Trabajo Nº119

Trabajo Nº119
Título
APOPTOSIS DIFERENCIAL EN LINFOCITOS T ASOCIADA A microRNA 146a EN
PACIENTES CON DM1: TASA DE SOBREVIDA COMO POSIBLE BIOMARCADO DE
FACTOR DE RIESGO PARA DM1
Autor Y Coautores
G. Mancilla, C. Pizarro, D. García, E. Codner, C. Flores, F. Pérez-Bravo.
Lugar De Trabajo
Laboratorio de Genómica Nutricional. Departamento de Nutrición e IDIMI, Facultad de
Medicina, Universidad de Chile (Fondecyt 1130240)
Relator
Georthan Mancilla Álvarez
Contenido (2500 Caracteres, Incluye Los Espacios)
Recientes hallazgos vinculan a microRNAs como reguladores críticos de la expresión génica a
nivel post-transcripcional principalmente del sistema inmune de mamíferos. El mi-146 tiene
como blanco distintas proteínas involucradas en la vía de apoptosis Fas, de la que destaca
FADD, por lo cual podría ser un regulador anti-apoptótico. Objetivo: Establecer diferencias de
expresión de mi-146a durante la activación de Linfocitos T de pacientes con DM1 y controles.
Diseño experimental: Estudio de activación de células mononucleares periféricas (CMPs)
provenientes de pacientes con DM1 y controles en tiempo; 0 horas, 8 horas, y 7 días células
activadas y no activadas. Métodos: Las CMPs fueron obtenidas por centrifugación sobre FicollHistopaque, cultivadas en DMEM, 10% FBS y mantenidas a 37°C con 5% CO2. La activación
se realizó con 1ug de anti-CD3 (clon OKT3) por 1x106 células en 1mL por 48 horas, en placa de
96 pocillos. Luego se cultivaron con 200UI/ml de IL-2 por 5 días. Extracción de microRNA por
Trizol, y cuantificación por sondas Taqman a través de qPCR. La cuantificación fue relativa,
analizando la expresión sin curva patrón (método de comparación de Ct=2-ΔΔCt). Resultados: En
DM1 se encontró una mayor expresión relativa basal de miR-146a (1,9 veces, P<0,001, ±0,339)
respecto a controles. La activación siempre indujo un aumento de expresión relativa en
comparación con CMPs no activadas a igual tiempo, tanto en DM1 como en controles. Respecto
a las CMPs no activadas a las 8 hrs, en el grupo control se observó disminución de expresión
respecto al tiempo cero de 0,324 veces (p=0,0022, ±0,197). En CMPs de DM1 disminuyó 0,085
veces (p=0.146, ±0.392). Por último, al día 7 hay un aumento de la expresión de miR-146a de
CMPs activadas respecto a tiempo cero, 4,997 veces en controles (p=0,025, ±4,705) y 2,774
veces en DM1 (P<0.0001, ±0,346). Conclusiones: Durante la activación de CMPs se apreció
aumento en la expresión relativa de miR-146a. Este miR tiene influencia directa en la expresión
de proteínas relacionadas a la vía de muerte Fas, posibilitando la proliferación al bloquear la
apoptosis. La expresión relativa de miR-146 siempre fue mayor en DM1 que en controles, tanto
a niveles basales como en CMPs activadas. Esta resistencia a la apoptosis posibilita una mayor
ventana de sobre vida de linfocitos, que en el caso de la DM1 los torna autoreactivos. Así los
niveles de miR-146 basales y de células activadas serían un factor de riesgo para desarrollar
DM1.
Postulación A Beca
SI
Socio Patrocinador
Francisco Perez Bravo
Area Temática
Pediatría Diabetes
Tipo De Presentación
Oral