EVALUACION DEL EFECTO PROTECTOR DE DIFERENTES PRODUCTOS EN LA EFICACIA DEL CONTROL DE CANCER BACTERIAL (Pseudomonas syringae) EN CEREZO Objetivo General Se evaluó el efecto protector de la aplicación de diferentes Productos Comerciales sobre el control de Pseudomonas syringae pv. syringae en Cerezos bajo condiciones de campo. Objetivos Específicos Se evaluó el Efecto Preventivo (tiempo de protección) de los Productos Comerciales en el control de Pseudomonas syringae pv. syringae en Cerezos bajo condiciones de campo. Se evaluó el nivel de Incidencia de Pseudomonas syringae pv. syringae en Cerezos bajo condiciones de campo. Metodología a) Ubicación: El ensayo se llevo a cabo en la Estación Experimental Fitonova, la cual se encuentra ubicada en el Sector de Purísima, comuna de Talca. Dentro del predio las aplicaciones de los tratamientos se efectuó a las hileras 5 y 6 del Sector N° 3. En plantas de cerezo de 2 años, variedad Bing sobre Colt. b) Época: El presente ensayo se desarrollo entre brotación y cuaja, comprendiendo los meses de octubre hasta mediados de diciembre. c) Diseño Experimental: Se utilizo un Diseño Factorial de 4 x 3, donde los factores son producto (detallados abajo) y Momento de Aplicación,(14, 7 y 1 días pre inoculacion). De esta manera se obtuvieron 16 tratamientos, los cuales consideran 3 repeticiones por plantas por tratamiento. d) Descripción del Ensayo: Tratamientos: TESTIGO POSITIVO DIA 0 DIA 7 DIA 14 SON TODOS IGUALES, NO SE APLICAN Y SE INOCULAN AL DÍA 15 Strepto Plus 60 g/hl X1 X2 X3 Bacillus subtilis cepa QST 713 300 g/hl X1 X2 X3 Nacillus® 150 g/hl X1 X2 X3 DIA 15 i i (1,2,3) i (1 i (1 i (1 Ac. Peracético 200 g/hl Ac. Peracético + Nacillus ® X1 X2 X3 i (1 X1 X2 X3 X = APLICACIÓN 1,2,3, FECHA DE APLICACIÓN i = FECHA DE INOCULACIÓN Forma y descripción de las aplicaciones: Las aplicaciones se realizaran con bomba de carretilla, utilizando una presión de 3 bares, considerando un mojamiento de 400 L/ha (0,6 L/planta). Inoculación de Microorganismos Fitopatógenos: Luego de 24 hrs de aplicados los últimos tratamientos (momento de aplicación Día 15), se procedió a realizar heridas mediante el uso de una lija de madera fina, a 2 brotes por planta (uno de cada lado de la planta), luego de esto se inocularon las plantas por aspersión, de suspensión a una concentración mínima de 1 x 10 6 UFC/ml del microorganismo fitopatógeno. Se obtuvo solo un 50% de efectividad en este tipo de inoculación. Evaluaciones a) Incidencia de daño en yemas. A los 7, 15 y 21 días, post inoculación se evaluó el porcentaje de yemas atizonadas, evaluándose el total de yemas presentes en las ramas a las que se les practico heridas con lija. b) Poblaciones epifitas Setenta y dos horas después de realizada la inoculación, se tomaron 5 yemas por repetición, las que fueron maceradas en forma separada, en buffer de extracción por 2 horas, luego de lo cual 1 ml fue sembrado en placas Petri con agar B de King y puestas en incubación por 48 hrs a 25°C, luego de lo cual se determino el porcentaje de yemas por repetición, con presencia de Pseduomonas syringae. 5. RESULTADOS Los datos fueron sometidos a test de normalidad y homocedasticidad, siendo la prueba de Shapiro Wilks no significativa (P= 0.422), por lo tanto normal, así mismos la prueba de Homocedasticidad de Barllet fue no significativa P= 0.25, por lo tanto se cumplió con el supuesto de homogeneidad de varianzas, permitiendo la aplicación de ANDEVA, la que no dio un efecto significativo de los factores tratamiento en la evaluación de los 15 días. (P= 0.059) y si para momento de aplicación (P< 0.05), sin interacción entre ambos (P= 0.059);io un efecto significativo de los factores tratamiento en la evaluación de los 21 días. (P< 0.01) y momento de aplicación (P< 0.05), sin interacción entre ambos (P< 0.01). Pese a la no significancia del Andeva a los 15 días, se presentan los datos por la fuerte tendencia que presentan, así en el grafico 1 se aprecia, que los mejores tratamientos, serian las aplicaciones de Nacillus en cualquiera de las fechas, independiente de una aplicación previa de acido peracético, pese a lo cual se aprecia una tendencia a que la adición del acido incrementa las diferencias entre Nacillus y el antibiótico. Los tratamientos compuestos por Strepto Plus y Bs QST, solo presentando diferencias significativas con el control cuando fueron aplicados un día previo a la inoculación no existiendo diferencias en las otras fechas de aplicación. Incidecnia (yemas atizonadas %) 25 a 20 a a a a a 15 a ab ab bc b b bc 10 bc bc bc bc c 5 0 1 dia 7 dias 15 dias Días de aplicación previo a inoculación. Testigo positivo Ac. per. Strepto Plus Bs QST Nacillus Nacillus + Ac. Per. Grafico 1. Incidencia %, de daño 15 días post inoculación, de Pseudomonas syringae pv. syringae en yemas de plantas de cerezo bajo distintos momentos y tratamientos de control (P= 0.059). Así tenemos que el mayor porcentaje de control en la evaluación 15 días después de inoculación, lo tienen los tratamientos con Nacillus ®, independiente de la adición de Ac. Peracetico, manteniendo niveles de control sobre el 60% con diferencia de 1 día entre aplicación e inoculación y no menores al 50%, con diferencia de 15 días. 100 a 80 a a a Control % ab b 60 abc b b bc 40 c c cd 20 d d 0 1 dia 7 dias 15 dias Días entre aplicacion e inoculación Ac. per. Strepto Plus Bs QST Nacillus Nacillus + Ac. Per. Grafico 2. Porcentaje de control 15 días post inoculación Pseudomonas syringae pv. syringae en yemas de plantas de cerezo bajo distintos momentos y tratamientos de control (P=0.059). En el grafico 3 (evaluación a los 21 días), se aprecia que las plantas testigos incrementan en mayor medida su nivel de incidencia respecto a la evaluación previa, a diferencia del resto de los tratamientos. Al día después de la inoculación solo el tratamiento de acido per acético no presento diferencias significativas con el testigo, mientras que los mejores tratamientos, fueron ambos consistentes en Nacillus ®, con y sin acido per acético, seguidos por el tratamiento químico basado en aplicaciones de estreptomicina y luego por Bacillus QST 713. A los 7 días se mantiene la misma tendencia, mientras que con aplicaciones 15 días previo a inoculación, solo los tratamientos basados en Nacillus ®, y tratamiento químico, fueron capaces de diferenciarse del testigo. Por lo tanto, se puede señalar que el acido per acético solo no entrega protección residual; Bacillus QST 713 logra niveles de protección significativos de hasta 7 días, mientras que aplicaciones de estreptomicina, Nacillus ® y Nacillus ® mas acido peracético, entregan protección hasta 15 días, existiendo una tendencia a que la combinación de Nacillus ® + acido peracético mejore el desempeño del primero, pero sin diferencias significativas con Nacillus ® solo. Incidecnia (yemas atizonadas %) 70 a 60 a a 50 ab a ab ab b b 40 bc bc c 30 c cd d b bc c 20 10 0 1 dia 7 dias 15 dias Días de aplicación previo a inoculación Testigo positivo Ac. per. Strepto Plus Bs QST Nacillus Nacillus + Ac. Per. Grafico 3. Incidencia %, de daño 1 días post inoculación Pseudomonas syringae pv. syringae en yemas de plantas de cerezo bajo distintos momentos y tratamientos de control (P< 0.05). Los porcentajes de control con 1 día de diferencia entre aplicación e inoculación, se mantuvieron cercanos al 80% para todos los tratamientos, no existiendo grandes diferencias entre ellos, a los 7 días, los tratamientos con Nacillus ® y Strepto Plus, bajan a cerca de un 40% sin diferencias entre ellos, pero superiores a Bacillus QSt y Ac. Per acético, y sin diferencias con los niveles de control a los 15 días, mientras que ac. Peracético y Bacillus QST, siguen bajando.( Grafico 4). 120 a a 100 a a a Control % 80 b 60 b bc b b bc 40 cd bc cd d 20 d 0 1 dia 7 dias 15 dias Días entre aplicacion e inoculación Ac. per. Strepto Plus Bs QST Nacillus Nacillus + Ac. Per. Grafico 4. Porcentaje de control 21 días post inoculación Pseudomonas syringae pv. syringae en yemas de plantas de cerezo bajo distintos momentos y tratamientos de control (P< 0.05). Al evaluar el efecto sobre poblaciones epifitas (grafico 3), todos los tratamientos muestran una disminución significativas (P< 0.059, con aplicaciones 1 día pre inoculación, todos los tratamientos mostraron efecto significativo, siendo el acido peracético el único con presencia de poblaciones epifitas, diferenciándose tanto del testigo, como del resto de los tratamientos. En aplicaciones a los 7 días, solo el manejo con antibiótico y los tratamientos con Nacillus® mostraron diferencias con el testigo, mientras que a los 15 días, solo los tratamientos con Nacillus ® tienen efecto significativo sobre las poblaciones epifitas en las yemas. Poblaciones epifitas (% yemas con presencia) 120 a a ab ab a a a 100 80 ab 60 b b b 40 20 0 1 dia 7 dias 15 dias Días de aplicación previo a inoculación Testigo positivo Ac. per. Strepto Plus Bs QST Nacillus Nacillus + Ac. Per. Grafico 3 Incidencia (%) de poblaciones epifitas de Pseudomonas syringae pv. syringae en yemas de plantas de cerezo bajo distintos momentos y tratamientos de control (P< 0.05). Conclusiones Todos los productos evaluados, mostraron un efecto de control tanto sobre el daño causado, como sobre las poblaciones epifitas de Pseudomonas syringae pv. syringae, cuando existía una diferencia de un día entre momento de aplicación e inoculación del patógeno. Con diferencias de 7 y 15 días entre aplicación e inoculación, solo los tratamientos consistentes en Strepto Plus y Nacillus ® con o sin ac. Peracético, tiene un efecto de control sobre daño como poblaciones epifitas de Pseudomonas syringae pv. syringae. Dado que el presente ensayo considero la generación de heridas e inoculación del patógeno en forma artificial, se considera que el nivel de control de Nacillus ® con y sin acido peracético y Strepto Plus, logra niveles de protección aceptables por 15 días, en el periodo de brotación a floración, en ausencia de lluvias, condiciones en las que se desarrollo el ensayos.