PROGRAMA DE SEGURIDAD PARA TRABAJOS CON ADN RECOMBINANTE FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES - SERVICIO DE HIGIENE Y SEGURIDAD 1.0 Introducción Toda investigación que involucre ADN recombinante que se realice dentro de los laboratorios de la FCEN debe cumplir estas directivas. Este documento es una guía para asistir a la Institución, al Subcomité de Bioseguridad (SCBS), Comité de Seguridad (CS), al Servicio de Higiene y Seguridad y al Investigador Responsable para determinar las acciones que deben implementarse. El propósito de estas directivas es especificar las prácticas para la construcción y manipulación de Moléculas de ADN recombinante Organismos y virus conteniendo ADN recombinante Definiendo ADN recombinante como: Las moléculas que se construyen fuera de las células vivientes juntando segmentos de ADN sintético o natural y que pueden replicarse en una célula viviente. Las moléculas que resultan de la replicación de las arriba descriptas. 2.0 Responsabilidades 2.1 Decano de la Facultad El Decano de la Facultad, por recomendación del Secretario a cargo del área de Higiene y Seguridad, fija el Programa de Seguridad para el manejo de ADN Recombinante. 2.2 Servicio de Higiene y Seguridad. El Servicio de Higiene y Seguridad (SHyS) es el responsable de coordinar el Programa de Seguridad para el manejo de ADN Recombinante en la Facultad. El SHyS es responsable de revisar que las investigaciones con ADN recombinante realizadas en la Facultad, estén de acuerdo con las directivas de bioseguridad de la FCEN y autoriza la realización de aquellos proyectos de investigación que según la clasificación del NIH (Instituto Nacional de Salud de EEUU) así lo requieran. Cuando se considere necesario, hará intervenir al SCBS para su revisión y asesoramiento. Estas revisiones deben incluir: Una evaluación independiente de los niveles de contención requeridos por las directivas de la FCEN para la investigación propuesta. Evaluación de las instalaciones, procedimientos, prácticas y entrenamiento y pericia del personal involucrado en la investigación con ADN recombinante. Notificación al Investigador Responsable de los resultados de la revisión. Revisión de los planes de emergencia para cubrir salpicaduras accidentales y contaminación personal resultante de la investigación con ADN recombinante. Establecimiento de subcomités o Comités ad hoc cuando sea necesario para llevar a cabo las tareas mencionadas anteriormente. Realización de interconsultas nacionales o internacionales cuando así se requiera. V1 (08/2012) El SHyS es responsable de Realizar inspecciones periódicas para asegurar que los estándares de laboratorio sean seguidos rigurosamente (Nota: los laboratorios son periódicamente inspeccionados como parte del Programa de Seguridad). Reportar al SCBS, a Medicina Laboral y al Comité de Seguridad cualquier problema significativo, violaciones a las directivas de la Facultad y enfermedades o accidentes significativos relacionados a la investigación. Controlar que existan planes de emergencia en caso de salpicaduras accidentales y contaminaciones personales y accidentes en el laboratorio de investigación, involucrando investigaciones con ADN recombinante. Aconsejar y advertir sobre las medidas de Seguridad que deben implementarse en el laboratorio. Proveer asistencia técnica a los Investigadores Responsables 2.3 Subcomité de Bioseguridad El Subcomité de Bioseguridad (SCBS) es el órgano asesor encargado de establecer y reglamentar las normas y políticas de trabajo seguras para la investigación con ADN recombinante en la FCEN. El mismo está constituido por un representante del SHyS y al menos 3 miembros de la comunidad de la FCEN con experiencia en el trabajo con ADN recombinante y agentes biológicos de naturaleza diversa. 2.4 Investigador Responsable El Investigador Responsable es responsable del cumplimiento de las directivas de la Facultad y de la conducta del personal que trabaja con ADN recombinante. Como parte de esta responsabilidad, el Investigador Responsable debe: Hacer una evaluación inicial del nivel requerido de contención de acuerdo con las directivas normativas de la Facultad, para el desarrollo de las técnicas de ADN recombinante. Seleccionar las prácticas microbiológica y las técnicas de laboratorio apropiadas a ser usadas por el investigador y el personal afectado a dichas tareas . Suministrar el protocolo de investigación inicial y los cambios subsecuentes (por ejemplo, cambios en la fuente de ADN o sistema vector-huésped), al SHyS para su revisión y aprobación. Hacer conocer, a todo el plantel del laboratorio, los protocolos que describen el bioriesgo potencial y las precauciones que deben tomarse. Instruir y entrenar al plantel del laboratorio en las prácticas y técnicas requeridas para asegurar la seguridad y los procedimientos para tratar los accidentes. Supervisar el desempeño del personal del laboratorio para asegurar que se empleen las técnicas y prácticas seguras requeridas. Informar cualquier problema significativo en la implementación de prácticas y procedimientos al SHyS. Realizar las correcciones necesarias en condiciones o prácticas que puedan resultar en la liberación de ADN recombinante. V1 (08/2012) Asegurar un mantenimiento eficaz de las medidas físicas de contención, filtros, gabinete de seguridad biológica y proveer de calidad y en cantidad suficiente de elementos de protección personal si así se requiere. Velar por el mantenimiento de las instalaciones de uso común de la FCEN Asegurar la identidad de los agentes biológicos que se manipulan, pureza y características genotípicas y fenotípicas. Cumplir con todos los requerimientos de la reglamentación al iniciar investigaciones que requieran aprobación del SCBS. Reportar cualquier problema significante, violaciones a la reglamentación vigente, o cualquier enfermedad o accidente significante relacionado con la investigación, al SHyS, al SCBS u otra autoridad competente, dentro de los 30 días. Dar a conocer dentro de su grupo de trabajo directivas del SCBS o de la FCEN.. Estar adecuadamente entrenado en buenas técnicas microbiológicas. Cumplir con los procedimientos de transporte para material biológico 3.0 Aprobación de los Procedimientos Estas políticas se aplican a todas las investigaciones con ADN recombinante. Todo trabajo que se realice con ADN recombinante está incluido en una de las 6 categorías A, B, C, D, E y F que se listan a continuación, (Guía del NIH sección III: Experiments covered by the NIH Guidelines). Las siguientes categorías de experimentos que no están permitidos en la FCEN: Categoría A: Experimentos donde se realice la transferencia deliberada de una cualidad de resistencia a drogas a un microorganismo patógeno, si la adquisición de la misma puede comprometer el uso de la droga para controlar enfermedades en humanos, medicina veterinaria o agricultura. Categoría B: Experimentos que involucran la clonación y/o expresión de moléculas tóxicas o toxinas. Por ejemplo la biosíntesis de toxinas de botulismo, tétanos, difteria, neurotoxinas Categoría C: Experimentos que involucran la transferencia deliberada de ADN recombinante o ADN o ARN de ADN recombinante en uno o mas participantes receptores humanos (terapia génica). 3.1 Documento de registro Los Investigadores Responsables que deseen usar moléculas de ADN recombinante deben notificarlo al SCBS presentando el formulario en el SHyS para la información y el registro. El Investigador Responsable deberá completar el Formulario de Inscripción para Trabajar con ADN Recombinante de acuerdo a la naturaleza de las investigaciones según: Categoría D: Requieren aprobación del SHyS antes de realizarlos. Categoría E: Requieren notificación al comienzo de la actividad. Categoría F: Deben presentar el formulario al SHyS. Experimentos de categoría D: V1 (08/2012) Categoría D1: Experimentos que involucran la transferencia de material genético de agentes de Riesgo 2 como sistema vector-huésped que requieren instalaciones de nivel de seguridad BL2. Nota: El uso de agentes de Riesgo 3 y Riesgo 4 no están permitidos en la FCEN. Categoría D2: Experimentos en los que ADN de agentes de Riesgo 2 es clonado en un sistema vector-huésped formado por procariotas no patogénicos o eucariotas menores, estos requieren instalaciones de nivel de seguridad BL2. Nota: El uso de agentes de Riesgo 3 y Riesgo 4 no están permitidos en la FCEN. Categoría D3: Experimentos que involucran el uso de ADN o ARN de virus infecciosos o defectivos en presencia de un virus auxiliar en sistemas de cultivos celulares. Se debe tener especial cuidado para la evaluación de los niveles de contención de los experimentos que puedan aumentar la patogenicidad (por ejemplo, la inserción de un encogen anfitrión) o puedan extender la gama de huéspedes (por ejemplo, la introducción de nuevos elementos de control) de vectores virales en condiciones que permitan una infección productiva. En tales casos, se debe aumentar la contención física por lo menos un nivel. Categoría D4: Experimentos que involucran animales completos en los que el genoma del animal ha sido alterado por introducción estable de ADN recombinante o ADN derivado, en la línea germinal (animales transgénicos) y experimentos que involucran microorganismos modificados por ADN recombinante probados en animales completos. Para estos últimos, con excepción de los virus que son sólo de transmisión vertical, los experimentos no se pueden efectuar en BL1-N, requieren un mínimo de contención BL2-N. Categoría D5: Experimentos que involucran plantas completas en los que las plantas han sido modificadas por ingeniería genética por métodos de ADN recombinante, si esas plantas son usadas para otros propósitos experimentales (como respuesta al stress). Para propagar dichas plantas o para usar esas plantas en conjunto con microorganismos o insectos que contienen ADN recombinante, se deben realizar en condiciones de contención adecuadas ( BL2-P) Categoría D6: Experimentos que involucran más de 10 litros de cultivo. Categoría D7: Experimentos que involucran virus influenza. Los experimentos con virus influenza generados por métodos recombinantes, se deben realizar en áreas de contención correspondientes al nivel necesario para el virus de mayor porcentaje de segmentos. Experimentos de categoría E: Son aquellos no clasificados en las categorías A, B, C, D o F y que se realizan con niveles de bioseguridad 1. Categoría E1: experimentos que involucran la formación de moléculas de ADN recombinante que no tengan mas de las 2/3 parte de cualquier virus eucariota Categoría E2: experimentos que involucran plantas completas Categoría E3: experimentos que involucran roedores transgénicos Experimentos de categoría F: Los trabajos con las siguientes moléculas de ADN recombinantes están exentas solicitar un permiso pero deben presentar el formulario correspondiente al SHyS. V1 (08/2012) Categoría F1: Aquellas que no están en organismos o virus. Categoría F2: ADN no-recombinante, que consiste completamente de segmentos de ADN de una fuente única de ADN no-cromosómica o viral Categoría F3: ADN no-recombinante, derivado de un huésped procariótido o virus cuando es propagado sólo en el huésped original, o cuando es transferido a otro huésped por medios naturales Categoría F4: ADN de un huésped eucariótido incluyendo sus cloroplastos, mitocondria o plásmidos (pero exceptuando virus) cuando se propagan sólo en ese huésped Categoría F5: ADN de diferentes especies que intercambian ADN por procesos fisiológicos conocidos, Categoría F6: ADN que no presentan un riesgo para la salud o el medio ambiente. 3.2 Entrenamiento Los Investigadores Responsables deben presentar la planilla correspondiente a capacitaciones, donde figure el entrenamiento de los investigadores asociados a la misma. 3.3 Cambios en la investigación aprobada Los Investigadores Responsables que deseen modificar los procedimientos (experimentos) con ADN recombinante, regulados por las directivas de la Facultad, son responsables de notificarlo al SHyS, presentando un nuevo formulario de registro. Las modificaciones deben ser aprobadas antes de implementar nuevos procedimientos, según corresponda. 4.0 Inspecciones del laboratorio Los laboratorios en que se realicen investigaciones con ADN recombinante requieren aprobaciones específicas según el nivel de riesgo implícito, que están reguladas por las directivas de la Facultad. El SHyS inspecciona y audita por lo menos en forma anual, los laboratorios que trabajen con nivel de bioseguridad 2 (NB2) . 5.0 Niveles de bioseguridad 3 y 4 Los experimentos que requieren nivel de bioseguridad 3 y 4 (NB3 y 4) se deben realizar en otro ámbito, fuera de la FCEN. V1 (08/2012)