sistema lote semilla

EL TEXTO EN COLOR ROJO HA SIDO MODIFICADO
Con fundamento en el numeral 4.11.1 de la Norma Oficial
Mexicana NOM-001-SSA1-2010, se publica el presente
proyecto a efecto de que los interesados, a partir del 1º de
agosto y hasta el 30 de septiembre de 2016, lo analicen,
evalúen y envíen sus observaciones o comentarios en idioma
español y con el sustento técnico suficiente ante la CPFEUM,
sito en Río Rhin número 57, colonia Cuauhtémoc, código
postal 06500, Ciudad de México. Fax: 5207 6890
Correo electrónico: consultas@farmacopea.org.mx.
APÉNDICE VI. CONSERVACIÓN,
MANTENIMIENTO Y MANEJO DE
CULTIVOS
MICROBIANOS DE REFERENCIA:
SISTEMA LOTE SEMILLA
Los cultivos microbianos de referencia se utilizan en los
laboratorios de microbiología para evaluar la calidad de los
medios de cultivo, controlar la calidad de los resultados que
emite el laboratorio, validar los métodos microbiológicos,
determinar la efectividad de desinfectantes, sanitizantes, eficacia
del sistema preservativos, potencia de antibióticos y vitaminas
entre otros.
Los cultivos microbianos de microorganismos de referencia
deben proceder de colecciones
nacionales o internacionales reconocidas registradas en la
WFCC (World Federation Culture Collection) y contar con
el certificado de origen correspondiente, pueden adquirirse en
presentaciones congeladas, liofilizadas o en cultivos activos.
Estos cultivos son los patrones de referencia más exigentes
porque son dependientes del manejo, mantenimiento y
conservación para asegurar su viabilidad y características
originales.
El manejo y almacenamiento de cultivos microbianos de
referencia en el laboratorio debe efectuarse de tal forma que
se reduzca la posibilidad de variaciones genotípicas y
fenotípicas, así como el riesgo de contaminación.
Se recomienda el sistema lote semilla para el mantenimiento
de cultivos de referencia. El sistema de lote semilla, es un
método sencillo y práctico, que reduce al mínimo el número
de pases de los cultivos de referencia (figura A6.1). Otro
sistema de conservación puede emplearse siempre que
asegure la pureza, viabilidad y estabilidad de los cultivos.
(Stock) debe prepararse y distribuirse en recipientes
apropiados (tubos, viales, frascos) y conservarse de acuerdo al
método seleccionado, estos cultivos se denominan cultivo
lote semilla (CLS). Para periodos prolongados de
almacenamiento, seleccionar para cada microorganismo el
método de conservación más apropiado (congelación,
liofilización y/o criopreservación).
Subcultivo
Un pase se define como la transferencia de microorganismos
de un cultivo viable a un medio fresco con crecimiento de los
microorganismos.
A partir del cultivo stock del lote semilla (CLS), resembrar dos
tubos del medio de cultivo (A1R) y (A1L). Incubar ambos tubos
en las condiciones adecuadas para cada microorganismo.
Mantener el subcultivo (A1R) en refrigeración hasta la
transferencia subsecuente y destinar el subcultivo (A1L) para
el trabajo rutinario. Resembrar periódicamente *el tubo A1R
por duplicado, en el medio de cultivo como se observa en
la figura A6.1. Efectuar únicamente cuatro transferencias a
partir del cultivo stock del lote semilla (CLS). Repetir
el procedimiento para cada serie de tubos del cultivo lote
semilla (B, C, D... J.)
* La periodicidad de resiembra de cada cultivo debe determinarla el
laboratorio.
Control de los cultivos microbianos de referencia.
Antes de usar cada cultivo microbiano de referencia
confirmar la pureza, viabilidad y estabilidad.
Cada lote semilla (CLS) de los diferentes microorganismos
las cepas de referencia se debe documentar e integrar en un
expediente que incluya: certificado de origen, registro de
elaboración del lote, registros de resultados de las pruebas de
control, registros de existencias, certificados de calidad entre
otros.
Los procedimientos deben contener las actividades detalladas
de cada etapa del proceso, los medios de cultivo, condiciones de
incubación y los registros necesarios para demostrar el
cumplimiento del procedimiento.
Periódicamente verificar la pureza, viabilidad y estabilidad de
los cultivos del lote semilla mediante la aplicación de los
métodos convencionales.
SISTEMA DE LOTE SEMILLA
Cultivo Lote semilla (CLS)
El cultivo microbiano de referencia se resuspende o rehidrata
siguiendo las instrucciones del proveedor
si es un
microorganismo de referencia, o mediante un procedimiento
previamente aprobado. Inocular e incubar en las condiciones
adecuadas para cada microorganismo. Este primer cultivo
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Apéndices
1
Río Rhin 57
col. Cuauhtémoc
06500, del. Cuauhtémoc
Ciudad de México, México.
1. Reconstituir la cepa el microorganismo de referencia
como indique el proveedor. En microorganismos
autóctonos a partir de una colonia aislada obtener un
cultivo puro que se va a utilizar como stock.
con 0.4 mL del medio líquido adecuado.
2. Transferir a por lo menos 10 tubos del medio de cultivo
recomendado e incubar en las condiciones establecidas.
Conservar de acuerdo a procedimientos.
3. Subcultivar un tubo (CR) en dos tubos del medio de
cultivo recomendado. Incubar en las condiciones
establecidas. Descartar el tubo (CR).
4. Destinar el subcultivo A1L para el trabajo rutinario del
laboratorio (cultivo de trabajo). Mantener el subcultivo
A1R en refrigeración hasta la transferencia subsecuente.
5. Resembrar quincenal o mensualmente (según se requiera)
el tubo A1R por duplicado en el medio de cultivo
recomendado como se observa en la figura A6.1.
Efectuar únicamente cuatro transferencias a partir del CR
original (cinco pases en total a partir del cultivo stock de
la cepa de referencia).
6. Iniciar el procedimiento para cada uno de los cultivos
semilla B, C, D... J.
Figura A6.1 Mantenimiento de los cultivos
microbianos de referencia por la técnica de lote semilla.
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