Epidemiología molecular de la infección del cérvix por virus del papiloma humano en San Luis Potosí y Guanajuato Luz Aurora Martínez-Contreras1, Mireya Guadalupe Sánchez-Garza1, Aurora Londoño-Avendaño1, Adriana Lomelí-Forcada1, Julio OrtizValdez2, Raúl Rojas-Hernández3, Silvia Quintana3, Rubén López-Revilla1 1División de Biología Molecular, Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica, Camino a la Presa San José 2055, Col. Lomas 4ª Sección, 78216 San Luis Potosí, S.L.P. rlopez@ipicyt.edu.mx, mireya@ipicyt.edu.mx 2 Clínica de Displasias de la Jurisdicción Sanitaria No. 1, Servicios de Salud de San Luis Potosí 3 Departamento de Investigación y Desarrollo Tecnológico, Secretaría de Salud de Guanajuato Introducción El cáncer cervicouterino (CaCu) es la segunda causa de muerte por cáncer en las mujeres del mundo y la primera en México y Latinoamérica. Para el desarrollo del CaCu es necesaria la infección por virus del papiloma humano (VPH), transmitidos a las mujeres por contacto sexual con hombres infectados. Por su asociación con el CaCu, los VPH son denominados como tipos de alto riesgo (VPH-AR) o de bajo riesgo (VPH-BR). Los VPH-AR provocan transformación celular benigna que causa verrugas o condilomas mientras que los VPH-AR pueden conducir a la transformación maligna que progresa al CaCu invasor. Los métodos moleculares son más sensibles y específicos que el Papanicolaou para diagnosticar la infección e identificar los tipos de VPH-AR. El objetivo de este trabajo fue identificar los tipos de VPH−AR circulantes en los estados de San Luis Potosí (SLP) y Guanajuato (Gto) mediante análisis de restricción de un producto de la región viral E6/E7 de ~250 pares de bases de VPH-AR amplificado a partir de lesiones del cérvix de mujeres de ambos estados. Métodos Detección de VPH-AR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Muestras cervicales de 370 mujeres con lesiones (250 de SLP, 120 de Gto) fueron colectadas con cytobrush en solución salina amortiguada, fijadas y mantenidas a temperatura ambiente. El ADN total de las muestras fue extraído y purificado. La infección por VPH-AR fue detectada mediante amplificación por PCR anidada de un segmento de ~250 pares de bases amplificado de la región del genoma viral que abarca los genes E6/E7. Tipificación con Ava II 1 2 3 4 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 La digestión del producto de ~250 pb con cinco endonucleasas permite identificar siete de los tipos de VPH−AR (16, 18, 31, 33, 35, 52 y 58) más frecuentes en el mundo (Fujinaga y cols. J Gen Virol 72:10391044, 1991) por los tamaños de los dos fragmentos generados. La enzima de restricción Ava II permite distinguir tres de los tipos más frecuentes (16, 18 y 33). Cada una de las enzimas restantes (Rsa I, Ava I, Bgl II, Acc I) permite distinguir un solo tipo de VPH-AR (ver tabla de abajo). Tipificación con otras enzimas Enzima de restricción Tamaño (pb) Ava II Rsa I Ava I Bgl II Acc I 16 238 157/81 ----- 18 268 172/96 ----- Tipo de VPH 31 33 35 232 244 232 -136/108 -117/115 ----186/46 ------- Resultados En SLP encontramos los siete tipos identificables de VPH−AR (16, 18, 31, 33, 35, 52 y 58). En Guanajuato no encontramos el tipo 58. En ambos estados los tipos más frecuente fueron el 16 (72.0%), 31 (10.1%) y 18 (10.1%) y los menos frecuentes fueron, en SLP el 35 (0.6%) y 58 (0.6%), y en Gto el 33 (2.0%) y el 35 (2.0%). En ambos estados en el 80% de los casos identificamos un solo tipo de VPH-AR. Identificamos infecciones por dos tipos de VPH-AR en ambos estados pero por tres tipos solamente en SLP. Los tipos de VPH-AR más frecuentes en las infecciones múltiples fueron, en orden descendente, 16, 31, 52 y 58. 1 52b 231 ---176/55 -- 2 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 58 244 ----126/118 Tipos de VPH-AR en las infecciones múltiples Total SLP Gto n % n % n % Infección Tipos Tipos de VPH-AR en las infecciones únicas Total SLP Gto Tipo n % n % n % 16 185 72.0 123 77.4 62 63.3 18 26 10.1 15 9.4 11 11.2 31 26 10.1 13 8.2 13 13.3 52 9 3.5 4 2.5 5 5.1 33 4 1.6 2 1.3 2 2.0 35 3 1.2 1 0.6 2 2.0 58 1 0.4 1 0.6 0 0 NI 3 1.2 0 0 3 3.1 Totales 257 100 159 100 98 100 Doble Conclusiones 1. En SLP circulan los siete tipos VPH-AR (16, 18, 31, 33, 35, 52 y 58) identificables con el método empleado. En Gto no parece circular el tipo 58. 2. Las frecuencias de los tipos de VPH-AR predominantes en ambos estados son similares a las de poblaciones con alta incidencia de CaCu. Triple 16/18 9 7 14.6 2 9.5 16/31 22 31.9 14 29.2 8 13.0 38.1 16/33 1 16/52 13 18.8 1.5 1 9 18.8 4 2.1 --- 19.1 16/35 10 14.5 7 14.6 3 14.3 16/58 3 4.3 3 6.3 --- 18/35 2 2.9 2 4.2 --- --- 18/31 2 2.9 1 2.1 1 4.8 18/52 1 1.5 1 2.1 --- --- 18/? 1 1.5 1 2.1 --- --- 31/33 1 1.5 -- --- 4.8 31/35 1 1.5 1 2.1 --- --- 35/52 3 4.3 1 2.1 2 9.5 16/31/ 52 2 40 2 40 --- --- 16/18/ 35 1 20 1 20 --- --- 16/31/ 35 1 20 1 20 --- --- 16/35/ 52 1 20 1 20 --- --- 1 3. La mayoría de la infecciones en ambos estados son únicas, pero casi el 20% se debe a dos o tres tipos de VPHAR. 4. La vacunación profiláctica contra la infección por los tipos de VPH-AR 16 y 18 probablemente tendrá efectos favorables en ambos estados. 5. A partir de este trabajo las mujeres de la región tienen acceso a la detección y tipificación molecular de HPV−AR. Agradecemos el apoyo financiero de FONINVGuanajuato (2002-5751) y FOMIX-SLP (2002-4441) --- ---