Avances de la producción vegetal y animal en el noa. 2003 - 2005 (ISBN 987 - 43 - 9145 - 6) ANÁLISIS DEL COMPORTAMIENTO CROMOSÓMICO EN MEIOSIS Y SU RELACIÓN CON LA FERTILIDAD EN DOS ESPECIES DE COMMELINACEAE Andrada Mansilla, Bruno*; Pastoriza, Adriana del V.; Andrada, Alberto B.; Martínez Pulido, L.; Nasif, A. Fac. de Agronomía y Zootecnia. UNT. Av. Roca 1900. 4000. Tucumán. E=mail: brunoam1@hotmail.com Trabajo subsidiado por el Consejo de Investigaciones de la Universidad Nacional de Tucumán (CIUNT) RESUMEN En este trabajo se realizó un análisis citogenética, del comportamiento de los cromosomas en meiosis y la relación con la fertilidad en T. fluminensis Vell. y C. erecta L.. El material de provino de Yerba Buena (Tucumán, Argentina). Para el análisis de los cromosomas mitóticos y meióticos, se realizó un pretratamiento y en la confección de los preparados se empleó hematoxilina al 2% como colorante y citrato férrico al 1% como mordiente. La viabilidad del polen se determinó con Azul de algodón en lactofenol. Los resultados de los cromosomas mitóticos dieron un 2n=60 tanto para T. fluminensis como para C. erecta. En la meiosis de T. Fluminensis se observó un comportamiento irregular de los cromosomas. El análisis de viabilidad de polen dio un 44% de polen viable. Para T. erecta, el comportamiento de los cromosomas en meiosis fue regular, con la formación de gametas normales. El porcentaje de grano de polen viable dio un valor de 92,6. En relación con T. Fluminensis la alta irregularidad de la meiosis se tradujo en un bajo porcentaje de polen viable, lo que disminuye su fertilidad. En cambio, en C. erecta, la regularidad de su meiosis y viabilidad del grano de polen, se refleja en una alta producción de semillas fértiles, lo que favorece su difusión natural en la región. Palabras Clave: cromosomas, meiosis, fertilidad. CHROMOSOMAL BEHAVIOR ANALYSIS IN MEIOSIS AND ITS RELATIONSHIP WITH THE FERTILITY IN TWO SPECIES OF COMMELINACEAE SUMMARY In this work it was realized a cytogenetic analysis, with observation of the chromosomic behavior in meiosis and its relationship with the fertility in T. fluminensis Vell. and C. erecta L.. Material came from Yerba Buena (Tucumán, Argentina). For the mitotic and meiotic chromosome analysis, material was pretreated and squashed on hematoxiline 2%. Pollen viability was carried out by means of coloration in Blue of cotton in lactofenol. It was determined a 2n=60 chromosomal number in T. fluminensis and in C. erecta. It was observed an irregular chromosome behavior at different meiosis phases of T. Fluminensis. The analysis of viability of pollen gave 44% of viable pollen. In C. erecta, the behavior of the chromosomes in meiosis was regular, with formation of normal gametas. The pollen grain gave a value of 92,6 % of viability Avances de la producción vegetal y animal en el noa. 2003 - 2005 (ISBN 987 - 43 - 9145 - 6) The irregularity of the meiosis in T. Fluminensis was translated in a low percentage of viable pollen, what diminishes its fertility. On the other hand, in C. erecta, the regularity of their meiosis and the high percentage of pollen viability, it was reflected in a high probability of fertile seeds production, what favors their natural diffusion in the region. Key Word: chromosome, meiosis, fertility. INTRODUCCIÓN La familia Commelinaceae posee alrededor de 50 géneros y 700 especies distribuidas en regiones tropicales, subtropicales o templadas de ambos hemisferios, especialmente de América. En esta familia se destacan los géneros Tradescantia y Commelina. Tradescantia cuenta con más de 35 especies, en general, ornamentales. Muchas de ellas se utilizan en exterior como cubresuelos y en interior, como plantas colgantes. Tradescantia fluminensis Vell. es originaria de América del Sur, Paraguay, Sur de Brasil, Uruguay Argentina. Crece en terrenos modificados, húmedos y umbrosos. Es una planta herbácea, perenne, rastrera, con tallos suculentos que forman una densa cobertura. Presenta hojas oblongas o aovadas, y flores blancas, hermafroditas, dispuestas en cimas. Es muy conocida por su uso como ornamental. También se la puede considerar una amenaza en algunos cultivos por su gran facilidad de multiplicación por pequeños gajos o trozos de tallos (Marzocca, 1994). Los estudios sobre el género Tradescantia disponibles, se basan principalmente en un análisis morfológico, descripciones botánicas y de distribución geográfica. Desde el punto de vista citogenético, se ha informado que Tradescantia fluminensis Vell. (flor de Santa Lucía) posee un número cromosómico 2n=60 (Andrada, et al., 2004). En relación con el género Commelina, éste es el más numeroso de la familia, con alrededor de 250 especies, distribuidas por todo el mundo (Lorentzii, Harri, 2000; Cristóbal et al., 2004). Commelina erecta L., conocida también como flor de Santa Lucía, es una planta herbácea y perenne. Se encuentra distribuida en América, desde EE. UU hasta el norte y centro de Argentina, habitando suelos secos y arenosos (Cabrera, 1968; Zuloaga y Morrone, 1996; Roncaglia et al. 2000). Se han citado para este género, entre otros, los números cromosómicos de C. difusa, C. erecta y C. tuberosa, correspondiendo un 2n=30, 2n=60 y 2n=86 respectivamente (Cristóbal et al., 2004). Se dispone además, de información acerca de la morfología polínica de estas especies, trabajos éstos que se han realizado tanto en microscopía óptica como electrónica (Garcia et al. 2002). El objetivo de este trabajo es realizar un análisis del comportamiento de los cromosomas en meiosis y su relación con la fertilidad en T. fluminensis Vell.y C. erecta L. MATERIALES Y MÉTODOS El material de T. fluminensis y C. erecta seleccionado para este trabajo, provino de la localidad de Yerba Buena (Tucumán, Argentina). Avances de la producción vegetal y animal en el noa. 2003 - 2005 (ISBN 987 - 43 - 9145 - 6) Para el análisis de los cromosomas en mitoisis, se pretrataron meristemas radicales en una solución saturada de Paradiclorobenceno (Paclosol) durante 2 horas 20 minutos. Luego se fijaron en 3:1 (alcohol absoluto: ácido acético glacial). Posteriormente el material se hidrolizó en HCl 1 N a 58°C - 60ºC durante 8 minutos y se conservó en ácido acético al 45%. Para la realización de los preparados se empleó hematoxilina al 2% como colorante y citrato férrico al 1% como mordiente, (Andrada et al., 1975); (Boggiatto et al.,1979). Para el análisis de los cromosomas en meiosis, las flores jóvenes se fijaron en Newcomer. Se realizaron las preparaciones microscópicas, empleándose la misma técnica citada anteriormente. Se observaron las distintas fases de la meiosis en células madre del grano de polen (CMP) y se obtuvieron las microfotografías correspondientes. Para la determinación de viabilidad de grano de polen se colorearon los mismos en una gota de Azul de algodón en lactofenol. Se consideraron normales los granos coloreados y anormales aquellos que no se colorearon y/o deformes. RESULTADOS Y DISCUSION T. fluminensis Vell. Del análisis de los cromosomas mitóticos se obtuvo un complemento cromosómico con un 2n=60 (Figura 1), con cromosomas que oscilaron entre 2 y 5 . En meiosis, se observó un comportamiento irregular de los cromosomas en sus distintas fases, con la observación de univalentes en Metafase I, cromosomas rezagados en Anafase I y Telofase I. Las tetradas presetaron formación de micronúcleos (Figura 1). El análisis de viabilidad de polen se realizó sobre un total de 2.067 granos, de los cuales 909 fueron normales y 1158 anormales, es decir, un 44% de polen viable. Avances de la producción vegetal y animal en el noa. 2003 - 2005 (ISBN 987 - 43 - 9145 - 6) A B C D Figura 1. T. fluminensis Vell.. A) Mitosis. Aprox. 2000x. B) Meiosis: Metafase I, con presencia de univalentes. Aprox. 1400x. C) Meiosis: Anafase I y Telofase I, con cromosomas rezagados y micronúcleos. Aprox. 1400x. D) Meiosis: Tetradas con micronúcleos. Aprox. 1400x. C. erecta L. C. erecta presenta un complemento cromosómico 2n60 (Figura 2), con un tamaño cromosómico que varió entre 1,4 y 2,8 . Presentó una meiosis regular, observada por el comportamiento de los cromosomas en sus distintas fases, como se muestra en Diplonema, en las asociaciones bivalentes de la Metafase I, en la migración de los cromosomas en Anafase I y en la formación de los núcleos en Telofase I y Tetradas (Figura 2). De la misma manera, se presentó regularidad de comportamiento cromosómico en la división II de la meiosis, con la formación de cuatro núcleos que originan las cuatro microsporas normales. En relación con la viabilidad del polen, de un total 596 granos contados, 552 resultaron normales y 44 anormales, es decir un porcentaje de 92,6 de normalidad. Avances de la producción vegetal y animal en el noa. 2003 - 2005 (ISBN 987 - 43 - 9145 - 6) A B C D E F Figura 2. C. erecta L. A)Mitosis. Aprox. 2100x. B) Meiosis: Diplonema. Aprox. 1400x. C) Meiosis: Metafase I. Aprox. 1400x. D) Meiosis: Anafase I. Aprox. 1400x. E) Meiosis: Telofase I. Aprox. 1400x. F) Meiosis: Tetradas. Aprox. 1400x. DISCUSIÓN Y CONCLUSIÓN En relación con T. Fluminensis la alta irregularidad de la meiosis se tradujo en un bajo porcentaje de polen viable, lo que disminuye su fertilidad. Por lo tanto, recurre a una forma de multiplicación vegetativa. Por no tener variabilidad, las posibilidades de colonizar áreas diferentes, son escasas. En C. erecta, a pesar del alto número cromosómico, el tamaño adecuado de los mismos constituye una ventaja para la confección del cariotipo, lo que permitirá establecer presuntas diferencias a ese nivel entre C. erecta y otras especies del género con igual Avances de la producción vegetal y animal en el noa. 2003 - 2005 (ISBN 987 - 43 - 9145 - 6) número cromosómico. Por otro lado, de la regularidad de su meiosis y del alto porcentaje de viabilidad del grano de polen, se deduce una alta probabilidad de producción de semillas fértiles, lo que favorece su difusión natural en la región. BIBLIOGRAFÍA Andrada, A. B.; A. J. Boggiatto, L. G. Auad y M. L. Collado. 1975. Estudios citogenéticos en el híbrido intergenérico Euchlaena perennis Hitch por Zea mays L. I. Análisis meióticos en plantas de dos generaciones. Rvta. Agron. N.O. Argent., XII (3-4) 323-330. Andrada, A. B.; Pastoriza, A.; Nasif, A.; Martínez Pulido, L.; Andrada Mansilla, B. 2004. Estudios Citogenéticos En Tradescantia Fluminensis Vell.. CD XXI Jornadas Científicas de la Sociedad de Biología. Nº 244 (492-493). Tafí del Valle, Tucumán. República Argentina. Boggiatto, A. J., A. B. Andrada y A. M. P. de Zamudio. 1979. Euchlaena perennis Hitch por Zea mays L. Interpretación citogenética de su fertilidad. Rvta. Agron. N.O. Argent. , XVI (1-4) 75-90. Cabrera, Angel L. 1968. Flora de la Provincia de Buenos Aires. Parte I. Colección Científica del INTA. 623 pp. Buenos Aires. Zuloaga, Fernando O.; Morrone, Osvaldo (editors). 1996. Catálogo de las Plantas Vasculares de la República Argentina. I. Pteridophyta, Gymnospermae y Angiospermae (Monocotyledoneae). ISBN 0-915279-40-1. ISSN 0161-1542. 323 pp. Missouri Botanical Garden. García, María E.; Lozzia, María E.; Cristóbal. María E. Polinic morphology in three species of the genus Commelina L. in the province of Tucumán, (Argentina). 2002. Biocell. ISSN: 0327 – 9545. 26 (1):161. Cristóbal. María, E.; Caro, M. S.; Lozzia, M. E.; Frías, A. M; Torres, Marta. 2004. Análisis de los cariotipos de tres especies del género Commelina (COMMELINA – CEAE). CD XXI Jornadas Científicas de la Sociedad de Biología. Nº57 (139140). Tafí del Valle, Tucumán. República Argentina. Darlington, C. D. y A. P. Wylie. 1955. Chromosome Atlas of flowering plants. George Allen & Unwin Ltd., London. 325-326. Marzocca, Angel. 1994. Guía descriptiva de malezas del Cono Sur. INTA. 295 pp. Buenos Aires, República Argentina. Lorentzii, Harri. 2000. Plantas Daninhas do Brasil. Terrestres, Aquáticas, Parasitas e Tóxocas. 3ª Edic. 608 pp. Brasil. Roncaglia, Ricardo V. R.; De Marco de Roncaglia, Nora E.; Villagrán de Krapovickas, Lucrecia, F.; Díaz, Bibliana; Mansilla de Andrada, Nora J.; Arce, Osvaldo. 2000. Malezas frecuentes en el norte argentino. Facultad de Agronomía y Zootecnia. Universidad Nacional de Tucumán. República Argentina. 63 pp.