MICOLOGÍA 2011 ASPERGILOSIS ASPERGILOSIS •Dra. Marisa Biasoli •Centro de Referencia de Micología Son un conjunto de enfermedades producidas por hongos del género Aspergillus Alérgicas Interacción del hospedero sensibilizado con Ag fúngico inmunológicamente reactivo Patogénicas Manifestación de base infecciosa donde los agentes causales son los conidios, en este caso de un hongo oportunista CLASIFICACIÓN DE LAS MICOSIS Micosis superficiales Piedra Pitiriasis versicolor Tiña nigra Otitis externa Micosis cutáneomucosas Dermatofitosis Onicomicosis Intertrigo blastomicético Candidiasis mucocutánea Queratitis Micosis subcutáneas Micetoma Esporotricosis Cromoblastomicosis Hialohifomicosis subcutánea Feohifomicosis subcutánea Sinusitis micótica CLASIFICACIÓN DE LAS MICOSIS Paracoccidioidomicosis Histoplasmosis Coccidioidomicosis Criptococosis Aspergilosis Micosis profundas Candidiasis sistémica Zigomicosis Feohifomicosis cerebral y diseminada Hialohifomicosis sistémica Infecciones diseminadas por hongos levaduriformes (Trichosporonosis, Malasseziosis, Geotricosis) Las micotoxicosis, producidas por metabolitos secundarios tóxicos (micotoxinas) no están incluidas dentro de las Aspergilosis Agentes Etiológicos: - Aspergillus fumigatus - Aspergillus flavus - Aspergillus niger - Aspergillus terreus - Aspergillus nidulans Hábitat natural: son hongos ambientales, se pueden aislar de cualquier sustrato que contenga materia orgánica y humedad: suelo, vegetales en descomposición, alimentos enlatados abiertos, sistemas de ventilación, bolsas de diálisis, pintura fresca, etc. Vía de ingreso : inhalatoria, aunque puede llegar por otras vías como inoculación directa a córnea (queratitis), piel (micetoma), vía intravenosa (drogadictos) Sitio de infección más frecuente: vías respiratorias Factores de virulencia en A. fumigatus: Latgé Latgé JPl, JPl, Clin Microb Rev 1999 Cuadros Clínicos • No invasiva Pulmonar • Invasiva - Alérgica - Aspergiloma -Traqueobronquitis -Aspergilosis Pulmonar Invasiva -Aspergilosis Necrotizante Crónica Extra Pulmonar • SNC • Cutánea • Ótica • Genitourinaria • Oftálmica Aspergilosis Pulmonar Alérgica Alveolitis extrínseca: Exposiciones reiteradas con altas cc de Ag o conidios de Aspergillus Disnea, tos, fiebre, escalofríos Puede haber fibrosis con daño pulmonar irreversible Existen Ac séricos Aspergilosis Broncopulmonar Alérgica: Asma Eosinofilia periférica y aumento de Ig E Reacción cutánea (+) a extractos de Aspergillus Tapones mucosos conteniendo hifas Ac séricos Aspergilosis Pulmonar Alérgica Sinusitis alérgica: Pólipos nasales Tapones mucosos con eosinofilia e hifas Reacción cutánea (+) para extractos de Aspergillus Ac séricos Aspergilosis Pulmonar no invasiva: Aspergiloma Involucra cavidades preformadas (Por TBC) Formación de masas fúngicas semejantes a micetomas Síntomas similares a ABPA + hemoptisis Reacción cutánea (+) y Ac séricos Aspergilosis Pulmonar Invasiva (API) Infección oportunista Causas predisponentes -Neutropenia o N deficientes -Neoplasia, -Enf hematológicas malignas, -Transplantes, -Coticoterapia, -VIH ? -Peq. tamaño conidios -Sust inh fagocitosis y lisis de MØ yN Patogenia de Aspergillus - Invasión de hifas del parénquima pulmonar (elastasas) - Infarto y necrosis de tejido y vasos sanguíneos - Diseminación hematógena Aspergilosis Invasiva (AI) Traqueobronquitis: Frecuente en pacientes con SIDA y transplantados Disnea, tos fiebre, escalofríos Puede evolucionar a una API o diseminarse Aspergilosis pulmonar invasiva (API) Forma grave y frecuentemente fatal Neumonitis necrotizante con invasión de vasos sanguíneos. -Neumonía Puede presentarse como: -Bronconeumonia necrotizante -Infarto hemorragico -Abscesos pulmonares Síntomas: tos, fiebre, infiltrados pulmonares, hemoptisis Aspergilosis Invasiva (API) Aspergilosis Semiinvasiva Necrotizante Inflamación del parénquima pulmonar sin invasión de vasos sanguíneos Enfermos pulmonares crónicos Síntomas: tos, expectoración, fiebre, pérdida de peso0 Localizaciones extra-pulmonares Aspergilosis del SNC Aspergilosis cutánea 1º y 2º Localización ótica Localización genitourinaria Localización oftálmica Aspergilosis Invasiva (API) Aspergilosis Semiinvasiva Necrotizante Inflamación del parénquima pulmonar sin invasión de vasos sanguíneos Enfermos pulmonares crónicos Síntomas: tos, expectoración, fiebre, pérdida de peso0 Localizaciones extra-pulmonares Aspergilosis del SNC Aspergilosis cutánea 1º y 2º Localización ótica Localización genitourinaria Localización oftálmica Interaction of Aspergillus with the host Acute IA ABPA Allergic sinusitis Subacute IA Tracheobronchitis Aspergilloma Chronic cavitary Chronic fibrosing Immune dysfunction Normal immune . function Frequency of aspergillosis Frequency of aspergillosis A unique microbial-host interaction Immune hyperactivity www.aspergillus.man.ac.uk ESTUDIOS MICOLÓGICOS 1-Muestra: esputo seriado, LBA, biopsias, hemocultivos, lavados sec. nasal, punción abcesos, secresión ótica, raspado ojo, piel, etc Observación en fresco 2- Examen directo 3- Cultivos Observación por fijación y tinción • Medios generales • Medios selectivos 4- Identificación de género y especie: Macro y Micromorfología 5- Estudios complementarios - Detección de Ac, - Detección Ag, - Detección ADN 6- Interpretación e informe de los resultados ESTUDIOS MICOLÓGICOS Examen directo en fresco ED en fresco con gueguén de material rinosinusal – 400x ESTUDIOS MICOLÓGICOS Examen directo por coloración Coloración Grocott de abceso cerebral – 400x ESTUDIOS MICOLÓGICOS Examen directo por coloración Coloración Grocott de abceso cerebral – 400x ESTUDIOS MICOLÓGICOS - Cultivos Esputo seriado, LBA, biopsia, punción, etc. Hisopado de mucosa Sb, Sb Cl, CCS. Incubar a 28 ºC y 37ºC, 1 mes Sb, Sb Cl Incubar a 28 ºC, 1 semana • En caldo Hemocultivos • Lisis-centrifugación Sb, Sb Cl, CCS. Incubar a 28 ºC y 37ºC, 1 mes Escamas de piel Sb, Sb Cl Incubar a 28 ºC, 2 semanas Caracterización taxonómica del género Aspergillus Características micromorfológicas de especies de Aspergillus Macro y micromorfología de Aspergillus fumigatus A. fumigatus, baja frecuencia de resitencia a los azoles www.aspergillus.man.ac.uk Macro y micromorfología de Aspergillus flavus A. flavus -algunas cepas son resistentes a la anfotericina B Macro y micromorfología de Aspergillus niger Macromorfología de Aspergillus terreus www.aspergillus.man.ac.uk Micromorfología de Aspergillus terreus A. terreus – resistente a Anf B www.aspergillus.man.ac.uk Macromorfología de Aspergillus nidulans www.aspergillus.man.ac.uk Macro y micromorfología de Aspergillus nidulans www.aspergillus.man.ac.uk Micromorfología de Aspergillus nidulans www.aspergillus.man.ac.uk La frecuencia relativa de las especies asociadas con aspergilosis invasiva es la siguiente: 85-90 % de A. fumigatus, 10.5 % A. flavus, 3-7 % A. niger 1 % A. nidulans. Hay aproximadamente 25 -30 otras especies de Aspergillus que han causado la enfermedad en los seres humanos .. Características macro y micromorfológicas de especies de Aspergillus A.fumigatus A.nidulans A.flavus A.niger A.terreus Aspecto Plano, aterciopelado, algodonoso Plano, aterciopelado Pulverulento Punteado negro Aterciopelado, flocoso Color Verde botella, blancoblanco-grisá grisáceo Verde amarillento Verde amarillento Blanco amarillento, negro Marró Marrón amarillento Reverso Incoloro, Rojo amarillento Rojo pú púrpura Incoloro, café café amarillento Incoloro, amarillento Incoloro, beige Conidió Conidióforo Corto, liso, incoloro, 300 µm Muy corto, liso, café café (marró (marrón), 600 µm Regular, pared rugosa Largo, 1.5 – 3 mm Regular,hialino liso Vesí Vesícula Mazo o domo Hemiesfè Hemiesfèrica Esfè Esfèrica Globosa Subesfé Subesférica Fialides Una serie, paralelas Dos series, paralelas Una a dos series radiadas Dos series radiadas Dos series Ligeramente colunnar Conidios Globosos, equinulados, equinulados, verdes Globosos, equinulados, equinulados, verdes Piriformes o globosos, verde amarillentos Globosos, negros Globosos, estriados, amarronados Cleistotecios --- Globosos, cafè cafè (marròn) marròn) 130 µm --- Ascosporas --- Rojizas --- --- --- Células en avellana --- 20 µm --- --- --- Esclerotes --- --- Blanco o negro --- --- Temperatura de desarrollo óptimo 37 a 50 ºC 30 a 37 ºC 37 ºC 37 ºC 37 ºC CARACTERISTICAS Colon ia Repro ducci ón asexu ada Repro ducci ón sexua da Otros --- --- ESTUDIOS MICOLÓGICOS: Pruebas complementarias Detección de Anticuerpos Técnicas utilizadas: - ID - CIE Antígenos utilizados: - Ag específicos de especie - Ag metabólicos Resultados de la ID: - ABPA: 4 o más bandas - Aspergiloma: hasta 18 bandas - AI: 1 o ninguna banda Ac 4 mm Ag 4 mm ESTUDIOS MICOLÓGICOS: Pruebas complementarias • Detección de Antígenos Antígenos detectados: Ag galactomanano (GM) Anticuerpos utilizados: Ac Monoclonal de rata EBA-2 Técnica: ELISA doble sandwich Tratamiento del suero: con calor + EDTA para disociación de inmunocomplejos y pptación de proteínas Platelia Aspergillus (Bio-rad): GM (+) : 2 pruebas consecutivas positivas. Punto de corte: ≥ 1,5 ng/ml Utilidad diagnóstica: pacientes neutropénicos adultos (<100 N/mm3 >3 semanas ó <500 N/mm3 >5 semanas) ESTUDIOS MICOLÓGICOS: Pruebas complementarias Detección de Metabolitos fúngicos (1-3)-ß-D-glucano -Componente de pared celular de la mayoría de los hongos excepto Cryptococcus neoformans y Mucorales -No existe en tej. de mamíferos,cel. proc. y virus -Su eliminación es lenta (no hay glucanasas en suero) -Es un marcador panfúngico Buen marcador de IFI combinar con otras técnicas para la identificación a nivel de género Se han detectado falsos (+): tratamientos de hemodiálisis con membrana de celulosa, tratamiento con albúminas, agentes anti-cancerosos y ciertos ATB. -Existen disponibles 4 equipos comerciales: Fungitell, Fungitec G, Wako, B-G Star ESTUDIOS MICOLÓGICOS: Pruebas complementarias - Utilidad diagnóstica de (1-3)-ß-D-glucano: • Una prueba (+) indica un criterio microbiológico de IFI • Tiene una S del 87,5%, una E de 89,6 % para la AI • Desventajas: al ser marcador panfúngico debe combinarse con otras pruebas que permitan identificar la especie fúngica infectante. • La deteccion conjunta de ambos marcadores, GM y BG, realizadas en suero bisemanalmente, permite: 1-aumentar la E y el valor predictivo (+) a un 100 %; 2- predecir la evolución en los enfermos con AI y 3- detectar los falsos positivos para ambos tests. ESTUDIO MCOLÓGICO DE UN CASO MUESTRA: Punción Nódulo pulmonar de paciente con transplante de MO realizado hace 10 días. Examen directo en fresco (KOH 20%): Se observan filamentos tabicados hialinos Cultivos: Se obtuvo desarrollo de un hongo filamentoso en todos los tubos ESTUDIO MICOLÓGICO DE UN CASO Estudio macromorfológico: Se obtuvo desarrollo de colonia de color ocre, aspecto aterciopelado, acuminada, bordes radiados, de desarrollo regular a abundante ESTUDIO MICOLÓGICO DE UN CASO Estudio micromorfológico de la colonia: Se observan hifas tabicadas hialinas. Conidióforos de pared gruesa, vesículas globosas, 2 hileras de fialides, conidios pequeños, cabezas aspergilares columnares (con lupa) ESTUDIO MICOLÓGICO DE UN CASO MUESTRA: Punción Nódulo pulmonar de paciente con transplante de MO realizado hace 10 días. - Identificación del hongo? - Porqué es importante la identificación de la especie? - Repetiría la toma de muestra? - Qué estudios complementarios realizaría? - si le interesa saber más acerca del tratamiento consulte: www.aspergillus.man.ac.uk http://aspergilosis.reviberoammicol.com/