El Laboratorio Clínico y HbA1c y Dra. Verónica Ramírez M. Sudepto. Coordinación Externa Depto . Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia 26 de noviembre, 2012. 1 Hemoglobina A1c (Hb A1c) y Hemoglobina del adulto y 97% Hb A y 2,5% Hb A2 y 0,5% Hb F y HbA1c ≠ HB A1 HbA HB A y Hb A1 = Hb A1a, Hb A1b, HbA1c ˜ y Hb A Hb A1c 80% de Hb A1 8 % d Hb A y Sinónimos: A1c,Glicohemoglobina, Hemoglobina glicada. 2 Glicación de hemoglobina val 3 Glicación de hemoglobina y Ocurre en forma continua durante la vida de los GR. y Formación es irreversible. y Concentración de HbA1c depende de : C t ió d HbA d d d y Nivel de glucosa en sangre y Vida media de los glóbulos rojos: duración de la exposición. y Permeabilidad de los glóbulos rojos (gap de glicación). y Se excluye: anemia, hemólisis, déficit de vitamina B12 y y folatos, hemoglobinopatías. , g p 4 Rol del laboratorio en el manejo de DM y Diagnóstico: y Preclínico(pesquisa) y Glicemia de ayuno y Test de tolerancia a la glucosa y A1c y Insulina y Test de resistencia a la insulina y Clínico y Glicemia de ayuno y Test de tolerancia a la glucosa y A1c y Manejo o control y Complicaciones agudas y y y y y Glicemia‐glucosuria Cetonemia‐ cetonuria Cetonemia Estado ácido‐base Equilibrio hidro‐electrolítico (electrolitos, osmolaridad) Lactato y Complicaciones crónicas y Glicemia‐ glucosuria y A1c y Fructosamina y Proteinuria y Microalbuminuria y Insulina y Péptido C 5 Métodos analíticos para HbA1c y Según carga: y HPLC y Más Má susceptible tibl a interferencias i t f i por variantes i t de d hemoglobina h l bi (hemoglobinopatías). y Según g estructura: y Cromatografía de afinidad con boronato: menos interferencias por variantes. y Inmunoensayos: y y y Anticuerpos contra el extremo glicado N‐terminal de la cadena beta. Interferencias poco frecuentes pero difíciles de detectar. Uso con precaución en algunas l poblaciones. bl 6 Métodos analíticos para HbA1c Usuarios PEEC ISP Subprograma Hemoglobina Glicada 2005‐2011 2005 2011 Método Proporción de Usuarios Inmunoensayo 68.7% HPLC 26.2% Cromatografía de intercambio iónico 3.3% Cromatografía de afinidad 1.8% 7 Los orígenes de la estandarización y 1993 New England Journal of Medicine y y Resultados de Diabetes Control and Complications Trial (DCCT). Relación entre niveles de g glucosa en sangre g y riesgo g de complicaciones vasculares. y 1996National Glycohemoglobin y g Program (NGSP) y y y y y Standardization Estandarización contra el método usado por el laboratorio de referencia del DCCT Æ HPLC. Patrocinado en parte por American Diabetes Association (ADA). Certificado de trazabilidad al método DCCT a los fabricantes de ensayos. HbA expresada HbA1c d en %. % Mejora la comparabilidad de los resultados entre laboratorios. 8 Método IFCC y La trazabilidad establecida de esta forma corresponde a “método de comparación designado (DCM)” más que a un “método método de referencia (RM) (RM)”. y International Federation Of Clinical Chemistry y ((IFCC)) y IFCC Working Group on HbA1c Standardization (1995) y 2001 y 2010 Preparación de material de referencia primario y desarrollo de métodos de referencia aprobados por IFCC. IFCC Grupo de trabajo termina la tarea, queda funcionando una red de laboratorios supervisada por el IFCC Committee on Traceabilityy in Laboratoryy Medicine ((C‐ TLM). 9 Método IFCC y Definición del analito y HbA1c es la hemoglobina que está irreversiblemente glicada en uno o ambos extremos N N‐terminal terminal de las valinas de la cadena beta. y Material de referencia primario y Mezclas de Hb A1c HbA0 puras. Fracciones aisladas usando cromatografía de intercambio catiónico y de afinidad y caracterizada isoelectroenfoque capilar y espectrometría de masas con ionización electrospray (ESI MS) (ESI‐MS) 10 Método IFCC y Método de referencia IFCC y Se desarrollaron dos métodos que miden específicamente ífi t los l residuos id Nt N‐terminal i l glicados li d de d las l cadenas beta. y y y y Proteolisis de hemoglobina g en p péptidos. p Peptidos glicados y no glicados resultantes son separados por HPLC. Cuantificación por espectrometría de masas (MS) o electroforesis capilar (CE). Se mide HbA1c como una razón entre péptidos N‐terminal glicados y no glicados y se expresa como porcentaje. porcentaje 11 Relación IFCC‐NGSP • Excelente correlación. • Valores absolutos son diferentes: • Los resultados IFCC son consistentemente 1.5-2.0 % más bajos . ¿Cuál reportar? Ecuación maestra: NGSP% = (0.9148 • IFCC%) + 2.152 2007Æ IFCC recomienda expresar resultados como mmol HbA1c/mol Hb 0.09148 12 Relación IFCC‐NGSP l ó % HbA1c NGSP % HbA1c IFCC 5,0 3,1 6,0 4,2 70 7,0 53 5,3 8,0 6,4 9,0 IFCC HbA1c (mmol/mol) NGSP HbA1c (%) eAG (mg/dL) eAG (mmol/L) 31 5 97 5.4 7,5 42 6 126 7.0 10,0 86 8,6 53 7 154 8.6 11,0 9,7 64 8 183 10.2 12,0 10,8 75 9 212 11.8 86 10 240 13.4 97 11 269 14.9 108 12 298 16.5 eAG (mg/dL) = (28.7 • HbA1c) – 46.7 eAG (mmol/L)= (1.59 • HbA1c) ‐ 2.59 13 HPLC CPRL Lab. Central de Referencia 1° PRL Lab. de Referencia 1° Métodos comerciales SRL Lab. de Referencia 2° Monitoreo • Mensual (Red - CPRL) 10 muestras sangre congeladas rango 4-10%. • Bianual (IFCC/NGSP) Límites para las diferencias observadas CPRL/laboratorios individuales y seguimiento de CV% (PRL, SRL) R.Little. Clin Chem 2011;57:205-214 14 Procesos NGSP • Calibración - Certificado de trazabilidad a los f bi fabricantes. t - Proceso anual. - Comparación con SRL • Certificación - Incluye laboratorios individuales en dos niveles de cumplimiento de requisitos. requisitos • Evaluación de la calidad -Vigilancia de los datos de CAP Survey GH2 y LN15.(Sesgo promedio y CV%) -Dos envíos al año, sangre total. -Valores asignados por NGSP. NGSP R.Little. Clin Chem 2011;57:205-214 15 Procesos NGSP R.Little. Clin Chem 2011;57:205-214 16 R.Little. Clin n Chem 2011 1;57:205-214 HPLC 1.4- 3.5% Inmunoensayo 1.7- 6.0% 17 Métodos analíticos para HbA1c Usuarios PEEC ISP Subprograma Hemoglobina Glicada 5 2011 2005‐ 18 www.ngsp.org 19 Informe de resultados 20 I f d lt d Informe de resultados 21 22