Fertilización. La fecundación, también llamada singamia, es el

Centro de Estudios Tecnológicos del Mar
(Cet-Mar)
Secuencia de aprendizaje número 3
Asignatura: Módulo Profesional III.
laboratorio)
Cultivo de moluscos I (Obtención de semilla en
Unidad: Desove, fertilización y desarrollo larval.
Semestre: Cuarto semestre
Tema integrador: Fertilización, fecundación y desarrollo larval de moluscos
Tema: cálculo de gametos y cuidado larval
Concepto fundamental. Obtención de huevos y fertilización.
Concepto subsidiario: Inducción al desove, cálculo de gametos, evaluación de la calidad
de los gametos, fecundación y desarrollo larval
Propósito: Que el estudiante conozca implemente desarrolle y practique la inducción al
desove de moluscos, evalúe la calidad de los gametos, realice fertilización y conozca
y observe el desarrollo larval de moluscos.
Valor: Determinación
Tiempo: 15 horas.
Samuel Sánchez Serrano
Actividad de apertura . Lee cuidosamente el texto y subraya las ideas principales.
Fertilización.
La fecundación, también llamada singamia, es el proceso por el cual dos gametos (masculino y femenino) se fusionan para crear un nuevo individuo con un genoma derivado de ambos progenitores. Los dos fines principales de la fecundación son la combinación de genes derivados de ambos progenitores y la generación de un nuevo individuo (reproducción). Este proceso puede darse en una amplia diversidad de maneras, dependiendo de factores como si se trata de animales ovíparos, ovovivíparos o vivíparos. En la acuicultura la fecundación es el proceso inicial para la generación de semilla que permita el manejo exitoso de la producción comercial o con fines de repoblamiento por lo que, incrementar el índice de fecundación ha sido una de las prioridades de la investigación acuícola llevando a generar tecnologías enfocadas a procesos y metodologías de fertilización que incrementen la tasa de fecundación. La fertilización es el proceso por el cual se estimula en el laboratorio la fecundación de los gametos. El primer proceso previo a la fertilización es la limpieza de los gametos. Este proceso se realiza pasando los gametos a través de un tamiz de luz de malla de 40 micras para lograr la remoción de las partículas fecales expulsadas durante el desove o la presencia de conchas trituradas, esto evita la proliferación de organismos que puedan ser perjudiciales para nuestro cultivo. El tamizado se realiza de forma cuidadosa manteniendo el tamiz debajo del nivel de agua de un recipiente de mayor volumen. En el caso particular de los ostiones, los lotes de óvulos de los distintos adultos se guardan por separado y se fecundan por separado con esperma recién liberado de 3 ó 4 machos a una proporción de 2 ml de esperma por litro de suspensión de óvulos, procurando contar con una proporción de 100 espermas por cada ovulo (1:100, ovulo esperma) . Después de añadir el esperma, se dejan posar durante 60 minutos tiempo en el cual se deberá de observar al microscopio para asegurar una correcta proporción de gametos. El éxito de este proceso se vera reflejado en la aparición del primer cuerpo polar seguido de las divisiones celulares. Figura 1. Fecundación de óvulos de ostión. A) apariencia deseada para una correcta
fecundación de óvulos, B) primer cuerpo polar, C) primera división celular, Segunda división y
E) tercer división.
Con lo que respecta a los abulones, el proceso de limpieza de los gametos es similar al utilizado en ostiones pero la proporción entre ovocito:esperma sufre una modificación, considerando únicamente de 5 a 20 espermas por ovocito. Figura 2. Apariencia deseada para una correcta fecundación de óvulos de abulón.
Figura 3. Desarrollo embrionario de abulón hasta la formación de larvas trocófora dentro de
huevo.
Cultivo larval ostión.
El cultivo larva propiamente establecido comienza al pasar 24 horas después de la fertilización. En este momento las larvas han alcanzado la etapa de desarrollo conocida como Larva D (por la forma de la larva). Al comenzar el proceso es importante observar al microscopio el estadio de desarrollo larval ya que la temperatura existente juega un rol preponderante en el tiempo de desarrollo de las larvas. Una vez observadas se tamiza el tanque para desechar los residuos de huevo no fertilizados, larvas trocófora muertas o protozoarios; con varios tamices (100 y 25 μm), las larvas tipo D quedan retenidas en el tamiz de 35 μm. Figura 2. Cultivo larval. a) sistema de tamices para la limpieza del cultivo larval, b) sistema
para el cultivo larval y c) larva D.
En este proceso es importante el cálculo de la densidad del cultivo (Número de larvas por mililitro de agua) debiendo cuidar de no exceder las 6 larvas por mililitro. Es justo en este momento cuando las larvas deben de comenzar a ser alimentadas para lo cual se utiliza la siguiente tabla para el calculo del alimento. Al quinto día después de la fertilización, se observa la formación de larva umbonada y a los 12 días se observa larva con ojo (pediveliger) indicando la preparación para la metamorfosis. Cultivo larval abulón.
Al igual que en ostión, el cultivo larval comienza a las 24 horas post fecundación, momento en el cual se registran ya larvas trocóforas. En este momento se realiza la limpieza y remoción de larvas deformes o muertas así como huevos que no fueron fecundados utilizando el mismo procedimiento empleado en ostión pero con la diferencia que los tamices a utilizar serán de 75 y de 100 µm Larva trocófora 75 !
Una de las grandes ventajas del cultivo larval del abulón es que durante su vida planctónica no requieren del suministro de alimento. Es hasta el momento de la metamorfosis y siguiente asentamiento donde comienzan con el consumo de microalgas bentónica. Fijación de larvas.
Ostión.
A los 12 días de cultivo se cosechan las larvas pediveliger de los tanques utilizando una malla de 224 μm de apertura (puesto que las larvas fijadoras tienen un tamaño aproximado arriba de 300μm). Existen dos métodos utilizados para la fijación de la semilla el primero utilizando conchas completas sujetadas a una cuerda que llevan el nombre de sartas así como en concha molida. La fijación realizada sobre concha molida es especialmente utilizada para obtener semilla individual. Para esto se prepara un tamiz de 200μm de 80 cm de diámetro al que se aplica cera en las paredes cubriéndolas totalmente para evitar en lo posible la fijación de la ostra al tamiz. Posteriormente el tamiz se coloca dentro de un tanque de 500L, previamente lleno de agua filtrada y esterilizada con UV hasta alcanzar el nivel del tubo de entrada de agua. Se debe prestar atención a la temperatura y salinidad (27-­‐29°C y 27-­‐30 respectivamente). Figura 3. Sistema para la fijación de larvas individuales.
Abulón.
El desarrollo larval de los abulones es un proceso largo y complejo a diferencia del presentado pro ostiones. Durante este proceso, el abulón sufre cambios drásticos que le pemiten adaptarce completamente a la vida bentónica. El asentamiento del abulón ocurre a los 19 días posteriores a la fecundación aun que este proceso se puede acelerar (12 días) utilizando Acido aminobutirico (GABA) momento en el cual se realiza un tamizado de los abulones utilizando una maya de 250 µm y transfiriendo la semilla a estanques que previamente fueron inoculados con microalgas bentónicas. Actividad 1. (en equipo).
Con esta información acude al laboratorio de acuicultura, observa los sistemas de
confinamiento y diseña un sistema que permita el acondicionamiento de los reproductores.
Que condiciones (temperatura y cantidad de alimento) considerarías para una correcta
aclimatación. Discutan en plenaria.
Actividad 2. Investiga los diferentes tipos de reproducción existentes y discute tu información en clase. Actividad 3. (en equipo).
Realiza la practica de laboratorio 6. Evalúa el índice gonadosomático de los ostiones a lo
largo del periodo de aclimatación.
Actividad 4 (en equipo)
Realiza un esquema de los gametos obtenidos en la evaluación del índice gonadosomático.
Actividad 5 (Individual).
Completa la siguientes tablas
Calcula la cantidad de alimento para cada etapa de cultivo.
Etapa
Vol. tanque
Cultivo masivo
1 a 4 días
5 litro
1x108
5 días
20 litros
10x105
6 a 12 días
40,000 ml
8x106
Cantidad de alimento
Calcula la cantidad de huevos y esperma que se encuentran en cada volumen de los
siguientes conteos.
a) 25,000 huevos/ml – 1x107 espermas/ml
b) 1,000 huevos/ml – 100,000 esperma/ml
c) 350x103 huevos/ml – 10x109 espermas/ml
Vol.
Huevos
Esperma
5,000 ml
3m3
1L
Actividad 6.
Utilizando la proporción entre huevos y espermas para una óptima fertilización. Calcula
la cantidad de esperma para una óptima fertilización utilizando los resultados del
ejercicio anterior.
Actividad 7.
Realiza una serie de tarjetas utilizando las etapas de desarrollo embrionario y larval del
abulón, por cada etapa identifica cuales son sus principales características. Posteriormente tu
profesor evaluara tu conocimiento de las etapas de desarrollo del abulón.
Actividad de cierre
Elabora una bitácora donde establezcas cada uno de los procedimientos a seguir en la
aclimatación, inducción al desove, fertilización hasta el cuidado larval. Recuerda que
esta te servirá de guía para el cuidado de tu cultivo.