéticamente
desagradable
• Generando metabolitos tóxicos.
Cátedra Microbiología
• Los microorganismos pueden contribuir a
la contaminación de diversas maneras:
Enfermedades producidas por
microorganismos acuáticos
Cátedra Microbiología
Bacterias:
Coliformes
Estreptococos fecales
Especies de Bacillus,
Proteus, Clostridium,
Thiothrix, Thiobacillus,etc.
• Patógenos
causantes de
infecciones del
tracto intestinal
Cátedra Microbiología
En áreas de polución
doméstica predominan:
• Los microorganismos en el
agua pueden afectar la
salud de personas,
animales, plantas y otros
organismos
Cátedra Microbiología
Organismos patógenos
transportados por el agua
Bacterias
Virus
Protozoos
Escherichia
Salmonella
Shigella
Vibrio
Leptospira
Mycobacterium
Enterovirus
Hepatitis A
Adenovirus
Coxsackie A y B
Reovirus
Parvovirus
Entamoeba
Acanthamoeba
Giardia
Schistosoma
Cátedra Microbiología
Fiebre tifoidea:
• Salmonella tiphi,
otras salmonelas
• Transmisión por
alimento y
eventualmente por
el agua
Cólera
• Vibrio cholerae
• Endémica en Asia:
niños
• Epidémica en
América: adultos y
niños
Cátedra Microbiología
Si hay fecales en el agua de consumo,
hay posibilidad de:
Disentería bacilar o shiguelosis:
• Shiguella spp
• Mayor susceptibilidad en niños
de 1 - 4 años
Cátedra Microbiología
Disentería amebiana:
• Entamoeba hystolitica
• agua y alimentos
Hepatitis A o hepatitis viral infecciosa
• Persona a persona
• Alimentos
• Agua
• Moluscos contaminados
Cátedra Microbiología
Parasitosis:
• Tenias
• Áscaris
• Tricocéfalos
Otras enfermedades:
• Poliomielitis
• Gastroenteritis viral y por
Escherichia coli
• Dermatomicosis
En aguas recreacionales con más de
2500 coliformes/100ml, pueden aparecer
Cátedra Microbiología de ojos, nariz, oídos y garganta
infecciones
Propagación de virus humanos en el agua
Excretas humanas
Mares
Mariscos
Aguas
residuales
Ríos y lagos
Recreación
Abono con lodos de
depuradoras
Agua
subterránea
Agua potable
HOMBRE
Verduras
Agua de riego
Aerosoles
Cátedra Microbiología
Impregnación de
suelos
• Los microorganismos
patógenos se
encuentran en todas
las aguas residuales
Cátedra Microbiología
Contaminación por microorganismos patógenos
La utilización indiscriminada de los
mismos cursos fluviales para:
• baños
• agua de bebida
• y eliminación de residuos
Pone la población en peligro

A no ser que los cauces de agua se
examinen y traten
minuciosamente.
Cátedra Microbiología

• Procedimientos para examinar el agua y
determinar su calidad microbiológica.
• Métodos de purificación del agua para
proporcionar agua potable y segura
• Métodos de tratamiento de aguas residuales
antes de su eliminación o reutilización
Cátedra Microbiología
Para evitar las enfermedades existen:
Cátedra Microbiología
Procedimientos para
examinar el agua y
determinar su calidad
microbiológica.
Pero pueden estar en número tan exiguo que su
aislamiento sea difícil y no adecuado como
sistema de "alarma".
Cátedra Microbiología
El aislamiento de un microorganismo patógeno
constituiría la prueba irrefutable de peligro
potencial
Detectarla a bajos niveles es la mejor
garantía para preservar la potabilidad
de las reservas de agua.
Cátedra Microbiología
Los procedimientos actuales de análisis del agua
se basan en que:
• la mayoría de los microorganismos patógenos
alcanzan cauces como resultado de la
contaminación fecal
• "Prueba de la
Determinación de
Coliformes”:
• Única prueba
microbiológica
estatutaria vigente en
muchos países del
mundo
Cátedra Microbiología
• La contaminación fecal
puede ser demostrada
mediante la detección en
el agua de bacterias que
están presentes en
números muy elevados
en el contenido
intestinal del hombre y
de otros animales.
• Un incremento
general en la
incidencia de un
patógeno exigiría
rápidamente el
uso de otros
análisis más
complicados.
Cátedra Microbiología
• Un examen bacteriológico
estricto no garantiza
completamente que la
muestra de agua se
encuentre necesariamente
libre de otro tipo de
patógenos que tengan
características de
supervivencia distintas.
Para qué se hacen los análisis de agua:
• Evaluar la calidad de las aguas costeras y
aguas dulces destinadas a recreación
• Detectar la influencia de los pozos sépticos,
ubicados en la cercanía de la línea de costa
y de ríos y quebradas
Cátedra Microbiología
• Evaluar la calidad de las aguas de
abastecimiento doméstico a nivel urbano y
rural
• Cuantificar la influencia
de descargas puntuales
importantes, como
plantas de tratamiento
de líquidos cloacales e
industriales.
Cátedra Microbiología
• Analizar los aportes de
los pluviales a la carga
bacteriana del cuerpo
receptor
Microorganismos indicadores de la calidad del agua
• Podrían no aparecer en muestras de laboratorio pues:
• Tienen acceso en forma esporádica
• No sobreviven en el agua por mucho tiempo
• Necesitan mucho tiempo para detectarse
• Si están en número muy pequeño no se pueden detectar
por métodos de laboratorio
Cátedra Microbiología
En el análisis rutinario de aguas no se aislan patógenos
porque:
• Su presencia en el
agua prueba que está
polucionada con
material fecal de
personas o animales
de sangre caliente
• Se encuentran sólo
en aguas
polucionadas
• Y cuando están
presentes en el agua
indican que hay
patógenos
Cátedra Microbiología
Se usan microorganismos indicadores:
Método de determinación del número de gérmenes
Número de unidades formadoras de colonias
totales o de una especie determinada en un gr o
en 1 ml de material investigado bajo condiciones
de cultivo definidas
Cátedra Microbiología
Número de gérmenes:
• Métodos de determinación del número de
gérmenes:
(NMP).
YMétodo de filtro de membrana
• Método de la placa vertida
• Método de título
Cátedra Microbiología
YMétodos del número más probable
• Paralelamente varias
series decimales de
dilución (mínimo
tres) en medio de
cultivo líquido.
• Número de tubos con
crecimiento NMP,
tablas de McRady, 100
ml de muestra
Cátedra Microbiología
Método del número más probable
Prueba Presuntiva
Inoculación en caldo lactosado
No producción de gas
Fin de la prueba
Producción de gas +
-
Cátedra Microbiología
Colimetría
Prueba Confirmativa
Resiembra a partir de los tubos positivos caldo lactosado
Siembra de muestras + en EMB
Colonias pequeñas, con centro oscuro
y brillo metálico +
O Siembra en tubos con CLVBB
Producción de gas +
Terminación de la prueba
Colonias más típicas de siembra por estría EMB
Coloración de Gram: Bacilos Gram - no
esporulados
• Filtro estéril sobre unidad de filtración de 0.45
• Se filtra cierto volumen de agua: bacterias
quedan retenidas
• El filtro se coloca sobre soporte absorbente
saturado con el medio adecuado. Incubar en
cajas de petri especiales que permiten acomodar
el soporte y el medio adecuado
• Desarrollo de colonias sobre el filtro
Cátedra Microbiología
Método de filtro de membrana
Limitación
• Aguas con muchos sólidos disueltos o suspendidos
NMP = #coliformes x 100/ vol filtrado
Cátedra Microbiología
Ventajas:
• Examinar grandes volúmenes de agua
• Más rápidas que técnicas de tubo
• Estyimación cuantitativa de tipos de
bacterias (coliformes, etc.)
• La materia orgánica
biodegradable de
origen doméstico,
agrícola o industrial
puede marcar cambios
en un cuerpo de agua
Principalmente como
consecuencia de la
alteración en el
equilibrio de O2 de
agua.
Cátedra Microbiología
Contaminación debida a materia orgánica
demandante de oxígeno:
Cátedra Microbiología
• El O2 tiene una solubilidad en el
agua relativamente baja (9,8 ppm
(mg/l) a 20°C), y la actividad
microbiana puede consumir con
rapidez el O2 disuelto.
Condiciones aeróbicas + 200C +
número suficiente de bacterias
La materia orgánica es descompuesta en CO2
y agua.
Cátedra Microbiología
DBO: Cantidad de oxígeno requerido por las
bacterias, para descomponer la materia
orgánica bajo condiciones aeróbicas.
• En este caso a la
prueba se le nombra
DBO5
Cátedra Microbiología
Tiempo que tarda la
materia orgánica en
descomponerse: 10
días
• En la práctica cinco
días, período en el
cual se descompone
entre el 70 - 80% de
la materia orgánica.
Conocer la contaminación de un cuerpo de agua
con aguas residuales domésticas o industriales,
en términos del oxígeno que requieran para oxidar la
materia orgánica que llevan en solución,
bajo condiciones aeróbicas.
Estas pruebas son de rutina en:
• Las plantas de purificación de agua
• En el cobro de las tasas retributivas.
Cátedra Microbiología
La prueba de DBO permite :
Para hacer este bioensayo se requiere :
• Según los métodos APHAAWA, diluir con agua
destilada las muestras con
mucha materia orgánica,
para garantizar la
oxigenación, debido a la
poca solubilidad del O2 (9
mg/l a 200C ).
Standard Methods for Examination of Water and Wasted Water
• No deben existir tóxicos
en el agua
• Las condiciones
ambientales y el nivel de
nutrientes para las
bacterias deben ser
apropiados
Cátedra Microbiología
• Proteger las muestras para
evitar la aireación
• Aguas naturales muy
limpias no necesitan
dilución.
Método de medición del DBO
• Si hay necesidad, se
diluye la muestra
• Ajustar la temperatura
a 200C
• Airear la muestra, por
agitación, hasta
alcanzar nivel de
saturación
• Llenar con la muestra
dos o más botellas
Winkler
• A una de las botellas se le
mide oxígeno, las demás se
dejan en incubación por 5 días
a 200C.
• Al final de este tiempo, se mide
el oxígeno presente
• Se resta el valor obtenido en la
muestra analizada el primer día
• La diferencia en la en la
cantidad de oxígeno equivale
al valor de DBO presente en la
muestra.
Standard Methods for Examination of Water and Wasted
Water
Cátedra Microbiología
Métodos de purificación del
agua para proporcionar agua
potable y segura
Cátedra Microbiología
Tratamiento
de coagulación - sedimentación
• Se espera que con este tratamiento se remuevan entre el
• 40 - 50% de de la DQO
• 80 - 90 % de sólidos suspendidos, incluyendo los microorganismos
Cátedra Microbiología
Costos de la coagulación sedimentación :
• Aunque el área de
establecimiento es más
pequeña que la de los
tratamientos biológicos, los
equipos son costosos.
• Los costos de operación tales
como coagulantes, control
permanente de pH y energía
son relativamente altos.
Cátedra Microbiología
Adaptable a:
• Tratamiento de aguas
de abastecimiento
• Tratamiento de aguas
residuales de la
mayoría de las
industrias desde la
metal - mecánica a las
de pulpa y papel.
Tratamiento convencional
Agua cruda
Cribado
Sedimentación
Cámara de
mezcla del
floculante
Clarificador
Canales de
sedimentación
Cámara de
floculación
Cloración
Almacenamiento
Distribución
Cátedra Microbiología
Cátedra Microbiología
ANÁLISIS
MICROBIOLÓGICO
DE AGUA
Se puede definir el análisis microbiológico como el
conjunto de operaciones encaminadas a
determinar los microorganismos presentes en una
muestra problema de AGUA.
Cátedra Microbiología
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO
DEL AGUA
• DISMINUCION DEL CONTENIDO MICROBIANO
• La acidez
• oxígeno disuelto
• Las sales
• La filtración
• Los protozoos fagocitan bacterias
• La turbidez ya que los rayos UV. no manifiestan su acción
y así disminuyen el número de estas.
• INCREMENTO
• La materia orgánica
• Si existe poca cantidad de sales se estimula el desarrollo
bacteriano.
• La temperatura puede aumentar o disminuir el contenido
bacteriano.
Cátedra Microbiología
FACTORES QUE INCIDEN EN
LA MICROBIOTA BACTERIANA
ENFERMEDAD
AGENTE
ORIGEN BACATERIANO
Fiebres tifoideas y
paratifoideas
Salmonella typhi,
Salmonella
Paratyphi A y B
Shigella
ANÁLISIS
MICROBIOLÓGIC
AGUA
Vibrio cholerae
Disentería bacilar
cólera
Cátedra Microbiología
• El interés se centra en los
microorganismos
patógenos, que son los
diferentes
tipos
de
bacterias, virus, protozoos
y otros organismos, que
transmiten enfermedades
Gastroenteritis
agudas y diarreas
Escherichia coli.
Campylobacter
Yersiniae nterocolitica
Salmonella sp
Shigellas
Cátedra Microbiología
En los países en vías de desarrollo las enfermedades producidas por estos
patógenos son uno de los motivos más importantes de muerte prematura,
sobre todo de niños. Normalmente estos microbios llegan al agua en las
heces y otros restos orgánicos que producen las personas infectadas
Cátedra Microbiología
• Métodos de análisis:
1. Bacterias coliformes y Escherichia coli
2. Enterococos:
3. Clostridium perfringens(incluidas las esporas)
4. Enumeración de microorganismos cultivables-Recuento de
colonias a 22 °C
Otros tests complementarios:
•Salmonelas
•Estafilococos patógenos
•Bacteriófagos fecales
•Enterovirus
•Protozoos
•Animálculos (gusanos-larvas), Invertebrados béntico
TOMA DE MUESTRAS PARA ANÁLISIS
MICROBIOLÓGICO
• Su análisis debe comenzar antes de que hayan
transcurrido 6 horas desde el momento de la toma
de muestras.
• En circunstancias excepcionales, las muestras pueden
conservarse a una temperatura de 4ºC durante un
periodo máximo de 24 h antes de su análisis.
Cátedra Microbiología
• Las muestras que se tomarán para el análisis deben
ser representativas para poder determinar así su
calidad microbiológica.
• Para su recogida debe utilizarse frascos estériles y debe
recolectarse cantidades comprendidas entre 500 y 1000 ml.
• Se añadirá una cantidad suficiente de tiosulfato sódico.
- Para un volumen de 250 ml son suficientes 0,2 ml de una
solución acuosa al 3% de tiosulfato sódico
Cátedra Microbiología
• Cuando se estime probable que el agua a analizar contenga
trazas de cloro, cloramina u ozono, será necesario neutralizar
su efecto bactericida en el momento del muestreo.
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: BACTERIAS
COLIFORMES
•
•
•
•
•
pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, de morfología bacilar, Gram
negativas, aerobias o anaerobias facultativas, oxidasa negativa, no
esporuladas y que fermentan la lactosa con producción de ácido a 37ºCen
24-48 horas
Del grupo coliformes forman parte varios
géneros:
Escherichia,
Enterobacter,
Klebsiella,
Citrobacter.
-Escherichia coli produce dolor abdominal,
diarrea, nauseas, vómitos y fiebre.
-Klebsiella
produce
enfermedades
respiratorias.
-Citrobacter produce alteraciones a nivel del
colon y a nivel intestinal
Cátedra Microbiología
 1.FUNDAMENTO: Los coliformes reagrupan ciertas especies bacterianas
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: BACTERIAS
COLIFORMES
Cátedra Microbiología
• 2. MÉTODO: El método consiste en desarrollar solo una
prueba presuntiva en el que una reacción negativa excluye la
presencia del grupo coliforme.
Inocular caldo de peptona con
diluciones decimales de la muestra de agua,
expresados en 10-1, 10-2, 10-3. Inocular 3 tubos de
lactosa bilis verde brillante (a los que se les añade un
tubo de Durham invertido) con 1 ml de cada dilución.
Incubar a 37ºC (+/-1ºC) durante 24 ó48h.
Cátedra Microbiología
• 3. PROCEDIMIENTO.
Cátedra Microbiología
• 4.LECTURA E INTERPRETACIÓN. Si se observa
crecimiento bacteriano con producción de gas
las 24h o antes, la presencia de bacterias
coliformes fecales se considerará confirmada,
prosiguiendo con el método del filtro de
membrana para conteo
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO:
COLIFORMES FECALES
• FUNDAMENTO: Las bacterias coliformes de origen fecal
son aquellas comprendidas en el grupo anterior
(coliformes totales), que además son capaces de fermentar
la lactosa, con producción de ácido y de gas a 44ºC, en un
tiempo máximo de 24h.2.
Cátedra Microbiología
• Método de filtración de membrana.
• TOMA DE MUESTRA Y ALMACENAMIENTO: Se utiliza la
muestra de agua tomada para el análisis de coliformes totales
que se encontraba guardada en frigorífico a 4ºC
Cátedra Microbiología
• MÉTODO: El método consiste en la determinación del nº de
coliformes mediante filtración de volúmenes determinados
del agua a analizar por filtros de membrana e incubación
sobre medio de lactosa enriquecido(agar de lactosa TTC con
heptadecilsulfato de sodio) y una temperatura de 44,5ºC(+/0,2ºC).3.
4. PROCEDIMIENTO:
1.
Colocar un filtro de membrana estéril
sobre el soporte de filtración. 2.
Adaptar el embudo y conectar el
matraz a una bomba eléctrica de vacío.
Filtrar 100 ml de muestra si se trata de
agua potable, y 0,1 y 1 ml si se trata de
aguas no potables, previamente
homogeneizadas. Lavar con unos 30 ml
de agua destilada.
2.
1.
Retirar el embudo. Mediante las pinzas
esterilizadas, transferir la membrana
filtrante sobre el medio de cultivo
contenido en una placa de Petri, de
modo que la superficie de filtración
quede hacia arriba. Cerrar e invertir la
placa e incubar a 44ºC(+/-1ºC) durante
24h ( +/-2h ).
Cátedra Microbiología
•
Cátedra Microbiología
• 5. LECTURA E INTERPRETACION:
• La lectura de los resultados requiere el examen de las colonias
aparecidas sobre la membrana y el examen de los halos en la
capa de agar subyacente a la membrana.
• Se considera coliformes aquellas colonias que presentan halo
amarillo, halo amarillo con centro naranja(Escherichia y
Citrobacter).
• halo amarillo con centro rojo ladrillo(Klebsiella y
Enterobacter).
• La densidad se estima como el total de coliformes totales por
100ml, utilizando aquellos filtros de membrana que tengan
20-80 colonias de coliformes y no más de 200.
Cátedra Microbiología
• La fermentación de la lactosa provoca la formación de un
halo amarillo.
• 1.FUNDAMENTO: Los enterococos pueden considerarse como
indicadores de contaminación fecal.
• Algunos enterococos presentes en las aguas pueden proceder
de otros hábitats.
• Se pueden detectar y cuantificar las especies: Enterococcus
faecalis, E. faecium, E. duransy E. hirae.
• Como enterococos intestinales se consideran aquellos
microorganismos capaces de reducir el cloruro de
trifeniltetrazolio(TTC) y de hidrolizar la esculina.
Cátedra Microbiología
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO:
ENTEROCOCOS FECALES (NORMA UNE-EN ISO 7899-2: 2001)
• 2. MÉTODO: Se utiliza para la determinación del número de
enterococos intestinales mediante filtración de un volumen
determinado del agua a analizar a través de filtros de
membrana e incubación de los mismos sobre medios de
cultivo a temperaturas adecuadas.
Cátedra Microbiología
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: ENTEROCOCOS FECALES
(NORMA UNE-EN ISO 7899-2: 2001)
• 4. LECTURA E INTERPRETACIÓN: Tras la incubación, se
consideran como colonias típicas de enterococos todas las
que muestren un color rojo, marrón o rosado, en el centro o
en toda la colonia, consecuencia de la reducción del TTC
(incoloro) a trifenilformazán(rojo).
Cátedra Microbiología
• 3. PROCEDIMIENTO: Se filtran 100 ml del agua a analizar
previamente homogeneizada. Se coloca el filtro de membrana
sobre el medio de Slanetzy Bartleyy se incuban las placas a
37ºCdurante 48 h.
Cátedra Microbiología
Análisis microbiológico: Clostridium perfringens
(incluidas esporas)
• La especie C. perfringens están normalmente presente
en heces. Sus esporas son resistentes al calor, a los
procesos de desinfección y a los tratamientos de
depuración habituales de las aguas (cloración), por lo
que su supervivencia en agua es mayor.
• La diferenciación de C. perfringens de otras especies de
Clostridium, se basa en su capacidad de fermentar la
sacarosa con producción de ácido, en su incapacidad de
fermentar la celobiosa (debido a la ausencia de β-Dglucosidasa) y en la producción de fosfatasa ácida.
Cátedra Microbiología
• 1.FUNDAMENTO: Los bacterias incluidas en el género
Clostridium tienen morfología bacilar, son Gram
positivas, anaerobias estrictas y capaces de formar
esporas.
• 2. MÉTODO: Se utiliza de método de filtración para la
determinación del número de C. perfringens mediante
filtración de un volumen determinado del agua a analizar a
través de filtros de membrana e incubación de los mismos
sobre medios de cultivo a temperaturas adecuadas
AGAR m-cp
Cátedra Microbiología
Análisis microbiológico: Clostridium perfringens
(incluidas esporas)
Cátedra Microbiología
• 3. PROCEDIMIENTO: Siguiendo el método de
filtración, se filtran 100 ml del agua a analizar,
previamente homogeneizado. Se coloca el filtro de
membrana sobre el medio de m-CP y se incuban las
placas a 44ºC durante 24 h en condiciones de
anaerobiosis.
Cátedra Microbiología
• 4. LECTURA E INTERPRETACIÓN: Tras la incubación, se
consideran como colonias típicas de C. perfringens todas las
que muestren un color amarillo opaco, consecuencia de la
acidificación del medio tras la fermentación de la sacarosa, y
que cambien a color rosa o rojo al cabo de 20 a 30 segundos
de exposición a vapores de hidróxido amónico.
Cátedra Microbiología
•
•
A.
B.
C.
D.
1.FUNDAMENTO: Las bacterias aerobias son todas
las bacterias heterótrofas, aerobias o anaerobias
facultativas, mesófilas y psicotróficas capaces de
crecer en un medio de agar nutritivo.
UTILIDAD
evaluar el estado de los recursos de agua en su
origen
eficacia del proceso de tratamiento de las aguas
destinadas al consumo humano
indica la limpieza y el estado de los sistemas de
distribución
Permite detectar cambios anómalos en el número
de microorganismos en la red de distribución.
Cátedra Microbiología
Análisis microbiológico: Bacterias aerobias
UNE EN ISO 6222:1999
• 2. MÉTODO: Este método se basa en contar el nº de
colonias desarrolladas en una placa de medio de
cultivo sólido, en el que se ha sembrado un volumen
conocido de agua muestra, transcurrido un tiempo y
una temperatura de incubación determinados.
Cátedra Microbiología
Análisis microbiológico: Bacterias aerobias
UNE EN ISO 6222:1999
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3. PROCEDIMIENTO:
Preparar 3 tubos con 9 ml de agua peptonada cada uno.
Realizar diluciones decimales
Depositar 1 ml en cada placa de Petri de cada diluciòn.
Verter 15 ml de medio de cultivo de agar (PCA) en cada
placa y dejar solidificar (5-10min),
- invertir las placas y meterlas en la estufa a 37ºC(+/-1ºC),
- incubar durante 48h.
- Si se emplea agar extracto de levadura la incubación se
lleva a cabo a 22ºCdurante 72 horas.
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•
-
• 3. PROCEDIMIENTO:
Cátedra Microbiología
• 4. LECTURA Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS: Transcurridos
48h (+/-3h) contar todas las colonias desarrolladas en cada
placa. El resultado se expresará, como nº de bacterias totales
en 1 ml. Se estima utilizando aquellos filtros de membrana
que tengan 20-80 colonias de coliformes y no más de 200
Cátedra Microbiología
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•Gracias