O-49-docu

EFECTOS DE LA GONADECTOMIA EN LA SEÑALIZACIÓN DE Ca2+
INTRACELULAR EN REBANADAS DE HIPÓFISIS DE RATON MACHO.
ML Durán-Pastén1, T Fiordelisio-Coll3, CV. Rivera-Cerecedo2 y A Hernández-Cruz1. 1División
de Neurociencias and 2Bioterio, Instituto de Fisiología Celular, y 3Departamento de Biología,
Facultad de Ciencias. Universidad Nacional Autónoma de México, DF, México, 04320.
mlduran@ifc.unam.mx
La GnRH provoca la liberación de las gonadotropinas LF y FSH en gonadotropos. Los
patrones de señalización calcio intracelular [Ca2+]i en gonadotropos resultan de la unión
del GnRH a receptores específicos acoplados a proteínas G y a la producción de InsP3.
En un estudio reciente en rebanadas de hipófisis de ratón macho, observamos la
respuesta de docenas de gonadotropos a GnRH simultáneamente, así como su
localización y distribución. De los gonadotropos in situ, 20% muestran respuestas
canónicas con el aumento en la concentración de GnRH, mientras que el 55% de ellos
muestran una progresión no canónica y ~ 30% muestran respuestas no oscilatorias.
Cuando la misma dosis de GnRH es aplicada repetidamente, las células presentan
prácticamente la misma respuesta. Además, los gonadotropos in situ se encuentran
organizados en pequeños racimos con patrones de Ca2+ intracelular similares. En este
trabajo estudiamos la regulación por los esteroides gonadales de las señales de Ca2+
intracelulares en gonadotropos de rebanadas de hipófisis de ratón macho normal y
castrado (1). Fueron empleados ratones Balb-C machos adultos control y con 30 días
post gonadectomia (Gnx). La hipófisis fue embebida en agar y se obtuvieron rebanadas
transversales de 130 µm grosor. Después de la incubación con el indicador de calcio
fluo-4 AM (22 μM; 30 min) las rebanadas fueron montadas en un microscopio vertical y
prefundidas con BBS normal saturado con 95% de O2 y 5% CO2. Las secuencias de
imágenes fueron obtenidas a 510 nm de emisión con un objetivo 20X de inmersión en
agua (10 ms de exposición; 250 ms de intervalo) con un monocromador Polichrome V
(TILL photonics; 488 nm excitación) y una cámara Imago QE. El GnRH (dosos de 0.01
nM a 100 nM) fue aplicado en el baño por 30 s y lavado por >30 min entre cada
aplicación. Después de la Gnx, el número de células que responden a 100 nM [GnRH]
aumenta, de 43 ± 8.4 en ratón intacto a 75.5±16.2 en ratones Gnx (media ± ES). Sin
embargo, con respecto al control, en ratones Gnx el porcentaje de células que responden
a concentraciones bajas de GnRH disminuye de 31.5 ± 0.9 a 5.7±1.1 y de 40.7 ± 8.2 a
6.5±1.9 (media ± ES; 0.01 y 0.1 nM, respectivamente). La mayoría de la células sólo
responden a dosis altas (10 y 100 nM de GnRH), sugiriendo una disminución en la
sensibilidad al agonista. Por consiguiente, cuando las curvas dosis respuesta son
calculadas, los valores de la ED50 van de 0.19 a 0.74 nM en el ratón intacto y de 2.3 a
6.58 nM en ratones Gnx. En contraste con los ratones intactos, las respuestas
oscilatorias en los ratones Gnx se presentan con mayor frecuencia en todas las dosis de
GnRH probadas. Nuestros resultados confirman que los esteroides, así como otros
factores gonadales juegan un rol crucial en la regulación de la señalización de [Ca2+]i
inducida por GnRH en gonadotropos de ratones macho, lo cual abre nuevas preguntas
sobre los factores que controlan la expresión y regulación de los mecanismos
involucrados en la señalización de [Ca2+]i.
1. Sánchez-Cárdenas C. and Hernández-Cruz A. (2010). GnRH-induced Ca2+ signalling patterns in
mouse gonadotrophs recorded from acute pituitary slices in vitro. Neuroendocrinology 91: 239255