Dosificación Aglutininas Objetivo: Al concluir la práctica el alumno

Dosificación Aglutininas
Objetivo: Al concluir la práctica el alumno identificará las aglutininas salinas de título
elevado, que caracterizan la sangre del llamado “donador universal peligroso”
Generalidades: El sistema ABO es el único sistema en el que el plasma y suero inactivado,
contienen aglutininas que reaccionan con factores sanguíneos presentes en los eritrocitos de
otras personas. Las isoaglutininas responsables de la aglutinación en el sistema ABO son
del llamado completo, lo cual quiere decir que la adherencia del Ac al eritrocito que tiene
factor sanguíneo homólogo, va seguido automáticamente del antígeno.
En casos de urgencia o escases del tipo sanguíneo necesario para una
transfusión se empleará sangre tipo o llamada comúnmente “donador universal”, por
carecer sus eritrocitos de aglutinógenos; pero si existen en el plasma aglutininas alfa o beta,
que pueden presentar casos de aglutinación a los receptores, en los casos de títulos
elevados. Hay que tomar precauciones, el riesgo de que las isoaglutininas transfundidas
dañen a los hematíes del receptor, se podrán realizar este tipo de transfusiones sin peligro
alguno, si se cumple con las siguientes normas:
1. El plasma de la sangre que ha de emplearse no de be contener aglutininas para los
hematíes del futuro receptor
2. El título de isoaglutininas reactivas deberá ser inferior 1:80
La prueba cruzada menor debe realizarse con el suero neutralizado del donador,
solo si esta prueba no da aglutinación, podrá emplearse la sangre sin riesgo. Sangre
completa del “donador universal”, para un receptor de otro grupo sanguíneo, los peligros
relacionados con transfusiones de sangre de donadores universales, pueden reducirse al
mínimo por la extracción parcial o completa del plasma.
En casos de transfusiones de urgencia, en las que es necesario reponer el
volumen sanguíneo perdido y no se puede esperar a practicar las pruebas cruzadas, se
recomienda el uso de sangre “O” Rh negativa con títulos bajos de anti A y anti B y exenta
de todos los anticuerpos irregulares.
Fundamento: Las aglutininas forman parte de los donadores universales. Para cuantificar el
título de isoaglutininas, se cuantifica cualquier reacción de aglutinación de Anti A y Anti B
que persista en una dilución de 1:80 deberá considerarse de título elevado, donador
universal peligroso.
Material y equipo:
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Ø Gradilla
Ø 24 tubos de 10 x 75
Ø 3 tubos de 13 x 100
Ø 10 pipetas de 0 1
Ø 5 pipetas pasteur
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Ø 2 pipeta 1ml
Ø 1 centrifuga
Ø 1 baño maria 37°C
Ø Suero o plasma problema
Ø Solución salina normal
Ø Globulos rojos “A” y “B”
Técnica:
1. En la gradilla colocar 3 hileras de tubos de 10 x 75, de 8 tubos cada una, marcar los
tubos de la primera hilera con: 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1320, 1:640 y 1:1280,
2. Realizar diluciones del suero o plasma “O”, poniendo 5 ml, de solución salina en
cada uno de los tubos marcados, agregando 0 5m1, de suero o plasma del grupo “O”
al primer tubo, mezclar y tomar 0,5 ml de esta suspensión y ponerla en el siguiente
tubo y así sucesivamente hasta terminar desechando 0.5 ml de la suspensión final
3. Preparar suspensión de glóbulos rojos en solución salina al 5% de los grupos “A” y
“B”, en los tubos de ensaye 13 x 100
4. Añadir 0.1 ml de la suspensión preparada anteriormente de glóbulos rojos del grupo
“A” a los tubos de la segunda hilera y 0.1 ml de la suspensión de glóbulos rojos del
grupo “B” a los tubos de la tercera hilera
5. Depositar 0.1 ml de suero “O” diluido a cada uno de los tubos que contienen los
glóbulos rojos “A” y “B” teniendo cuidado de marcar correctamente los tubos con
la dilución que se emplee
6. Incubar todos los tubos “A” y “B” a 37°C por treinta minutos
7. Centrifugar a 2500 rpm durante un minuto
8. Remover suavemente los glóbulos rojos sedimentados, observando si existe
aglutinación macroscópica, reportar la aglutinación en cruces hasta el último tubo
en que se encuentre
Interpretación de resultados:
Se anotará la dilución a la que se observó la aglutinación en las dos hileras de
tubos que contienen la sangre A y B
Aglutinación más de 1:80 se considera de título elevado y por lo tanto solo
transfundir a paciente con sangre de su mismo tipo o sangre “O” pero solo concentrado
eritrocitario.
Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida “SIDA”
Objetivo: Búsqueda de los antígenos virales o anticuerpos producidos como respuesta a los
antígenos, en suero sanguíneo de una persona infectada por el virus de la inmunodeficiencia
humana (VIH) .
Generalidades: El síndrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA) conocido también
como “AIDS” es considerado en prácticamente todos los países del mundo como un serio
problema de salud pública.
El agente causal del SIDA es un retrovirus que fue denominado “limphadenopaty asociated
virus” por su primer descubridor, el Dr Luc Montagnier, del instituto Pasteur en Francia, en
mayo de 1983. En mayo de 1984 el Dr Robert Gallo del Instituto Nacional del Cáncer en
U S A, aisla y caracteriza un retrovirus de pacientes con SIDA y lo denomina “human
lymphotropic virus III desde 1987, por acuerdo internacional se decide nombrar al virus
“human inmunodeficiency virus” (HIV en español “virus de la inmunodeficiencia
humana” hasta el momento se han reconocido dos cepas significativamente diferentes,
llamándoles VIH I y VIH 2, el virus se transmite por contacto sexual, bucal o anal por la
inoculación o administración de sangre o hemoderivados contaminados y perinatalmente de
madre infectada a hijo; el paso trasnplacentario del virus está demostrado y existe la
factibilidad de infección a través de la lactancia.
No existen evidencias que apoyen la transmisión por contacto casual entre las personas en
ambientes escolares, sociales o de trabajo; no existe la evidencia de la transmisión por
medio de insectos, ni por tos o estornudos, así como tampoco a través de agua o
alimentos.
Después de infectarse una persona, puede permanecer asintomática durante varios años
algunos pacientes pasan por un estadio de molestias tempranas con presencia de fiebre,
artralgias y malestar general que se presentan al mismo tiempo que la seroconversión,
momento a partir del cual es posible detectar anticuerpos contra VIH en el suero del
paciente esto ocurre generalmente entre la segunda semana y el tercer mes posterior a la
infección, a partir de este momento pueden pasar en promedio de 8 a 9 años para el
desarrollo del SIDA, una vez que la enfermedad se ha desarrollado, la mortalidad es muy
elevada, casi del 100%.
El virus es capaz de producir el deterioro progresivo y predecible de las funciones
inmunológicas, siendo el SIDA una manifestación tardía de este proceso, el padecimiento
es de naturaleza inmunosupresora y de tipo básicamente celular, la población
celular específicamente abatida, es la de los linfocitos T cooperador C4, la perdida de las
células T4 daña seriamente la habilidad del organismo para contrarrestar a la mayor parte
de microorganismos invasores, observando que este daño es particularmente severo, sobre
la defensa en contra de virus, hongos, parásitos y ciertas bacterias.
Métodos de laboratorio: Una vez que la infección ha ocurrido, el individuo podrá
permanecer totalmente asintomático durante un lapso que puede fluctuar desde 10 meses
hasta 89 años, un individuo infectado o infectante por el hecho de sentirse bien, continuará
su conducta habitual, con el consiguiente riesgo para si y para los demás, dentro de este
lapso asintomático, la única manera de conocer si una persona está o no infectada, es
mediante la búsqueda de los antígenos virales a los anticuerpos producidos en respuesta a
aquellos, en suero sanguíneo o bien el aislamiento del virus a partir de algún tejido, las
pruebas de laboratorios que se disponen son las que permiten detectar anticuerpos
contra VIH y se dividen en dos categorías:
Prueba de tamizaje o escrutinio inicial (presuntivas)
1. Pruebas confirmatorias
Pruebas presuntivas:
Actualmente existen varias pruebas para la detección de anticuerpos contra VIH estas
pruebas difieren en su principio funcional, lo cual da lugar a diferencias en tiempo
de proceso, necesidad de instrumentación analítica, necesidad de tratamiento y
experiencias del personal analista, entre otras, ELISA (Eenzyme Linked Inmuno Sorbent
Assay)
Fundamento: Se trata de un análisis inmunoenzimatico heterogéneo, existen dos tipos
competitivo y no competitivo, emplean una fase sólida la cual ha sido recubierta con
antígenos de VIH si el suero problema contiene anticuerpos contra VIH, estos reaccionan
con el antígeno quedando por lo tanto unidos a la fase sólida, el revelado de la presencia de
estos anticuerpos unidos se hace mediante un conjugado formado por un anticuerpo Anti
IgG o Anti IgM unido a una enzima, la unión del conjugado se pone de manifiesto
adicionando el substrato de la enzima, en los ELISA de tipo no competitivo, la producción
de color es directamente proporcional a la cantidad de anticuerpos contra VIH presentes
en el suero problema, dentro de ciertos límites, en los ELISA de tipo competitivo, la
producción de color es inversamente proporcional.
Membrana sensibilizada.
Fundamento: Este análisis hace uso de una membrana porosa sensibilizada con antígenos
de VIH, al depositar el suero problema sobre la membrana, la reacción ocurre
instantáneamente, drenándose rápidamente el líquido los anticuerpos unidos se ponen de
rnanifiesto mediante un conjugado especial que provoca la aparición de un punto rojo
apreciable a simple vista.
Tiempo de proceso: 5 minutos.
Método inmnunocromatográfico en suero o plasma
OBJETIVO
Detectar cualitativamente la presencia de Antígeno de envoltura de la Hepatitis B en muestras de suero o
plasma.
INTRODUCCIÓN
La hepatitis viral es una enfermedad primaria sistémica, que involucra al hígado. La mayoría de los casos de
hepatitis viral aguda son causados por los virus A,B (HBV) o C.
El antígeno de envoltorio del virus de la hepatitis B (HBeAG), es una proteína viral secretada por las células
infectadas por el HBV. Su presencia indica altos niveles de virus en la sangre e indica el nivel de infección del
portador.
MUESTRA
Suero o plasma no hemolizado
Tira reactiva
PROCEDIMIENTO
1.
2.
3.
Llevar las muestras a temperatura ambiente
Remueva el cassette de su envoltorio metlizado tirando del empalme. Marcar el cassette
Dispensar 75 uL ( 3 gotas con la pipeta que va dentro de la bolsa) de la muestra de suero, en el
pocillo de muestra (S) y comenzar el conteo del tiempo.
4. Esperar 10 – 15 minutos e interpretar los resultados (no esperar más de 20 minutos).
Determinación cualitativa de anticuerpos anti-Brucella
OBJETIVO
Determinar cualitativamente anticuerpos anti-Brucella abortus en un suero problema.
INTRODUCCIÓN
El Rosa de Bengala es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y
semicuantitativa de anticuerpos anti-Brucela en suero humano o animal. La suspensión bacteriana
y coloreada, es aglutinada por anticuerpos IgG o IgM presentes en el suero del paciente.
METODOLOGÍA
1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo
disminuye a temperaturas bajas.
2. Depositar 50 µL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los controles Positivo y
Negativo, sobre círculos distintos de un porta.
3. Mezclar el reactivo de R. de Bengala vigorosamente. Depositar una gota (50 µL) junto a cada
una de las gotas anteriores.
4. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior
del círculo. Emplear palillos distintos para cada muestra.
5. Agitar durante 4 minutos. El exceso de tiempo de agitación puede originar la aparición de
falsos positivos
LECTURA E INTERPRETACION
Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente después de
retirar el porta del agitador. La presencia de aglutinación indica una concentración de anticuerpos
anti-Brucela igual o superior a 25 UI/mL.
ACTIVIDADES
1. MENCIONA EL SIGNIFICADO CLÍNICO DE LA DETERMINACIÓN DE: HIV, HVB, Rosa de
Bengala
2. Menciona las interferencias de cada método
3. Menciona otras pruebas para diagnóstico de certeza de cada enfermedad (Brucelosis,
infección por HIV o SIDA, Hepatitis B)