Recolección y aislamiento de cepas nativas en laboratorio de

Recolección y aislamiento de cepas
nativas en laboratorio de hongos
comestibles P. ostreatus y P.
pulmonarios en la provincia de
Cartago
• Giovanni Brenes Barquero
Núcleo de Formación y Servicios
Tecnológicos Agropecuarios
Obtención de cepas silvestres
• _ La demanda de hongos comestibles
en el país ha crecido
• _ Esto ha generado una necesidad de
capacitación
• _ Para esto se hace necesario la
obtención de material de reproducción
Obtención de cepas silvestres
_ Se puede obtener cepas de origen silvestre
en el país
• _ El INA cuenta con la infraestructura
necesaria para producir cepas propias
• _ En el país se hace difícil obtener
semilla
• _ Importada sin garantía de suministro
Objetivo General
• Recolectar y aislar cepas nativas de
Pleurotus sp, de la provincia de
Cartago en los meses de marzo a
octubre, para utilizarlas como
fuente de semilla en el Centro
nacional Especializado en
Agricultura Orgánica (CNEAO).
Objetivos Específicos
• 1_ Recolectar cepas nativas de
Pleurotus sp en la provincia de Cartago
• 2_ Aislar en laboratorio, cepas nativas
de Pleurotus sp para su utilización como
fuente de semilla en el CNEAO
• 3_ Preservar las cepas aisladas para
pruebas de producción, a futuro, en el
CNEAO
Muestreo y Metodología
• El muestreo se realizó esperando las
condiciones ideales para la salida de los
carpoforos
• La muestras se llevaron al Laboratorio de
Fitoprotección del CNEAO, La Chinchilla,
Cartago
• Para el cultivo se utilizó PDA al 1%, siguiendo
procedimientos ya establecidos para esta tarea
Muestreo y Metodología
• Básicamente el procedimiento se realiza en cámara de
transferencia en donde se cultiva una sección del
cuerpo
• Esta sección se deposita en placas petri conteniendo
PDA como medio de cultivo (6 x M y 10 x M final)
• Previo a este paso, dependiendo del tamaño de la
muestra, se desinfecta con lavados con Cloro, Alcohol
y agua estéril.
• Si la muestra es suficientemente grande se usa el
contexto sin lavados.
Muestreo y Metodología
• Las placas cultivadas se dejaron en
incubación, lo suficiente como para
establecer contaminación o crec. Puros
• Los cultivos puros, fueron guardados
en tubos de ensayo y en refrigeración
para su posterior utilización
Resultados
Localidad
Muestra
Cervantes
C4, C5 y C6
Bajo Pacuare
C8-1, C8-2
Chinchilla
C3 y C7
Ochomogo
C9
Cartago Centro C1
San Marcos
C2
Resultados
• De las 10 cepas obtenidas solo 4
pudieron aislarse en forma pura
• El resto tuvo problemas de
contaminación que no permitió
rescatarlas. ( Contaminación
ambiental)
• Las muestras variaron en tamaño
Resultados
Muestra
Contaminado
Cepa pura
Contaminado
Resultados
Traslado a tubos
Tubos para incubación
Crecimiento de cepa pura
Conclusiones
• 1_ La recolección de muestras
silvestres de Pleurotas sp, es posible al
menos en la Provincia de Cartago.
• 2_ La muestras obtenidas revelan que
se pueden obtener de diferentes
zonas altitudinales de la Provincia, ya
que las mismas fueron encontradas en
Bajo Pacuare , zona baja de Turrialba y
Ochomogo, zona alta del Cantón
Central de Cartago
Conclusiones
• 3_ La contaminación de los cultivos de
micelio se debieron a microorganimos
comunes a los habitad de ambientes
en descomposición natural , en el cual
se encuentran bacterias, levaduras,
hongos etc. y entre estos últimos el
Pleurotus sp también un
descomponedor de lignina y celulosa.
• 4_ Se recolectaron 9 muestras de las
cuales 4 se lograron aislar y almacenar
para futuras pruebas de producción en
el CNEAO.
Recomendaciones
• 1_ Coordinar la Identificación de las
especies de Pleurotus sp recolectadas a
través de un taxónomo, para su
posterior utilización como cepas
madre en el CNEAO.
• 2_ Recolectar muestras con cuerpos de
Hongos más grandes para incrementar
la posibilidad de éxito en el
procedimiento de aislamiento, para
nuevas cepas.
Recomendaciones
• 3_ Utilizar al menos 10 platos por
aislamiento inicial para lograr obtener
puntos de crecimiento micelial puros
en algunos de los platos con medio de
cultivo.
• 4_ Se recomienda realizar una
segunda etapa de manejo de estas
cepas, el cual consiste en la siembra
de las mismas en sustratos comerciales
o comúnmente utilizados en
producciones comerciales de este
hongo, en una planta acondicionada
para tal fin.
Recomendaciones
• 5_ El procedimiento utilizado aquí
representa una experiencia para
incorporar, en un futuro, al Módulo
de producción de hongos o asesorias
que se soliciten, transmitiendo al
productor la manera de poder obtener
su semilla para su planta y así no
depender de un suministro externo que
en ocasiones le pueda fallar.