Tratamiento de muestras y técnicas de separación de analitos

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Tema 2: Tratamiento de muestras y
técnicas de separación de analitos.
ecosistema
(¿contaminado?)
toma y
preparación
Tratamiento de muestras (algunas directrices)
muestra
1) Toma de una muestra representativa: réplica en
miniatura del sistema real
2) Transformación en la forma química y física (sólido,
líquido, gas) y la concentración adecuadas al
método analítico que se va a emplear
sólido, líquido o gas
técnica
analítica
Ejemplo de un análisis químico:
Cuantificación de cafeína y teobromina en chocolate
3) Si es posible, extracción del analito de interés o de
especies interferentes en las medidas analíticas
4) Homogeneizado de la muestra para el análisis:
pulverizado de sólidos, homogeneizado de mezclas y
disoluciones
5) Métodos “de campo”: medidas in-situ, teledetección.
Paso 2: extracción de los analitos
Paso 1: extracción de la materia grasa
Paso 3: separación de los analitos
Detección por absorción
Ultravioleta a 254 nm
Paso 4: Calibrado del método
y análisis de datos
Recta de calibrado para cada analito
1
¿Qué cantidad de muestra es necesaria?
Muestreo: algunas consideraciones
mezcla de dos especies A y B con
fracciones molares p y q, respectivamente
Si se cogen N partículas de la muestra como
analito para realizar una medida se tiene:
Partículas A: NA= N⋅ p
Partículas B: NB= N⋅ q
desviación estándar en NA y NB: s =
N⋅p⋅q
desviación relativa (%)
RA= s/NA x 100
RB= s/NB x 100
(porcentaje mayor para las componentes minoritarias)
Constante de muestreo Z : masa de analito tal que R= 1%
Métodos de transformación y extracción de gases
¿Qué cantidad de muestra es necesaria?
Medidas de 24Na en el hígado
x
valor
medio
- disolución
- condensación
- atrapamiento
químico
s (desviación estándar)
R = s/x %
desviación relativa
K
gas
- congelación
- adsorción sobre
superficies
Masa de muestra
Masa necesaria si se
requiere un valor de R:
M = Z/R2
Métodos de transformación y extracción de líquidos
- evaporación
- ebullición
- volatilización de llama
o electroquímica
líquido o
disolución
- fusión
- disolución
- digestión
- extracción por
recirculación y
supercrítica
gas
extracción líquido-líquido
sólido
sólido
Métodos de transformación y extracción de sólidos
sólido
- precipitación
- congelación
- adsorción en
poros y superficies
líquido o
disolución
-
evaporación/desorción
combustión
ablación (láser, eléctrica)
bombardeo (iones)
líquido o
disolución
gas
2
Extracción de analitos con disolventes
Digestión de sólidos:
disolución con ácidos, bases, agentes oxidantes
(HCl, HNO3, H2SO4, H3PO4, HF, NaOH, ...)
Familias de analitos y su polaridad
(tabla 24.2 libro de Harris)
disolución ácida de metales: M + nH+ → Mn+ + (n/2)H2
problema: se forman muchas sustancias volátiles.
Se deben usar reactores cerrados y paredes gruesas
protonación de aniones de la muestra: H2CO3 (→ CO2),
H2S, PH3, H3BO3 , ...
formación de haluros metálicos volátiles: HgCl2, SnCl4,
No Polares
Hidrocarburos saturados
y aromáticos
Mercaptanos y sulfuros
Polaridad Intermedia fuerte
Alcoholes
Ácidos carboxílicos
Fenoles
Aminas primarias y secundarias
Nitrilos
Polaridad Intermedia débil
Éteres
Cetonas
Ésteres
Aminas terciarias
Nitritos
Polaridad Fuerte
Polihidroxialcoholes
Aminoalcoholes
Hidroxácidos
Ácidos polipróticos
Polifenoles
Algunos disolventes típicos en Análisis Químico
Isooctano (99ºC)
Extracción en fase sólida
Disolvente (pto. Ebullición normal)
Disolución de
la muestra
Hexano (69ºC)
disolvente 2
disolvente 3
Tolueno (101ºC)
Polaridad decreciente
Benceno (80ºC)
Diclorometano (39ºC)
Muestra:
disolvente 1
con analitos
Acetato de Etilo (77ºC)
Cloroformo (61ºC)
Etanol (78ºC)
Acetona (56ºC)
Dimetilsulfóxido (189ºC)
matriz
sólida
Metanol (64ºC)
Agua (100ºC)
inmiscibles
miscibles
Métodos de separación y extracción de analitos
Extracción: Pasar un soluto de una matriz a otra
Extracción Líquido-líquido
V
Fase 1
V
Fase 1
V
Fase 2
(VA = VB)
Coeficiente de reparto
de un analito entre dos
matrices (o fases)
[C]2
K = [C]
1
K=0.5
K=5
disolvente 1
disolvente 2 disolvente 3
Extracción líquido-líquido
Disolventes inmiscibles
Coeficiente de reparto y
Eficiencia de extracción
Fase orgánica
[C]1 = q n /V1
[C]2 = (1-q) n /V2
Fase acuosa
Disolventes orgánicos
CCl4, CHCl3
tolueno, hexano,
benceno
3
Extracción
líquido-líquido
en modo continuo
(analito no volátil)
disolvente
extractor
más denso
A
disolvente
extractor
menos denso
calor
B
Emerge sólo disolvente
B
emerge
A
emerge
Columnas cromatográficas modernas
Cromatografía de gases
Muestra con
analitos
A, B, C ,D
Disolvente con
Solutos A y B
(fase móvil)
Relleno de la columna
(fase estacionaria)
muestra
muestra
condensador
(refrigerado)
Separación cromatográfica clásica en columna
Los analitos A y B fluyen con velocidades distintas
a través del material de la columna (fase estacionaria)
Por su distinta interacción con el mismo
detector
Horno con columna
de separación
cromatográfica
señal
horno
A
B
D
C
Columna abierta
(cromatografía de gases)
Columna empaquetada
(cromatografía de líquidos)
tiempo
Fase estacionaria
(sólida o líquida)
grosor 0.1 - 5 µm
diámetro interno
columna 0.1 - 0.5 mm
Los analitos A, B, C, D, etc fluyen con velocidades distintas
a través de la columna por su distinta interacción con la misma
Mayor interacción = mayor tiempo de retención
Un ejemplo:
Separación de hidrocarburos saturados (alcanos) lineales por
Cromatografía de gases con Temperatura programada
Fase estacionaria
(sólido poroso)
diámetro interno
columna 1 - 5 mm
Composición del “Chapapote” del Prestige
Fuel pesado (residuo de la destilación del petróleo crudo)
Temperatura
Programada
50º-250º en 8 min.
Utilización
- combustión industrial (centrales térmicas, hornos, cementeras) y
- combustible de barcos con motores diesel lentos, de gran potencia
Composición
(fuente: Laboratorio Le-Cedre (Francia) http://www.le-cedre.fr/fr/prestige)
Técnica Utilizada: Cromatografía de gases con
detección por Espectrometría de masas
Resultados
Hidrocarburos saturados 25 %
Hidrocarburos aromaticos 50 %
Resinas 10 % Asfaltenos 25 %
4
Vertido del
Prestige
Hidrocarburos
Saturados
Hidrocarburos
Aromáticos
5
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