PROTEINAS L.C.R. / ORINA URINE / C.S.F. PROTEINS METODO CON CLORURO DE BENZETONIO Para la determinación “in vitro” de Proteinas en orina y L.C.R. BENZETHONIUM CHLORIDE METHOD For “in vitro” determination of Proteins in Urine and C.S.F. Principio Principle A pH alcalino las proteínas de la muestra son desnaturalizadas, y con ayuda del EDTA se eliminan las posibles interferencias de los iones, principalmente magnesio. Posteriormente el Cloruro de Benzetonio se compleja con las mismas produciendo turbidez que se cuantifica espectrofotométricamente a 505 nm. Cálculos ΔE = E2 – E1 ΔE PR x 200 = mg prot./dl. ΔE ST At alkaline pH solution, the sample is incubated with EDTA, which denatures the proteins and basically eliminates the possible interferences from magnesium ions. Then, Benzethonium chloride is added and produces with the protein turbidity at 505 nm. This turbidity is proportional to the protein concentration and it can be measured spectrophotometrically. Calculations ΔE = E2 – E1 ΔE PR x 200 = mg prot./dl. ΔE ST Reactivos Kit 1 x 150 ml (Ref.99 30 30). Contiene: A. 1 x 100 ml. Disolución alcalina. Listo para su uso. B. 1 x 50 ml. Cloruro de Benzetonio. Listo para su uso. C. 1 x 5 ml. Standard. Disolución acuosa de Proteínas. Equivalente a 200 mg/dl. (2 g/ L). D. 1 x 5 ml. Control. Ver la concentración en la etiqueta del vial. Para calcular mg Prot./24 horas: mg/L x litros Orina 24 h. = mg/24 h. Si desea expresar los resultados en μg/min, multiplicar los mg/24 h por el factor 0,6944. Ref. 99 30 32 Ref. 99 30 34 (mg / 24 h) x 0,6944 = μg / min Ref. 99 23 05 Valores normales L.C.R.: 15 - 45 mg/dl. Orina: < 12 mg/dl. (< 130 mg/ L ) < 150 mgl (<1500 mg ) en 24 horas. Ref. 99 58 95 Las concentraciones de la solución reactiva son: Na OH EDTA Cloruro de Benzetonio Tensoactivos Se aconseja que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. 550 mM 76 mM 35 mM 1% Conservación y estabilidad Los reactivos del kit, mantenidos a temperatura ambiente (15-25º C), son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Sin embargo el Standard y el Control deberán conservarse en refrigerador a 2-8ºC. NOTA: Para obtener mayor exactitud en los resultados, se recomienda utilizar una curva de calibración. Para su creación se efectúan seriadas a partir del standard de 200 mg/dl, obteniendo los siguientes puntos: 200, 100, 50, 25 y 12,5 mg/dl. Técnica semi-micro Puede llevarse a cabo con la mitad de los volúmenes indicados anteriormente. Muestra Orina y Líquido cefalorraquídeo ( L.C.R.). Las muestras, pueden conservarse 48 horas en refrigerador (2 - 8º C). El Standard y Control contienen Azida sódica al 0,09%. Manipular con precaución. La eliminación de residuos debe hacerse según la normativa legal vigente. Técnica Muestra Standard Reactivo A BL ml --2,0 PR ml 0,1 -2,0 ST ml -0,1 2,0 Mezclar e incubar 5 min., a 37ºC. Leer (E1). Reactivo B 1,0 1,0 1,0 Mezclar e incubar 1 min., a 37ºC. Leer (E2). Lectura Longitud de onda: 505 nm. Blanco: El contenido del tubo BL. QUIMICA CLINICA APLICADA S.A. Empresa Certificada ISO 9001 / ISO 13485 A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40 Revisión: Octubre 2011 Kit 1 x 150 ml (Ref.99 30 30). Contents: A. 1 x 100 ml. Alkaline solution. Ready-to-use. B. 1 x 50 ml. Benzethonium clhoride. Ready-to-use. C. 1 x 5 ml. Standard. Solution of Proteins. Equivalent to: 200 mg/dl. (2 g/L ). D. 1 x 5 ml. Protein Control. See the concentration on the vial label. The concentrations in the reagent solution are: Na OH EDTA Benzethonium ClhorideSurfactants To calculate the mg Prot./24 h: mg/L x liters Urine 24 h. = mg/24 h. To express the results in μg/min, multiply the mg/24 h. result by the factor 0.6944. Ref. 99 30 32 Ref. 99 30 34 (mg / 24 h) x 0,6944 = μg / min Ref. 99 23 05 Normal values C.S.F.: 15 - 45 mg/dl. Urine: < 12 mg/dl. (< 130 mg/L) < 150 mg (< 1500 mg) in 24 h Ref. 99 58 95 It is advisable that each lab determines its own reference values. 550 mM 76 mM 35 mM 1% Storage and stability The reagents, when kept at room temperature (15-25ºC), will remain stable until the expiration date stated on the label. On the contrary, the Standard and the Control should be kept in the refrigerator (2-8º C). NOTE: To obtain a better recovery, it is recommended to carry out a calibration curve, by preparing dilutions from the Standard of 200 mg/dl included in the kit, with the following points: 200, 100, 50, 25, 12.5 mg/dl. Semi-micro method It can be carried out with half of the volumes above indicated. Sample Prestaciones. Características de funcionamiento. Precauciones Reagents Margen de reacción hasta 200 mg proteínas/dl. Para concentraciones superiores diluir la muestra con salina y multiplicar el resultado por el factor de dilución adecuado. Las características de funcionamiento del producto dependen tanto del reactivo como del sistema de lectura manual o automático empleados. Los siguientes datos se han obtenido de forma manual: Cerebrospinal fluid (CSF) and Urine. Samples may be stored at 2- 8ºC for 48 hours. Caution The standard and Control contains Sodium azide at 0.09%. Handle with care. The disposal of the residues has to be made according to legal local regulations. Coeficiente de Variación en la serie: 2,31% Coeficiente de Variación entre series: 2,85% Exactitud: 96,7 de porcentaje de recuperación. La hemoglobina interfiere a partir de 50 mg/dl, la bilirrubina a partir de 45 mg/dl. Autoanalizadores Adaptaciones a distintos analizadores automáticos, disponibles bajo demanda. Bibliografía Iwata, J., Nishikaza, O., (1979), Clin. Chem., 25, 1317 – 1319. Luxton, R.W., Patel, P., Keir, G., Thompson, E.J., (1989), Clin. Chem. 35, 1731 – 1734. PRO4_REG9_LCRBE Procedure BL SA ST ml ml ml Sample -0.1 -Standard --0.1 Reagent A 2.0 2.0 2.0 Mix well, and incubate 5 min. at 37ºC. Read (E1). Reagent B 1.0 1.0 1.0 Mix well, and incubate 5 min. at 37ºC. Read (E2). Reading Wavelength: 505 nm. Blank: BL contents. QUIMICA CLINICA APLICADA S.A. ISO 9001 / ISO 13485 Certified Company A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40 Revision: October 2011 Performances Characteristics Reaction range: up to 200 mg of proteins/dl. Concentrations higher than this value will require a prior dilution of the sample with saline (NaCl 0.9%). Multiply the result by the dilution factor used. The analytical performance characteristics of the product depend both of the reagent and the reading system used, manual or automatic. The following data have been obtained manually. Intraserie Variation Coefficient: 2.31% Interseries Variation Coefficient: 2.85% Recovery: 96.7 %. Concentrations of haemoglobin up to 50 mg/dl, as well as bilirubin up to 45 mg/dl do not interfere with the assay. Autoanalyzers Technical bulletins for different analyzers are available upon request. References Iwata, J., Nishikaza, O., (1979), Clin. Chem., 25, 1317 – 1319. Luxton, R.W., Patel, P., Keir, G., Thompson, E.J., (1989), Clin. Chem. 35, 1731 – 1734. PRO4_REG9_LCRBE PROTÉINES LCR/URINE MÉTHODE UTILISANT LE CHLORURE DE BENZÉTHONIUM Pour la détermination in vitro des protéines dans l’urine et le LCR Principe À un pH alcalin, les protéines de l’échantillon sont dénaturalisées. Les éventuelles interférences dues aux ions, notamment au magnésium, sont éliminées à l’aide de l’EDTA. Ensuite, les protéines et le chlorure de benzéthonium forment un complexe qui produit une turbidité quantifiée par spectrophotométrie à 505 nm. Calculs ΔE = E2 – E1 ΔE ESSAI x 200 = mg de protéines/dl ΔE ÉTALON Réactifs Kit 1 x 150 ml (Réf. 99 30 30). Contenu: A. 1 x 100 ml Solution alcaline Prêt à l’emploi. B. 1 x 50 ml Chlorure de benzéthonium. Prêt à l’emploi. C. 1 x 5 ml Étalon. Solution aqueuse de protéines. Équivalente à 200 mg/dl (2 g/ l). D. 1 x 5 ml Contrôle. Voir la concentration sur l’étiquette de la fiole. Pour calculer les mg de protéines par 24 heures: mg/l x litres. Urines.24 h = mg/24 h Pour exprimer les résultats en μg/min, multiplier les mg/24 h par le facteur 0,6944. Réf. 99 30 32 Réf. 99 30 34 (mg/24 h) x 0,6944 = μg/min Réf. 99 23 05 Valeurs normales LCR: 15 à 45 mg/dl Urine: < 12 mg/dl (< 130 mg/l) < 150 mg (< 1 500 mg) sur 24 heures. Réf. 99 58 95 Les concentrations de la solution réactive sont les suivantes: Na OH EDTA Chlorure de benzéthonium Tensioactifs Il est conseillé que chaque laboratoire établisse ses propres valeurs de référence. 550 mM 76 mM 35 mM 1% Conservation et stabilité Conservés à température ambiante (15 à 25 ºC), les réactifs du kit sont stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette. Cependant, il est conseillé de conserver l’étalon et le contrôle au réfrigérateur à une température comprise entre 2 et 8 ºC. REMARQUE: pour obtenir une meilleure précision des résultats, il est recommandé d’utiliser une courbe d’étalonnage. À cet effet, des dilutions en série à partir de l’étalon de 200 mg/dl permettent d’obtenir les points suivants: 200, 100, 50, 25 et 12,5 mg/dl. Technique semi-micro Elle peut être effectuée avec la moitié des volumes indiqués précédemment. Échantillon Urine et liquide céphalorachidien (LCR). Les échantillons peuvent être conservés pendant 48 heures au réfrigérateur (2 à 8 ºC). Précautions d’emploi L’étalon et le contrôle contiennent de l’azide de sodium à 0,09 %. Manipuler avec précaution. L’élimination des déchets doit être effectuée conformément aux normes en vigueur. Fonctionnement et caractéristiques de performance du dispositif Limite de la réaction : jusqu’à 200 mg de protéines/dl. Pour des concentrations supérieures, diluer l’échantillon avec une solution saline et multiplier le résultat par le facteur de dilution adéquat. Le fonctionnement du produit dépend tant du réactif que du système de lecture manuel ou automatique utilisé. Une technique manuelle a permis d’obtenir les données suivantes: Coefficient de variation dans la série: 2,31 % Coefficient de variation entre les séries: 2,85 % Exactitude: le pourcentage de récupération est de 96,7 %. Technique Échantillon Étalon Réactif A BL ml --2,0 ESSAI ml 0,1 -2,0 ÉT. ml -0,1 2,0 Mélanger et incuber pendant 5 minutes à 37 ºC. Lire (E1). Réactif B 1,0 1,0 QUIMICA CLINICA APLICADA S.A. Entreprise certifiée ISO 9001 / ISO 13485 A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40 Révision: Octobre 2011 Analyseurs automatiques Des adaptations à différents analyseurs automatiques sont disponibles sur demande. 1,0 Mélanger et incuber pendant 1 minute à 37 ºC. Lire (E2). Lecture Longueur d’onde: 505 nm Blanc: le contenu du tube BL. L’hémoglobine et la bilirubine interfèrent à partir de 50 mg/dl et de 45 mg/ dl respectivement. Bibliographie Iwata, J., Nishikaza, O., (1979), Clin. Chem., 25, 1317 – 1319. Luxton, R.W., Patel, P., Keir, G., Thompson, E.J., (1989), Clin. Chem. 35, 1731 – 1734. PRO4_REG9_LCRBE 958 412 886 629 636 705 http://www.cromakit.es/ Calle Tucumán 8 Nave B 18200 Maracena (Granada)