El virus del ébola analizado por un Bioquímico

El virus del ébola
analizado por un
Bioquímico-Biotecnólogo
Nadine Fernández-Novel Marx
Nazaret Gámez Ruiz
3ºBioquímica. Bioquímica, Biotecnología y Sociedad
●
Índice
1. La enfermedad del Ébola.
2. Enfermedad contagiosa.
3. Cuadro clínico y diagnóstico.
4. Tratamiento.
5. Molecularidad y mecanismo de acción.
6. Pruebas para la determinación de la enfermedad.
7. Estrategias terapéuticas.
8. Sociedad.
1. La enfermedad del Ébola.
Serotipos del virus del Ébola.
Ébola-Bundibugyo.
Ébola-Tai-Forest.
Ébola-Reston.
Ébola-Sudán.
Ébola-Zaire.
2. Enfermedad contagiosa.
3. Cuadro clínico y diagnóstico.
4. Tratamiento.
5. Molecularidad y mecanismo
de acción.
Función de las proteínas víricas.
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Nucleoproteína (NP): genera una cápsula protectora para RNA genómico.
●
Polimerasa L: implicada en la síntesis y replicación del RNA genómico viral.
●
Glicoproteínas (GP1 y GP2): forman el receptor funcional del virus.
●
VP30:permite el reinicio del proceso de replicación del material genético viral.
●
VP35:facilita el proceso de replicación del material genético viral.
●
●
VP40: controla el ensamblaje de los componentes del virión y la salida de partículas virales desde la
célula infectada.
VP24:bloquea la señalización intracelular responsable de iniciar la respues inmune.
6. Pruebas para la determinación de
la enfermedad.
ELISA IgM
· PT-PCR
· Visualización del virus mediante MET: se lleva a cabo un ensayo de
inmunomicroscopía electrónica con anticuerpos y partículas de oro. Estas partículas son
observables por MET
· Aislamiento del virus en cultivos celulares: se emplean células aisladas
del tejido de pacientes. Estas células deben conservarse en medios de cultivo adecuados (células
Vero). Las partículas víricas pueden visualizarse por microscopía electrónica
7. Estrategias terapéuticas.

Tras el brote de 2014, se han incrementado los esfuerzos e
inversiones para desarrollar un tratamiento eficaz contra el
ébola.

EVD (ebola virus disease) es el conjunto de síntomas causados
por exposición al ébola. El desarrollo de terapias y vacunas
contra EVD es muy lento y requiere medias especiales.

Los tratamientos actuales se encuentran en fase experimental.
1. Genética reversa

Modifica regiones genómicas del virus para su expresión con el
fin de estudiar su función. Se sintetizan partículas víricas
(VLPs) no patógenas.

Permite estudiar los mecanismos de ensamblaje, infección y
replicación sin riesgo de contagio.

Ejemplo:
Expresión celular de proteínas de la cápside vírica para crear
vacunas
2. Terapias con análogos de nucleótidos

Favipiravir (T-705): es un inhibidor de RNA polimerasa, capaz de
bloquear el ciclo replicativo del virus. Es un derivado de
piracianocarboxiamida.

Brincidifovir (BCV): es un conjugado lípido de fosfato nucleótido
acíclico cidofovir y se ha desarrollado como un antiviral dirigido contra
virus de doble cadena.
2. Terapias con análogos de
nucleótidos

JK-05: este compuesto actúa en la RNA polimerasa del virus e inhibe su
replicación. Actualmente solo se permite su uso en caso de emergencia.

BCX4430: un análogo de adenosina que inhibe la RNA polimerasa del virus
mediante la incorporación de nuevas cadenas de RNA y causando la
terminación de la cadena.
3. Moléculas silenciadoras de RNA (iRNA)

El silenciamiento de RNA es un mecanismo regulador de la expresión
génica asociado al control del desarrollo y la diferenciación celular. A
este RNA silenciado también se le llama RNA de interferencia (iRNA).

El virus del ébola sintetiza una proteína EBOV VP35 supresora de iRNA en
mamíferos. VP35 bloquea la activación del interferón IRF-7.

Se han identificado varios iRNA capaces de inhibir la replicación del virus. Estos iRNA
forman complejos con polietilenimina (PEI) o con partículas lipídicas estables:

TKM-ebola: nanopartículas lipídicas con iRNA dirigidas hacia varias proteínas del virus.
Los fragmentos de iRNA se hibridan con el mRNA del virus interfiriendo en su
expresión.
4. Oligómeros de fosforodiamidato
antisentido (PMOs)

Se hibridan al RNA, bloqueando
la traducción por impedimento
estérico.

Ejemplo: AVI-6002,
actualmente en ensayo clínico
como terapia contra el ébola.
5. Inmunoterapia

OBJETIVO: prepara al sistema inmune frente a una infección → vacunas

Elaboración de vacunas a partir de suero con IgG extraído de pacientes
recuperados

Existen pocos ensayos, es un proceso complejo.
Ej: preparación y uso de suero
hiperinmune

Objetivo: desarrollo de suero con inmunoglobulinas anti-EBO.

Selección de Ig mediante ELISA usando lisado de EBO como antígeno.

Indice de neutralización= log(título experimento) – log (título control)

1ª inmunización a cabras con homogenizado de hígado infectado

2ª inmunización (1-3 meses)

15-20 días: extracción sangre

Preparación suero anti-EBO → ensayo con pacientes

Aumento niveles de IgG e IgM

Uso de suero hiperinmune de cabra aprobado en caso de emergencia
6. ZMapp

Cóctel de anticuerpos: mAbs humanizados + mAbs quiméricos

mAbs obtenidos a partir de ratones infectados

Clonación de linfocitos de ratón y aislamiento de genes de memoria

Transformación de genes de memoria en plantas tabaco mediante
Agrobacterium tumefaciens → producción a gran escala

Limitaciones: necesaria purificación posterior
7. Desarrollo de vacunas

Vacuna cAd3:
-Vector de adenovirus (no replicativo como soporte)
-Expresa glicoproteína de la cápside del virus
-Monovalente (anti-Z) o bivalente (anti-Z + anti-S)

Vacuna de vesículas de virus Stomatitis (VSV):
-Emplea vesículas atenuadas como base
-Contiene proteínas de la envoltura de ZEBOV
Polimorfismo

Necesidad de recopilar datos genéticos del virus para la elaboración de
vacunas:

Creación de USC Ebola Genome Browser (Santa Cruz University, EEUU)

Recopila las secuencias obtenidas de varias muestras enfrentadas frente a una
secuencia de referencia para estudiar polimorfismo

Importa datos de PDB, UniProt e IEDB
8. El ébola en la sociedad
Descubrimiento del ébola

Descubierto por el microbiólogo Peter
Piot en el laboratorio de Microbiología
de Antwerp (Bélgica) (1976)

Piot viaja al Zaire para estudiar sus
efectos y propagación

Su hallazgo no es considerado
“rentable”

“La tragedia podría haberse evitado”
(Piot sobre la epidemia de 2014)
Epidemia de 2014

Mayor brote de la historia→ 7842 víctimas en 1 año

Inicio en Guinea (diciembre 2013). Extensión a Liberia, Sierra Leona, Nigeria,
Senegal

Casos en Europa y EEUU

Desde su inicio hasta febrero 2015→ 23253 infectados, 9380 fallecidos
Acción internacional

Comunidad Económica de Estados de África Occidental (CEDEAO)
Cumbre de jefes de estado: 250000$

Unión Europea (UE)
500000€ + médicos experimentados a Guinea

Organización de las Naciones Unidas (ONU)
La OMS declara emergencia de salud pública a nivel internacional

Cuba
Envío de 103 enfermeras y 62 médicos
Ébola en España

5/8/2014 → repatriación del misionero Miguel Pajares

21/9/2014 → repatriación del misionero Manuel García

21/9/2014 → traslado a España de la religiosa ecuatoguineana Paciencia
Melgar recuperada del ébola

6/10/2014 → la auxiliar de enfermería Teresa Romero es puesta en cuarentena

20/11/2014 → repatriación de médico cooperante

2/12/2014 → la OMS declara a España “país libre de ébola”

Tratamiento: Zmapp, favipiravir, suero inmune
Medidas propuestas:

Respetar cuarentenas

Evitar todo contacto con personas infectadas

Equipamiento adecuado para el personal sanitario

Buena preparación del personal

Desarrollo de una vacuna eficaz

Mayor actuación internacional
Referencias:
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