Efecto del tiempo de lavado de las cribas, su tamaño de orificio y

Agronomia Costanicense 22(2): 205-210. 1998
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EFECTO DELTIEMPO DE LAVADO DE LAS CRIBAS,
SU TAMANO DE ORIFICIO Y POSICION, SOBRE LA RECUPERACION
DE NEMATODOS EXTRAIDOS DE RAICES DE BANANOI
Mario Araya2/*, Roger Jaen*, Alexander Cheves*, Minor Centeno*
RESUMEN
En buscade afinar el metodo de recuperaci6n de nematodosde las falces de banano,se
evalu6 el efecto del tiempo de lavado de cribas,
el tamafio de orificio y posici6n. Las muestras
fueron procesadaspor el metodo de licuado y
tamizado. Se compararon6 tiempos de lavado,
de 1 hasta6 min. Trabajandocon 2 arreglosde
cribas de 0.5/0.150/0.038/0.020 mm y
0.5/0.150/0.025/ 0.020 mm se calcul6 el porcentaje de nematodosque pasan la criba de
0.038 y 0.025 mm y luego, utilizando la seriede
cribas de 0.5/0.150/0.035/0.025 mm en posici6n horizontal (90°) e inclinada (45°), se estim6 el porcentajeen que Ios nematodospasanla
criba de 0.038 rom. No hubo efecto del tiempo
de lavado de las cribas en la recuperaci6nde R.
similis (P=0.98),Helicotylenchusspp. (P=0.99),
Meloidogyne spp. (P=0.99), Pratylenchus spp.
(P=I.O) y nematodostotales (P=0.98). Con los
R. similis retenidosen la criba de 0.020 mm se
estim6 que 82% y 38% pasanla criba de 0.038
y 0.025 rom, respectivamente,y con los retenidos en la criba de 0.025 mm se calcul6 que un
62% de los R. similis pasanIa criba de 0.038
mm en posici6n horizontal, mientrasen angulo
de 45° pasans6Io un 39%.
ABSTRACT
Effect of sieve washing time, mesh size, and mesh position, on nematode recovery
from banana roots. Root samples were processedby the blending method. Six washing tiroes of 1 to 6 min were compared. Working
with 2 seriesof sievesof 0.5/0.150/0.038/0.020
mm and 0.5/0.150/0.025/0.020rom, the percentage of nematodes that passed through the
0.038 and 0.025 mm sieves was calculated.
Then the percentageof nematodesthat passed
through the sieve of 0.038 rom, was estimated,
using the sieve seriesof 0.5/0.150/0.035/0.025
mm in horizontal position and in an angle of
45°. There was no effect of the sieve washing
time on R. similis (P=0.98), Helicotylenchus
spp. (P=0.99), Meloidogyne spp. (P=0.99),
Pratylenchus spp. (P=1.0) and total nematodes
(P=0.98) recovery. With the nematodesgathered in the 0.020 mm sieve,it was estimatedthat
82% and 38% of R. similis passedthrough the
sieve 0.038 and 0.025 rom, resp., and with the
nematodesretained in the 0.025 mm sieve it
was estimated that 62% of R. similis passed
through 0.038 mm sieve in horizontal position,
while with the sievesin a 45° angle only 39%
passed.
INTRODUCCION
II
Recibido parapublicaci6n 19 de rnayode 1998.
2/
*
Autorparacorrespondencia.
Direcci6ndeInvestigaciones,
CORBANA.
ApartadoPostal390-7210,
CostaRica.
d
. d d 1
'
' od d 1.
met 0 e lcua 0 y tamlza 0 e as ralces, introducido porTaylor y Loegering (1953), es
uno de los mas usados para la extracci6n de nemaEl
206
AGRONOMIA COSTARRICENSE
todosenbanano(Vilardeboy Guerout1976,Escobar
y Rodriguez-Kabana
1980,Tarteet at. 1981,Panequeet at. 1988,Arreagaet at. 1989,Rodriguez1990,
Price 1994).EI mismorue adaptadoy modificado
para su uso en el laboratoriode nematologiade
CORBANApor Figueroa(1985).
Pararecuperarlos nematodosseusandiferentesnumerosde cribas.Las de mayor tamaiio
de orificio, retienenlos restosradicularese impurezaspresentesen las suspensiones,
mientrasen
la mas fina se recuperanlos nematodospara su
identificaci6n y conteo. Segunlas dimensiones
del nematodo0 los nematodosque se pretendan
extraer,sepuededefinir un tamaiiode orificio de
criba particular con el fin de recuperarmayor
cantidadde nematodos.
Araya y Vargas(1996) usandola criba de
0.025 mm (N°500) debajo de la de 0.038 mm
(N°400)demostraron
quelos nematodosextraldos
de las raicesdel banano,paganla criba de 0.038
rom. EI tiempo de lavadode lag cribasvaria con
los laboratorios(Rodriguez 1990, Loos y Loos
1960)y puedeafectartambienla estimaci6nfinal
de la poblaci6nde nematodos.
Adicionalmente,la
posici6ndel juego 0 selie de cribas,puedeinfluir
en la recuperaci6n
delos nematodos(Ferris 1987).
El objetivo del presenteestudiorue determinar un tiemporazonablede lavadode lagcribas,
estimarel porcentajede nematodosque paganla
criba de 0.038mm y c6moafectala posici6nde la
seriede cribasla recuperaci6nde los nematodos.
MATERIALES Y METODOS
La extracci6n de nematodosse hizo por
ellicuado de 25 g de falces funcionalescomo se
detalla en Araya y colaboradores(1995). Todas
las cribas usadasfueron de 20.3 cm (8") de diametro por5.1 cm {2") de alto. La identificaci6n
y conteo de los nematodosrecuperadosse hizo
bajo un microscopio OlympusBX40F-3 a 4X
de magnificaci6n,usandoalfcuotasde 2 ml procedentesde 200 ml de suspensi6n.Los datosse
expresanen nematodospor 100 g de falces. EI
total de nematodoscorrespondea la sumade los
diferentesgenerosdetectados.
Experimento I: Tiempo de lavado de lag
cribas
Una vez licuadaslas falces,se procedi6a
tamizar 30 muestrasen un juego de cribassobrepuestasde arriba bacia abajode 0.5/0.150/0.038
mm (N°35/100/400).Ellavado de lag cribas se
realiz6 pot medio de una manguera,aplicando
agua sin presi6ny en forma circular, a log residuoscontenidosen la criba de 0.5 rom. Al minuto de lavado,sedetuvola aplicaci6nde aguay se
cambi6 la criba de 0.038 mm por una limpia de
igual tamaiio,se lav6 de nuevoen la misma forma por otro minuto y se cambi6de nuevola criba. Esteprocedimientose sigui6 bastalog 6 min,
de maneraque serecuper6los nematodosretenidogen la criba de 0.038 mm cadaminuto, desde
1 basta6 min, constituyendoseen los tratamientOg.Los datos por nematodo,en cada minuto,
fueron sumadosparaobtenerla cantidadrecuperadaen I, 2, 3, 4, 5 y 6 min, luego se sometieron
aunANOVA.
Procedimiento general
Experimento II: Tamaiios de orificio
Muestrasprocedentesdel servicio de monitoreo mensualde nematodosque la Corporaci6n BananeraNacional (CORBANA) brinda a
log productores,fueron usadasen los 3 experimentos. Cada muestrade falces se tom6 de 5
plantasentre 1 y 8 dias de florecidas,usandoun
palin paraexcavarun hoyo de 13cm longitud, 13
cm anchoy 30 cm deprofundidad(volumenaproximado de 5.070 cm3 de suelo) al frente de las
plantasy recolectandotodaslasralcescontenidas
en el volumende suelo.
Dos evaluacionescon diferentesmuestras,
fueron efectuadasconsiderandolog siguientes
juegos de cribas:
1. 0.5/0.150/0.038/0.020mm (N°35/100/
400/635mesh)y,
2. 0.5/0.150/0.025/0.020mm (N°35/100/
500/635mesh).En amboscasos,ellavado de lag
cribas se realiz6 por medio de una manguera,
apllcandoagua sin presi6n y en forma circular
por 2 min a los residuoscontenidosen la criba de
ARAYA et al.: Recuperaci6nde nematodosde rafcesde banano
0.5 mm; se separoestacriba y se lavo por 1 min
los residuosde la criba de 0.150 mm. Los nematodos se recuperaronen las 2 ultimas cribas de
cadaserie.Los datossesometierona un ANaVA
y secalculo el porcentajeque representanIDsnematodosrecuperadosen la criba de 0.020mm, en
relacion a los detectadosen el tamiz de 0.038 y
0.025 mm.
Experimento III: Posicion de la serie de cribas
Treinta muestrasse homogeneizaronindividualmentey se dividieron en 2 submuestras
de
igual tamano.Cadasubmuestrase homogeneizo
de nuevoy setomaron25 g de falcesparala extraccionde los nematodos,como se indico en el
procedimientogeneral.
Luego, usando el juego de tamices de
0.5/0.150/0.038/0.025mm (N°35/100/400/500
mesh)se comparola posicion horizontal(angulo
900),comunmenteusadaen ellaboratorio, contra
unainclinadaa un angulode 45°. Paraestaultima
posicion,se construyouna basede maderacon el
anguloindicadoparacolocarlas cribas.Ellavado
de las cribasen amboscasosrue por 3 min, 2 en la
de 0.5 mm y 1 rnin en la de 0.150mm. Los nematodosfueronrecuperados
en las cribasde 0.038y
0.025mm. Con IDSdatosde la criba de 0.025mm
secalculoel porcentajede nematodosquepasanla
criba de 0.038mm en ambasposiciones.
207
RESULTADOS
Tiempo de lavado de las cribas
La cantidadde R. similis (P=0.98),Helicotylenchus spp. (P=0.99), Meloidogyne spp.
(P=0.99), Pratylenchusspp. (P=I.0) y nematodos totales (P=0.98) recuperadosen la criba de
0.038 mm, rue igual en los diferentestiempos
de lavado de las cribas (Cuadro 1). Esto indica
que igual cantidadde nematodosserecuperadel
licuado de falces y pasan las cribas de 0.5 y
0.150 mm con 1, 2, 3, 4, 5 0 6 min de lavado.
Las poblacionesestimadasde los nematodosse
traslaparony coincidieron a cravesde los difecentestiempos de lavado. EI lavado por 6 min
perrnitio tan solo una recuperacionadicional de
6.9%; 3.7%; 11.7%; 0.0% y un 6.7% de los R.
similis, Helicotylenchus spp., Meloidogyne
spp.,Pratylenchusspp.y total de nematodosextraldos en 1 min.
Tamaiios de orificio
Evaluacion I: En relacion a la criba de
0.038 mm (N°400), la criba de 0.020 mm
(N°635) recupero un 82.0% de R. similis;
187.8%de Helicotylenchusspp., 63.4% de Meloidogyne spp., 23.1% de Pratylenchus spp. y
un 81.8%, de nematodostotales (Cuadro2).
Cuadro I. Valores promedio y error estandar del numero estimado de nematodos recuperados en la criba de 0.038 mm con difecentes tiempos de lavado.
Tiempos de
lavado
cribas (min)
Nematodos/lOO g de rafces
Radopholus
Helicotylenchus
Meloidogyne
Pratylenchus
Total de
similis
spp.
spp.
spp.
nematodos
I
27.827 j: 3.581 *
3.947 j: 676
1.480 j: 483
13 j: 13
33.267 j: 3.752
2
3
4
5
6
29.213 j: 3.790
29.453 j: 3.819
29.573 j: 3.840
29.680 j: 3.860
29.760j:3.876
4.000 j: 684
4.040 j: 688
4.040 j: 688
4.093 j: 693
4.093j:693
1.560 j:
1.600 j:
1.640 j:
1.653 j:
1.653 j:
\.3 j: 13
13 j: 13
13 j: 13
13 j: 13
13j:13
34.787 j: 3.956
35.106 j: 3.989i
35.267 j: 4.015
35.440 j: 4.045
35.520j:4.060
539
537
549
550
550
Datos son medias de 30 observaciones. Total de nematodos= R. similis + Helicotylenchus spp. + Meloidogyne spp. + Pratylenchus spp.
* error estandar.
.
-.
~
208
.--
AGRONOMIA COSTARRICENSE
Evaluacion II: En relaci6n a la criba de
0.025 mm (N°500), la criba de 0.020 mm
(N°635)recuper6un 38.4%deR. similis;51.4%
de Helicot)'lenchusspp., 80.6% de Meloidogyne
spp.,29.0%de Pratylenchusspp.y un 41.4%,de
nematodostotales(Cuadro2).
Posicion de la serie de cribas
mitis, 50% de Helicot)'lenchus spp., 102% de
Meloidogynespp., 30% de Pratylenchusspp. y
un 61.7% de los nematodostotales retenidosen
la criba de 0.038mm (N°400) (Cuadro3). Cuando la serie de cribas se utiliz6 en un angulo de
45°, la criba de 0.025 mm (N°500) recuper6un
38.5%,28%, 11.4%,37.4%Y un 35.2%de los R.
similis, Helicotylenchusspp.,Meloidogynespp.,
Prat)'lenchusspp. y nematodostotalesretenidos
en la criba de 0.038 mm (Cuadro3).
En la posici6n horizontal, la criba de
0.025 mm (No 500) recuper6un 61.6% de R. si-
Cuadra2. Valorespromedioy error estandardel numeroestimadode nematodosen 100g de rafcesrecuperadoscon los diferentes arreglosde cribas.
Nematodos
Cribas
Radopholu.f
similis
Helicol)-Iell("hu.~
spp.
Meloidogyne
spp.
Pral)-Ienchu.f
spp.
Total de
nematodos
Evaluacion I
0.038 mm (N°400)
0.020mm(N°635)
20.680:i:2.540*
16.960:i:2.590
213:i: 113
400:i:179
800:i: 226
507:i:121
173:i: 148
4O:i:40
21.867:i: 2.533
17.906:i:2.600
Evaluaci6n II
0.025mm(N°500)
0.020 mm (N°635)
17.960:i:2.454
6.893:i:1.018
3.653:i:929
1.880:i:523
480:i:193
387:i:205
93:i:41
27:i:18
22.186:i:2.477
9.186:i:I.OO3
Datos son mediasde 30 repeticiones.Total de nematodos=R. similis + Helicotylenchusspp. + Meloidogynespp. + Pral)-Ienchus spp.
* error estandar.
Cuadra3. Valorespromedioy error estandardel numeroestimadode nematodosen 100g de raices,segunla posici6nde las cribas.
Horizontal (90")
Nematodo
Radopholussimilis
Helicotylenchusspp.
Meloidogynespp.
Pratylenchusspp.
Nernatodostotales
0.038 mm
15.946:i: 1.708*
1.733:i:551
640:i: 203
133:i: 62
18.427:!:2.034
lnclinada a 45°
0.025 mm
9.826:i: 1.106
867:i: 299
653:i: 251
4O:i:22
11.386:i:1.313
0.038 mm
16.320:i: 1.854
1.853:i:512
1.520:i:739
107:i: 60
19.800:i:1.960
0.025 mm
6.280:i: 776
520 :i:.192
173:i: 122
4O:i:29
6.987:i: 838
Datosson mediasde 30 observaciones.
Total de nematodos=R. similis +"Helicotylenchusspp. + Meloidogynespp. + Pral)'lenchus spp.
* error estandar.
ARAYA et aI.: Recuperaci6nde nematodosde falcesde banano
DISCUSION
Las medias y el error estandar de los nematodos detectados fueron muy constantes en
los diferentes tiempos de lavado, 10 que indica
que cualquier tiempo es apropiado. En ellaboralorio, el paso generalizado es lavar la criba de
0.5 mml2 miD y la de 0.150 mmll min. Comparando estos 3 miD con 10recuperado a los 6 miD el
aumento rue tan solo de 1.0% en R. similis, 1.3%
en Helicotylenchus spp., 3.3% en Meloidogyne
spp., 0% en Pratylenchus spp. y un 1.2% en el total de nematodos. A pesar que no se encontro diferencia estadfstica en los tiempos de lavado, se
sugiere continuar usando los 3 miD comunmente
empleados. Tres minutos tambien son usados POT
Rodriguez (1990). Para laboratorios que quieran
cambiarel tiempo de lavadoa 1 min, significarfa perder un 5.4% de R. similis; 2.3% de Helicotylenchus
spp.; 8.1% de Meloidogynespp.;0% de Pratylenchus
spp. y un 5.5% del total de nematodos,10cual probablementeno tiene implicaci6n parala toma de una decision de manejo.
El uso de una criba de tamaiio de orificio
mas fino, como la de 0.020 m~ (N°635 mesh
sieve) perrnitio demostrar que un 82% de los R.
similis pasan la criba de 0.038 mm (N°400),
mientras solo un 38.4% pasan la criba de 0.025
mm (~O500). Tambien se-detecto una mejor recuperacion de Helicotylenchus spp. y del total de
nematodos con la criba de 0.025 mill. El haber
deterrninado un mayor porcentaje de Meloidogyne
spp. y Pratylenchus spp. que pasala criba de 0.025
mm es contradictorio, pero factible porque los 2
grupos de muestrasson independientes.Comparando los nematodosretenidosen las cribas de 0.025 y
0.020 mm de la Evaluacion II, con los contenidos
en las cribas de 0.038 y 0.020 mm de la Evaluacion
I, se observa que la poblacion de.Meloidogyne spp.
y Pratylenchus spp. rue solo un 66 y un 56%. Al
existir menor cantidad de nematodos, probablemente hubo una mejor distribucion de los mismos
en el area de la criba 10que facilito su paso a traves
de los orificios. Ademas, la relacion es porcentual,
y mayor en la Evaluacion II, pero en terminos numericos la cantidad de nematodosretenidos rue inferior. Es decir, el contenido individual de cada genero afecto en forma particular su recuperacion.En
209
muestras pareadas,es de esperar que menor cantidad de estosnematodospasela criba de 0.025 mm.
En un estudio anterior Araya y Vargas
(1996) encontraron que la criba de 0.025 mm
(N°500) recupero un 33.5%, 96.4%, 73.6% y un
9.1 % de los R. similis, Helicotylenchus spp.,
Meloidogyne spp. y Pratylenchus spp. detectados en el tamiz de 0.038 mm (N°400), respectivamente. POTtanto, si se quiere aumentar la eficiencia de recuperacion de este metodo, deberia
cambiarse la criba que se usa para colectar los nematodos. En este caso, a pesar de que los nematodos pasanla criba de 0.025 mm (N°500), se propone su uso, ya que en la de 0.020 mm se dificulta el
lavado. El agua escurre muy lentamente a traves
de los orificios de la criba, 10queprovoca elllenado y en algunos casos el derrame de agua en las
cribas, con la consiguiente perdida de nematodos.
Adicionalmente, se observo que se requeria mas
tiempo para ellavado de las cribas, 10que repercute negativamenteen la eficiencia dellaboratorio.
La posicion de las cribas afecto el numero
de nematodos que pasan a traves de los orificios.
Como se esperaba,un mayor numero pasan cuando las cribas se usanen forma horizontal que en angulo de 45°. Las diferencias variaron con los generos, es mayor en Meloidogyne spp. producto posiblemente, de su mayor longitud, como 10 predice
Ferris (1987). En R. similis y nematodostotales un
23.1% Y un 26.5% mas, pasaron la criba de 0.025
mm en posicion horizontal comparado con la incliDada.En condiciones dellaboratorio de nematologfa de CORBANA, que procesaalrededorde 20002500 muestrasmensuales,se recomienda continuar
con la posicion horizontal. El empleo de la posicion
inclinada tiene algunas desventajascomo: a pesar
que se podrfa construir basespara mantener el lingulo de inclinacion constante,habrfa mayor dificultad para el escurrimiento de las cribas y ellavado
resultarfa mas cansado para los operarios, 10 que
probablemente repercuta negativamente en la eficiencia del laboratorio. Para condicione.s experimentales, donde se busque mayor eficiencia en la
recuperacion de los nematodos,es posible consideTar el uso del juego de cribas en forma inclinada.
Sin embargo, se tendrfan 2 porcentajes diferentes
de recuperacion, que habrfa que considerarlos al
momento de comparar resultados.
210
AGRONOMIA
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CITADA
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