I PARCIAL Ruby N. Gutiérrez 5.1 Lab N°1 – tinciones simples y compuestas - Tinciones o Simples 1 sólo tinte Morfología Violeta cristal; Azul de metileno o Carbol fucsina o Compuestas 2 ó más reactivos o tintes Clasificar bacterias según características especiales. - Bacterias (morfología) o Individual o Agrupación Cocos Racimos (Staphylos) Bacilos Cadenas (streptos) Espiroquetas Pares (diplococos) Espirilos Tétradas Cocobacilo = bacilo que tiende a ser esférico - Tinción de Gram: (+) = Púrpura x el violeta cristal; (-) = Rojo o Extender, secar y fijar con calor o Violeta cristal (tiñe las bacterias) o Yodo de Gram (fija la tinción en gram positivas) o Alcohol acetona (decolora en gram negativas) o Safranina (colorante de contraste) - Tinción de Moeller (esporas): esporas tiñen de rojo, bacilos de celeste Bacillus subtilis o Carbol fuchina mechero (esperar vapores, no hervir!!) =permite q entre el colorante o Enjuagar o Ácido sulfúrico 1% o Enjuagar o Azul de metileno o Secar - Tinción de Anthony (cápsula): Tinción negativa: lo q queremos ver no se tiñe, se tiñe el medio Klebsiella pneumoniae; Bacillus anthracis o Leche descremada al 20% o Frotis secar al aire o Violeta cristal 1% o Lavar con sulfato de cobre secar o Observar principalmente los bordes Lab N° 2 – Cultivo de bacterias y morfología colonial - Clasificación de los medios según características físicas: o Líquidos (caldos) o Sólidos Tubos Inclinado (en pico de flauta) Profundo e inclinado (aguja) Platos Petri método de estrías = + utilizado para aislar colonias o Semisólidos: para obtener motilidad inocular con aguja Si se observa turbiedad = la bacteria posee movimiento En forma de aguja = la bacteria no se mueve (vertical) - Según características químicas (depende de la composición de los medios de cultivo) o Nutritivos: para bacterias poco exigentes; posee lo mínimo que necesita una bacteria para crecer. BHI (Brain Heart Infusion) o Enriquecidos: medio nutritivo + nutriente específico Agar sangre Agar chocolate (sangre hervida) Thayer Martin = Agar chocolate + antibióticos suprime bacterias que no queremos q crezcan o Diferenciales MacConkey EMB o Selectivos Thayer Martin (Neisseria gonnorrohoeae) MacConkey: contiene violeta cristal y rojo neutro (indicador de cuando cambia el pH) Gram (-) - Características a evaluar en las colonias o Tamaño o Elevación o Forma o Consistencia o Borde o Color Resultados - MacConkey: Klebsiella pneumoniae (+) - Agar sangre: Staphylococcus aureus B hemólisis - Agar nutritivo: Bacillus subtilis - Agar inclinado: Staphylococcus aureus y Escherichia coli - Agar profundo: Klebsiella pneumoniae - Caldos: Bacillus subtilis, Klebsiella pneumoniae líquido más turbio - Semisólido: Escherichia coli se mueve El conteo de colonias es importante para conocer la velocidad de reproducción de la bacteria y gracias a esto elegir así el antibiótico adecuado para su tratamiento LAB N°3 – EFECTO DE LOS AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS SOBRE LAS BACTERIAS - - - Muerte o destrucción de los microorganismos = pérdida de la capacidad de multiplicarse en conjunto de condiciones conocidas Ausencia de crecimiento no es igual a esterilidad Esterilidad: destrucción de todas las formas vivientes Pasteurización: utilización del calor para matar las formas vegetativas de las bacterias Desinfección: empleo de agentes químicos (superficies) Antiséptico: sobre tejidos vivos (cuerpo) Asepsia: evita q lleguen a un ambiente protegido Antibiótico: natural Antimicrobiano: artificial Métodos físicos (agentes externos) o Calor húmedo (autoclave Parámetros: 15 lbs, 15 min, 121°C) = desnaturalización rápida de las proteínas o Calor seco (horno) o Filtración o Rayos UV exposición directa: daño directo al ADN formando dímeros de timina; pérdida de la capacidad para replicarse. Métodos químicos o Se clasifican según su composición de alcoholes, peróxido de oxígeno, yodóforos, fenólicos, glutaraldehído y compuestos de amonio cuaternario. o Antibióticos Resultados o Mejor desinfectante: clorox 10%, Lysol, fenol o Luz UV (sin tapa): Bacillus subtilis esporas; Serratia marcescens pigmento rojo = se produce al exponerse a factores adversos. o Difusión en plato: cualitativo. Medio más empleado = Müeller Hinton Antibiograma Turbidez = 0,5 de la escala de McFarland Pseudomona aeruginosa (bacilo gram -); Enterococcus faecalis (coco gram +) o Método de dilución: cuantitativo. o CIM = Concentración Inhibitoria Mínima (poco crecimiento bacteriano). Es la utilizada en el paciente. CMB = Concentración Bactericida Mínima = no hay crecimiento. E-Test: cuantitativo. No vemos CBM punto donde convergen = CIM LAB N°4 – MICROORGANISMOS DE FLORA NORMAL Y DEL AMBIENTE - - - - Factores para poder colonizar o Cantidad y tipo de nutrientes o pH o potencial óxido-reducción o resistencia a sustancias antibacteriales locales como la bilis y lisozimas Áreas con mayor cantidad de microorganismos de flora normal o Cavidad oral o Intestino o Piel Atacan cuando hay un desequilibrio Beneficios de la flora normal o Síntesis de vitamina K y B12 o Absorción de nutrientes o Evitan la colonización de patógenos mantienen el sistema inmune alerta Biopelícula: complejo de agregación de microorganismos marcado por la excreción de una matriz adhesiva protectora. LAB N°5 – COCOS GRAM POSITIVOS - - - - - Staphylococcus = racimos crecen muy bien en medio de agar sangre bajo incubación aerobia Streptococcus = cadenas crecen mejor en medios enriquecidos (Agar sangre), bajo condiciones aerobias o anaerobias (facultativos) S. aureus o Principal causante de infecciones purulentas agudas o Sobrevive a la desecación o Causante de intoxicaciones alimentarias Streptococcus pyogens = bacteria carnívora faringoamigdalits estreptocóccica, q puede producir fiebre reumática y cardiopatía agalactiae = sepsis neonatal pneumoniae = neumococo causante de neumonías y meningitis n cualquier edad. o Pueden clasificarse según su hemólisis en alfa, beta y gamma hemolíticos Enterococcus faecalis faecium o infección en personas hospitalarias o con imunodeficiencia Grupo de Lancefield o Streptococcus B-hemolíticos del grupo B = S. agalactiae o Streptococcus B-hemolíticos del grupo A = S. pyogens o Streptococcus B-hemolíticos del grupo D = Enterococcus faecalis Resultados o CAMP punta de flecha = S. agalactiae: produce factor CAMP o MRSA (Staphylococcus aureus resistente a la meticilina) uso de vancomicina o S. aureus Osteomielitis Gastroenteritis Síndrome de piel escaldada Shock tóxico o Infecciones prenatales = Streptococcus agalactiae (grupo B) Septicemia Faringitis estreptocócica Neumonía LAB N°6 – BACILOS GRAM POSITIVOS - Corinebacterias (no esporulados) Pequeñas Pleomórficas formaciones tipo letras chinas o empalizadas Crecen en agar sangre ambiente aerobio o Corynebacterium diphteriae: difteria o Listeria monocytogenes: causa esporádica de meningitis y otras infecciones en fetos, neonatos y huéspedes inmunosuprimidos Nacimiento del producto muerto o sepsis neonatal fulminante Crece a temperatura ambiente Gram positivos Adultos = fiebre y malestar general - Bacilos Anaerobios o facultativos Formadores de esporas Saprófitos excepto Bacillus anthracis o Bacillus anthracis Cadenas largas Causante del carbunco (lesión en la piel) Arma biológica (2001) o Bacillus cereus Intoxicación alimentaria - Resultados o L. monocytogenes Medio SIM = crece en forma de paraguas xq busca oxígeno o Medio SIM Sulfuro – Indol – Motilidad Mide la motilidad de la bacteria Medio semisólido Amarillo o Gelatina = determinar la presencia de gelatinasa + al enfriar, no se endurece = la bacteria posee las enzimas para licuar la gelatina o Otros microorganismos como armas biológicas = Francisella tularensis o Muestras para carbunco sintomático Sangre Esputo Muestras de pus y líquido local (tejidos afectados) o Antimicrobianos contra Listeria Ampicilina Penicilina G Trimetropin / Sulfamethoxazol LAB N°7 – INFECCIONES DE TRANSMISIÓN SEXUAL - No son ETS xq podemos estar infectados, más no enfermos x un mismo microorganismo Bacterias o Neisseria gonorrhoeae (Gonococo, GC) = gonorrea o Treponema pallidum = sífilis úlcera: chancro duro (indolora y regular) o Chlamydia trachomatis = Linfogranuloma vénereo, uretritis inespecífica o Mycoplasma hominis = uretritis inespecífica o Ureaplasma urealiticum = uretritis inespecífica o Gardnerella vaginalis = vaginosis bacteriana o Haemophilus ducryii = chancro blando (úlcera irregular y con dolor) - - - Virus o HPV = papiloma o HV II = herpes (úlceras) o HBV = hepatitis B o HCV = hepatitis C o HIV = SIDA Hongos = Candida albicans (candidiasis) Parásitos = Trichomonas vaginalis (tricomoniasis) N. gonorrhoeae gram negativo o Diplococo o Se encuentra dentro de los PMN o Patogenicidad = fimbrias o Es más común y fácil de diagnosticar ya q se puede cultivar en Thayer Martin (ambiente microaerofílico) C. trachomatis: requiere células McCoy para su crecimiento Micoplasmas y Ureaplasmas colonias vistas bajo el microscopio Resultados o Lactobacillus = Gram positivos o Nugent 0 ausencia del morfotipo Células guías 1+ 1 Lactobacillus = altas [ ] normal 2+ de 1 a 4 Bacilos gram corto variables (Moviluncus) 3+ de 5 a 30 Gram negativos curvos 4+ de 30 en adelante o Treponema pallidum = espirilos color oscuro (chocolate) en tinción argéntica o Fases de la sífilis y pruebas diagnósticas Primaria (chancro duro) = microscopía de campo oscuro Secundaria (pápulas) = test serológico de sífilis (TSS) + Latente = TSS reagínico y treponémico + Terciaria = TSS + o Pruebas diagnósticas para C. trachomatis Cultivo celular Análisis de orina Tinción de Gram Técnicas de inmunofluorescencia o Pruebas treponémicas Fluorescencia de absorción de anticuerpos treponímico Inmovilización de T. pallidum o Pruebas no treponémicas Prueba rápida de reagina plasmática Prueba del lab.de investigación de enf. Venéreas MICROSCOPIO - - Distancia focal (punto focal) = distancia entre el eje óptico del lente y el foco Poder de magnificación = relación entre el diámetro aparente de la imagen y el diámetro o longitud del objeto Magnificación total = aumento del objetivo x aumento del ocular Poder de resolución = distancia minima entre 2 puntos para q aparezcan separados Poder de definición = nitidez de las imágenes obtenidas sobre todo respecto a sus contornos ML > resolución (200nm) - ME 2nm o Muestras vivas o Muestras muertas o < costo o > aumento 300 000 veces o Fuente de luz o Haces de electrones o Fijadores de rutina o Tinciones de rutina o Aumento 2 500 veces M. fluorescencia clínica = inmunofluorescencia identificación de un microorganismo unidos a anticuerpos x marcadores se tiñe la muestra con una sustancia fluorescente que absorbe la energía de las ondas cortas de luz y emite a longitud de ondas más largas. - Apertura numérica = capacidad de captación de la luz x las lentes del microscopio. Estos valores son constantes. BACTERIAS GRAM POSITIVAS - Staphylococcus aureus - S. epidermidis - Bacillus subtilis - Streptococcus pneumoniae - S. pyogenes - S. agalactiae - Enterococcus faecalis - Corynebacterium diphteriae Sensibilidad a antibióticos - Enterococcus faecalis penicilina - Pseudomona aeruginosa Fosfocil, Imipenem GRAM NEGATIVAS - Escherichia coli - Pseudomona aeruginosa - Neisseria gonorrhoeae - N. meningitidis - Klebsiella pneumoniae