SLPc - AGHH

Análisis Inmunofenotípico de
los SLPc.
Aula Formativa Hematólogos Jóvenes, 24 de marzo 2011
Eugenia Fernández Mellid
Complejo Hospitalario Universitario de Santiago de Compostela
Introducción



La citometría de flujo (CMF) estudia la presencia/ausencia de
antígenos específicos (inmunofenotipo) en una población a
estudio.
Para seleccionar los marcadores inmunofenotípicos (panel)
que empleamos para estudiar una muestra nos basaremos
en:
 Historia clínica.
 Hallazgos clínicos, analíticos y pruebas de imagen.
 Estudio morfológico.
 (Estudio CMF previo)
Poblaciones celulares/linajes a identificar:
 Linfocitos T
 Linfocitos B
 Células plasmáticas
 Serie mielomonocítica
2006 Bethesda International Consensus Recommendations on the Inmunophenotypic Analysis of
Hematolymphoid Neoplasia by Flow Cytometry: Optimal Reagents and Reporting for the Flow Cytometric
Diagnosis of Hematopoietic Neoplasia. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72 Suppl 1:S14-22.
Interpretación y análisis del
estudio mediante CMF
Análisis inmunofenotípico busca identificar:
1. Linaje celular
2. Estadio madurativo.
3. Presencia de poblaciones
clonales
4. Análisis del fenotipo de la
población a estudio.
Citometría de flujo en los SLPc
 Síndromes linfoproliferativos crónicos (SLPc):
 Proliferaciones de linfocitos maduros.
 Inmunofenotipo similar al de las células linfoides
maduras normales (ausencia de marcadores
antigénicos de inmadurez).
 Pueden ser:
 De células B
 De células T
 De células NK.
 Muestras a analizar:
 Sangre periférica
 Aspirado de médula ósea.
 Muestras de células obtenidas por PAAF/biopsia de
ganglio, suspendidas en soluciones conservantes.
 Líquido ascítico, pleural, cefalorraquídeo….
Citometría de flujo en los SLPc
 IDENTIFICACIÓN DE
POBLACIONES DE LINFOCITOS:


Basado en 3 marcadores:
 CD19: Linfocitos B
 CD3: Linfocitos T
 CD56: Linfocitos NK.
Empleando CD45: proporción de las
distintas
poblaciones
sobre
la
celularidad total.
Citometría de flujo en los SLPc-B
Diferenciación linfoide B:
Dos fases:
1. Antígeno-independiente: tiene lugar en la
médula ósea (adulto)Linfocitos B
inmunocompetentes y autotolerantes.
2. Antígeno-dependiente: migración de linfocitos
B maduros desde la médula ósea a órganos
linfoides secundarios.
Citometría de flujo en los SLPc-B
Citometría de flujo en los SLPc-B
NEOPLASIAS DE LINFOCITOS MADUROS B
Población B anormal puede distinguirse:

Cadenas ligeras de superficie:



Kappa o lambda.
Ratio kappa/lambda <0,3 o > 4
Expresión aberrante de antígenos:


Presencia de antígenos que no se expresan
normalmente en células de línea B (antígenos
de línea linfoide T…)
Presencia de antígenos en una subpoblación
de linfocitos B que se expresan normalmente
en otras subpoblaciones pertenecientes a
compartimentos biológicos/ganglionares
distintos. (p.e Bcl2 en CD10+)
Citometría de flujo en los SLPc-B
EXPRESIÓN ABERRANTE DE ANTÍGENOS:

Expresión de CD5 y CD10:



CD5: molécula accesoria implicada en la modulación de los procesos de
activación y diferenciación, expresada en la superficie de los linfocitos T
y en una subpoblación de linfocitos B.
CD10: marcador de superficie de los precursores más inmaduros de
linfocitos B
En función de la expresión de CD5 y CD10 distinguimos:




CD5+/CD10CD5+/CD10+
CD5-/CD10CD5-/CD10+
Citometría de flujo en los SLPc-B
CD5+/CD10LLC-B
Manto
Otros
CD23+
CD23-
Algunos LNH-B
de zona marginal
Linfoma
linfoplasmocítico
Linfoma B difuso
de células grandes
…
Si CD 23 -/+d: ver CD200:
CD200++: LLC-B
CD200-/+d: Manto
Típicamente
CD20 +d
CD22+d
FMC7Expresión débil de
Igs de superficie
CD38
ZAP 70
CD20 +d/+
FMC7-/+d
Citometría de flujo en los SLPc-B
 LLC-B:
 ZAP-70 y CD38: valor pronóstico.
 ZAP-70: dificultades técnicas para una
determinación fiable:
 Marcador citoplásmico
 EDTA, tiempo…
 Positividades débiles
 CD-38: determinación más fiable, aunque:




No clara positividad/negatividad
Células positivas y negativas en la misma muestra.
Diferencias según fluorocromo, SP o BM…
Variaciones en el curso de la enfermedad y tras
tratamientos.
Citometría de flujo en los SLPc-B
ZAP-70
CD200
Citometría de flujo en los SLPc-B
CD5-/CD10+
Folicular
Difuso de células
grandes
Otros
Bcl-2 +
CD43-
Bcl-2-/+d
CD43+
 Burkitt en la infancia
Algunas Tricoleucemias.
Citometría de flujo en los SLPc-B

LNH-B difuso de células grandes:


No-centro germinal
Centro germinal:




Importancia diagnóstica de morfología y molecular.
Burkitt en la infancia:




20-40%
Habitualmente CD10+
CD5-/CD10+ con elevada frecuencia
Bcl-2 –,CD10++, CD43Para diferenciar de LNHBCG tener en cuenta inmunofenotipo,
morfología, índice de proliferación y molecular.
Tricoleucemia: morfología y respuesta al tratamiento
similar a las CD10-
Citometría de flujo en los SLPc-B
CD5-/CD10Tricoleucemia
Marginal
Otros
CD20++
CD22++
CD11c++
CD25+
CD103+
Kappa/lambda
superficie+/++
CD11c+/CD103+/Ocasionalmente
Kappa/lambda
superficie –
Kappa/lambda
citoplásmica+
 LNH-B difuso cels
grandes
 Folicular CD10 Manto CD5-
Citometría de flujo en los SLPc-B
Tricoleucemia
Citometría de flujo en los SLPc-B
•CD5+/CD10+:
•Neoplasias linfoides maduras B que expresen CD5 y CD10 son
infrecuentes.
•Múltiples subtipos de LNH pueden presentar este fenotipo.
Valorar:
•Morfología
•Tamaño celular (Folicular, Manto, LLC vs Burkitt, LDCG, LLA)
•Citogenética, FISH…
Tipo
Marginal
Tricoleucemia
LLC-B
Manto
Folicular
LNHBCG
Burkitt
+
+
+
+
+
+/-
+
-/(+)
-
+
+
-
-
-
CD10
-
+/Variante-
-
-
+
+
+
CD22
+
+
+d/-
+
+
+
+
CD23
-
-
+
-
-
-
-
Igs
Superf
IgM
IgM,IgG
+d/-
+
+
+/(-)
+
CD43
-
+
+
-
-/(+)
-
FMC7
+
+
-
+/(-)
+/-
+/-
-/(+)
CD103
-/(+)
+
Variante +/-
-
-
-
-
-
CD11c
-/+
+
Variante+/-
-/+
-
-
-
-
CD25
-/+
+
Variante-
-/+
-
-
-/(+)
-
CD20
+/(-)
+
+
+
+
+(-)
+
+
+
-
+
-
+
+
CD19
CD5
CD79b
Inmunophenotyping of acute leukemia and lymphoproliferative disorders: a consensus proposal of the European
LeukemiaNet Work Package 10. M C Béné, T Nebe, P Bettelheim, B Buldini, H Bumbea, W Kern, F Lacombe, P Lemez, I
Marinov, E Matutes, M Maynadié, U Oelschlagel, A Orfao, R Schabath, M Solenthaler, G Tschurtschenthaler, A M Vladareanu, G
Zini, G C Faure and A Porwit Leukemia , (21 January 2011) | doi:10.1038/leu.2010.312
Citometría de flujo en los SLPc-T/NK
•Mayor dificultad para identificar poblaciones inmunofenotípicas
anormales de células T o NK->clasificación peor establecida.
•Diagnóstico clínico+morfológico+inmunofenotípico+molecular.
•Desde el punto de vista de CMF, población T/NK puede
diferenciarse por:
•Expresión débil/fuerte/pérdida de antígenos T/NK(CD3, CD5,
CD7)
•Expresión aberrante de antígenos B.
•Alteración ratio CD4+/CD8+
•Expresión TCR V-beta (preferible reordenamiento TCR por
técnicas moleculares)
Flow cytometric immunophenotyping for hematologic neoplasm Fiona E. Craig and Kenneth A. Foon
From www.bloodjournal.org by on April 14, 2009
Citometría de flujo en los SLPc
PANEL DE SCREENING:
 Identificación de poblaciones linfocitarias:
CD19, CD3, CD56
 Panel B (población CD19+):
 CD5, CD20, CD22, CD23, CD103, CD10, KappaLambda de superficie, CD25, CD79b, CD38.
 Panel T:
 CD2, CD3, CD4, CD5, CD8, CD7
 Panel NK:
 CD56, CD57, CD45, CD158, CD94
Inmunophenotyping of acute leukemia and lymphoproliferative disorders: a consensus proposal of the European LeukemiaNet
Work Package 10. M C Béné, T Nebe, P Bettelheim, B Buldini, H Bumbea, W Kern, F Lacombe, P Lemez, I Marinov, E Matutes, M
Maynadié, U Oelschlagel, A Orfao, R Schabath, M Solenthaler, G Tschurtschenthaler, A M Vladareanu, G Zini, G C Faure and A Porwit
Leukemia , (21 January 2011) | doi:10.1038/leu.2010.312
Figure 2
MARGINAL ZONE CD19, CD20, CD22, CD79, sIg, FMC7, bcl-2,
CD23+ (CD5, CD10, CD43, bcl-6 neg)
T LYMPHOMAS AND ANGIOIMMUNOBLASTIC
CD5+/CD10+/CD3+/CD4+
SEZARY CD3, CD2, CD5, CD4, CD7+/-(CD8 neg)
NODAL MALT
LARGE CELLS ANAPLASTIC CD2, CD4, CD3+, CD30
CLL CD19, CD20, CD43,CD23, sIg+/-, CD5 (CD79 CD10, CD22,
FMC7 neg)
PERIPHERAL CD2, CD3, CD5, CD4
ANGIOCENTRIC CD2, CD5, CD4 ou CD8, CD56
HCL CD19, CD20, CD22, sIg++, CD11c, CD25, CD103, CD123
(CD5, CD10, CD23 neg)
INTESTINAL CD3, CD7, CD103
ATLL CD3, CD4, CD25, CD45RO, CD7neg
MANTLE ZONE CD19, CD20, CD22, CD79,
FMC7, sIg, bcl-1, CD5, CD43,
(CD10, CD23 neg)
BURKITT CD19, CD20, CD22,
CD79, sIg, CD10, DR, bcl-6
FOLLICULAR CD19, CD20, CD22, sIg+, CD79,
CD10, bcl-2
(CD5, CD23, Tdt neg)
(CD5, CD23, CD43 neg)
WALDENSTROM CD19, CD20+, CD22,
CD79 sIg+, cIg, FMC7 (CD5, CD10,
CD23 neg)
INTESTINAL OR LUNG MALT
Follicular, mantle zone,
marginal zone
DIFFUSE LARGE B CELL LYMPHOMAS, sIg+,
cIg+, CD19, CD20, CD79, CD22++, CD79, CD10+
(CD5 rare cases, bcl-2, bcl-6, MUM-1 can be useful
for further classification)
SLVL
MYELOMA cIg, CD56, CD45+,
CD38, CD138
circulating marginal zone cells
(CD19, CD20, CD22 neg)