Virologìa [Modo de compatibilidad]

ACTUALIZACION TOMA DE
MUESTRAS VIROLOGICAS
Abril 2014
MV. Judith Mora R.
Jefe Subdepto.
Enfermedades Virales
ISP
METODOS DE DIAGNOSTICO VIRAL
A. DETECCION DE VIRUS
•Aislamiento viral en cultivos celulares.
•Inoculación en animales de laboratorio
•Inoculación en huevos embrionados
B. DETECCIÓN INDIRECTA O PRODUCTOS VIRALES.
•Inmunofluorescencia (IFD).
•Inmunoensayo enzimático (ELISA)
C. DETERMINACION DE ANTICUERPOS
Métodos serológicos (sueros pareados o muestra única)
•ELISA (IgM –IgG)
•Inmunofluorescencia (IFI).
D. DETECCION DE MATERIAL GENETICO VIRAL
• Reacción de polimerasa en cadena (PCR)
CONSIDERACIONES PARA TOMA Y ENVIO DE
MUESTRAS PARA ESTUDIO VIROLOGICO
• PERIODO OPTIMO DE RECOLECCION
– Ej: Aislamiento viral en fase aguda
• TIPO DE MUESTRA
– Ej: Sangre c/EDTA
• SITIO DE OBTENCION
– Ej: Deposición
• TECNICA DE OBTENCIÓN DE LA MUESTRA
– ANF vs Tórula faríngea
• RECOLECCION DE LAS MUESTRAS
– Envase estéril, cierre hermético, etc
• TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS
– Temperatura, medio transporte, etc
1º
Tº
2º: protege el
embalaje/envase
secundario de los
daños físicos
durante el
transporte.
3º
identificar al
remitente y al
destinatario.
Incluir formularios de datos relativos a la muestra
Organigrama Subdepartamento
Enfermedades Virales
Laboratorio Nacional de Referencia y cumple
acciones de vigilancia establecidas en el
Reglamento sobre Notificación de Enf.
Transmisibles de Declaración Obligatoria .
R.R.H.H:
Profesionales
26
Técnicos, Auxiliares,
Administrativos
24
Total
50
32.000 muestras
Exámenes por Algoritmos
Diagnósticos
Virus Entéricos
• Vigilancia PFA
Apoyo a erradicación del virus Polio
Último caso en América 1991 (Perú)
• Meningitis Viral
Estudio brotes
Diarreas agudas con diferentes
etiologías:
• Vigilancia Rotavirus
Hospitales centinelas (V, VIII,
RM) MINSAL-OPS
• Vigilancia Gastroenteritis
virales (Norovirus, ADV,
Astrovirus, Rotavirus):
– Centinelas ambulatorios
– Estudio Brotes
Nombre
exámen /
Prestación
Método
Tipo de muestra
Requisitos previos
Volumen de
muestra
Transporte y
conservación
Plazo de
respuesta en
días hábiles
Deposición: envase
estéril, tapa rosca. sin
medio de transporte
Aislamiento Aislamiento
LCR: envase estéril,
0-5 días de
de
en cultivos
tapa rosca.
evolución
Enterovirus celulares
Liq.pericárdico:
envase estéril tapa
rosca
Deposición:
Congelar (-18º
1 cuch. de té
a -20ºC) o
LCR o Líq
refrigerar (2º a
Pericard: 1
8ºC) con envio
ml ped
inmediato
2 ml adulto
15
Vigilancia
Aislamiento
Poliovirus
en cultivos
(sospechos
celulares
os PFA)
Congelar (-18º
10 grs. (1
a -20ºC) y
cuch. de té) enviar en frío
2º a 8ºC. .
15
Deposición sin medio
de transporte en
0-14 días de
envase estéril tapa
evolución
rosca
Vigilancia de
Virus
* Deposición sin
* 0-3 días de
Gastroenteri
medio de transporte en evolución en
cos:
Inmunoquím envase esteril tapa
niños menores 5 10 grs. (1
Adenovirus
ica y RT-PCR rosca .
años :
cuch. de té)
entéricos,
**5 a 10 muestras por Centinelas
Astrovirus,
Brotetificado)
ambulatorios
Norovirus y
otros
Técnicas
Vigilancia
Serológicas Deposición sin medio
Rotavirus
Inmunoenzi de transporte, envase
(Centros
máticas
esteril tapa rosca
Centinelas)
ytipificación
0-5 días de
evolución en
niños, hasta 5
años de edad,
hospitalizados
Congelar (-18º
a -20ºC) y
enviar en frío
2º a 8ºC. .
21
Congelar (-18º
10 grms. (1 a -20ºC) y
cuch. de té) enviar en frío
2º a 8ºC. .
21
Virus Respiratorios
• Vigilancia Virus Respiratorios :
ADV, VRS, PI , Metapneumovirus)
e Influenza A y B
– IRAG complicación frecuente de la
Influenza
– Red Lab. Hosp. Centinelas IFI
– Red Lab. Regionales PCR
– Centro Nacional Influenza para OMS
Aislamientos Recepción hasta 12:00 hrs por tipo
procesamiento
Nombre exámen / Prestación Método
Aislamiento
Aislamiento de Influenza
en cultivos
AyB
celulares
Aislamiento Virus
Respiratorio Sincicial ,
Adenovirus,
Parainfluenza
Inmunofluorescencia
Indirecta para Virus
Influenza A, B
Aislamiento
en cultivos
celulares
Tipo de muestra
a) Gargarismo
b) Aspirado ANF
Máximo 3 días de
c) Tórula con
evolución
secreción NF
d) Biopsia tejidos
a) ANF b) Tórula
secreción NF
c) Biopsia tejidos Hasta 5 días de
d )ADV: Tórula
evolución
secreción
conjuntival
Inmunofluore Frotis fijado
scencia
Aspirado NF
PCR para Influenza A, B PCR
Requisitos previos
Aspirado
nasofaríngeo o
tórula secreción
nasofaríngea o
biopsia pulmón
Hasta 3 días de
evolución
Otros VR :Hasta 5
días de evolución
Hasta 3 días
desde inicio de los
síntomas
Volumen de Transporte y
muestra
conservación
Medio
transporte
viral Hanks´s
0,5% gelatina
+antibiótico
en frío
c/refrigerante
s T° 2 – 8 C
Medio
transporte
viral Hanks´s
0,5% gelatina
+antibiótico
en frío
c/refrigerante
s T° 2 – 8 C
Plazo de
respuesta
en días
hábiles
15
15
En frío con
refrigerantes.
T° 2-8°C
3
Medio
transporte
viral Hanks´s
0,5% gelatina
c/antibiótico
c/refrigerante
s T° 2 - 8 C
5
Virus Exantemáticos
• Vigilancia Integrada Sarampión-Rubéola:
• Pacientes con exantema macular que puede ser
acompañado de fiebre, conjuntivitis, artralgia,
linfoadenopatías , etc
• SRC malformaciones congénitas (1er trimestre
embarazo)
Recomendaciones:
– Muestra para aislamiento ideal Aspirado
– En su defecto, orina: mínimo 50 ml, enviar siempre
junto a la muestra de suero.
• Otras: CMV, Herpes
Nombre exámen /
Prestación
Método
Requisitos
Tipo de muestra
previos
Volumen
Volumen de
de
muestra
muestra
adulto
pediátrica
Suero extraído
1 ml
en forma estéril Enviar
ELISA, IF,
2 ml suero.
suero.
enviar en tubo muestras con
aislamiento,
ANF en ANF en
estéril tapa
formulario de
Vigilancia Sarampión RT-PCR
medio de medio de
rosca. En casos vigilancia con la
Rubeola
(según
transport transporte
seleccionados totalidad de los
e viral o viral o 50
algoritmo
ANF
antecedentes
ISP)
50 ml
ml orina
(Orina a
solicitados
orina
solicitud)
Estudio Inmunidad
Sarampión
Vigilancia Síndrome
Rubeola Congénita .
Suero extraído
Inmunofluor en forma estéril
escencia
enviar en tubo No tiene
(IF) (IgG) estéril tapa
rosca
ELISA IgM
(algoritmo
ISP)
Serología IgG RubéolaELISA IgG
Suero en tubo
estéril tapa
rosca .
Suero, en tubo
estéril tapa
rosca .
1 ml
2 ml
Recién nacidos 1 ml de
< 1 año
suero
1 ml de
suero
3 ml suero
Transporte y
conservación
Plazo
de
respue
sta en
días
hábile
s
Aspirado con
medio de
transporte viral
Hanks´s con
0,5% gelatina
mas antibiótico.
Enviar con
unidades
refrigerantes Tº
2-8ºC.
4
En frío Tº 2-8ºC.
Con unidades
refrigerantes
5
En frío Tº 2-8ºC.
Enviar con
unidades
refrigerantes
En frío Tº 2-8ºC.
Enviar con
unidades
refrigerantes
10
10
Nombre exámen /
Prestación
Requisitos
previos
Método
Tipo de muestra
ELISA
Suero en tubo
estéril tapa
rosca .
Estudio
transplante
Serología IgM
Citomegalovirus
ELISA
suero, en tubo
estéril tapa
rosca.
IgM recién
nacidos < 3
meses con
Síndrome de
TORCH
Aislamiento de
Citomegalovirus
Orina,Recolecciò
Aislamiento n: segundo
24 horas de
en cultivos chorro. Envase
evolución
celulares
estéril, tapa
hermética
Aislamiento Herpes
Simplex
a) LCR en tubo
estéril tapa
rosca o de goma
b) Contenido
Aislamiento
vesicular
en cultivos
De 0- 2 días
(Líquido de
celulares
lesión)
c) Tórula
Secreción
Vaginal
Serología IgG
CITOMEGALOVIRUS
Aislamiento
Aislamiento de Virus
Tórula de lesión
en cultivos
Hasta 3 días
Varicela Zoster
vesicular
celulares
Volumen
de
Volumen de
Transporte y
muestra muestra
conservación
pediátric adulto
a
Plazo
de
respu
esta
en
días
hábile
s
En frío Tº 2-8ºC.
Enviar con
unidades
refrigerantes
10
1 ml de
suero
En frío Tº 2-8ºC.
Enviar con
unidades
refrigerantes
10
3 ml
3 ml
Refrigerar sin
medio de
transporte viral
21
LCR: 1 ml
Con medio de
transporte viral
Hanks´s con
0,5% gelatina
mas antibiótico.
Enviar con
refrigerantes T°
2–8C
7
En frío Tº 2-8ºC.
Enviar con
unidades
refrigerantes
15
1 ml de
suero
LCR: 1
ml
3 ml suero
SIDA
• Enfermedad causada por VIH:
Confirmación de muestras reactivas
al tamizaje en el país
Verificar clave en CI
• Diagnostico SIDA pediátrico (< 2
años)
Recepción lu a Ju por tipo
procesamiento
• Estudios Genotipificación, FRVIH
http://formularios.ispch.cl
NOMBRE DE LA
PRESTACIÓN
ENSAYOS
TIPO DE MUESTRA
REQUISITOS
PREVIOS
CRITERIO DE
VOLUMEN ACEPTACION,
MUESTRA ALMACENAMIENTOTRANSPORTE
PLAZO DE
RESPUESTA
(DIAS
HABILES)
Suero o plasma: En
frío Tº 2 - 8ºC. Enviar
Determinación * Suero o plasma
con unidades
de Ag HIV
(Técnicas
Técnicas
Muestra
refrigerantes.
Ac IgG anti HIV serológicas)
serológic
doblemente
12 días,
VIH ADULTO
as: 1 ml
* Sangre con
reactiva al
Sangre con
90,6% año
CONFIRMACION Ácidos
Técnicas
anticoagulante
tamizaje de VIH
anticoagulante:
2013)
nucleicos:
EDTA (téc.
molecula
Temperatura ambiente
provirus y
res: 4 ml
moleculares)
(15-25 ºC) no más de
RNA de HIV
48 hrs desde la
extracción.
Detección de
AntígenoSangre con
VIH PEDIATRICO anticuerpo virus
anticoagulante
CONFIRMACION VIH, Ag P24,
EDTA
virus VIH (PCR
, RNA)
En > 2 años a
solicitud. En <2
años, hijos de
madres VIH (+),
protocolo
4 ml
diagnóstico de
sida pediátrico
(Resolución
Minsal).
Temperatura ambiente
(15-25 ºC) no más de
48 horas desde la
extracción.
14
DOCUMENTO
REQUERIDO
Formulario de
envío de
muestra para
Confirmación
de VIH
Formulario de
envío de
muestra para
Confirmación
de VIH
pediátrico
Virus Hepáticos
Detección hepatitis virales:
HBsAg, VHC:
Hepatitis que pueden
evolucionar a cronicidad,
cirrosis y carcinoma hepático.
Confirmación Muestras
reactivas al tamizaje
http://formularios.ispch.cl/Extern
o/FormularioExterno.aspx
Estudio de brotes Hepatitis A:
(3 a 5 casos).
Hepatitis de transmisión
entérica, no desarrollan
infección crónica.
Nombre
exámen /
Prestación
Método
Tipo de muestra
ConfirmaciónELISA,
Suero en tubo
Antígeno de neutralización
estéril tapa rosca
Superficie
(según
de goma
Hepatitis B algoritmo ISP)
ELISA, RTConfirmaciónPCR,
de Virus
Inmunoblot
Hepatitis C (según
Algoritmo)
Vigilancia
brotes de
Hepatitis A
ELISA (IgM)
Volumen
de
Requisitos previos
muestra
pediátrica
Muestra con
tamizaje
o
1 ml
doblemente
reactivo a HBsAg
Volume
Transporte y
n de
muestra conservación
adulto
3 ml
En frío Tº 28ºC. Enviar
con unidades
refrigerantes
En frío Tº 28ºC. Enviar
Plasma con
con unidades
anticoagulante
refrigerantes.
3 ml de
5 ml
(EDTA) o Sangre
Sangre no más
Muestra
sangre
sangre
con EDTA (enviar
de 24 hrs.
Doblemente
(EDTA) y 1 (EDTA) y
desde la
dentro de 24 hrs.
reactiva a Ac-VHC. ml de
3 ml
). En tubo estéril
extracción
plasma
plasma
tapa rosca o de
hasta la
goma
recepción en el
laboratorio
Suero en tubo
0-10 días desde
1 ml de
estéril tapa rosca . inicio los síntomas suero
3 ml
suero
En frío Tº 28ºC. Enviar
con unidades
refrigerantes
Plazo de
respuest
a en días
hábiles
15
15
7
Virus Enf. Emergentes:
Hantavirus
Enf. Febril que puede producir SCPH
compromiso respiratorio y evolucionar a
shock y muerte. Transmitido por O.
longicaudatus
(*) Recepción 24 horas
• Virus Dengue :
Enf febril aguda con cefalea, mialgias,
erupción , etc transmitida por Aedes aegypti
Vigilancia y casos importados
• Virus Nilo Occidental
Enf febril con manifestaciones neurológicas
como cefalea a encefalitis. El vector
mosquitos (Culex pipiens), se mantiene en la
naturaleza mediante un ciclo de transmisión
mosquito-ave-mosquito
Nombre exámen /
Prestación
Método
Tipo de muestra
Requisitos
previos
a)Sangre con EDTA
(tubo tapa lila) y
Sangre sin
ELISA, RT- anticoagulante (tubo
PCR
tapa roja)
Vigilancia Infección
Caso
(según
sospechoso
por Hantavirus
algoritmo b)Tejido de pulmón
del ISP)
en tubo estéril tapa
rosca, sin
presevantes.
(punción cardiaca)
Volumen
Volumen
de
Transporte y
de muestra
muestra
conservación
adulto
pediátrica
3 ml de
sangre
5 ml
sangre
En frío Tº 2 8ºC. Enviar con
unidades
refrigerantes
3 ml
En frío con
refrigerantes.
T° 2 -8°C
Plazo
respues
ta ds
hábiles
3
Con 6 o más
días de
evolución.
* ELISA
*Aislamient
Suero extraído en
Identificaciòn
Vigilancia Dengue / o/ PCR
forma estéril. En tubo Brote
2 ml
Fiebre Amarilla
(según
estéril tapa rosca . muestra
algoritmo
dentro de los
del ISP)
3 primeros
días de
evolución
Técnicas
LCR y Suero en
Vigilancia Virus del
Serológicas tubo estéril tapa
Nilo Occidental
rosca .
ELISA
1 ml
En frío de 2 -8
3 ml suero
> a 8 días de suero y 1
ºC con
y 2 ml de
evolución.
ml de
unidades
LCR
LCR
refrigerantes
10
10
Virus Oncogénicos, otros
• Vigilancia HTLV I/II (Virus
linfotrópico de células T humano)
Confirmar muestras reactivas
tamizaje país y casos sospecha de
Leucemia Linfotrópica y Paraparesia
Espástica
http://formularios.ispch.cl/Externo/Form
ularioExterno.aspx
• Diagnóstico y estudios Virus
Papiloma Humano :
El VPH puede causar verrugas
genitales y ciertos cánceres (CaCu).
• Estudio brotes Parotiditis : infección
aguda con aumento volumen
glándula parótida.
gp46
HTLV-I
9
5
CELLULAR
RECEPTOR
k
d
Tax (p40), Rex (p27,p21)
HTLV-I
p14
Nombre exámen /
Prestación
Método
Tipo de
muestra
Requisitos
previos
Confirmación HTLV
I/II
Muestra
Doblemente
reactiva y
casos de
ELISA , IF, Sangre con
PCR (según anticoagulante sospecha de
algoritmo) (EDTA o citrato) Leucemia
Linfotrópica y
Paraparesia
Espástica
Volumen
de
Volumen
Transporte y
muestra de muestra
conservación
pediátric adulto
a
3ml
5 ml
En frío Tº 2-8ºC.
Enviar con
unidades
refrigerantes. No
más de 4 ds.
desde extracción
a la recepción en
laboratorio
Estudio de Brotes de Serología,
Parotiditis
PCR
En frío de 2 a 8
ºC con unidades
1 ml
Suero o plasma Sólo estudio de
3 ml suero refrigerantes. No
suero y 3
y Orina en tubo brote según
y 3 ml de
más de 4 ds.
ml de
estéril
circular MINSAL
orina
desde extracción
orina
a la recepción en
laboratorio
Virus Papiloma
Humano (VPH)
Tórula de lesión
o raspado de
zona
sospechosa de
infección genital
/ Biopsias de
tejidos /
condiloma ;
tubo estéril tapa
rosca con medio
de transporte.
PCR
En frío de 2 a 8
ºC con unidades
refrigerantes. No
más de 4 ds.
desde extracción
a la recepción en
laboratorio
Plazo
de
respu
esta
en
días
hábil
es
15
7
10
RABIA
• Sd neurológico agudo
(encefalitis ) que
progresa a coma ,
insuficiencia
respiratoria y muerte.
Pacientes con
antecedentes
contacto con animal
sospechoso.
•Estudio de inmunidad en mascotas .
•Vigilancia virus Rábico:
Animales sospechosos: murciélagos,
perros, gatos
(*) Recepción 24 horas
•Caracterización antigénica para determinar
variantes virales circulantes
Recomendaciones:
Cumplir normas de transporte,
bioseguridad
• Diagnóstico de Rabia en humanos
NOMBRE DE LA TIPO DE MUESTRA
PRESTACIÓN
REQUISITOS
PREVIOS
Sangre
s/anticoagulante, o
suero en un tubo
INMUNIDA
plástico estéril con
D PARA
tapa rosca o tapón
RABIA
de goma.
ESTUDIO
En caso de
sospecha de rabia
humana (*)
Animal
VIRUS
RABICO
En caso de
VIGILANCI
sospecha de rabia
A
humana (*)
VOLUMEN
MUESTRA
ADULTO
PEDIATRICO
30 días
después de
2 ml de
la
sangre o 1
vacunación
ml suero
antirrábica.
Sospecha
No Aplica
de rabia.
* Ver siguiente tabla
PLAZO DE
DESCRIPCION DE
ALMACENAMIENTOTRAN RESPUESTA
PRESTACION
SPORTE
(DIAS HABILES)
<8ºC.
Enviar con
unidades
refrigerantes.
<8ºC.
Enviar con
unidades
refrigerantes.
12
Detección de Ac
antirrábicos
neutralizantes por
la tecnica de
inhibición de focos
fluorescentes
(RIFFT)
5
Detección de Ag
rábico por la
técnica de
inmunofluorescenci
a directa
Muestras para diagnóstico en caso sospecha
de encefalitis rábica en humanos
Muestras antemortem (anticuerpos, antígeno y ácidos nucleícos)
Muestra
Suero
(3 ml)
LCR
Condiciones de envío
4ºC /-20ºC
4ºC /-20ºC
(1 a 2 ml)
Saliva
(1-2ml)
Biopsia
nuca,
Folículo
piloso
Congelada-20ºC
Congelada-20ºC
Técnica
Detección
Frecuencia
Anticuerpos
2 veces por
semana
RIFFT
Anticuerpos
2 veces por
semana
RT-PCR Nested
Ácidos nucleicos
RT-PCR Nested
Ácidos nucleicos
IFD
Antígeno
RIFFT
RT-PCR Nested
Ácidos nucleicos
Muestras postmorten (antígeno y ácidos nucleícos)
Biopsia: cerebro: Corteza cerebral, Cuerpo calloso, Cerebelo, Médula espinal
Diariamente
2 veces por
semana
Factores a revisar:
• Demora en envío de las muestras desde laboratorio
• Cumplir indicaciones de envío (BS, envase, Tº).
Muestras sin refrigerantes recibidas fuera de rango Tº
indicado causal de rechazo
• Identificación correcta del paciente
• Formulario indicado y vigente
• Completar antecedentes del formulario:
–
–
–
–
–
–
Fecha obtención muestra
Inicio síntomas (ds evolución)
Resultados exámenes solicitados (Ej. Absorbancias)
Vacunas (Ej: Polio)
Correo @ de responsable envío
Etc.
• Diferencias entre el código del tubo y del antecedente.
• Volumen de muestra solicitado
• Estafeta Acreditado: El retiro de resultado no siempre
es periódico
Gracias