- .-.-. .. INSTlTlJTO NACIONAl. DE PROCESO REDESENSALUDPÚBLICA MANTENIMIENTO DE COLONIAS DE INSECTOS EN EL GRUPO DE ENTOMOLOGIA RNL S.Hl'IJ INT- R01-5010-003 Versión:02 2012 - Ago - 23 Página 1 de 9 1. OBJETIVO ..~ Establecer la metodología para el mantenimien~e de Entomología del Instituto Nacional de Salud, 2. ALCANCE las colonias de mosquitos en el insectario del grupo ' Este documento describe la forma como se hace el mantenimiento de las colonias de mosquitos de importancia médica y aplica para el insectario del grupo de Entomología del Instituto Nacional de Salud y para las unidades de Entomología de los laboratorios departamentales salud pública, e inicia con el conocimiento del ciclo biológico de las especies y finaliza con la obtención de las generaciones requeridas. 3. RESPONSABILIDAD Serán los profesionales y técnicos calificados del grupo de Entomología, los encargados de desarrollar la metodología para el mantenimiento de las colonias de insectos, bajo la supervisión del Coordinador del grupo. 4. DEFINICIONES Cámara ambiental: es un ambiente con paredes aislantes, cortinas de acetato, puerta de seguridad, donde se mantiene el fotoperiodo, temperatura y humedad relativa en forma controlada por un tablero programable. Cámara de incubación: Las cámaras de incubación se pueden hacer en bandejas esmaltadas con gasa humedecida Ciclo de vida de los insectos: los insectos tienen metamorfosis completa, pasando por los estadios de huevo, larva, pupa y adulto. La hembra hace una toma de sangre y se retira entre 24 y 48 horas a un lugar oscuro para madurar los huevos; posteriormente busca depósitos de paredes rígidas que contengan agua relativamente limpia para colocarlos. Los pequeños huevos, de color negro miden aproximadamente un milímetro, se adhieren a las paredes de los depósitos en forma separada o formando hileras. Cuando los huevos entran en contacto con el agua, nacen las larvas, estas se alimentan y crecen durante 7 a 10 días, dependiendo de la temperatura del ambiente. Pasado este tiempo, se convierten en pupas, esta es una etapa intermedia entre la larva y el mosquito adulto que tarda aproximadamente dos días. Las pupas no se alimentan, a partir de la pupa se forma el adulto, el cual puede vivir entre 10 Y 20 días, y es en esta etapa cuando se reproducen y vuelve a comenzar el ciclo. Ciclo gonotrófico: abarca la toma de sangre de la hembra, seguida de la digestión de esta, la maduración de los oociytos, la oviposición, hasta una nueva toma de sangre. Dependiendo de la temperatura ambiental el tiempo para la digestión de la sangre y la producción de huevos varia de 3 a 5 días. Colonia: conjunto de individuos de una misma especie cuyo origen es común, que se han establecido en un lugar determinado sin recibir individuos nuevos luego de su conformación. Criadero: sitio con agua que puede ser colonizado por el insecto hembra para la ovipostura, eclosión, desarrollo de larvas, pupas y emergencia de adultos. Cuarto climatizado: habitación adaptada manualmente para controlar condiciones de luz, temperatura y humedad para el mantenimiento de colonias de insectos, el fotoperiodo es ,controlado por un . __ __ _ INSTITUTO N.-\CION.U DE PROCESO REDESENSALUDPÚBLICA MANTENIMIENTO DE COLONIAS DE INSECTOS EN EL GRUPO DE ENTOMOLOGIARNL INT-R01-5010-003 SAlll) Versión:02 2012 - Ago - 23 Página 2 de 9 temporizador graduado para mantener 12 horas de oscuridad y 12 horas de luz, la temperatura se regula con un calentador de ambiente y la humedad relativa con recipientes con agua. Dengue: es una enfermedad viral causada .pOIarl1ovin.[§II?transmitidaal hombre por el mosquito Aedes aegypti, su principal vector. De ~nfermed,ápesi I)rralestransmitidas por artrópodos, el dengue es la de mayor importancia actualmente ~nstitüye una prioridad de salud pública en los países tropicales y subtropicales.~ · ~ Encefalitis equina venezolana: es una enfermedad reemergentes producida por el virus de la Encefalitis Equina Venezolana (VEEV), del género Alphavirus, Familia Togaviridae, el cual es transmitido por la picadura de mosquitos (Diptera: Culicidae), a los vertebrados susceptibles (Humanos y equinos). Existen dos ciclos epidemiológicos de transmisión de la enfermedad, el ciclo epizoótico, que ocurre entre vertebrados (equino y humano), y los pricipales vectores son las especies: Aedes (Ochlaerotatus) taeniorhynchus, Psorophora (Grabhamia) confinnis, los subtipos epidémicos son el IAB y el IC. El ciclo enzoótico ocurre constantemente en áreas silvestres, boscosas y/o pantanosas entre pequeños mamíferos (roedores) y mosquitos del género Culex, subgénero Melanoconion, de la sección Spissipes, los humanos se infectan accidentalmente al entrar a las zonas donde ocurre este ciclo. El subtipo enzoótico en Colombia es el ID. Entomología Médica: es la ciencia que estudia los insectos y otros artrópodos que intervienen en el ciclo evolutivo de enfermedades que afectan al hombre y a los animales domésticos y silvestres. Estenogamia: capacidad de los mosquitos de criarse en espacios reducidos Uaulas 30x30x30 o de 60x60x60). Fiebre amarilla: es una enfermedad producida un virus de la familia Flaviviridae transmitido por mosquitos que ocasiona en el hombre falla hepática, renal, miocárdica y hemorragias generalizadas con una alta tasa de letalidad. Se distribuye principalmente en las zonas tropicales del África y en América Latina en Perú, Brasil, Bolivia, Venezuela, Colombia, Ecuador y Guyana Francesa. La infección es mantenida por transmisión en un ciclo selvático entre primates cuyo vector es un mosquito del género Haemagogus en América del Sur y Aedes africanus en África. En esta etapa el hombre es ocasionalmente infectado en viajes a la selva. En el ciclo urbano de transmisión, el virus es transmitido desde un humano infectado a un susceptible a través de la picadura del mosquito hembra Aedes aegypti, la cual se alimenta durante el dia y se encuentra preferentemente en zonas urbanas. Forma inmadura: estadio acuático (larvas y pupas) del ciclo de vida de un mosquito. Forma madura: estadio adulto (hembra o macho) del ciclo de vida de un mosquito. Fotoperíodo: tiempo en que los insectos están sometidos a la acción de la luz entre dos periodos de oscuridad. Imago: forma adulta recién emergida. - Ingesta de sangre: las hembras de los mosquitos se alimentan de fuentes de sangre proveniente de aves, anfibios, reptiles y una amplia variedad de mamíferos, incluido el hombre, con el fin de alcanzar la maduración de los huevos. Insectario: sitio de cría de colonias de insectos en donde desarrollan su ciclo de vida completo. Insecto vector: artrópodo que puede transmitir patógenos de un hospedero vertebrado a otro. ..1 . ___ .. __ PROCESO INSIT\)TO DE NACIONAL MANTENIMIENTO DE COLONIAS DE INSECTOS EN EL GRUPO DE Versión: 02 ENTOMOLOGIA RNL 2012 - Ago- 23 INT-R01-5010-003 Página3 de 9 REDES ENSALUD PÚBLICA SALU) Longevidad: periodo de vida de un insecto desde huevo a adulto que se ve afectado por las condiciones de luz, temperatura, humedad y alimentación. Malaria: es una enfermedad causada por un parásito del género Plasmodium spp, que se transmite de un humano a otro por la picadura de mosquitos anof~linos infectados. Esta enfermedad tiene alto poder epidémico y es endémica en una gran part~~@1:'t~ñtP~fnacional localizada por debajo de los 1.500 \.-, ,,-. msnm. - .1 1,.- Ovipositar: después de la ingesta ~angre la hembra coloca los huevos sobre una superficie húmeda o liquida. Factores como la temperatflJfá, intensidad de la luz, profundidad y calidad del agua, afectan la ovipostura. 5. CONDICIONES GENERALES (En caso de que aplique para el documento) Agua reposada: no es conveniente utilizar el agua potable directamente del grifo debido a que los niveles de cloro pueden afectar el desarrollode las larvas, por tanto se recomiendamantenerun recipienteo contenedorcon aguaalmacenada. Alimentación de larvas: existen varios productos sintéticos que sirven de alimento a las formas inmaduras, entre ellos encontramos la Rodentina@y la Pescadina@,ambos funcionan bien. Alimentación de adultos: las hembras se pueden alimentar con sangre de ratón, curie o hámster de laboratorio, previamente anestesiados, la alimentación artificial es otra alternativa, se puede emplear sangre de cualquier mamífero. Bioseguridad: las condiciones básicas de protección del personal encargado del mantenimiento de las colonias son las siguientes: 1. Disponer de un esquema básico de vacunación, además de estar inmunizado contra la fiebre amarilla. 2. Usar bata blanca de puño elástico y de largo hasta debajo de la rodilla, guantes y zapatos blancos. 3. Contar con sillas ergonómicas Condiciones ambientales: en condiciones experimentales la temperatura promedio para el desarrollo de las colonias de mosquitos oscila entre 25 y 30°C y la humedad relativa entre el60 y 80 %. Fotoperiodo: el ciclo de vida de los mosquitos se ve afectado por la intensidad de la luz, en el laboratorio se exponen a periodos de 12 horas de oscuridad y 12 de luz. Instalaciones: demarcada . . . . . el insectario consta principalmente de cinco zonas, cada una de ellas deberá estar área de mantenimiento de jaulas y bandejas (con condiciones de luz, temperatura y humedad controladas) área de manejo de colonia (mesón en el que se seleccionan y separan las pupas, se realiza el cambio de alimento de las larvas) área de alimentación de adultos (mesón en el que se colocan las jaulas y los mamíferos fuentes de alimento) área de lavado de material área de desecho de residuos Es recomendable que las paredes, puertas y techos sean lisos y la pintura sea lavable (para facilitar su limpieza), que los mesones sean en acero inoxidable, en el área de lavado los grifos deben tener cuello de cisne y ser móviles, la poceta debe tener 30 cm de profundidad. Para evitar que los insectos se - .. ... '" '" MANTENIMIENTO INSTITUTO NACIONAL PROCESO REDESENSALUDPÚBLICA DE SAIXIJ DE COLONIAS DE INSECTOS EN EL GRUPO DE ENTOMOLOGIA RNL Versión: 02 2012 INT-R01-5010-003 - Ago - 23 Página 3 de 9 Longevidad: periodo de vida de un insecto desde huevo a adulto que se ve afectado por las condiciones de luz, temperatura, humedad y alimentación. Malaria: es una enfermedad causada por un parásito del género Plasmodium spp, que se transmite de un humano a otro por la picadura de mosquitos anof~linos infectados. Esta enfermedad tiene alto poder epidémico y es endémica en unag¡an part~_dei-'t~m1P~fnacional localizada por debajo de los 1.500 msnm. ~. , 11 c:. ,'''''Ovipositar: después de la ingesta ae.sangre la hembra coloca los huevos sobre una superficie húmeda o líquida. Factores como la temperat«J1'a'¡intensidad de la luz, profundidad y calidad del agua, afectan la ovipostura. 5. CONDICIONES GENERALES (En caso de que aplique para el documento) Agua reposada: no es conveniente utilizar el agua potable directamente del grifo debido a que los niveles de cloro pueden afectar el desarrollo de las larvas, por tanto se recomienda mantener un recipiente o contenedor con agua almacenada. Alimentación de larvas: existen varios productos sintéticos que sirven de alimento a las formas inmaduras, entre ellos encontramos la Rodentina@y la Pescadina@,ambos funcionan bien. Alimentación de adultos: las hembras se pueden alimentar con sangre de ratón, curie o hámster de laboratorio, previamente anestesiados, la alimentación artificial es otra alternativa, se puede emplear sangre de cualquier mamffero. Bioseguridad: las condiciones básicas de protección del personal encargado del mantenimiento de las colonias son las siguientes: 1. Disponer de un esquema básico de vacunación, además de estar inmunizado contra la fiebre amarilla. 2. Usar bata blanca de puño elástico y de largo hasta debajo de la rodilla, guantes y zapatos blancos. 3. Contar con sillas ergonómicas Condiciones ambientales: en condiciones experimentales la temperatura promedio para el desarrollo de las coloniasde mosquitososcilaentre25 y 30°C y la humedadrelativaentreel 60 y 80 %. Fotoperiodo: el cic.lode vida de los mosquitos se ve afectado por la intensidad de la luz, en el laboratorio se exponen a periodos de 12 horas de oscuridad y 12 de luz. Instalaciones: demarcada . . . .. el insectario consta principalmente de cinco zonas, cada una de ellas deberá estar área de mantenimiento de jaulas y bandejas (con condiciones de luz, temperatura y humedad controladas) área de manejo de colonia (mesón en el que se seleccionan y separan las pupas, se realiza el cambio de alimento de las larvas) área de alimentación de adultos (mesón en el que se colocan las jaulas y los mamfferos fuentes de alimento) área de lavado de material área de desecho de residuos Es recomendable que las paredes, puertas y techos sean lisos y la pintura sea lavable (para facilitar su limpieza), que los mesones sean en acero inoxidable, en el área de lavado los grifos deben tener cuello de cisne y ser móviles, la poceta debe tener 30 cm de profundidad. Para evitar que los insectos se - ... .. MANTENIMIENTO INSTITUTO NACIONAL DE DE COLONIAS DE INSECTOS EN EL GRUPO DE ENTOMOLOGIA RNL PROCESO REDESENSALUDPÚBUCA SAIXIJ Versión: 02 2012 - Ago INT-R01-5010-003 - 23 Página3 de 9 Longevidad: periodo de vida de un insecto desde huevo a adulto que se ve afectado por las condiciones de luz, temperatura, humedad y alimentación. Malaria: es una enfermedad causada por un parásito del género Plasmodium spp, que se transmite de un humano a otro por la picadura de mosquitos anofelinos infectados. Esta enfermedad tiene alto poder epidémico y es endémica en una g¡an part~~~el~'t~t¡i:¡1P~fhacional localizada por debajo de los 1.500 msnm. ~. , 1' e \' r Ovipositar: después de la ingesta tffi.Sangre la hembra coloca los huevos sobre una superficie húmeda o líquida. Factores como la temperat(Qf'á¡intensidad de la luz, profundidad y calidad del agua, afectan la ovipostura. 5. CONDICIONES GENERALES (En caso de que aplique para el documento) Agua reposada: no es conveniente utilizar el agua potable directamente del grifo debido a que los niveles de cloro pueden afectar el desarrollo de las larvas, por tanto se recomienda mantener un recipiente o contenedor con agua almacenada. Alimentación de larvas: existen varios productos sintéticos que sirven de alimento a las formas inmaduras, entre ellos encontramos la Rodentina@y la Pescadina@,ambos funcionan bien. Alimentación de adultos: las hembras se pueden alimentar con sangre de ratón, curie o hámster de laboratorio, previamente anestesiados, la alimentación artificial es otra alternativa, se puede emplear sangre de cualquier mamffero. Bioseguridad: las condiciones básicas de protección del personal encargado del mantenimiento de las coloniasson las siguientes: 1. Disponer de un esquema básico de vacunación, además de estar inmunizado contra la fiebre amarilla. 2. Usar bata blanca de puño elástico y de largo hasta debajo de la rodilla, guantes y zapatos blancos. 3. Contar con sillas ergonómicas Condiciones ambientales: en condiciones experimentales la temperatura promedio para el desarrollo de las colonias de mosquitos oscila entre 25 y 30°C y la humedad relativa entre el 60 y 80 %. Fotoperiodo: el cic,lode vida de los mosquitos se ve afectado por la intensidad de la luz, en el laboratorio se exponen a periodos de 12 horas de oscuridad y 12 de luz. Instalaciones: el insectario consta principalmente de cinco zonas, cada una de ellas deberá estar demarcada . . . .. área de mantenimiento de jaulas y bandejas (con condiciones de luz, temperatura y humedad controladas) área de manejo de colonia (mesón en el que se seleccionan y separan las pupas, se realiza el cambio de alimento de las larvas) área de alimentación de adultos (mesón en el que se colocan las jaulas y los mamfferos fuentes de alimento) área de lavado de material área de desecho de residuos Es recomendable que las paredes, puertas y techos sean lisos y la pintura sea lavable (para facilitar su limpieza), que los mesones sean en acero inoxidable, en el área de lavado los grifos deben tener cuello de cisne y ser móviles, la poceta debe tener 30 cm de profundidad. Para evitar que los insectos se - ... ... "\ INTlTl'TO ACIONAI. SALUJ DE PROCESO REDESENSALUDPÚBLICA MANTENIMIENTO DE COLONIAS DE INSECTOS EN EL GRUPO DE ENTOMOLOGIA RNL INT-R01-5010-003 Versión:02 2012 - Ago - 23 Página4 de 9 desplacen fuera del insectario, se deben adecuar anjeos de malla fina para proteger las ventanas y ductos de ventilación, las puertas deben contar con brazos mecánicos y cortinas sobre sus marcos. Sanitización: la limpieza y desinfección se debe realizar mensualmente rotando los desinfectantes como alcohol 70 %, cloruro de benzalconio, extran, hipoclorito de sodio. 6. MATERIALES y REACTIVOS Agujas entomológicas Alcohol al 70% Algodón Alimentadores artificiales Anjeo Animales vivos: ratón, cobayo, curí Azúcar Baldes medianos Bandejas plásticas transparentes con tapa Bolsas rojas Bolsas verdes Caneca plástica para almacenamiento de agua Caneca para residuos peligrosos Caneca para residuos ordinarios Coladores de tul Cortinas Esferos Estantes Gasa Guantes desechables Jama Lápiz Mangueras de silicona de 1.5 cm Papel kraft Papel contact transparente Pinzas entomológicas Pipetas plásticas Rodentina molida Rótulos Sangre de mamrfero Succionadores Tapabocas Tazas plásticas con capacidad de 430 mi Tijeras Toallas de papel absorbentes Vasos de icopor o plásticos 7.EQUIPOS Baño de Marra Bomba de succión Cámara ambiental Cámara fotográfica Cámara de incubación Calentadores de ambiente Computador '" . ... _ MANTENIMIENTO DE COLONIAS DE INSECTOS EN EL GRUPO DE ENTOMOLOGIA RNL PROCESO INTITl:TO lila N."CIONAL DE REDESEN SALUDPÚBLICA S¡\Ll"n Versión:02 2012 INT-R01-5010-003 - Ago - 23 Página 5 de 9 Estereoscopio Impresora Jaulas Gerber Microscopio Molino Termohigrómetro digital Temporizador 8. DESCRIPCiÓN Desde la década de los 70, el grupo de Entomología del INS, ha establecido y viene manteniendo colonias de insectos de importancia en Salud Pública, con el fin de realizar estudios sobre métodos de colonización, ciclos de vida de diferentes especies de insectos, realizar investigaciones sobre capacidad de infección y transmisión de virus y parásitos, estudios genéticos, pruebas de susceptibilidad y resistencia a insecticidas, ensayos de control biológico y con fines de docencia. El listado de las colonias de mosquitos que se han establecido y mantenido en el pasado son: Anophe/es albimanus, Anopheles darlingi, Aedes aegypti, Aedes taeniorhynchus, Culex bamborum, Culex (Culex) quinquefasciatus, Culex (Melanoconion) ocossa, Haemagogus equinus, Haemagogus celeste, Limatus durhami, Psorophora confinnis, Psorophora ferox, Toxorhynchites amboinensis. 8.1 Colonias de mosquitos del Grupo de Entomología Actualmente el grupo de Entomología, RNL, tiene establecidas 13 colonias de mosquitos, dos de referencia utilizadas para desarrollar pruebas de susceptibilidad y resistencia a insecticidas y las otras se emplean con otros propósitos de investigación, estas son: . . . . . Aedes aegypti cepa Rockefeller Puerto Rico (colonia de referencia) Aedes albopictus cepa Leticia Amazonas Aedes taeniorhynchus cepa Ambalema (Tolima) AnophelesalbimanuscepaCartagena(coloniade referencia)y cepa Barranquilla Culex quinquefasciatus cepa Muña (Cundinamarca) y INS (Bogotá) Cada colonia cuenta con una replica, para asegurar su sotenibilidad y se encuentran separadas en cuartos diferentes. INSECTARIO UBICACION No. 1 Cámara ambiental 2 Culex quinquefasciatus (Muña No 1 Colonias Pruebade H 4 Sala 1 - Cámara ambiental N02 Colonias de Referencia Sala 2 --- - Cuarto climatizado 5 6 7 8 I ena, Bolivar (Muña 9 r:¡-O 11 12 13 ena, Bolivar . __ _ .... .... I:-HTlTl'TO NACIONAl. DE PROCESO MANTENIMIENTO DE COLONIAS DE INSECTOS EN EL GRUPO DE REDESENSALUDPÚBLICA ENTOMOLOGIA RNL S.Hl'(} INT-R01-5010-003 Versión: 02 2012 - Ago - Página 6 23 de 9 8.2 Mantenimiento de las formas inmaduras y adultas de las colonias de mosquitos Debido a que las hembras ovipositan en diversos sustratos, existen diferentes métodos para su mantenimiento, así mismo el cuidado y alimentación de las formas ¡nmaduras, difiere de los adultos, por tanto se ha separado la descripción del mantenimiento de las colonias de acuerdo con el estadio y con la especie. 8.2.1 huevos: f" Aedes aeavoti v Aedes albooictus o o o o o ~~ 24 horas despuésde la ingestade sangre, las~bras recolectan 105huevos ...,1 ovipositan,a partir de este momentose t"""" Para la recolección de los huevos se emplea como sustrato toallas de papel absorbente, las toallas se colocan en tasas plásticas con agua corriente, hasta un tercio de su volumen, el recipiente se deja durante 48 horas dentro de la jaula para que las hembras ovipositen en ella. Es importante marcar con lápiz las toallas de papel, antes de introducirlas al agua, indicando el nombre de la cepa y la fecha de postura. Una vez obtenidas las posturas, las toallas se sacan de los recipientes plásticos y se colocan en cámara de incubación durante 48 horas, tiempo en el que se completa el desarrollo embrionario. Los huevos permanecen viables hasta por doce meses, tiempo pueden almacenarse por tiempo máximo de un año. En el almacenamiento para la incubación de los huevos, debe verificarse que no queden adultos adheridos a la' postura, por consiguiente la toalla debe quedar sólo humedecida, así se evita la proliferación de hongos y la eclosión de los huevos. Para que eclosionen los huevos, se sumergen las toallas en agua reposada con una temperatura entre de 25 a 28°C. Aedes taeniorhvnchus o o o o o Para recolectar los huevos, se debe esperar un día después de la alimentación de las hembras para que se lleve a cabo la digestión y puedan ovipositar después de la ingesta. Se recolecta tierra de jardín en tazas humedeciendola en donde se van a hacer postura de los huevos, se deben dejar dos días dentro de la jaula para que las hembras ovipositen en ellas. Las tazas deben rotularse con los datos de la cepa y la fecha de postura. Estas tazas deben mantenerse a una temperatura de 27 - 28°C después de haber recolectado la postura. Estos huevos en tierra humedecida pueden conservarse durante máximo seis meses. Cuando se requiera que eclosionen los huevos para la obtención de larvas, se inundan las tazas sumergiéndolas en bandejas con agua hasta que se aprecie las larvas flotando en la superficie del agua. Para Aedes. taeniorhynchus sólo se retira la taza con tierra y se tapa. Anooheles albimanus y Culex auinauefasciatus o - Los huevosde estas especiesen el insectariode Entomologfa,no permitensu almacenamientoya que las hembras ovipositan directamente en el agua, por lo que estas colonias deben mantenerse siempre en niveles altos de población, en jaulas gerber. 8.2.2. larvas en bandejas o Las posturas se inundan en bandejas con capacidad de 5 litros. o Cuandoeclosionanlas larvas se repartenen bandejasplásticasdebidamentemarcadascon el o nombre de la especie y cepa de tal manera que no queden hacinadas, así se evita retraso en el desarrollo y crecimiento. Se recomienda de 300 - 400 larvas por bandeja. Diariamente las bandejas se revisan y limpian de los productos de desecho y excreción, larvas muertas, posteriormente se les agrega rodentina (alimento para roedores finamente molido), la - "" . .... __ .. INSTlTl'TO NACIONAL DE PROCESO REDESENSAL.UD PÚBLICA "" MANTENIMIENTO DE COLONIAS DE INSECTOS EN EL GRUPO DE ENTOMOLOGIA RNL Versión:02 2012 INT-R01-5010-003 S¡\Ll'D . . . - Ago - 23 Página 7 de 9 cantidad exacta de rodentina se toma entre los dedos índice y pulgar, la cual se suelta en la superficie de la bandeja dejando que recorra hasta los limites de esta. Las bandejas se revisan a diario para retirarles una pelicula o nata blanca que se puede formar por exceso de comida o ya que ésta contiene mucha grasa. De esta forma se evita la muerte de larvaspor faltade aire. ~ . '" ¡"'- El agua de las bandejas se cambian dos ve~e~ por semana. 9«cuah'do estén turbias. Recuerde que en especies de Aedes es ~a,guas limpi'ás y la limpieza de bandejas con sus larvas y pupas se hace con agua de grifo. Er"!J!~pecies de Anopheles requiere que en caso de ser necesario un cambio de agua (la mayoria de~~s . porque se haya formado una nata de grasa a causa de la comida), ésta sea declorinada, de 'l'Ócontrario puede estar todo su desarrollo larva . - pupa - adulto en el agua donde la hembra hizo inicialmente la postura. Las larvas de Ae. taeniorhynchus presenta en el segmento anal una lámina en forma de silla de montar a diferencia de Ae. aegypti ausente en el mismo segmento. 8.2.3. pupas: · De las bandejas con larvas diariamente se seleccionan las pupas con una pipeta plástica marcada con su especie correspondiente y se depositan en tazas debidamente rotuladas con la especie y llenadas a un i/3 de su capacidad. · La taza se introduce en las jaulas de adultos de su respectiva cepa. El recipiente con las pupas se debe mantener bien tapado para evitar que los adultos se escapen o que en las hembras alimentadas, ovipositen dentro de estas tazas. · Diariamente se destapa el recipiente para liberar los adultos recién emergidos y retirar las exuvias y pupas muertas. Si no se realiza este paso es posible que amanezcan muertas algunas pupas al dia siguiente o que adultos recién emergidos mueran ahogados. 8.2.4. adultos en jaula: · · Los adultos emergidos de las pupas dejadas en las tazas son liberados en las jaulas Gerber de 30x30x30 o de 60x60x60 las cuales cuentan con una mota de algod6n envuelta en una gasa humedecida diariamente que les propoíciona humedad y una torunda (bola de algodón envuelta en gasa) instalada sobre una vaso transparente o de icopor impregnada de solución azucarada al 10 % para dar alimento a los machos que emergen primero. Diariamente con una gasa humedecida .se limpia el sustrato de la jaula. Las torundas se cambian completamente cada semana haciendo unas nuevas, pero se deben lavar y humedecer con agua azucarada todos los dias. No se debe dejar muy concentrada el agua azucarada, esto puede matar los mosquitos ya que se torna pegajosa y se llena de hongos. 8.3. Alimentación · · . . Los mosquitos adultos recién emergidos requieren nutrientes de valor energético, para lo que se usa soluciones azucaradas al1 0%, colocándose chupas de algodón y gasa humedecida Para las hembras se utiliza como fuente proteica, sangre de origen animal con una periodicidad de 2 veces por semana. Se puede emplear cobayo, ratón o hámster. Se tranquilizan e inmovilizan para facilitar la alimentación de los mosquitos cuidando que el vertebrado esté insensible al dolor que puede ocasionar este procedimiento. Cuando se. emplea cobaya para alimentar las hembras, se deja dentro de las jaulas aproximadamente por dos horas. Si se emplea ratón, es aconsejable dejarlo durante la noche, por lo que se introduce el ratón en la jaula al finalizar la jornada de trabajo (5 pm), y se saca en la mañana siguiente. Para la alimentación artificial por membrana las hembras se dejan por 2 días con anterioridad con solo humedad y se realizar la instalación del baño de Maria, bomba de succión y precalentamiemtode sangre disponible (humano, bovino) colocando la jaula por espacio de 1 a 2 horas. . INSTlTt!T() ~ SALU) ... __ NACIONAl. DE PROCESO REDESENSALUDPÚBLICA MANTENIMIENTO DE COLONIAS DE INSECTOS EN EL GRUPO DE ENTOMOLOGIA RNL INT-R01-5010-003 8.4 Actividades diarias del insectario de Entomolo~~a ... · · · · · · · · ·· · ~ ("., .' Versión:02 - 2012 - Ago 23 Página8 de 9 ..~< ~\ \.1 I~ ,")1,. En los formatos de registro de magnitud ~-A04,P01.5noo-03)de cada equipo (cámaras ambientales y cuarto climatizado) se deben ~trár los datos correspondientes a la humedad relativa y temperatura en los siguienteshorario~~OO am, 12:00 m y 5:00 pm. Revisar las bandejas, retirar el exceso de comida, larvas muertas y exuvias de larvas con la pipeta. Con la pipeta retirar las pupas que haya y depositarias en un recipiente de plástico rotulado con la especie correspondiente. Uniren un solo recipiente las pupas que se sacaron de la bandeja y las pupas del día anterior. Proporcionar a las larvas la rodentina como alimento. Realizar el lavado de bandejas que estén sucias y con exceso de comida. Se utilizaagua del grifo para reemplazar el agua que tenía, excepto para la colonia de Anopheles albimanus, que requiere de agua reposada hasta terminar el ciclo inmaduro. De la jaula correspondientea la coloniaque se está trabajando,liberarlos adultos que hayan emergido y sacar las exuvias de las pupas con el fin de limpiarel agua y de que las pupas que todavía quedan en el recipiente sin emerger puedan hacerlo sin dificultad. Limpiarcon una gasa el piso de la jaula, con el fin de eliminar las heces de los mosquitos y retirar los adultos muertos para evitar la proliferaciónde hongos. Sacar la chupa del agua azucarada, lavarla y humedecerla con una nueva solución. Retirar la toalla de la humedad, enjuagarla y volverlaa colocar. Dosveces porsemana se deben alimentarlas colonias,con ratóno cobayo. Todas las actividadesque se realicenen las coloniasse deben registraren el formato FOR R01-5010-020 _ Actividades diarias realizadas insectario de entomología. 8.5. Acciones de contingencia a realizar en niveles bajos de población: aunque debe evitarse por todos los medios enfrentarse a una situación de baja drástica en las densidades poblacionales de los mosquitos, si llega a suceder pueden tomarse las siguientes medidas: · · · - · · Para evitar que las densidades de larvas, pupas y adultos desciendan a tal punto de poner en riesgo la presencia de la cepa en el insectario, debe tenerse la precaución de mantener siempre mínimo seis (6) bandejas con larvas de todas las especies, y dos (2) jaulas con adultos de las especies de referencia. Hay que tener en cuenta que los mosquitos son poblaciones biológicas cuyas densidades pueden verse afectadas por situaciones inherentes a ellas, o ajenas a su biología, como daños en las cámaras ambientales que regulan la temperatura y la humedad relativa de las colonias. Si el motivo de la crisis es el daño en alguna cámara ambiental ya sea de prueba o referencia, deben trasladarse las bandejas y las jaulas a la otra cámara ambiental, buscando las condiciones óptimas de temperatura y humedad relativa para las cepas. Lo recomendado es aclimatar paulatinamente las cepas de insectos en su nuevo ambiente, dejándolas inicialmente por un par de horas y luego ampliando este lapso de tiempo hasta que puedan permanecer allí o hasta que se repare el daño. La temperatura puede controlarse con el manejo de calentadores de ambiente adicionales, que se enciendan por cortos períodos de tiempo durante la jornada (1 - 1.5 horas,aproximadamente), siemprey cuandoel cuartodonde estén los insectos permanezca cerrado. Alimentar adultos con cobayo o ratón todos los días, para que las hembras puedan madurar más rápido sus huevos. Luego de alimentar las hembras de las colonias se deben dejar reposar un dia para el dia siguiente colocarles el medio en que van a ovipositar. .__ ... " INSTlTllTO NACIONAL OE PROCESO REDESENSALUDPÚBLICA " MANTENIMIENTO DE COLONIAS DE INSECTOS EN EL GRUPO DE ENTOMOLOGIA RNL SAIX() INT- R01-5010-003 8.4 Actividades diarias del insectario de Entomologia r Versión:02 2012 - Ago - 23 Página8 de 9 '\ \~,.' · En los formatos de registro de magnitud ~-A04,P~~ · ambientalesy cuarto climatizado)se deben ~tra'r los datos correspondientesa la humedad relativay temperaturaen lossiguienteshorario~;;DOam, 12:00m y 5:00pm. Revisar las bandejas, retirarel exceso de comida,larvas muertas y exuvias de larvas con la pipeta. Con la pipeta retirar las pupas que haya y depositarias en un recipiente de plástico rotulado con · · · · · · · · · .'8'Ó~~-~3;)de cada equipo (cámaras la especie correspondiente. Unir en un solo recipiente las pupas que se sacaron de la bandeja y las pupas del día anterior. Proporcionar a las larvas la rodentina como alimento. Realizar el lavado de bandejas que estén sucias y con exceso de comida. Se utiliza agua del grifo para reemplazar el agua que tenía, excepto para la colonia de Anopheles albimanus, que requiere de agua reposada hasta terminar el ciclo inmaduro. De la jaula correspondiente a la colonia que se está trabajando, liberar los adultos que hayan emergido y sacar las exuvias de las pupas con el fin de limpiar el agua y de que las pupas que todavía quedan en el recipiente sin emerger puedan hacerlo sin dificultad. Limpiar con una gasa el piso de la jaula, con el fin de eliminar las heces de los mosquitos y retirar los adultos muertos para evitar la proliferación de hongos. Sacar la chupa del agua azucarada, lavarla y humedecerla con una nueva solución. Retirar la toalla de la humedad, enjuagarla y volverla a colocar. Dos veces por semana se deben alimentar las colonias, con ratón o cobayo. Todas las actividades que se realicen en las colonias se deben registrar en el formato FOR R01-5010-020 Actividades diarias realizadas insectario de entomología. 8.5. Acciones de - contingencia a realizar en niveles bajos de población: aunque debe evitarse por todos los mediosenfrentarsea una situaciónde baja drásticaen las densidadespoblacionalesde los mosquitos,si llegaa sucederpuedentomarselas siguientesmedidas: · · · · · Para evitar que las densidades de larvas, pupas y adultos desciendan a tal punto de poner en riesgo la presencia de la cepa en el insectario, debe tenerse la precaución de mantener siempre minimo seis (6) bandejas con larvas de todas las especies, y dos (2) jaulas con adultos de las especies de referencia. Hay que tener en cuenta que los mosquitos son poblaciones biológicas cuyas densidades pueden verse afectadas por situaciones inherentes a ellas, o ajenas a su biologia, como daños en las cámaras ambientales que regulan la temperatura y la humedad relativa de las colonias. Si el motivo de la crisis es el daño en alguna cámara ambiental ya sea de prueba o referencia, deben trasladarse las bandejas y las jaulas a la otra cámara ambiental, buscando las condiciones óptimas de temperatura y humedad relativa para las cepas. Lo recomendado es aclimatar paulatinamente las cepas de insectos en su nuevo ambiente, dejándolas inicialmente por un par de horas y luego ampliando este lapso de tiempo hasta que puedan permanecer allí o hasta que se repare el daño. La temperatura puede controlarse con el manejo de calentadores de ambiente adicionales, que se enciendan por cortos periodos de tiempo durante la jornada (1 - 1.5 horas,aproximadamente), siemprey cuandoel cuartodonde estén los insectos permanezca cerrado. Alimentar adultos con cobaya o ratón todos los dias, para que las hembras puedan madurar más rápido sus huevos. Luego de alimentar las hembras de las colonias se deben dejar reposar un dia para el dia siguiente colocarles el medio en que van a ovipositar. ... ... "\ "\ PROCESO REDESENSALUDPÚBLICA INSTITUTO NACIONAl. SA ll'(} MANTENIMIENTO DE COLONIAS DE iNSECTOS EN EL GRUPO DE ENTOMOLOGIA RNL DE INT-R01-5010-003 Versión:02 2012 - Ago- 23 Página9 de9 9. DOCUMENTOS DE REFERENCIA . .. . . . . . Morales, A, Artrópodos vectores de algunas ~ferl1)~ade~t del hombre y los animales en Colombia, VIII Congreso de la Soci~d Colombiana\.d~Entomología, memorias, Julio 1981. Denguey dengue hemorrágicoen ~mérica: guías para su prevencióny control. OPS, Publicación científica No. 548, Washirtgfpn, 1995. Gula para la toma, transporte y envío ~.material entomológico. Laboratorio de Entomología. Instituto Naciona! de Salud. Documento interno. 2000. Manual de indicaciones técnicas para insectarios, Pérez, O., Editorial Ciencias Médicas, La Habana, 2004. Bueno, A, Manual para agentes educativos, programa Prevención Dengue de Bucaramanga, Alcaldía de Bucaramanga, 2002. Cova, P, Mosquitos de Venezuela. Ministerio de sanidad y Asistencia Social Caracas, Venezuela, 1966. Mosquitos hematófagos transmisores de enfermedades, Fajardo, D, Universidad Surcolombiana. Yaguará y Hobo, 1994. Morales, A., Olano, VA, Ferro, e Una historia, un compromiso. Instituto Nacional de Salud, 1917 -1997. Laboratorio de Entomología, 1934 -1997. En: Bogotá, 1998.77-94. 10 CONTROL DE CAMBIOS VE~SIO Y'N~:?;i,< , 00 01 02 ;: _ JAP:~~~16Ñ" :.AA "".." 2007 2009 2012 OESCRIPCIÓN ~. >i,' MM1-,,'DD .' 02 04 08 ,-' ":'~" - t I'~:-~,:,~ . "',:1'.- , 15 05 23 11. ANEXOS No Aplica -.._ ,... I ELABORO lNs'rlrl.~T() NACIONAL S,'LUJ> f}F. h 1 ¡; e ,jl . /:L~'-'1','1/' ...1 (9T¿¡?'" 5 anara Pére'4l!.t1?7tt ptlnol ' ~ Profesional contratista Grupo Entomología RNL REVISO \C,q hc' . O t . ancla Fuva O ~ I~ ' O VI do , Diana Martír1ez"CartIOna Profesionales Especializadas Grupo Entomología RNL \ ~ ¡ c,L' 1:B~~ __ f / Ligia Lugo Vargas Coordinadora Grupo Entomología RNL