1 ESTUDIO POR ESPECTROFOTOMETRIA UV-VIS DE LA HETERO-ASOCIACIÓN DE LA TEOFILINA CON EL AZUL DE METILENO a a a Ana Ma. Cervantes Tavera , A. Hernández Santiago , Ma.C. Bautista Flores , Estela Jasso b a González , Facultad de Ciencias Químicas, Benemérita Universidad Autónoma de Puebla , b Preparatoria “Lic. Benito Juárez García” ,E-mail: anact26@hotmail.com RESUMEN En este trabajo se presentan resultados del estudio realizado sobre la auto-asociación del colorante Azul de metileno (AM) y la hetero-asociación de la Teofilina (TF) en solución acuosa por medio de espectrofotometría en el rango visible del espectro. Las dependencias de la concentración de la absorción molar de la interacción molecular fueron usadas para analizar el equilibrio dinámico en solución en condiciones de dos componentes modelo de hetero-asociación molecular. 1. INTRODUCCIÓN La acción conjunta de las sustancias aromáticas con actividad biológica y la regulación de su actividad médico biológica en su utilización en forma combinada, está enlazada por diferentes aspectos al análisis de la auto-asociación y hetero-asociacón de las moléculas aromáticas [1-5]. Generalmente se considera que la hetero-asociación entre moléculas aromáticas biológicamente activas es un importante proceso, que en ciertos casos puede determinar la actividad biológica de drogas aromáticas en una combinación dada 2. TEORÍA Algunos de los métodos experimentales más efectivos, que permiten obtener una mejor información sobre la estructura y los parámetros termodinámicos de los sistemas moleculares en solución son los espectroscópicos. Se ha establecido que la cafeína inhibe la síntesis de ADN, aumenta la condensación de cromatina y se relaciona con otros efectos en las células [6-8]. Asimismo, la cafeína no es el único representante de las metil – xantinas en el plasma de la sangre humana también están presentes: teofilina, teobromina, paxantina, los cuales en principio, pueden actuar de forma similar como la cafeína, interaccionando con moléculas biológicamente activas [9] Generalmente se considera que la hetero-asociación entre moléculas aromáticas biológicamente activas es un importante proceso, que en ciertos casos puede determinar la actividad biológica de drogas aromáticas en una combinación dada [10,11. 12].. El azul de metileno o Cloruro de Metiltionina, es un colorante derivado de la fenotiacina, capaz de enlazarse con ácidos nucleicos, es utilizado en terapia fotodinámica de tumores malignos. Se encuentra como cristales de color verde oscuro que tienen la particularidad de ser muy soluble en agua y al hacerlo, la solución se torna color azul. Su fórmula molecular es C16H18N3SCl (Fig 1). La teofilina (1,3 diinetilxantina) es un alcaloide con baja solubilidad en agua, similar en estructura química a la cafeína y la teobromina (Fig. 2). La teofilina es un fármaco que estimula los receptores beta de los pulmones, provocando la relajación del músculo liso bronquial y los vasos pulmonares, permitiendo que las vías respiratorias de los pulmones se abran. En las situaciones en las que las vías respiratorias se contraen, como en el asma, se hace difícil que el aire entre y salga de los pulmones. La teofilina, abriendo las vías respiratorias, invierte los efectos del asma y ayuda al paciente a respirar. Otras acciones que posee son, vasodilatación coronaria, diuresis, estimulante 2 cerebral, cardíaco y del músculo esquelético. Se encuentra naturalmente en el té negro y en el té verde. En trabajos publicados se muestra que los derivados de xantinas muestran una tendencia a la autoasociación en solución acuosa, estabilizándose por un reacomodo paralelo de los cromóforos aromáticos. En estas circunstancias, la constante de equilibrio de autoasociación depende en gran medida de la cantidad de grupos metilo contenido en las moléculas [7]. Fig. 1. Estructura del azul de metileno Fig. 2. Estructura de la teofilina 3. PARTE EXPERIMENTAL La absorción electrónica del espectro de las soluciones investigadas de Azul de Metileno y Teofilina (Sigma) fueron medidas usando el espectrofotómetro CARY 50 UV-V en el rango del espectro visible (500-800 nm) a T= 293 K. Para los estudios de auto-asociación de la solución de -4 Azul de Metileno se prepararon por diluciones secuenciales concentraciones en el rango de 10 -12 hasta 10 M, usando agua bidestilada. Las mediciones fueron realizadas en celdas estándar de vidrio Durante los estudios de heteroasociación, del Azul de Metileno en la solución mezclada con -3 -12 Teofilina, se prepararon soluciones en un rango que van de 10 a 10 M de Teofilina, -4 manteniendo constante la concentración del Azul de Metileno (10 M ). Las investigaciones termodinámicas de auto- y hetero-asociación de AM y TF fueron realizadas en celdas de 1 cm a T= 293 K.. El rango de longitud de onda va de 650 a 680 nm. (Fig. 3) 3 AZUL DE METILENO CON TEOFILINA 2.8 3 3.2 3.4 3.6 3.8 4 4.2 4.4 4.6 4.8 5 BLANCO 2 BLANCO 1 2.5 ABSORBANCIA (U.A) 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 500 600 700 800 LONGITUD DE ONDA (nm) Fig.3 Espectros experimentales de la Teofilina con Azul de metileno 4. CONCLUSIONES En este trabajo se utilizó el método de espectrofotometría UV-Vis, que es de gran utilidad para el análisis de compuestos de alto peso molecular, en este caso el Colorante Azul de Metileno y la Teofilina a bajas concentraciones. Con el fin de comprobar el Fenómeno de Hetero-asociación, el cual determina si la mezcla de compuestos afecta o no su actividad biológica, se prepararon soluciones en un rango que -3 -12 -4 van de 10 a 10 M de Teofilina, manteniendo constante la concentración del Azul de Metileno (10 M). La Teofilina es capaz de interaccionar con el colorante aromático Azul de metileno, es decir hay un cambio en la actividad biológica del colorante en presencia de Teofilina, como se observa en las graficas. En todos los casos, se puede ver claramente un mínimo de la absorbancia en la longitud de onda de 630 nm. La Concentración fue el principal parámetro dependiente de la absorción Molar del Azul de Metileno, y al mezclarlo con Teofilina permitió observar la interacción entre estos compuestos. Una Xantina como la Teofilina es capaz de interaccionar con el colorante aromático Azul de metileno, es decir hay un cambio en la actividad biológica del colorante en presencia de Teofilina y esto puede ser significante cuando es administrado algún fármaco y se consume una concentración mayor de Teofilina. BIBLIOGRAFÍA [1] Baron J.J., Roberts H. Caffeine. Berlin: Springer-Verlag, 1981. [2] Traganos F., Kapuscinsky J., Darzynkiewicz Z. // Cancer Res. 1991. V. 51. P. 3682-3689. [3] Piosik J., Zdunek M., Kapuscinski J. // Biochem. Pharmacol. 2002. V. 63. P. 635-646. [4] Piosik J., Ulanowska K., Gwizdek-Wisniewska A., Czyz A., Kapuscinski J., Wegrzyn G. // Mutat. Res. 2003. V. 530. P. 47-57. 4 [5] Ulanowska K., Piosik J., Gwizdek-Wisniewska A., Wegrzyn G. // Bioorg. Chem. 2005. V. 33 [6] Davies D.B., Veselkov D.A., Djimant L.N., Veselkov A.N. // Eur. Biophys. J. 2001. V. 30. P. 354366. [7] Evstigneev M.P., Khomich V.V., Davies D.B. // Eur. Biophys. J. 2006. V. 36. P. 1-11. 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