Quanti-Disc YEA Procedimiento y el Numero Mas Probable

Quanti-Disc YEA
®
Insert and Most Probable Number (MPN) Table
YEA
For Technical Support, please call:
North/South America: 207-556-4496/1-800-321-0207
Europe: 00800 4339 9111
UK: +44 (0) 1638 676800
China: +86-21-61279528
Japan: +81-422-71-5921
Australia: 1 800 655 978
06-04951-05
One IDEXX Drive
Westbrook, Maine 04092 USA
www.idexx.com/water
Quanti-Disc® YEA Test Kit
Introduction
The IDEXX Quanti-Disc® YEA Test Kit is used for the quantification of heterotrophic bacteria in water, and is based on IDEXX’s patented Multiple Enzyme TechnologyTM that detects viable
bacteria in water by testing for key enzymes known to be present in these organisms. The Quanti-Disc device uses multiple enzyme substrates that produce a blue fluorescence when
metabolized by waterborne bacteria. The sample is added to a Quanti-Disc device, incubated and then examined for fluorescing wells under a UV lamp. The number of fluorescing wells
corresponds to a Most Probable Number (MPN) of heterotrophic bacteria in the original sample. The Quanti-Disc method correlates with the pour plate method using yeast extract agar
incubated at 22°C (±2°C) for 68 hours ±4 hours and 36°C (±2°C) for 44 hours ±4 hours as described in the ISO standard 6222.
Contents
• 200 sterile Quanti-Disc YEA tests (Cat. No. WQDY-200) or 40 sterile Quanti-Disc YEA tests (WQDY-40)
• MPN Table
Storage
Store at 2°–8°C. If stored at room temperature (9°–25°C), the expiration date is 120 days from receipt of product or the printed expiration date, whichever occurs first.
Test Procedure
Dispensing Zone
Place the Quanti-Disc on a level surface.
Pipette 4.0 mL of sample from the sample container.
Remove Quanti-Disc cover.
Keeping the pipette vertical, dispense sample continuously within the
Dispensing Zone (Figure 1) in a circulating motion to ensure sample
coverage of all channels.
• Make sure the sample comes into contact with all channel
openings to allow capillary flow.
• If sample does not contact a channel opening, gently use the
pipette tip to direct sample to channel opening.
• Wait 3 seconds before covering the Quanti-Disc.
Figure 1
5. Cover the Quanti-Disc and wait a minimum of 3 seconds before
moving the Quanti-Disc to allow excess sample to be absorbed and
to prevent spillage.
6. Place the Quanti-Disc in a 36°C (±2°C) incubator for 44 ±4 hours. DO NOT INVERT the Quanti-Disc. For each water sample, an additional Quanti-Disc should be inoculated and
incubated at 22°C (±2°C) for 68 ±4 hours.
7. After incubation, place the Quanti-Disc under a 6-watt, 365-nm UV lamp, and count the number of wells with fluorescence. Hold the lamp 5 inches (13 cm) above the Quanti-Disc
in a dark environment. Face the light away from your eyes and toward the sample.
8. Refer to the MPN Table provided to determine the Most Probable Number of heterotrophic bacteria in the original sample. The results from the MPN Table are expressed as MPN/mL.
1.
2.
3.
4.
Procedural Notes
• Follow aseptic technique.
• Chlorinated samples should be treated with sodium thiosulfate at the time of collection.
• If the Quanti-Discs are stored in refrigerated conditions, follow the proper laboratory procedures and allow the Quanti-Disc to equilibrate to room temperature before
conducting the test.
• Dispose of Quanti-Disc devices in accordance with good laboratory practices.
• To assist with reading flourescent wells, a negative control can be used as a side-by-side comparison.
• Samples can be diluted, as long as the final inoculating volume added to the Quanti-Disc device is 4 mL.
• Adjust the MPN to reflect dilutions. For example, if 1 mL of sample and 9 mL of sterile diluent are tested (a 10-fold dilution), multiply the MPN Table number by
10 to find the correct MPN/mL for the undiluted original sample.
• A notch in the Quanti-Disc lid serves as a counting marker.
• This insert may not reflect your local regulations. For compliance testing, be sure to follow appropriate regulations/procedures.
Quality Control Procedure
The following procedure is recommended for each lot of Quanti-Disc tests, or more often as regulations require:
• Negative Control:
a. Using 4 mL of sterile diluent (e.g., dechlorinated water, deionized water, phosphate buffer or 1% peptone water), follow steps 1–8 of the Test Procedure.
b. No wells should fluoresce.
• Positive Control:
Follow steps 1–8 of the Test Procedure, using the following organism:
Escherichia coli NCTC 9001 or
ATCC 11775
36°C ±2°C for 44 ±4 hours
22°C ±2°C for 68 ±4 hours
+
+
Manufactured under one or more of the following U.S. Patents: 5,700,655; 6,287,797; 5,985,594; 6,387,650; 6,472,167, 6,509,168.
Other U.S. and/or foreign patents issued or pending.
© 2009 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved.
Quanti-Disc and Multiple Enzyme Technology are trademarks or registered trademarks of IDEXX Laboratories, Inc. in the United States and/or other countries.
Kit de Test YEA Quanti-Disc®
Introduction
Le Kit de Test YEA Quanti-Disc® IDEXX sert à quantifier les bactéries hétérotrophes présentes dans l’eau. Cette méthode est basée sur la Multiple Enzyme TechnologyTM brevetée d’IDEXX
qui permet de détecter les bactéries viables dans l’eau par la mise en évidence d’enzymes clés présentes dans ces organismes. Elle utilise plusieurs substrats enzymatiques qui
produisent une fluorescence bleue quand ils sont métabolisés par les bactéries de l’eau. L’échantillon est déposé sur une plaque Quanti-Disc. La plaque est ensuite incubée puis examinée
sous lampe UV pour y rechercher la présence de puits fluorescents. Le nombre de puits fluorescents correspond au nombre le plus probable (NPP) de bactéries hétérotrophes contenues
dans l’échantillon initial. La méthode Quanti-Disc est corrélée à la méthode par ensemencement dans un milieu de culture nutritif gélosé avec incubation à 22°C (±2°C) pendant 68
heures ±4 heures, et à 36°C (±2°C) pendant 44 heures ±4 heures, décrite par la norme ISO 6222.
Contenu
• 200 tests YEA Quanti-Discs stériles (no de catalogue WQDY-200) ou 40 tests YEA Quanti-Discs stériles (WQDY-40)
• Une table des NPP
Conservation
A conserver entre 2° et 8°C. A température ambiante (9°–25°C), jusqu’à 120 jours après réception, ou jusqu’à la date de péremption si celle-ci intervient avant les 120 jours. Procédure de test
1.
2.
3.
4.
Placer le Quanti-Disc sur une surface plane.
À l’aide d’une pipette, prélever 4 ml « d´eau “ dans le flacon d’échantillon.
Zone d´inoculation
Retirer le couvercle du Quanti-Disc.
Tout en maintenant la pipette verticalement, déposer en continu les 4
ml d’échantillon à l’intérieur de la Zone d´inoculation (figure 1) selon
un mouvement circulaire pour faire en sorte que l’échantillon entre en
contact avec toutes les entrées des canaux.
• S’assurer que l’échantillon couvre toutes les entrées des canaux afin
de permettre la bonne répartition de l’échantillon par capillarité.
• Si l’échantillon n’entre pas en contact avec une entrée en particulier,
positionner l’embout de la pipette au niveau de l’entrée en question
et y déposer délicatement l’échantillon.
• Attendre 3 secondes avant de remettre le couvercle du Quanti-Disc.
5. Fermer le Quanti-Disc et attendre au minimum 3 secondes avant de
Figure 1
le déplacer afin de permettre l’absorption du surplus de l’échantillon et
éviter ainsi toute fuite.
6. Placer la plaque Quanti-Disc dans un incubateur à 36°C (±2°C) pendant 44 heures ±4 heures. NE PAS RETOURNER le dispositif Quanti-Disc. Pour chaque échantillon d’eau, une
autre plaque Quanti-Disc doit être ensemencée puis incubée à 22°C (±2°C) pendant 68 heures ±4 heures.
7. Après incubation, placer le dispositif Quanti-Disc sous une lampe UV à 365 nm de 6 watts et compter le nombre de puits fluorescents. Maintenir la lampe à une distance de 13 cm
au-dessus du Quanti-Disc, en milieu obscur . Orienter la lampe UV en direction de l’échantillon et la tenir à l’écart des yeux.
8. Consulter la table NPP fournie pour déterminer le nombre le plus probable de bactéries hétérotrophes présentes dans l’échantillon initial. Les résultats de la table NPP sont exprimés
en NPP/ml.
Notes sur la procédure
• Procéder de manière aseptique.
• Les échantillons d’eau chlorée doivent être traités, au moment de leur receuil, avec du thiosulfate de sodium.
• Si les Quanti-Disques sont stockés sous conditions réfrigérées, suivez les procédures de laboratoire appropriées et assurez vous que le Quanti-Disque soit à température ambiante
avant toute utilisation.
• L’élimination des tests Quanti-Discs doit se faire conformément aux Bonnes Pratiques de Laboratoire.
• Il est possible d’utiliser à côté en comparaison un contrôle négatif pour vous aider à compter le nombre de puits fluorescents.
• Les échantillons peuvent être dilués, à condition que le volume final d’ensemencement ajouté au dispositif Quanti-Disc soit de 4 ml.
• Corriger le NPP en fonction des dilutions. Par exemple, si 9 ml de diluant stérile ont été ajoutés à 1 ml d’échantillon (dilution
au dixième), il faudra multiplier par 10 le chiffre donné par la table des NPP pour obtenir le NPP/ml réel de l’échantillon initial non dilué.
• Une encoche dans le couvercle du Quanti-Disc sert de marqueur pour le comptage.
• Il est possible que cette notice ne reflète pas la réglementation en vigueur dans votre pays. Pour les tests de conformité, s’assurer de respecter les
règlementations/procédures adéquats.
Procédure de contrôle qualité
Nous recommandons de suivre la procédure suivante pour chaque lot de tests Quanti-Discs, ou plus souvent si la réglementation l’exige :
• Stérilité :
a. Avec 4 ml de diluant stérile (ex. eau déchlorurée, eau désionisée, tampon phosphate ou eau peptonée à 1%), réaliser les étapes 2 à 5 de la « Procédure de test ».
b. Aucun puits ne doit être fluorescent.
• Contrôle positif :
Réaliser les étapes 2 à 5 de la « Procédure de test ». avec l’organisme suivant :
Escherichia coli NCTC 9001 ou
ATCC 11775
36°C ±2°C pendant 44 ±4 heures
22°C ±2°C pendant 68 ±4 heures
+
+
Fabriqué selon un ou plusieurs des brevets américains suivants : 5,700,655; 6,287,697; 5,985,594; 6,387,650; 6,472,167; 6,509,168. Autres brevets américains et/ou étrangers enregistrés ou en cours d’enregistrement.
© 2009 IDEXX Laboratories, Inc. Tous droits réservés.
Quanti-Disc et Multiple Enzyme Technology sont des marques de fabrique ou des marques déposées d’IDEXX Laboratories, Inc. aux États-Unis et/ou dans d’autres pays.
Kit de Prueba Quanti-Disc® YEA
Introducción
El kit de prueba Quanti-Disc® YEA de IDEXX se utiliza para cuantificar la presencia de bacterias heterótrofas en el agua. Dicho kit se basa en la Multiple Enzyme TechnologyTM (tecnología
de enzima múltiple) patentada por IDEXX que detecta bacterias viables en el agua buscando enzimas clave presentes en estos organismos. El dispositivo Quanti-Disc utiliza diversos
sustratos de enzimas, los cuales producen una fluorescencia azul cuando son metabolizados por las bacterias que se encuentran en el agua. Se añade la muestra al dispositivo
Quanti-Disc, se incuba y luego se examina, bajo una lámpara de UV, para determinar la presencia de pocillos que emiten fluorescencia. El número de pocillos que emiten fluorescencia
corresponde al Número Más Probable (NMP) de bacterias heterótrofas presentes en la muestra original. El método Quanti-Disc guarda correlación con el método de vertido en placa que
utiliza el agar extraído de levadura incubada a 22°C (±2°C) durante 68 horas ±4 horas y 36°C (±2°C) durante 44 horas ±4 horas tal y como se describe en la norma ISO 6222.
Contenido
• 200 pruebas Quanti-Disc YEA (Cat. No. WQDY-200) estériles o 40 pruebas Quanti-Disc YEA (WQDY-40) estériles
• Tabla del NMP
Almacenamiento
Almacenar a 2°–8°C. Si se almacena a temperatura ambiente (9°–25°C), la fecha de caducidad es de 120 días desde la recepción del producto o la fecha impresa según el producto
sea almacenado.
Procedimiento de la prueba
Zona de Muestras
Coloque el Quanti-Disc en una superficie plana.
Pipetee 4,0 ml de agua del recipiente de muestra
Quite la tapa del Quanti-Disc.
Con la pipeta en posición vertical, dispense la muestra de forma
continua en la zona de muestras (figura 1) con un movimiento circular
para asegurarse de que la muestra cubre todos los canales.
• Asegúrese de que la muestra entra en contacto con todas las
aberturas de los canales para que pueda distribuirse por flujo capilar.
• Si la muestra no entra en contacto con la abertura de un canal,
utilice con cuidado la punta de la pipeta para dirigir la muestra hacia
la abertura de dicho canal.
Figura 1
• Espere 3 segundos antes de tapar el Quanti-Disc.
5. Cubra el Quanti-Disc y espere al menos 3 segundos antes de moverlo
para que pueda absorberse el excedente de muestra y evitar derrames.
6. Coloque el dispositivo Quanti-Disc en una estufa de incubación a 36ºC (±2°C) durante 44 ±4 horas. NO INVIERTA el Quanti-Disc. Para cada muestra de agua, se deberá inocular
e incubar un dispositivo Quanti-Disc adicional a 22°C (±2°C) durante 68 ±4 horas.
7. Tras la incubación, coloque el dispositivo Quanti-Disc bajo una lámpara de rayos UV de 6 vatios y 365 nm y cuente el número de pocillos que emiten fluorescencia. Mantenga la
lámpara 13 cm por encima del dispositivo Quanti-Disc en un lugar oscuro. Aleje la luz de sus ojos y oriéntela hacia la muestra.
8. Consulte la tabla del NMP que se facilita con el kit para determinar el Número Más Probable de bacterias heterótrofas de la muestra original. Los resultados de la tabla del NMP se
expresan como NMP/ml.
1.
2.
3.
4.
Notas sobre el procedimiento
•
•
•
•
•
•
•
Utilice técnicas asépticas.
Las muestras cloradas han de ser tratadas con tiosulfato de sodio en el momento de su obtención.
Si Quanti Disc es conservado en ambiente refrigerado, siga las normas de su laboratorio y deje que Quanti-Disc alcance una temperatura ambiente antes de realizar los análisis.
Deseche los dispositivos Quanti-Discs conforme a las buenas prácticas de laboratorio.
Con el fin de ayudar en la lectura de los pocillos que emiten fluorescencia, puede utilizarse un control negativo para realizar una comparación simultánea.
Las muestras pueden diluirse, siempre que el volumen inoculado final añadido al dispositivo Quanti-Disc sea de 4 ml.
Ajuste el NMP para reflejar las diluciones. Por ejemplo, si se analizan 1 ml de muestra y 9 ml de diluyente estéril (diluido 10 veces), multiplique el número de la tabla del NMP por
10 con el fin de obtener el valor de NMP/ml correcto para la muestra original sin diluir.
• Una muesca en la tapa del Quanti-Disc puede servir como marca para el recuento.
• Este folleto no refleja forzosamente la normativa local de su país. A efectos de la prueba de conformidad, asegúrese de que sigue los procedimientos y la normativa adecuados.
Procedimiento de control de calidad
Se recomienda utilizar el siguiente procedimiento para cada lote de dispositivos Quanti-Disc, o con mayor frecuencia según lo estipule la normativa vigente:
• Esterilidad:
a. Al utilizar 4 ml de diluyente estéril (por ejemplo, agua declorada, desionizada, tampón fosfato o agua de peptona al 1%), siga los pasos 2–5 del “Procedimiento de prueba”.
b. Ningún pocillo debe emitir fluorescencia.
• Control positivo:
Siga los pasos 2–5 del “Procedimiento de prueba,” utilizando el siguiente organismo:
Escherichia coli NCTC 9001 o
ATCC 11775
36°C ±2°C durante 44 ±4 horas
22°C ±2°C durante 68 ±4 horas
+
+
Fabricado bajo una o más de las siguientes patentes estadounidenses: 5.700.655; 6.287.797; 5.985.594; 6.387.650; 6.472.167; 6.509.168. Otras patentes norteamericanas y/o extranjeras condedidas o pendientes de concesión.
© 2009 IDEXX Laboratories, Inc. Todos los derechos reservados.
Quanti-Disc y Multiple Enzyme Technology son marcas o marcas registradas de IDEXX Laboratories, Inc. en los Estados Unidos de América y/o en otros países.
Quanti-Disc® YEA-Testkit
Einführung
Der IDEXX Quanti-Disc® YEA-Testkit wird zur quantitativen Bestimmung heterotropher Bakterien im Wasser verwendet. Der Test basiert auf der patentierten Multiple Enzyme TechnologyTM
von IDEXX, welche lebensfähige Bakterien im Wasser durch die Untersuchung auf Schlüsselenzyme nachweist, von denen bekannt ist, dass sie in diesen Organismen vorkommen.
Der Quanti-Disc-Test nutzt mehrere Enzymsubstrate, die bei Metabolisierung durch im Wasser vorkommende Bakterien eine blaue Fluoreszenz aufweisen. Die Probe wird in das
Quanti-Disc gegeben, inkubiert und anschließend unter einer UV-Lampe auf fluoreszierende Auftragsstellen untersucht. Die Anzahl der fluoreszierenden Auftragsstellen entspricht
der höchstwahrscheinliche Anzahl (MPN; Most Probable Number) an heterotrophen Bakterien insgesamt in der ursprünglichen Probe. Das Quanti-Disc-Verfahren korreliert mit dem
Plattengussverfahren, bei dem gemäß ISO-Norm 6222 Hefeextraktagar bei 22°C (±2°C) 68 Stunden ±4 Stunden lang und bei 36°C (±2°C) 44 Stunden ±4 Stunden lang inkubiert wird.
Inhalt
• 200 sterile Quanti-Disc YEA-Tests (Art. Nr. WQDY-200) oder 40 sterile Quanti-Disc YEA-Tests (WQDY-40)
• MPN-Tabelle
Lagerung
Bei 2°–8°C lagern. Bei einer Lagerung bei Raumtemperatur (9°–25°C) ist das Verfallsdatum 120 Tage nach Erhalt, oder dem gedruckten Verfallsdatum (der frühere Zeitpunkt gilt).
Testverfahren
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Die Quanti-Disc auf eine ebene Fläche legen.
Ausbringbereich
4,0 ml der Probe aus dem Probenbehälter pipettieren.
Den Deckel der Quanti-Disc entfernen.
Pipette senkrecht halten und die Probe kontinuierlich mit einer
langsamen Kreisbewegung auf den Ausbringbereich (Abbildung 1)
so auftragen, dass alle Kanalöffnungen von der Probe bedeckt sind.
• Darauf achten, dass die Probe mit allen Kanalöffnungen in Kontakt
kommt, damit sie sich durch die Kapillarwirkung verteilen kann.
• Sollte eine Kanalöffnung nicht von der Probe bedeckt sein, die
Probe vorsichtig mithilfe der Pipettenspitze in die Richtung der
Kanalöffnung leiten.
• Vor dem Abdecken der Quanti-Disc etwa 3 Sekunden warten.
Abbildung 1
Die Quanti-Disc abdecken und mindestens weitere 3 Sekunden
warten, bevor die Quanti-Disc bewegt wird, damit überschüssiges
Probenmaterial absorbiert und ein Verschütten vermieden wird.
Die Quanti-Disc nun mit nach oben weisendem Deckel in den Inkubator legen und bei 36°C (±2°C) 44 ±4 Stunden lang inkubieren. DieQuanti-Disc NICHT UMDREHEN! Für jede
Wasserprobe ist eine weitere Quanti-Disc zu beimpfen und bei 22°C (±2°C) 68 ±4 Stunden lang zu inkubieren.
Nach der Inkubation die Quanti-Disc unter einer 6 Watt starke 365-nm-UV-Lampe betrachten und die Anzahl der fluoreszierenden Vertiefungen zählen. Die Lampe im Dunkeln 13 cm
über dem Quanti-Disc-Test halten. Das Licht nicht in die Augen, sondern auf die Probe richten
Die mitgelieferte MPN-Tabelle verwenden, um die wahrscheinlichste Anzahl (Most Probable Number/MPN) an heterotrophen Bakterien in der ursprünglichen Probe zu bestimmen.
Die Ergebnisse der MPN-Tabelle sind in MPN/ml angegeben.
Verfahrenshinweise
•
•
•
•
•
•
•
Aseptische Technik befolgen.
Chlorierte Proben sind bei der Probennahme mit Natriumthiosulfat zu behandeln.
Falls Quanti-Disc gekühlt gelagert wird, ist der Test vor der Verwendung auf Raumtemperatur zu bringen (Gute Laborpraxis).
Quanti-Disc-Tests entsprechend der guten Laborpraxis entsorgen.
Zur besseren Identifikation der fluoreszierenden Auftragsstellen kann eine negative Kontrolle mitgeführt werden.
Proben können verdünnt werden, sofern das letztendlich auf den Quanti-Disc-Test gegebene Beimpfungsvolumen 4 ml beträgt.
Die MPN entsprechend der Verdünnung anpassen. Beispiel: Wenn 1 ml der Probe und 9 ml des sterilen Verdünnungsmittels untersucht werden (10-fache Verdünnung), ist die Zahl
der MPN-Tabelle mit 10 zu multiplizieren, um den richtigen Wert in MPN/mL für die unverdünnte, ursprüngliche Probe zu ermitteln.
• Eine Kerbe in der Quanti-Disc-Abdeckung dient als Zählmarkierung.
• Diese Packungsbeilage berücksichtigt möglicherweise nicht lhre örtlichen Vorschriften. Es muss sichergestellt werden, dass die entsprechenden Vorschriften/Verfahren für
Konformitätstests befolgt werden.
Qualitätskontrollverfahren
Die Durchführung des nachfolgenden Verfahrens wird für jede Charge von Quanti-Disc-Tests empfohlen oder kann, falls vorgeschrieben, noch häufiger erforderlich sein:
• Sterilität:
a. Verwendung von 4 ml sterilen Verdünnungsmittels (z.B.: entchlortes Wasser, Deionat, Phosphatpuffer oder 1%iges Peptonwasser) und „Testverfahren“ Schritte
2–5 oben befolgen.
b. Auftragsstellen dürfen keinerlei Fluoreszenz aufweisen.
• Positive Kontrolle:
Schritte 2–5 in „Testverfahren” oben befolgen und folgende Organismus verwenden:
Escherichia coli NCTC 9001
oder ATCC 11775
36°C ±2°C 44 ±4 Stunden lang
22°C ±2°C 68 ±4 Stunden lang
+
+
Hergestellt gemäß einem oder mehreren der folgenden US-Patente: 5.700.655; 6.287.797; 5.985.594; 6.387.650; 6.472.167, 6.509.168.
Andere U.S. und/oder ausländische Patente erteilt oder angemeldet.
© 2009 IDEXX Laboratories, Inc. Alle Rechte vorbehalten.
Quanti-Disc und Multiple Enzyme Technology sind Schutzmarken oder eingetragene Schutzmarken von IDEXX Laboratories, Inc. in den Vereinigten Staaten und/oder in anderen Ländern.
Kit per l’analisi delle acque Quanti-Disc® YEA
Introduzione
Il Kit IDEXX Quanti-Disc® YEA viene utilizzato per la quantificazione dei batteri eterotrofi nelle acque. Si basa sulla Multiple Enzyme TechnologyTM (Tecnologia ad enzimi multipli)
brevettata da IDEXX, che rileva i batteri che vivono in acqua attraverso la presenza degli enzimi chiave noti degli organismi. Il metodo utilizza substrati enzimatici multipli che, una volta
metabolizzati dai batteri acquiferi, producono un colore blu fluorescente. Il campione viene inserito in un contenitore Quanti-Disc, dove rimane in incubazione per poi essere analizzato
sulla presenza di pozzetti positivi sotto una lampada a raggi UV. Il numero di pozzetti positivi corrisponde al Numero Più Probabile (NPP) di batteri eterotrofici presenti nel campione
originale. Il metodo Quanti-Disc è correlato al metodo della piastra che utilizza un terreno di coltura a base di estratti di lievito incubati a 22°C (±2°C) per 68 ore ±4 ore e a 36°C
(±2°C) per 44 ore ±4 ore come prescritto dallo standard ISO 6222.
Contenuto
• 200 test sterili Quanti-Disc YEA (Codice di catalogo WQDY-200) o 40 test sterili Quanti-Disc YEA (WQDY-40)
• Tabella MPN
Conservazione
Conservare tra 2°–8°C. Se il prodotto viene conservato a temperatura ambiente (tra 9° e 25°C), la data di scadenza è di 120 giorni dalla data di consegna del prodotto o dalla data di
scadenza stampata, a seconda dell’evento che si verifichi per primo.
Procedura di Analisi
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Collocare il Quanti-Disc su una superficie piana.
Area di Distribuzione
Pipettare 4 ml dal campione
Rimuovere il coperchio del Quanti-Disc.
Tenendo la pipetta in posizione verticale, distribuire uniformemente il
campione all’interno dell’area di distribuzione (Figura 1), eseguendo un
movimento circolare per garantire che il campione copra tutti i canali.
• Assicurarsi che il campione venga a contatto con le aperture di tutti
canali affinché penetri in modo capillare.
• Qualora il campione non fosse a contatto con qualche apertura,
usare delicatamente la punta della pipetta per indirizzare il
campione verso l’apertura del canale in questione.
• Attendere 3 secondi prima di coprire il Quanti-Disc.
Figura 1
Chiudere il Quanti-Disc e attendere almeno 3 secondi prima di
muoverlo, per consentire l’assorbimento del campione in eccesso ed
evitarne così la fuoriuscita.
Mettere il dispositivo Quanti-Disc in incubazione ad una temperatura di 36°C (±2°C) per 44 ±4 ore. NON CAPOVOLGERE il Quanti-Disc. Per ogni campione d’acqua occorre
inoculare un nuovo Quanti-Disc e incubarlo a 22°C (±2°C) per 68 ±4 ore.
Al termine dell’incubazione, collocare il Quanti-Disc sotto una lampada UV da 6 watt 365 nm e procedere alla conta dei pozzetti positivi. Tenere la lampada a circa 13 cm sopra il
Quanti-Disc in un ambiente buio. Indirizzare la luce verso il campione e lontano dagli occhi.
Consultare la tabella NPP fornita in dotazione per determinare il numero più probabile di batteri eterotrofi presenti nel campione originale. I valori della tabella NPP sono espressi in NPP/ml.
Note procedurali
• Attenersi alla tecnica asettica.
• I campioni clorurati devono essere trattati con tiosolfato di sodio al momento della raccolta.
• Se il Quanti Disc e’ conservato in condizioni refrigerate, segua le appropriate norme di Laboratorio facendo si che il Quanti disc raggiunga la temperature ambiente prima di
effettuare il test.
• Smaltire i Quanti-Disc piastre in conformità con le Corrette Metodologie di Laboratorio (GLP).
• Per facilitare la lettura dei pozzetti fluorescenti, può essere utilizzato un controllo negativo per un confronto diretto.
• È possibile diluire i campioni se il volume complessivo inoculato e inserito nel Quanti-Disc piastra è pari a 4 ml.
• Regolare il valore NPP secondo le diluizioni. Ad es. se si analizzano un campione di 1ml e 9 ml di diluente sterile (una diluizione decuplicata), moltiplicare il numero indicato nella
tabella NPP per 10 per trovare il valore corretto di NPP/ml del campione originale non diluito.
• La tacca sul coperchio del Quanti-Disc serve come marcatura per la conta.
• Questo foglio illustrativo potrebbe non rispecchiare le norme locali. Per un’analisi conforme, accertarsi di attenersi alle
norme/procedure appropriate.
Procedura di Controllo Qualità
Si consiglia di eseguire la procedura di seguito riportata su ogni lotto di Quanti-Disc test o più frequentemente, se richiesto dalla normativa:
• Sterilità:
a. Con 4 ml di diluente sterile (es. acqua declorurata, deionizzata, acqua tamponata con fosfato o peptonata all’1%), eseguire i passaggi 2–5 della “Procedura di Analisi” sopra descritta.
b. Nessun pozzetto deve essere fluorescente.
• Controllo Positivo:
Eseguire i passaggi 2–5 della “Procedura di Analisi” sopra riportata utilizzando l’organismo di seguito indicato:
Escherichia coli NCTC 9001 o
ATCC 11775
36°C ±2°C per 44 ±4 ore
22°C ±2°C per 68 ±4 ore
+
+
Prodotto in base a uno o più dei seguenti brevetti USA: 5.700.655; 6.287.797; 5.985.594; 6.387.650; 6.472.167; 6.509.168.
Altri brevetti degli U.S.A. e/o stranieri concessi o domande di brevetto degli U.S.A. e/o straniere attesa di approvazione.
© 2009 IDEXX Laboratories, Inc. Tutti i diritti sono riservati.
Quanti-Disc e Multiple Enzyme Technology sono marchi di proprietà di, e/o registrati da, IDEXX Laboratories, Inc. e protetti negli Stati Uniti e/o in altri paesi.
Quanti-Disc® YEA テストキット
はじめに
IDEXX Quanti-Disc® YEAテストキットおよびIDEXX Quanti-Disc法は水中の従属栄養細菌の定量用キットです。これは、IDEXXが特許を取得したTM「Multiple
Enzyme Technology」を基にしています。この技術は、細菌の存在の指標である主な酵素の有無を調べることによって、水中の生菌を検出します。QuantiDiscは、水中の細菌による代謝によって青い蛍光を発する複数の酵素基質を利用しています。検体をQuanti-Discに注入し、培養し、UVランプ下で蛍光を
発するウェル数を数えます。蛍光を発するウェルの数から、検体中の従属栄養細菌の最確数（MPN値）を求めます。Quanti-Disc法は、ISO基準6222で説
明されている22°C（±2°C）で68±4時間、36°C（±2°C）で44±4時間培養したYeast Extract Agar を用いた方法と相関があります。
内容
• 滅菌Quanti-Disc YEA　200個（カタログ番号WQDY-200）または40個（WQDY-40）
• MPN 表
保管
2°～8°Cで保管してください。室温（9°～25°C）で保管した場合、有効期限は、製品を受け取った日から120日後、または、記載の有効期限のどちらか短い方になります。
操作手順
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
注入エリア
平らな場所にQuanti-Discを置きます。
ピペットで検体4.0 mLを吸引します。
Quanti-Discの蓋を外します。
ピペットを垂直に保持し，検体を注入エリア（図1参照）に注入し
ます。全てのウェルの開口部に検体が行き渡るよう，円を描くよ
うに注入してください。
• 毛細管現象によって、検体が全てのウェルの開口部に接して
いることを確認してください。
• 検体がウェルの開口部に接していない場合は，ピペットの先
端で，検体をウェルの開口部に接するようにしてください。
• Quanti-Discに蓋をする前に，3秒間お待ちください。
Quanti-Discに蓋をします。余分な検体を吸収させて検体漏れを防
図1参照
ぐため，そのまま3秒間お待ちください。
Quanti-Discを36°C ±2°C で44±4時間培養してください。その
際、Quanti-Discを逆さまにしないでください。それぞれの検体を別
のQuanti-Discに分注し、22°C ± 2°C で68±4時間培養してください。
培養後，暗所においてQuanti-Discの上、13cm辺りから、UVランプ（6W,365nm）を当て、蛍光を発するウェルの数を数えてください。光は目に直接向けないように注意
し，検体に向けてください。
添付のMPN（最確数）表を参照し，検体中の従属栄養細菌のMPNを求めます。MPN表中の結果の単位は，MPN/mLです。
操作上の注意
•
•
•
•
•
•
•
無菌操作を行ってください。
塩素処理した検体は、検査前に、チオ硫酸ナトリウムで処理してください。
Quanti-Discを冷蔵で保管している場合は、検査を始める前に、室温に戻してからお使いください。
Quanti-Discは、GLPに従って廃棄してください。
蛍光を発しているウェルを数えやすくするために、陰性対照と隣接比較することも可能です。
Quanti-Discに注入する検体量が4 mLであれば、検体を希釈してもかまいません。
その際は、希釈倍率に応じて、MPN値を調整してください。例えば、1 mLの検体と9 mLの検体希釈液を使用した場合（10倍に希釈）、希釈前の検体のMPN/mLは、MPN
表の数値を10倍する必要があります。
• Quanti-Discの蓋にある切込みは、ウェルを数えるときの目印として使用できます。
• 取扱説明書の内容は、各国の法律・条例に適合していないことがあります。各国の法律・条例に従って検査してください。
品質管理手順
Quanti-Discの各ロットの品質管理（もしくは、法律・条例に従ってください）は、下記操作をお薦めします。
• 無菌:
a. 滅菌希釈液（例：脱塩素水、脱イオン水、燐酸塩緩衝剤、または1%ペプトン水）4 mLを使用し、操作手順のステップ2～5を行います。
b. 培養後のウェルは、全て蛍光なしの結果となります。
• 陽性対照:
以下の菌を用い、操作手順の2～5に従います。:
大腸菌NCTC 9001またはATCC 11775
36°C±2°Cで44±4時間
22°C±2°Cで68±4時間
+
+
下記米国特許のうちの1件以上によって製造されています。5,700,655; 6,287,797; 5,985,594; 6,387,650; 6,472,167, 6,509,168. 米国および/または諸外国におけるその他の取得済特許または申請中の特許。
© 2009 IDEXX Laboratories, Inc.無断転載を禁ず。
Quanti-DiscおよびMultiple Enzyme Technology（複数酵素技術）は、米国および/または諸外国におけるIDEXX Laboratories, Inc.の商標または登録商標です。
Quanti-Disc Most Probable Number (MPN) Table
Table NPP/Tabella NPP/Tabla de NMP/MPN-Tabelle
Positive wells
MPN/mL
95% Confidence Limit
Low
High
Positive wells
MPN/mL
95% Confidence Limit
Low
High
Puits positifs
NPP/ml
Limites de confiance à 95%
Minimum
Maximum
Puits positifs
NPP/ml
Limites de confiance à 95%
Minimum
Maximum
Pozetti positivi
NPP/ml
Limit fiduciali del 95%
Inferiore
Superiore
Pozetti positivi
NPP/ml
Limit fiduciali del 95%
Inferiore
Superiore
Pocillos
positivos
NMP/ml
Límites de confianza del 95%
Inferior
Superior
Pocillos
positivos
NMP/ml
Límites de confianza del 95%
Inferior
Superior
Positive
Vertiefungen
MPN/ml
95% Vetrauensgrenze
Untere
Obere
Positive
Vertiefungen
MPN/ml
95% Vetrauensgrenze
Untere
Obere
陽性ウェル
MPN/ml
陽性ウェル
MPN/ml
下限
95%信頼限界
上限
下限
95%信頼限界
上限
0
<1.8
0.0
<14.0
26
73.4
50.0
110.0
1
2.0
0.3
14.0
27
77.7
53.0
110.0
2
4.1
1.0
16.0
28
82.1
56.0
120.0
3
6.2
2.0
19.0
29
86.8
60.0
130.0
4
8.3
3.1
22.0
30
91.6
63.0
130.0
5
10.5
4.4
25.0
31
96.8
67.0
140.0
6
12.8
5.7
28.0
32
102.2
71.0
150.0
7
15.1
7.2
32.0
33
107.9
75.0
150.0
8
17.4
8.7
35.0
34
113.9
80.0
160.0
9
19.8
10.0
38.0
35
120.4
85.0
170.0
10
22.3
12.0
42.0
36
127.3
90.0
180.0
11
24.8
14.0
45.0
37
134.7
95.0
190.0
12
27.4
16.0
48.0
38
142.7
100.0
200.0
13
30.1
17.0
52.0
39
151.4
110.0
210.0
14
32.9
19.0
56.0
40
160.9
110.0
230.0
15
35.7
21.0
59.0
41
171.5
120.0
240.0
16
38.6
24.0
63.0
42
183.3
130.0
260.0
17
41.6
26.0
67.0
43
196.6
140.0
280.0
18
44.6
28.0
71.0
44
212.0
150.0
300.0
19
47.8
30.0
75.0
45
230.3
160.0
330.0
20
51.1
33.0
80.0
46
252.6
170.0
370.0
21
54.5
35.0
84.0
47
281.3
190.0
420.0
22
58.0
38.0
89.0
48
321.9
210.0
490.0
23
61.6
41.0
93.0
49
391.2
240.0
640.0
24
65.4
44.0
98.0
50
>391.2
>240.0
>640.0
25
69.3
46.0
100.0