DETERMINACION DE S.4.LICILATO UN METODO SENCILLO DE

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TOMO XXVII
NúMERO 1
DETERMINACI ON DE S.4.LICILATO
UN METODO SENCILLO DE DETERMINACION DE SALICILATO
E. ARJONA, J. M. ALÉS y J. M. SEGOVIA
Instituto de Investigaciones Médicas. Director: Profesor
c.
JDIÉNEZ DíAZ.
La creciente importancia que el estudio de la
salicilemia va tomando en la clínica a partir de
los trabajos de COBURN 1 preconizando la necesidad de mantener niveles determinados de salicilato en el tratamiento de la fiebre reumática,
ha impulsado a la obtención de métodos que, trabajando con suficiente exactitud, no r equieran
grandes cantidades de sangre.
El método más empleado ha sido el de ERODIE y col. 2 , que siendo muy exacto, tiene el inconveniente de ser muy laborioso y su manejo
no está exento de peligros, ya que el dicloruro
de etileno usado en él es una sustancia de elevada toxicidad. Estos inconveni-entes hicieron que
WEICHSELBAUM y SHAPIRO 2 preconizasen un método original fundado en el color azul de la reacción del grupo salicílico con la solución alcohólica del reactivo del fenol de Folin y Ciocalteau.
Con este último método hemos hecho nuestros primeros estudios de salicilemia, y en su manejo diario nos hemos podido dar cuenta de los
numerosos inconvenientes que presenta. Ya los
propios autores r econocen que los sueros o plasmas exentos de salicilato dan un derto color
azul, más intenso que el de la prueba de blanco
de los reactivos, y que este color es variable de
unos sueros a otros, oscilando su equivalencia
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13 y 24 mgr. por 100 de salicilato.
Nosotros, haciendo curvas de recuperación,
nos hemos podido dar cuenta de que cuando las
cantidades de salicilato añadidas al suero son
pequeñas, el error. del método es tan grande, que
no puede utilizarse ni en el trabajo clínico. Por
otra parte, el margen de error de unos sueros a
otros es más amplio que el declarado por los
autores, sobre todo si se emplean sueros hipercolémicos, hasta tal punto, que en las cifras en
que suele moverse la salicilemia el error en nuestras manos llega a ser hasta de un 25 por 100.
También la temperatura ambiente influye demaｾｩ｡､ｯ＠
sobr-e el desarrollo del color, y todos estos
mconvenientes unidos a la engorrosa preparacwn del reactivo del fenol nos han inducido a
buscar un método sencillo y exacto que nos permitiera dosificar fácilmente el salicilato.
La reacción clásica del grupo salicílico con el
percloruro de hierro no puede ser utilizada, ya
que el color pardo del percloruro varía demasiado con el transcurso del tiempo, y, por otra
parte, precipita las albúminas del plasma o suero, lo que nos obliga al empleo de plasma desproteinizado, y ello entraña una gran pérdida de
salicilato que queda adsorbido en el precipitado
proteico.
POWELL 4 , en su método de determinación de
sulfocianuro en sangre, advierte que la reacción
21
empleada es interferida por la presencia de salicilato. Esta advertencia nos indujo a probar
si con un método 15imilar se podía llegar a una
dosificación de la salicilemia, evitando la precipitación de las proteínas, que ya habíamos
visto arrastraban parte del salicilato añadido.
El método, tal como ha sido practicado por
nosotros, consiste en poner 0,5 c. c. de suero
(que deberá estar totalmente exento de hemolisis) directamente en un tubo del fotocolorímetro (nosotros hemos empleado el de Evelyn) y
añadir después 9 c. c. de agua destilada; una
vez mezclados se agrega lentamente y agitando
0,5 c. c. del reactivo nitrato férrico (50 gr. de
nitrato férrico cristalizado pro análisis, 500 c. c.
de agua destilada y 25 c. c. de ácido nítrico
puro, una vez disuelto enrasar hasta 1.000 c. c.).
En presencia de salicilato se produce inmediatamente una coloración violeta, cuya intensidad varía proporcionalmente con la cuantía de
salicilato. En ausencia de él se proouce un ligero color amarillo sin trazas de color violeta. Es
de advertir que en los sueros ricos en globulinas al ser añadidos del agua destilada se produce un enturbiamiento que desaparece totalmente al añadirles el reactivo.
La prueba en blanco de los reactivos es totalmente incolora, e igualmente cuando al suero se
le agrega 0,5 c. c. de solución de ácido nítrico al
25 por 1.000 no se desarrolla color alguno. Por
esta razón aconsejamos sustituírla por una prueba en que utilizamos el propio suero del enfermo antes de comenzar el tratamitmto más el
agua destilada y el reactivo igual que en la
prueba problema. También se puede sustituir
el suero de} enfermo por un suero normal, ya
que las vanaciones encontradas por nosotros en
sueros no hemolizados son muy pequeñas y oscilan en un equivalente de 5 a 7 mgr. de salici·
lato por 100. Estas variaciones son mucho más
amplias en sueros h emolizados y dependientes
del grado de hemolisis; de aquí nuestra recomendación de emplear siempre sueros limpios.
En las numerosas investigaciones hechas por
nosotros hemos podido llegar a eliminar la prueba en blanco, ya q!le constantemente pudimos
comprobar que el coeficiente de transmisión con
el colorímetro y tubos empleados por nosotros
era de un 83 por 100 de la transmisión para el
agua destilada. Naturalmente que para otro coｾｯｲ￭ｭ･ｴ＠
y otros tubos deberá siempre determinarse con un número suficiente de sueros
normales el coeficiente de transmisión de estos
sueros más los reactivos.
Como en toda determinación con el fotocolorímetro es necesario comprobar si el color formado sigue la ley de Beer. Para ello hemos trazado varias curvas de titulación empleando cantidades variables de salicilato sódico, primera·
mente en suero y posteriormente al convencernos de la inutilidad de esta precaución en agua
destilada. En todas las curvas obtenidas se ha
podido comprobar que entre 5 y 50 mgr. de salicilato por 100 la gráfica representa una linea
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15 octubre 1947
REVISTA CLINICA ESPA1VOLA
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recta, como puede comprobarse en la figura 1.
Por encima de los 50 mgr. existe una varia·
ción de la recta que no hace aconsejable su empleo; ahora bien, como los niveles útiles de sa·
licilemia se mueven precisamente alrededor de
los 35 mgr. por 100 (CoBURN 1 ) , se puede utili·
zar nuestra gráfica que trabaja prácticamente
sin error, como veremos a continuación.
Como puede verse por estos ejemplos, prácticamente la recuperación obtenida es total, sin
que s ea influenciada por la existencia anterior
de un determinado nivel de salicilato.
Parecidas pruebas han sido practicadas en
orina, donde el método es perfectamente adaptable para la determinación de la saliciluria.
RESUl\IEN.
filtro .520
250
Se describe un método sencillo y rápido de determinación de salicilato en sangre y orina, fundado en la reacción del salicilato con el nitrito
férrico y se aportan las pruebas de su exactitud
como método clínico, proponiendo los autores
este método como ventajoso sobre los demás
existentes para el control de la salicilemia y saliciluria en los enfermos tratados con este medicamento.
200
BIBLIOGRAFIA
150
COBURN, A. F.-Bull. ｊｯｨｮｾ＠
Hopklns Hosp., 73, 435, 1943.
BRODII!l, B. B ., UNDEJ-<FRIE:!o.'l>, S. y COilURN, A. F.-Jour.
Pharmac. Exp. Therap. , 80, 114, 1944.
3. WEICHSELBAID!, T . E . y SHAPIRO, 1. -Amer. Jour. Clln.
Path., 15, 42, 1945.
4. PowELL, W . N.-Jour. Lab. and Clln. Med., 30, 1071, 1945
500
450
400
350
ｾＰ＠
l.
2.
100
10 15 20 25 30 35 <40 45 50 ｭｾＮＬｯ＠
5
Fíg. 1.-Fotocolorlmetro de Evelyn. Filtro 520 mp..
Con este método hemos hecho pruebas de re·
cuperación, agregando cantidades variables conocidas de salicilato sódico a sueros normales,
dando los resultados siguientes:
Cantidad afladlda
15 mgr. por 100
40
10
26
6
14
20
30
44
10
20
so
Cantidad r ecuperada
15 mgr. por 100
41
10,5
26,5
6,75
13,5
20
29
44
10,5
21
31,25
También hemos hecho la prueba de agregar
a sueros con salicilemia conocida cantidades variables de salicilato sódico para comprobar su
recuperación.
Contenl. basal
de salicilato
Cantidad
afiad ida
Cantidad
obtenida
cantidad
recuperada
·- - - 20,5
20,5
20,5
00,0
16,0
17,5
mgr.
mgr.
mgr.
mgr.
mgr.
mgr.
%
%
%
%
%
%
2
10
20
30
20
10
mgr. % 22,5 mgr.%
mgr. % 32,25 mgr.%
mgr. % 40,5 mgr. %
mgr. % 31 mgr.%
mgr. % 35,5 mgr.%
mgr.% 27,5 mgr.o/o
2
mgr.%
11,75 mgr.%
20
mgr.%
31
mgr.%
19,5 mgr.%
10,0 mgr.o/o
SUMMARY
A simple and rapid method is described for
the determination of salicylate in the blood and
urine, based on the creaction of salicylate with
ferric nitrite. Proofs of its accuracy as a clinical method are adduced. The authors propase
this method as having advantagcs over other
existing ones, for the control of salicylemia and
salicyluria in pati€nts treated with this drug.
ZUSAMMENFASSUNG
Beschrieben wird eine einfache und schnelle
Methode zur Bestimmung von Salizylsalzen im
Blut und Urin, die darauf beruht, dass das Salizylat mit Eisennitrid eine R eaktion gibt. Die
Beweise für die Genauigkeit zur klinischen Me·
thcde werdm beigebracht. Die Autoren schlag·en
deshalb diese Methode zur Kontrolle von Salizy·
laten im Blut und Urin bei mit diesem Medikament behandelten Patientm vor, weil sie gros.sere Vorteile hat.
R:f';SUM:e
On décrit une méthode simple et I'apide de
détermination de salicylate dans du sang et dans
de l'urine, basée sur la réaction du salicylate
avec le nitrite férrique et on apporte les preuves
de son exactitude comme méthode clinique. Les
auteurs proposent cette méthode, tres avantageuse pour le contróle de la salicylémie et de la
salicylurie chez les malades traités avec ce méclicament.