Introducción: Las células precursoras de mieloma múlti

LVI Congreso Nacional de la SEHH
Pediátrica. Hospital Universitario La Paz. Madrid. 4Investigación Clínica.
Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas (CNIO). Madrid
Introducción: Las células precursoras de mieloma múltiple (MM) poseen capacidad clonogénica y presentan propiedades de células madre que confieren resistencia a fármacos
constituyendo así la side population (SP) de MM. Nuestro grupo
demostró que los receptores NKG2D y NKp30 se encuentran
sobreexpresados en células natural killer (NK) activadas y expandidas (NKAE) y que son esenciales para su correcto funcionamiento frente al MM. Este estudio identifica el papel de los
receptores y ligandos de las células NK en la destrucción de la
célula de MM, en particular sobre las células tumorales precursoras con capacidad clonogénica (CTC).
Métodos: Se obtuvieron NKAE a partir de células NK de
pacientes con MM cocultivadas con células K562-mb15-41BBL
irradiadas. La actividad citotóxica se cuantificó mediante fluorescencia en tiempo resuelto con europium-TDA y se valoró la
acción específica sobre las CTC mediante cultivos en metilcelulosa. La SP se caracterizó mediante detección de eflujo de Dye
Cycle Violet por citometría de flujo (CMF). Las diferentes poblaciones se separaron mediante sorting. La expresión de ligandos
en células de MM se estudió mediante CMF o PCR cuantitativa. La actividad de las cls. NK y NKAE de los pacientes con
MM se comparó con la de células NK de donantes sanos.
Resultados: A una proporción de 8:1 (NK: MM) las células
NK (n=20) y NKAE (n=3) de pacientes produjeron la lisis del
28,8±2,8% y 68±0,4% de las células de MM, respectivamente. El efecto de las NK de donantes sanos sobre las de MM
fue similar (21,1±4,5%). Sin embargo, tanto las células NK de
pacientes como las obtenidas de donantes sanos indujeron
mayor destrucción (p<0,01) de CTCs (48,2±6,9% y 58,3±4%,
en cada caso). De forma destacada, la lisis de CTCs inducida por NKAEs (80,8±7,5%) fue incluso superior a la obtenida
sobre células de MM. En 7 líneas celulares de MM el estudio
por CMF de los ligandos de NK (Figura 1) reveló que las células
de la SP poseen la misma expresión que el resto de las células de MM (no side population) para los ligandos de NKG2D
(ULBP-1, ULBP-2, ULBP-3, MICA, MICB). Sin embargo presentan infraexpresión de los receptores de apoptosis (FAS, TRAILDR4, TRAIL-DR5) y de los ligandos de DNAM-1 (CD112 y
Figura 1. Perfil de expresión de marcadores de superficie en side
population (CTCs) y en células de MM no side population de líneas
celulares de MM (n=7) analizado por citometría de flujo.
CD155). Respecto a NKp30, su ligando B7H6 se encuentra
infraexpresado tanto en la SP de estas líneas celulares como en
las células primarias de MM de pacientes con la enfermedad.
Conclusiones: In vitro, la actividad citotóxica de las células
NKAE sobre las CTC del MM supera a la de las células NK
de pacientes con MM e incluso a la de individuos sanos. Los
ligandos de NKG2D; ULBP-1, ULBP-2, ULBP-3, MICA, MICB,
permanecen en las CTC y podrían constituir dianas terapéuticas para el tratamiento del MM.
CO-013 TERAPIA CELULAR HAPLOIDÉNTICA
Y SÍNDROME DE LIBERACIÓN DE CITOCINAS
Martínez M.E., Dorado N., Forés R., Regidor C., Bueno J.L.,
Gutiérrez Y., García M., Anze G., Morales A., Bautista G., Cabrera J.R.
Hospital Universitario Puerta de Hierro Majadahonda. Madrid
Introducción: El empleo de infusiones celulares de un
donante haploidéntico (ICDH) como terapia celular en el tratamiento de neoplasias hematológicas se está revelando como
un procedimiento eficaz. Sin embargo en algunos protocolos
se ha descrito un síndrome de liberación de citocinas (haploimmunostorm o HIS) tras la infusión, presumiblemente mediado
por IL-6, consistente en fiebre, rash, disfunción hepática, diarrea, derrames, distrés respiratorio y edemas. Presentamos la
experiencia de nuestro centro en relación a las manifestaciones
clínicas del síndrome HIS tras infusión de células haploidénticas en nuestro protocolo de “microtrasplantes”.
Pacientes y métodos: Entre enero/2013 y mayo/2014
hemos realizado 16 ICDH procedentes de 8 donantes (sangre
periférica tras movilización con G-CSF) a 7 pacientes (5 LMA, 1
AREB y 1 LMMC), mediana de edad 66 años. Las células administradas en cada una de las infusiones (mediana-rango) fue: CMN
2.60 x108/kg (5.43-1.50 x108/kg), CD3+ 1.25 x 108/kg (0.35-2.42
x 108/kg), CD34+ 2.82 x 106/kg (6.58-1.05 x 106/kg). Ocho ICDH
se realizaron inmediatamente tras la colecta y el resto tras descongelación y lavado. Las ICDH fueron realizadas tras administración de quimioterapia. Todos los pacientes con LMA alcanzaron
remisión completa y EMR-. Hemos analizado el desarrollo de las
manifestaciones propias del HIS en cada una de las infusiones.
Resultados: El procedimiento fue bien tolerado en la mayoría
de los casos. Hemos observado fiebre en 13 casos, rash morbiliforme en 6, leve disfunción hepática (hiperbilirrubinemia) en 2,
diarrea en 1 y edema en 1. Un paciente desarrolló una reacción
inmediata tras la segunda infusión seguido de cuadro de fibrilación
auricular que cedió con tratamiento. Ningún paciente desarrolló
cuadro de hiperpermeabilidad capilar ni infiltrados pulmonares.
Los síntomas cedieron espontáneamente o con tratamiento sintomático, sólo en un caso se instauró tratamiento esteroideo con
resolución del cuadro. En ningún caso se documentó prendimiento del injerto (estudios de quimerismo) ni enfermedad injerto-contra-huésped. No hemos observado relación entre gravedad del
HIS, características del producto celular y datos clínico-biológicos.
Curiosamente algunos pacientes desarrollaron fenómenos inmunológicos como plasmocitosis medular o aumento de células NK.
Conclusión: En nuestra experiencia las ICDH en nuestro
protocolo, aunque pueden producir algunas de las manifestaciones del síndrome de liberación de citoquinas (HIS), son bien
toleradas y generalmente se resuelven de forma espontánea, sin
necesidad de tratamiento específico. Incluso un cierto grado de
reacción podría ser beneficioso desde el punto de vista terapéutico.
I 282 I