Rev. Méd. Hosp. Na!. Niños Costa Rica 1 y 2 (24): 11-12, 1989. Descripción de un programa para la determinación de la capacidad de los antivenenos para neutralizar la actividad hemolítica de los venenos Dr. Abel Robles* y Dr. José María Gutiérrez* Introducción La evaluación de la potencia de los sueros antiofídicos, también llamados antivenenos, se ha efectuado tradicionalmente mediante el estudio de la neutralización del efecto letal de los venenos. Se ha definido la Dosis Efectiva 50% de un determinado antiveneno como aquella proporción antiveneno/veneno en la que se protege la mitad de los ratones inoculados (2). La evaluación de los antivenenos mediante la neutralización del efecto letal tiene el inconveniente de que utiliza una gran cantidad de ratones, con las implicaciones que esto conlleva. Por ello, la Organización Mundial de la Salud (2) ha planteado la necesidad de introducir técnicas in vitro para evaluar la potencia de los antivenenos. En Costa Rica, Gutiérrez et al. (1) describieron una técnica de hemólisis radial en geles de agarosa para el estudio de la actividad hemolítica de los venenos y su neutralización por los antivenenos. En esta técnica, los geles de agarosa contienen eritrocitos, lecitina de huevo y CaCI2. El veneno, o las mezclas de veneno y antiveneno, se aplican en orificios que se abren en el gel y la reacción se deja desarrollar durante 20 horas a 37°C. Después de este período de incubación, se mide el diámetro de los halos de hemólisis, los cuales son directamente proporcionales a la actividad hemolítica indirecta de los venenos o de las mezclas de veneno y antiveneno. Para el estudio de la capacidad neutralizante de los antivenenos, se incuban diversas proporciones, o razones, de veneno y antiveneno durante 30 mio a 37°C, aplicándose luego las muestras en orificios abiertos en el gel. Una vez ocurrida la reacción, se miden los diámetros de hemólisis, tomándose como 100% de actividad el diámetro de las muestras que tenían sólo veneno. El resto de los datos se expresan porcentualmente con respecto a ese valor de 100%. Finalmente, se calcula la Dosis Efectiva 50% (Deso), la cual se define como la razón Jll de antiveneno/mg de veneno en la que la actividad hemolítica se reduce al 50%. En el Instituto Clodomiro Picado hemos desarrollado un programa en lenguaje Pascal para el cálculo de la DEso de los antivenenos cuando se estudia la neutralización de la actividad hemolítica indirecta inducida por venenos de serpiente. Para • Instituto Clodomiro Picado, Facultad de Microbiologra, Universidad de Costa Rica, 11 san José, Costa Rica. 12 REVISTA MEDICA HOSPITAL NACIONAL DE NIÑos "DR. CARLOS SAENZ HERRERA" el uso de este programa, el operador debe suministrar el antiveneno/mg veneno) a usar, los niveles mayor y menor, en el gel para aplicar la muestra y los diámetros de los resultado que se obtiene es la Dosis Efectiva 50%, antiveneno/mg de veneno. número de niveles (Jll el diámetro del orificio halos de hemólisis. El exvresada en ul de Resumen Se describe un programa en lenguaje Pascal diseñado para calcular la capacidad de los antivenenos para neutralizar la actividad hemolítica indirecta de los venenos de serpientes, cuando se emplea la técnica de hemólisis radial descrita por Gutiérrez et al. (1). El operador debe suministrar el número de niveles, así como los niveles mayor y menor, el diámetro de los halos de hemólisis y el diámetro del orificio que se hace en el gel para aplicar las muestras. El resultado se expresa como Dosis Efectiva 50% (DEso), definida como la razón ul de antiveneno/mg de veneno en la que se neutraliza en un 50% la actividad hemolítica del veneno. Summary A program, inPasc<ll latlguage. for the estimation of the ability of antivenoms to neutralize indirect hemolytic activity ofvenoms is described, when using the radial hemolytic assay described by Gutiérrez et al. (1). The user must provide the numoer of antivenom/venom levels tested, the highest and lowest antivenomjvenom levels; the diameter of hemolytic halos and the diameter of the \vell made in the gel te apply samples. Results are given as Effective Dose 50% (EDso), defined as the ratio ~ antivenom/mg venom that neutralizes 50% oí the hemolytie aetivity. Bibliografia 1. Gutiérrez, J. M. et al.: An altemauve in vitro method for testing thc potency of the polyvalent antivenom produced in Costa Rica. Toxicon 26: 411, 1988. 2. World Hea1th Organization: Progress in the characterization of venoms and standardization of antivenoms. Geneva, WHO, 1981. Listado de A~chivo: HEMDL.PA5 PROGRAM HEMOLI5I5; VAR C,B1,M,8,A:ARRAY[1.,10] OF REAL; RE,AN,RE5UL,HIOO:REAL; CON,Y,X:INTEGER; Z9,Z:STRING[1]; KK:CHAR; BEGIN CLRSCgj TEXTCOLOR(lO); FOR X:=1 TO 8 DO WRITELN; :NRITE(' ':24); TEXTBACI<GRC'UND(11); WRITELN( 'NEUTRALIZACION DE HEMOLI515 RADIAL'); TEXTBACKGROUND(0); WRITE(' :35); TEXTBACKGROUND(ll); WRITE('ARH. 1989')j TEXTBACKGROUND(O)¡ DELAY(lOOO); CLRSCR; lAJRITELN( 'Cálculo de la DE50 por el método dE': HEMOLISIS RADIAL' :66; j WRITELN; WRITELN; WR~TELN(' «»' :40) jWRITELN¡ WRITELN( 'Al diámetro del halo se le debe restar' :60)¡ WRITELN( 'el diámetro del orificio en la agaroza.' :61); lAJR 1 TELN j lAJRITFLN(PARA TERMINAR L:4 EJECUCION DEL' :56); WRITELN( . PROGRAMA DIGITE "O" EN CONTRlJL.' :'56); WRITELN¡ WRITELN( . «»' :40); FDR X:=l TO B DQ ~vR ITELN j WRITE('Espaciador para cOfOtinuar •. 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(SIN) •• ' ) ¡ READLN(Z9) j CLRSCR¡ IF (Z9='N') OR (Z9='n') THEN BEGIN CLRSCR; EXIT; END; ENO; UN1IL (A[CON]<=H100/2); FOR CON:= 2 TO y DO BEGIN WRITE(C[CONJ:37:2,' = ' ) ¡ REA.JLN(A[CON]); END¡ x] : ::: x- ~istado de Archivo: HEMOL.PAS FDR X:=1 TO y DO IF A[X)=O THEN B(X):=O EL SE B[X]:=A[X]*~OO/H100; FDR X:=Y-1 DUWNTD 1 DO M[X]:=(B[X]-8[X+1])/(C[X]-C[X+l); FDR X:=1 TD Y-~ DO 81[X):=B[X+1]-M[X)*C[X+l); WRITELNj RE5UL:=O; FOR X:=Y-l DOWNID 1 DO BEGIN lF M[XJ<>O THEN BEGIN RESUL:=(50-Bl[X])/M[X]j IF «RESUL<C[X]) AND (RESUL>=C[X+l]» TH~N BEGIN WRITE( 'Valor de la DE50 = . :32,rESUt.;:4:2J; WRITELfIJ( '1-11 de Antiveneno/mg de Veneno' J j ENDj END; END; IF A[Y]=HIOO/2 THEN BEr, IN WRITE('VaJor de la CESO'" ':32,C[Y]:5:2)j WRITELN( '~I de Antivp.neno/mg de Veneno'); END¡ IF A[YJ<H100/2 THEN BCGIN WRITELN( 'NO SE PUEDE CALCULAR.'): WRITE( 'Se debe usar dosis menores a . J; WRITELN(C[Y]:6:2,'\-I1 de a"tivene-no/mg de Vene'1D.'); WRITELNj WRITE('Desea hacer otro cálculo? (SIN) .. 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