Globulina transportadora de Tiroxina (N-TBG)

comunes entre las tres cuartas partes de los niños con
CH, creando un aumento de la necesidad de la
7
detección. Al nacer y durante unos días después, los
niveles de TBG son los más bajos ya que las
concentraciones de hormonas tiroideas libres se
incrementan. Sólo con la edad los niveles de TBG
cambian y ninguna disminución significativa se puede ver
hasta después de la adolescencia. Aunque las
concentraciones de TBG no varían tan ampliamente
como las otras hormonas de la tiroides en un individuo
eutiroideo, un valor anormal es indicativo de una
enfermedad de la tiroides.8
Globulina transportadora de
Tiroxina (N-TBG) Test System
Cód. De producto: 8925-300
1.0 INTRODUCCION
Uso previsto: La determinación cuantitativa de Globulina
transportadora de Tiroxina TBG en sangre total de
humanos (Neonatos) por inmunoensayo enzimático en
micropozos.
2.0 RESUMEN
PRUEBA
Y
EXPLICACION
DE
LA
La determinación del hipotiroidismo en los primeros días
siguientes al nacimiento ha sido reconocida como la más
importante prueba diagnóstica en neonatos por la
Asociación Americana de Tiroides. El sistema nervioso
depende de las hormonas tiroideas para el correcto
desarrollo dentro del útero hasta por lo menos dos años
de edad e incluso ha mostrado efectos hasta la
adolescencia.1,2,3,4 La necesidad de su detección
temprana y el tratamiento ha resultado en el
establecimiento de centros de detección por los
departamentos de salud federales y estatales.
Actualmente muchos laboratorios solo analizan niveles
de T4 y TSH; sin embargo, los niveles de TBG en
neonatos son importantes de considerar cuando se trata
de hipotiroidismo.
En ciertos estados de la enfermedad, los niveles de T4 y
TSH seguirán apareciendo normales1,2,3,4
Un
cromosoma X ligado a un carácter recesivo, la
deficiencia de TBG de varios niveles muestra diferentes
síntomas clínicos, pero no siempre muestra variación en
los niveles de T4 y/o TSH. Los hombres muestran un
efecto muchos más profundo comparado con las
mujeres con el gen recesivo. Se ha demostrado que
ocurren casos en hombres proporción 9:1 mujeres 5,6. La
TBG no afecta el estado del metabolismo directamente,
pero con el tiempo conduce a una disminución en la
cantidad de T4 y T3 en el torrente sanguíneo, lo cual
afecta directamente el metabolismo e incluso su
desarrollo. 5
“Debido a que la hormona tiroidea es esencial para el
desarrollo del cerebro, el mayor riesgo de hipotiroidismo
congénito (HC) es el deterioro cognitivo y motor
irreversible "7. Estudios recientes han encontrado que 1
de cada 3017 infantes tienen una forma de hipotiroidismo
congénito. Las deficiencias pituitarias también son
Esta metodología de inmunoensayo enzimático de
microplaca proporciona una técnica con sensibilidad
optima que requiere una manipulación técnica mínima.
En este método, los calibradores, muestras de pacientes,
controles, todos hechos y secos en sangre total, son la
primera adición a los pozos de la microplaca. Se
adiciona un tampón que contiene ingredientes esenciales
para aislar la TBG de las proteínas de la sangre. La
sangre proveniente del papel filtro es eluido en el
tampón. En el proceso, la TBG (Globulina transportadora
de Tiroxina) es disociada de las proteínas del suero
(sangre). El conjugado Biotina se adiciona directamente
en la superficie y 30 minutos después el conjugado
enzimático. El proceso finaliza con un periodo de
incubación, el exceso de reactivos son removidos en el
paso de lavado. La actividad de la enzima presente en la
superficie del pozo es cuantificada por la reacción con un
sustrato que produce color.
El uso de varias referencias, hechas en sangre total, de
calibradores con concentración conocida de TBG permite
la construcción de una curva de respuesta a la dosis
(gráfico-DRC) de la actividad y la concentración. La
actividad de una muestra desconocida se puede
extrapolar desde la curva DRC.
.
3.0 PRINCIPIO
Inmunoensayo Enzimático Competitivo (TIPO 9)
Los
reactivos
esenciales
requeridos
para
el
inmunoensayo enzimático incluyen un anticuerpo de alta
afinidad y especificidad, un antígeno marcado con una
enzima y el antígeno nativo. En este procedimiento, la
inmobilización se lleva a cabo durante la prueba en la
superficie de la microplaca a través de la interacción de
la estreptavidina recubierta en el pozo y el anticuerpo
policlonal
biotinilado
anti-TBG
adicionado
exógenamente.
Primero, el tampón de elución y el punto seco de sangre
que contienen el antígeno nativo son mezclados para
que antígeno sea asequible para el resto de reacción.
Después de la incubación, el anticuerpo policlonal
biotinilado es adicionado directamente a la muestra
eluida que contiene el antígeno nativo. Durante el otro
paso de incubación, resulta una reacción entre el
antígeno y el anticuerpo como se ilustra en la siguiente
ecuación:
Ag + AbBtn
AgAbBtn
AbBtn = Anticuerpo Biotinilado
Ag = Antígeno (Cantidad variable) AgAbBtn = Complejo
inmune
El antígeno marcado con enzima es entonces
adicionado, lo que resulta en una competencia entre el
antígeno nativo y el antígeno marcado con enzima por un
número limitado de sitios de unión específicos en el
anticuerpo no consumidos en la primera incubación.
Después de la incubación, el anticuerpo unido al
antígeno se une a la superficie de los pocillos de plástico
a causa de la marca de biotina en él y la estreptavidina
que está presente en el plástico. La interacción es
ilustrada en la siguiente ecuación:
ka
Btn
EnzAg + Ag
EnzAg- BtnAb
Ab(p)
TBG +
(p) - AgTBG
k-a
Btn
Ab(p) = Anticuerpo Policlonal Biotinilado (Cantidad en
D. Reactivo N-TBG Biotina– 6.0 ml - Icono
E. Reactivo enzimático N-TBG– 6.0ml/vial- Icono E
F.
exceso)
AgTBG
= Antígeno nativo (Cantidad Variable)
EnzAg = Antígeno marcado con la enzima (Cantidad en
exceso)
EnzAg-BtnAb
(m)-
G.
AgTBG
=Anticuerpo-Complejo
de
Antígenos
ka
H.
= Rango constante de Asociación
k-a = Rango constante de Disociación
Simultaneamente, el complejo es depositado en el pozo
a través de la reacción de alta afinidad de estreptavidina
y anticuerpo biotinilado. Esta interacción se ilustra a
continuación:
EnzAg-Ag -BtnAb +estreptavidina 
TBG
(p)
C.W.
inmovilizado
Complejo
EstreptavidinaC.W. = Estreptavidina immobolizada en el
pozo
Complejo inmobilizado = complejo unido a la superficie
sólida
Después de un tiempo suficiente para la cuantificación,
el exceso de las proteínas séricas, anticuerpos y el
antígeno marcado con enzima se eliminan a través de un
paso de lavado. La actividad de la enzima en la fracción
unida al anticuerpo es inversamente proporcional a la
concentración de antígeno nativo. Mediante el uso de
diferentes referencias de suero con valores de antígeno
conocido, puede ser generada una curva de dosis
respuesta en la cual la concentración del antígeno de
una muestra desconocida puede ser comprobada.
4.0 REACTIVOS
Materiales Suministrados:
A. Calibradores N-TBG – Manchas de sangre seca
(Dos filas por seis niveles - 2 x 6)
Seis (6) niveles de calibradores N-TBG en manchas
secas de sangre con concentraciones aproximadas de
0(A), 50 (B), 100(C), 200(D), 375(E) y 750(F) nmol/L
puestas en un papel filtro WHATMAN tipo 903.
Almacenar de 2-8C.
Un preservativo se ha
adicionado.
B. Controles de Sangre Total – (I, II y III)
Tres (3) controles para TBG a diferentes
concentraciones (especificas por lote) hecho con
manchas de sangre total en papel filtro WHATMAN
tipo 903 suministrada en una bolsa resellable con un
desecante. Por favor verifique en la etiqueta los
rangos de los controles. Almacene de 2-8C. Se ha
adicionado un preservativo.
C. Tampón de Elución N-TBG– 6.0 ml:
Un (1) vial contiene 6.0 ml de tampón con
preservativos. Almacenar de 2-8ºC.
B
Un (1) vial contiene x-TBG en un tampón con
colorante azul, surfactantes y preservativos.
Almacenar de 2-8C.
I.
J.
Un (1) vial de conjugado TBG- peroxidasa de rábano
picante (HRP) en una matriz estabilizante de
proteínas. Un preservativo y colorante rojo ha sido
adicionado. Almacenar de 2-8C.
Microplaca recubierta con estreptavidina – 96
pozos - Icono 
Una microplaca de 96 pozos recubierta con
estreptavidina y empacada en una bolsa de aluminio
con un agente secante. Almacenar de 2-8C.
Solución de Lavado Concentrada – 20ml/vial –
IconoUn (1) vial contiene surfactant, tampon y sal.
Almacenar de 2-8C.
c
Solución Sustrato – 13ml/vial - Icono S
Un (1) vial contiene tetrametilbenzidina (TMB) y
peróxido de hidrógeno (H2O2) en un tampón.
Almacenar de 2-8C.
Solución de parada – 8ml/vial - Icono
Un (1) vial contiene un ácido fuerte (H2SO41N).
Almacenar de 2-8C.
Instrucciones del Producto.
STOP
Nota 1: No utilice los reactivos después de la fecha de
expiración.
Nota 2: Los reactivos abiertos son estables por 60
días cuando se almacenan de 2-8C. La estabilidad
de los componentes del kit está identificada en
cada etiqueta.
Nota 3: No intercambie los componentes de diferentes
lotes.
4.1 Material requerido no suministrado:
1. Agitador de microplacas con rotación de 150rpm.
2. Dispensador(es) de volúmenes repetidos de 0.050ml,
0.100ml y 0.350ml con una precisión superior a 1.5%.
3. Dispensadores de volumen ajustables (20-200µl) y
(200-1000µl) para las diluciones del conjugado.
4. Perforador de 1/8thpulgadas.
5. Lavador de microplacas o botella lavadora (opcional).
6. Lector de microplacas con absorbancias de 450nm y
620nm.
7. Papel absorbente para secar los pozos de la
microplaca.
8. Envoltura de plástico y tapa de microplaca para los
pasos de incubación.
9. Aspirador al vacío (opcional) para los pasos de
lavado.
10. Cronómetro.
11. Materiales de control de calidad externo.
5.0 PRECAUCIONES
Para uso Diagnóstico in Vitro
No para el Uso Interno ni Externo en Humanos o
Animales
Todos los productos que contienen sangre humana se
encontraron no reactivos para el Antígeno de Superficie
de la Hepatitis B, VIH 1 y 2 y anticuerpos para VHC por
los reactivos licenciados por la FDA. Incluso no se ha
conocido prueba que pueda ofrecer seguridad de que los
agentes infecciosos están ausentes, todos los productos
séricos de humanos deben ser manejados como
potencialmente peligrosos y capaces de transmitir
enfermedades. Los procedimientos de buenas prácticas
de laboratorio para el manejo de productos sanguíneos
pueden ser encontrados en el Centro de Control de
Enfermedades/
Instituto
Nacional
de
Salud,
“Bioseguridad en Laboratorios Microbiológicos y
Biomédicos”, 2da Edición, 1988, Publicación HHS No.
(CDC) 88-8395.
El descarte seguro de los componentes del kit debe
hacerse de acuerdo a los requerimientos regulatorios
y legales locales.
6.0 RECOLECCION Y PREPARACION DE LA
MUESTRA
contenedor adecuado. Almacene el tampón diluido de
2-30C hasta por 60 días.
Nota 1: No utilice el Substrato de Trabajo si es de
color azul.
Nota 2: No utilice los reactivos que estén
contaminados o tengan crecimiento bacteriano.
9.0 PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
Antes de iniciar el ensayo, permita que todos los
reactivos, y muestras de pacientes se encuentren a
temperatura ambiente (20 - 27C).
**El procedimiento debe ser realizado por personal
entrenado y capacitado**
7
Cal C
Cal D
Cal E
Cal F
Cont - I
Cont – II
Cont - III
10.0 CALCULO DE LOS RESULTADOS
Se usa una curva de dosis respuesta para calcular la
concentración de Neo-natal TBG en muestras
desconocidas.
1. Registre la absorbancia obtenida en la impresión del
lector de microplacas como se explica en el ejemplo
1.
2. Trace la absorbancia de cada duplicado de calibrador
versus la correspondiente concentración de N-TBG en
nmol/L sobre un papel de gráfica lineal. (no promedie
los duplicados de los calibradores antes de trazar).
3. Dibuje la mejor curva uniendo los puntos trazados.
4. Para determinar la concentración de N-TBG para una
muestra desconocida, ubique el promedio de la
absorbancia de los duplicados para cada muestra
desconocida en el eje vertical de la gráfica, y luego
encuentre el punto de intersección en la curva, y lea la
concentración (en nmol/L) en el eje horizontal de la
gráfica (los duplicados de las muestras desconocidas
deben ser promediados como se indica). En el
siguiente ejemplo, el promedio de la absorbancia
(1.39) intersecta en la curva de dosis respuesta con la
concentración de N-TBG (127.27 nmol/L). Ver la
Figura 1.
Nota: Puede usarse un software de reducción de datos
diseñado para ensayos de ELISA. Si este tipo de
software se utiliza, la validación de este debe ser
comprobada.
Paciente
2.805
2.636
1.919
2.124
1.689
1.461
1.009
1.177
0.580
0.641
0.389
0.362
2.091
1.833
1.433
1.549
0.940
0.990
1.250
1.575
Valor
1. Tampón de Lavado
Diluya el contenido del concentrado de lavado a
1000ml con agua destilada o desionizada en un
Cal B
A1
B1
C1
D1
E1
F1
G1
H1
A2
B2
C2
D2
E2
F2
G2
H2
A3
B3
C3
D3
(nmol/L)
8.0 PREPARACION DE REACTIVOS:
Cal A
Media
Cada laboratorio debe procesar controles externos de
rangos hipotiroideo, eutiroideo e hipertiroideo para
monitorear el desempeño de la prueba. Estos controles
deben ser tratados como desconocidos y los valores
deben determinarse en cada procedimiento realizado. Se
deben mantener gráficos de control de calidad para
seguir el funcionamiento de los reactivos. Se deben
emplear métodos estadísticos pertinentes para
comprobar las tendencias. Cada laboratorio debe
establecer los límites aceptables de análisis. Además, la
absorbancia máxima debe ser constante con las
experiencias pasadas. La desviación significativa del
funcionamiento establecido puede indicar el cambio
inadvertido en condiciones o degradación de los
reactivos del kit. Se deben utilizar reactivos frescos para
determinar la causa de las variaciones.
EJEMPLO 1
Abs.
7.0 CONTROL DE CALIDAD
1. Monte el número de pozos necesarios para cada
calibrador, control y muestra de paciente para ensayar
por duplicado. Coloque las tiras de micropozos que
no vayan a ser utilizadas dentro de la bolsa de
aluminio, séllela y almacene de 2-8°C.
2. Perfore un punto de 1/8” de cada calibrador, control y
muestra dentro de cada pozo asignado. (NOTA: No
perfore puntos de sangre de áreas que estén
impresas o que estén cerca del borde).
3. Adicione 0.050 ml (50µl) de tampón de Elución NTBG a todos los pozos.
4. Agite la microplaca suavemente durante 20-30
segundos para mezclar. (NOTA: Asegúrese de que
los puntos de sangre queden completamente
sumergidos en el líquido y no se pegue a las
paredes de los pozos).
5. Tape la microplaca y rote durante 45 minutos a
temperatura ambiente utilizando un rotador de
laboratorio a 150rpm.
6. Selle con cinta de microplacas e incube durante la
noche a temperatura ambiente.
7. Siga los pasos 6-15 en el “Procedimiento de la
prueba” descrito arriba.
Número
de Pozo
Las muestras secas son estables por hasta 3 semanas
almacenadas de 2-8°C protegidas de la luz y la
humedad. Rechace las muestras que se encuentren en
las siguientes condiciones:
1. Muestras no recolectadas en papel filtro WHATMAN
tipo 903.
2. Manchas de sangre no saturadas completamente en
ambos lados.
3. Manchas de sangre con aparición de aglomeración
o coagulación.
4. Manchas de sangre con aparición de humedad.
1. Montar el número necesario de pocillos para cada
muestra de calibrador, control y del paciente sean
analizados en duplicado. Coloque las tiras de
micropozos que no vayan a ser utilizadas dentro de
la bolsa de aluminio, séllela y almacene de 2-8°C.
2. Perfore puntos de sangre de 1/8” de cada calibrador,
control y muestra dentro de los pozos asignados.
(NOTA: No perfore puntos de sangre de áreas que
estén impresas o que estén cerca del borde).
3. Adicione 0.050 ml (50µl) de N-TBG Buffer de Elución
a todos los pozos.
4. Agite la microplaca suavemente durante
20-30
segundos hasta mezclar. (NOTA: Asegúrese de que
los puntos de sangre queden completamente
sumergidos en el líquido y no se pegue a las
paredes de los pozos).
5. Tape la microplaca y rote durante 60 minutos a
temperatura ambiente utilizando un rotador de
laboratorio a 150rpm. (Nota: ver la alternativa de
incubación en la noche).
6. Adicione 50 µl de Reactivo N-TBG Biotina
directamente a cada pozo (NO descarte los reactivos
que ya están en el pozo) y mezcle la placa
suavemente durante 20-30 segundos.
7. Tape la microplaca e incube por 30 minutos a
temperatura ambiente. La rotación no es requerida
en este paso.
8. Adicione 50 µl de Reactivo N-TBG Enzimático
directamente a cada pozo (NO descarte los reactivos
que ya están en el pozo) y mezcle la microplaca
suavemente durante 20-30 segundos.
9. Tape la microplaca e incube por 30 minutos a
temperatura ambiente. La rotación no es requerida
en este paso.
10. Descarte el contenido de la microplaca por aspiración
o decantación. Si decanta, golpee la placa contra un
papel absorbente para secar.
11. Adicione 350µl de tampón de lavado (ver la sección
de Preparación de reactivos), decante (golpee y
seque) o aspire. Repita cuatro (4) veces más para un
total de cinco (5) lavados. Se puede utilizar un
lavador de placas automatizado o manual. Siga las
instrucciones del fabricante para un uso
apropiado. Si se usa una botella lavadora, llene
cada pozo apretando el contenedor (evitar la
formación de burbujas) para dispensar el lavado.
Decantar el lavado y repetir 4 veces más.
12. Adicione 0.100 ml (100µl) de solución sustrato a cada
pozo.
13. Tape la microplaca e incube por 15 minutos a
temperatura ambiente. La rotación no es requerida
en este paso.
14. Adicione 0.050ml (50µl) de solución de parada a cada
pozo y mezcle suavemente por 15-20 segundos.
9.1 PROCEDIMEINTO DE PRUEBA
ALTERNATIVO – DURANTE LA NOCHE
Muestra
I.D.
Siguiendo la guía en la publicación NCCLS LA4T para la
recolección de muestras de sangre en el programa de
tamizaje neonatal, copias que fueron obtenidas de:
NCCLS, 771 E. Lancaster Ave, Villanova, PA 19085.
Utilice papel filtro WHATMAN tipo 903. Para el tamizaje
de muestras para CAH, recolecte las muestras 3 a 5 días
después del nacimiento. Utilice lancetas desechables
con puntas de menos de 2,5 mm para pinchar los lados
mediales o laterales de la parte inferior del talón. Permita
que la gota de sangre que se forme tenga suficiente
volumen para llenar una zona de 5/8 pulgadas de
diámetro en el papel filtro. Toque suavemente la gota de
sangre con el papel de filtro. NO PRESIONE CONTRA
DE LA PIEL. No toque el área MANCHADA. Suspenda
los papeles con la muestra horizontalmente y permita
que se seque a temperatura ambiente durante un
mínimo de 3 horas. Evitar que los puntos toquen otras
superficies y manténgalos alejados de la luz directa.
NOTA: Siempre agregue los reactivos en el mismo
orden para minimizar las diferencias de tiempo en
la reacción entre los pozos.
15. Lea absorbancia en cada pozo a 450nm (usando una
longitud de onda de 620-630nm para minimizar las
imperfecciones de los pozos) en un lector de
microplaca. Los resultados deben leerse entre los
15 minutos después de la adición de la solución
de parada.
2.72
0
2.01
48
1.58
94
1.09
188
0.61
375
0.38
750
1.96
52.75
1.49
108.12
0.97
223.98
1.39
127.27
*Los datos presentados en el Ejemplo 1 y la Figura 1 son
para ilustración únicamente y no deben utilizarse para la
preparación de la curva. Para cada procedimiento debe
generarse una curva
11.0 PARAMETROS
CALIDAD
DE
CONTROL
DE
Con el fin de considerar válidos los resultados de la
prueba se deben encontrar los siguientes criterios:
1. La absorbancia (OD) del calibrador 0 nmol/L debe ser
> 1.3.
2. Cuatro de los seis pooles de control de calidad deben
encontrarse dentro de los valores establecidos.
12.0 ANALISIS DE RIESGOS
Las MSDS y el Análisis de Riesgo están disponibles bajo
solicitud a Monobind Inc.
12.1
1.
2.
3.
4.
Rendimiento de la Prueba
Es importante que el tiempo de reacción en cada
pocillo se mantenga constante para lograr
resultados reproducibles.
El pipeteo de las muestras no debe extenderse más
de diez (10) minutos para evitar la desviación del
análisis.
Si se utiliza más de una (1) placa, se recomienda
repetir la curva de dosis respuesta.
La adición de la solución de sustrato inicia la
reacción cinética, la cual finaliza con la adición de la
solución de parada. Por lo que la adición del
sustrato y la solución de parada debe hacerse en la
misma secuencia para eliminar alguna desviación
durante la reacción.
5. Los lectores de placa miden verticalmente. No toque
el fondo de los pozos.
6. Si no se retira adecuadamente la solución en la
etapa de lavado por aspiración o decantación (s)
puede dar lugar a la réplica pobre y a resultados
falsos.
7. Use componentes del mismo lote. No intercambie
los reactivos de diferentes lotes.
8. Es esencial un pipeteo preciso y exacto así como
seguir el tiempo exacto y la temperatura requerida.
Cualquier desviación de las instrucciones dadas en
el inserto de Monobind puede arrojar resultados
inexactos.
9. Se deben seguir las buenas prácticas de laboratorio,
todos los estándares nacionales aplicables,
regulaciones y leyes de manera estricta para
asegurar el cumplimiento y uso adecuado del
producto.
10. Es importante calibrar todos los equipos: pipetas,
lectores, lavadores y/o instrumentos automatizados
que van a utilizarse con este reactivo y realizar un
mantenimiento preventivo rutinario.
11. El análisis de Riesgo, como lo requiere la Directiva
98/79/EC para la Marca CE de IVD – para este y
otros dispositivos, fabricados por Monobind, puede
ser
solicitado
vía
correo
electrónico
a
Monobind@monobind.com.
TABLA1
Intervalos de Referencia dependientes de la edad
9
para TBG
Edad
1 – 7 días
8 – 15 días
1 mes– 3 años
4 – 6 años
7 – 8 años
9 – 10 años
11 años
12 años
13 años
14 años
15 años
16 años
17 años
18 – 19 años
N-TBG – en nnmol/L
116.6
399.6
220.0
442.9
235.1
571.7
272.5
608.7
301.7
568.0
291.6
519.9
285.6
506.9
273.4
483.6
255.3
466.8
226.1
166.2
199.8
451.4
185.0
440.3
157.3
427.4
142.3
392.2
N-TBG – en µg/mL
6.3
21.6
11.9
23.9
12.7
30.9
14.7
32.9
16.3
30.7
15.8
28.1
15.4
27.4
14.8
26.1
13.8
25.2
12.2
9.0
10.8
24.4
10.0
23.8
8.5
23.1
7.7
21.2
Es importante tener en cuenta que el establecimiento de
un rango de valores, que se espera encontrar por un
método para una población de personas "normales",
depende de una multiplicidad de factores: la
especificidad del método, la población analizada y la
precisión del método en las manos del analista. Por
estas razones, cada laboratorio depende del rango de
valores esperados establecidos por el fabricante
únicamente hasta determinar un rango in-house usando
el método con una población natural del área en la que
se encuentra el laboratorio.
14.0 CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO:
12.2 Interpretación
1. Las mediciones e interpretación de los resultados
debe ser realizado por personal capacitado y
entrenado.
2. Los resultados de laboratorio por sí solos son sólo un
aspecto en la determinación de la atención al paciente
y no deben ser la única base para la terapia,
particularmente si los resultados generan conflictos
con otros determinantes.
3. Para validar los resultados de las pruebas, los
controles y otros parámetros beben encontrarse
dentro de los rangos formulados y requerimientos de
la prueba.
4. Si se alteran los kits de prueba, como por ejemplo
mediante la mezcla de componentes de diferentes
kits, lo que podría producir resultados falsos de las
pruebas, o si los resultados se interpretan de manera
incorrecta,
Monobind
no
tendrá
ninguna
responsabilidad.
5. Si se utiliza un sistema de reducción de datos
controlados por computador para interpretar los
resultados del ensayo, es necesario que los valores
de predicción para los calibradores se ubiquen dentro
del 10% de las concentraciones asignadas.
14.1 Precisión:
La precisión intra e inter ensayo para la prueba N-TBG
AccuBind® ELISA test system fue determinada
analizando tres niveles diferentes de controles de sangre
seca. El número (N), valores medios (X), desviación
estandar () ay el coeficiente de variación (C.V.) para
cada uno de estos controles son presentados en la Tabla
2 y 3.
13.0 RANGOS DE VALORES ESPERADOS
14.2 Sensibilidad
La prueba N-TBG AccuBind® ELISA test system tiene
una sensibilidad de 28.6 nmol/L. La sensibilidad fue
comprobada por la determinación de la variabilidad del
calibrador 0 nmol/L y usando la estadística 2  (95%
certidumbre) para calcular la dosis mínima.
De acuerdo con los intervalos de referencias para la
población pediátrica “normal” los rangos esperados para
la prueba N-TBG AccuBind® Test System se detallan en
la Tabla 1. Las unidades pueden convertirse utilizando
el factor de conversión 18.5.
TABLA 2
Precision Intra ensayo (Valores en nmol/L)
Muestra
N
X
C.V.%

Bajo
20
66.97
7.57
11.3
Normal
20
131.15
16.86
12.9
Alto
20
268.94
19.29
7.2
TABLA 3
Precision Inter ensayo (Valores en nmol/L )
Muestra
N
X
C.V.%

Bajo
10
72.76
11.52
15.8
Normal
10
120.76
12.11
10.0
Alto
10
227.69
22.74
10.0
* Si se mide en diez experimentos por duplicado en un
período de diez días.
14.3 Exactitud
La prueba N-TBG AccuBind® ELISA test system fue
comparada con un método de referencia. Se usaron
muestras biológicas de poblaciones hipotiroideas,
eutiroideas e hipertiroideas (los rangos oscilaron entre 49
nmol/L – 200 nmol/L). El número total de muestras fue
87. La ecuación de regresión de mínimos cuadrados y el
coeficiente de correlación fue computado para el método
N-TBG AccuBind® ELISA en comparación con el
método de referencia. Los datos obtenidos se muestran
en la tabla 4.
TABLA 4
Método
Media
Este método
(y)
Referencia (x)
118.06
Análisis de
ecuación de
regresión de
mínimos
cuadrados
y = 1.01(x) –
4.35
Coeficiente
de
Correlación
0.999
121.18
Solamente se presentaron pequeñas cantidades de
sesgo entre este método y el de referencia debido a la
proximidad de los valores medios. La ecuación de
regresión de mínimos cuadrados y el coeficiente de
correlación indicaron una concordancia excelente del
método.
14.4 Especificidad:
La reactividad cruzada del anticuerpo usado para la NTBG AccuBind® ELISA a determinadas sustancias fue
evaluada por la adición de cantidades masivas de las
sustancias de interferencia a una matriz de suero. La
reactividad cruzada se calculó mediante la derivación de
una relación entre dosis de la sustancia que interfería a
la dosis de tiroxina necesaria para desplazar la misma
cantidad de conjugado.
Sustancia
Bilirubina
Lipidos
Trigliceridos
IgG Humana
Reactividad
Cruzada
ND
ND
ND
ND
15.0 REFERENCIAS
1. Kempers, MJE. The Journal of Clinical Endocrinology
and Metabolism. 2006, 91, 3370-3376.
2. Howdeshell, KL. Environmental Health Perspectives.
2002, 110, 337-348.
3. American Academy of Pediatrics. Pediatrics. 1993,
91, 1203-1209.
4. Kapelari, K. BMC Endocrine Disorders 2008, 8, 1524.
5. Mandel, S. The Journal of Pediatrics. 1992, 122,
227-230.
6. Fisher, DA. The New England Journal of Medicine.
1981, 304, 702-712.
7. Lanting, CI. Pediatrics. 2005, 116, 168-173.
8. Elmlinger, MW. Clin Chem Lab Med. 39: 973-979.
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Date: 2012-JUL -10
Product Code: 8925-300
DCO: NA