efecto de la cauterizacion del ducto insicivo del organo

EFECTO DE LA CAUTERIZACION DEL DUCTO INSICIVO DEL ORGANO
VOMERONASAL SOBRE LA DENSIDAD OSEA Y TESTICULAR DE
BOVINOS BOS INDICUS DE LA RAZA NELORE, EN LA CIUDAD DE
JANAÚVA, ESTADO DE MINAS GERAIS-BRASIL
Iván R. Rojas Cometa, William Vargas Tapias
UNIVERSIDAD DE CIENCIAS AMBIENTALES APLICADAS UDCA
PROGRAMA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
Bogotá D.C.
2010
OVN | 2
HOJA DE EVALUACIÓN
NOMBRES: Iván R. Rojas Cometa, William H. Vargas Tapias
TITULO: Efecto de la cauterización del ducto incisivo del órgano vomeronasal
sobre la densidad ósea y testicular de bovinos bos indicus de la raza Nélore, en
la ciudad de Janaúva, estado de Minas Gerais-Brasil
Tesis presentada al programa de pregrado de
Medicina Veterinaria y Zootecnia de la
Universidad de Ciencias Aplicadas Ambientales
para la obtención del título Medico Veterinario
Zootecnista.
Fecha:____/____/____
DOCENTES EVALUADORES
Dr.__________________________
Institución_______________________
Firma________________________
Calificación______________________
Dr.__________________________
Institución_______________________
Firma________________________
Calificación______________________
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DEDICATORIA
A
nuestros
padres
y
hermanos quienes
siempre
han sido nuestro
apoyo
fundamental y quienes han
formado en nosotros
un
carácter ético y moral.
Ustedes siempre fueron el
pilar en el cual nos apoyamos
para hoy llegar a la sima.
OVN | 4
AGRACEDIMIENTOS
A Dios por la vida, por iluminar nuestro camino y colocar personas
maravillosas alrededor nuestro.
A nuestros padres Rodrigo y Pedro por su amor ante todo y por que con su
ejemplo de vida nos han dado las herramientas necesarias para salir
adelante.
A nuestras madres Eunice y Melba quienes con su constancia y
perseverancia nunca nos permitieron desfallecer en los momentos de dificultad
y nos enseñaron el valor de perseguir nuestros sueños.
A nuestras hermanas Angélica y Jhoana y a nuestro hermano Darío por su
paciencia y cariño incondicional.
A nuestro director Prof. Dr. Germán Arturo Bohórquez Mahecha y su familia por
todas sus enseñanzas científicas, profesionales, y personales, por sus
consejos de vida y esa calidad humana que los caracteriza y que le permitió
acogernos como dos miembros más de su familia.
A nuestro codirector Prof. Leonardo Gaona por recibirnos y apoyarnos en
nuestra ambición de ser profesionales.
Al Dr. Lucas Luz Emerick por su disposición incondicional para colaborarnos
en la parte científica.
A nuestra colega y compañera Catalina Huertas, por su incansable trabajo y
agradable compañía durante desarrollo experimental de la investigación.
A nuestro gran amigo y también colega Guilherme Lamego, quién junto a su
familia nos hicieron olvidar la nostalgia de estar lejos de nuestro país y nuestras
familias. Marcia, Cesar, Carolina, Henrique y Gabriel, muchas gracias.
A la facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad de Ciencias
Aplicada Ambientales UDCA y la facultad de Medicina Veterinaria de la
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Universidad Federal de Minas Gerais UFMG y los respectivos docentes de
estos planteles.
A nuestros amigos y colegas de pregrado por el apoyo y convivencia,
especialmente a Paola Duarte, Diana Duarte, Laura Rodas, Claudia Medina,
Pilar Cardenas, Miriam Murcia, Edilson Aredondo, Diego Martinez.
A nuestros amigos de desconcentración Gelmo Borrero, Ivan Garzon, Julian
Tibaduiza por las conversaciones y por los momentos alegres.
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EFECTO DE LA CAUTERIZACION DEL DUCTO INSICIVO DEL ORGANO
VOMERONASAL SOBRE LA DENSIDAD OSEA Y TESTICULAR DE
BOVINOS BOS INDICUS DE LA RAZA NELORE, EN LA CIUDAD DE
JANAÚVA, ESTADO DE MINAS GERAIS-BRASIL1
Germán A. Bohórquez Mahécha2
Leonardo Gahona3
Iván R. Rojas Cometa4
Willian H. Vargas Tapias5
2010
RESUMEN
Para este estudio fueron empleados 30 toros, los cuales fueron sometidos a
tres tratamientos distintos, 11 animales enteros con cauterización del ducto
incisivo del OVN, 11 enteros sin cauterización y 8 castrados, todos con una
edad promedio de 18 meses, y un peso aproximado de 333 Kg, con el fin de
determinar los efectos de la cauterización del ducto incisivo del OVN sobre
la producción de testosterona testicular y la densidad ósea. 6 meses
después de realizados los tratamientos los animales fueron sacrificados.
Posterior al sacrificio se colectaron muestras de hueso y testículo, para
inclusión en metacrilato, consecutivamente los bloques fueron seccionados
siguiendo técnicas clásicas de estudios morfomértricos, éstos fueron
colocados sobre láminas histológicas, coloreadas con azul de toluidinaborato y analizadas en microscopia de luz. Fue medida la proporción
volumétrica de las células de Leydig de los testículos de los toros tratados y
los toros control, posteriormente estos datos fueron correlacionados entre
los tres grupos, a la par con otros datos obtenidos como la densidad ósea y
la ganancia de peso de los tres grupos; en donde se encontró que el grupo
tratado presenta un volumen de células de Leydig menor a la grupo control,
lo que evidencia una clara reducción en la producción de testosterona en los
animales tratados, que es acorde a las marcadas tendencias de este grupo a
ser animales intermedios en cuanto a ganancias de peso, producción de
testosterona y densidad ósea.
Palabras Clave: Órgano vomeronasal, densidad ósea, células de Leydig,
ganancia de peso.
Trabajo de grado en modalidad investigación.
Financiado por UFMG. Departamento de Zootecnia
2 Director. Investigador Instituto de Ciencias Biológicas UFMG.
3 Codirector. Docente Carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia.
4 Estudiante último semestre, Carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia.
5 Estudiante último semestre, Carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia.
1
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LISTA DE FIGURAS
Grafico – 1 Relación porcentual de ganancia de peso entre toros enteros
(control), toros con cauterización del órgano vomeronasal (tratados), y
novillos con castración por el método de orquiectomia bilateral (castrados).
Belo Horizonte, 2009…………………………………………………………….55
Grafico – 2 Relación en kilogramos de la ganancia de peso entre toros
enteros (control), toros con cauterización del órgano vomeronasal (tratados),
y novillos con castración por el método de orquiectomia bilateral (castrados).
Belo Horizonte, 2009……………………..……………………………………56
Grafico – 3 Relación en kilogramos en el peso de la canal entre toros
enteros (control), toros con cauterización del órgano vomeronasal (tratados),
y novillos con castración por el método de orquiectomia bilateral (castrados).
Belo Horizonte, 2009……………………………………………………..……..57
Grafico – 4 Relación en la densidad ósea entre toros enteros (control),
toros con cauterización del órgano vomeronasal (tratados), y novillos con
castración por el método de orquiectomia bilateral (castrados) Belo
Horizonte,
2009………….…………………………………………………………………….58
Grafico – 5 Relación en gramos en el peso de los testículos entre toros
enteros (control), toros con cauterización del órgano vomronasal (tratados)
Belo Horizonte, 2009…………………………………….……………………..59
Grafico – 6 Relación volumétrica del núcleo de las células de leydig los
testículos entre toros enteros (control), toros con cauterización del órgano
vomeronasal (tratados). Belo Horizonte, 2009………………………………60
OVN | 8
Gráfico 7- Relación entre el volumen de las células de leydig (µm 3) y
peso testicular (gr) para animales sometidos a diferentes tratamientos en la
evaluación del efecto de la cauterización del ducto incisivo del OVN en toros.
Belo Horizonte (Brasil), 2009…………………………………………………65
Gráfico 8- Relación entre el volumen de las células de leydig (µm 3)
y
densidad ósea (Kg/m3) para animales sometidos a diferentes tratamientos
en la evaluación del efecto de la cauterización del ducto incisivo del OVN en
toros. Belo Horizonte (Brasil), 2009…………………………………………65
Gráfico 9- Relación entre el volumen de las células de leydig (µm3)
peso de
la
carcasa
(Kg)
y
para animales sometidos a diferentes
tratamientos en la evaluación del efecto de la cauterización del ducto incisivo
del OVN en toros. Belo Horizonte (Brasil), 2009……….…………………65
Gráfico 10- Relación entre el volumen de las células de leydig (µm3)
ganancia de peso
y
(%) para animales sometidos a diferentes tratamientos
en la evaluación del efecto de la cauterización del ducto incisivo del OVN en
toros. Belo Horizonte (Brasil), 2009…………………………………………65
Gráfico 11 - Relación entre el la densidada osea (Kg/m3 ) y ganacia de
peso (Kg) para animales sometidos a diferentes tratamientos en la
evaluación del efecto de la cauterización del ducto incisivo del OVN en toros.
Belo Horizonte (Brasil), 2009…………………………………………………65
OVN | 9
LISTA DE TABLAS
Tabla 1 - Deshidratación de las muestras en series decrecientes de etanol
con tiempos establecidos, para iniciar el proceso de preinfiltracion de las
muestras. Belo Horizonte, 2009………………………………………………67
Tabla 2 – promedio de los datos tomados para peso canal, volumen de
células de Leydig, peso testicular, ganancia de peso, de los tres grupos
experimentales. Belo Horizonte, 2009…………………………………….…68
Tabla 3 – Peso en canal, volumen de células de Leydig, peso testicular,
ganancia de peso, y densidad ósea
de cada uno de los grupos
experimentales. Belo Horizonte, 2009………………………………………….68
OVN | 10
LISTA DE ABREVIATURAS Y SIMBOLOS
OVN
órgano vomeronasal
SOP
sistema olfatorio principal
cm
centímetros
GnRH
hormona liberadora de gonadotropina
SOA
sistema olfatorio accesorio
Km
kilómetros
μm
micras
SVN
sistema vomeronasal
g
gramos
T°
temperatura
mm
milímetros
ICSH
hormona estimulante de las células intersticiales
ATP
adenosin trifosfato
ADN
acido desoxinucleico
MG
Minas Gerais
BH
Belo Horizonte
ICB
Instituto De Ciencias Biológicas
UFMG
Universidad De Minas Gerais
Kg
kilogramos
ml
milímetros
OVN | 11
C°
centígrados
PVC
policloruro de vinilo
ANOVA
análisis múltiple de varianza
nm
nanómetros
REα
receptores de estrógeno alfa
REβ
receptores de estrógeno beta
DMO
densidad mineral ósea
TGF
factor de crecimiento transformador
IGFs
factor de crecimiento semejante a insulina
PTH
paratormona
IL-
interleuquina
E2
prostaglandina
FGF
factor de crecimiento fibroblastico
OPG
osteoprotegerina
OVN | 12
INDICE
Paginas
1.0.
INTRODUCCION………………………………………………………….14
1.1.
2.0.
Objetivos…………………………………………………………..20
Revisión de literatura….………………………………………………..21
2.1.
Introducción del órgano vomeronasal………………………21
2.1.1. Anatomía del órgano vomeronasal…………………..23
2.1.2. Histología del órgano vomeronasal…………………25
2.1.3. Funciones del órgano vomeronasal…….…………..26
2.2.
Testículos ………………………………………………………..29
2.2.1. Introducción de los Testículos...…….……………… 29
2.2.2. Anatomía de los testículos ……….…………………..31
2.2.3. Funciones de los testículos….……………………….33
2.2.4. Histología testicular.…………………………………...36
2.2.5. Espermatogénesis……………………………………...40
2.3.
3.0.
Andrógenos y hueso…………….…………………………….45
MATERIAL Y METODOS……...……………………………………….51
3.1.
Lugar y ejecución del proyecto……………………………... 51
3.2.
Animales experimentales y criterios de selección.……….51
3.3.
Toma de muestras…………………………………………..….52
3.3.1. Peso de los animales en la edad de sacrificio……..53
3.3.2. Toma de muestras de fragmento de hueso………...53
3.3.3. Toma de muestras de testículo……………………….54
3.4.
Criterio de exclusión…………………………………………...54
3.5.
Determinación densidad ósea…………………………….....55
OVN | 13
3.6.
Histología de hueso y testículo……………………………….56
3.6.1. Datos histológicos de hueso………...........................58
3.6.2. Datos histológicos de testículo……………………….60
3.7.
Determinación de la producción de testosterona…………61
3.7.1. Volumen de las células de leady……………………..61
3.8.
Análisis de datos obtenidos ………………………………….62
3.8.1. Análisis estadístico..…………………………………...63
4.0.
Resultados……………………………………………………………….64
4.1.
Resultados descriptivos………………………………………64
4.2.
Resultados estadísticos………………………………………70
5.0.
Discusión ………………………………………………………………. 71
6.0.
Conclusiones …………………………………………………………...79
7.0.
Referencias.......................................................................................81
OVN | 14
1. INTRODUCCION
En el mercado de ganado destinado a la ceba y el sacrificio hoy en día se
tiene principalmente dos tipos de manejo, La ceba de novillos castrados y la
de novillos enteros, cada uno de ellos con sus ventajas y desventajas.
La ceba de novillos enteros dificulta su manejo, acarreando problemas para
el productor; debido a su conducta sexual y agresiva dentro del rebaño.
Los animales castrados destinados a sacrificio tienen un comportamiento
mucho más dócil, pero un desarrollo corporal más lento que el de los
animales enteros, debido a la ausencia de la testosterona testicular que
tiene funciones bien definidas en la expresión de los rasgos masculinos y
por ende en la proporción de musculo, hueso y grasa (Restle, et AL, 2000),
siendo en estos mayor la cantidad de grasa en la canal debido a su extrema
quietud, haciendo de ellos unos animales más leves.
Por otra parte, se han realizado estudios de los efectos de los andrógenos
sobre el hueso, demostrando así, que existe una alta correlación entre los
niveles de andrógenos y la densidad ósea, siendo que a mayor cantidad de
andrógenos mayor densidad ósea. Lo cual quiere decir que el tener
animales más pesados es posible si se mantienen altos los niveles de
andrógenos, que en el caso de los machos bovinos el más importante es la
testosterona producida en los testículos, es decir, debido al efecto de la
OVN | 15
testosterona producida en los testículos, los animales enteros son animales
que tienen un mejor desempeño productivo y alcanzan el peso de sacrificio
más prontamente en relación con los animales castrados, a demás de ser
animales con menor cantidad de grasa y por el contrario mayor cantidad de
musculo y hueso, lo que representa unos animales más pesados (Bavera y
Peñafort. 2006)
Pero en este punto es donde se evidencian los problemas de manejo, ya
que esa testosterona también despierta en los animales conductas
territoriales que finalmente se ven representadas en una actitud más
agresiva que dificulta su manejo. Por esto es que se utiliza actualmente la
castración en rebaños de engorde, ya que retirando los testículos se pierde
la mayor fuente de producción de testosterona, y juntamente las conductas
agresivas de los animales (Azambuja, et al, 2007). Pero no solo se retiran o
se pierden la testosterona testicular y la agresividad de los machos, también
se pierde el efecto de la testosterona sobre el desarrollo tanto muscular
como esquelético de los animales, y por ende gran parte de su capacidad
productiva.
El método de la castración por orquiectomia bilateral, realizada en este tipo
de animales, aparte de generar pérdidas fisiológicas en el desarrollo futuro
del animal, sugiere un periodo de ganancia de peso negativa en los días
posteriores a la castración, debido al traumatismo causado por el
procedimiento (Redvet, 2009).
OVN | 16
La castración tiene como atractivo principal, que muchas veces se vuelve el
factor decisivo, facilitar el manejo, ya que vuelve a los animales más dóciles,
permite mezclar machos y hembras
elimina conductas de agresividad
sexual (Azambuja, et al, 2007).
Otra ventaja observada es que las características cárnicas de los animales
castrados son de mejor calidad y de mayor aceptación en el mercado que
las de los animales enteros, ya que los últimos presentan una carne con
menos contenido de grasa, más oscura, más dura y de menor palatabilidad.
(Vaz, Restle, 2000)
Los bovinos enteros, por su parte presentaran mayor velocidad de ganancia
de peso y serán más eficientes en la transformación de los alimentos
ofrecidos en
peso vivo, producen cerca de 10% más de peso que los
castrados.
Cuando las canales de bovinos enteros y castrados son comparadas, los
resultados han demostrado que los animales enteros son superiores en peso
y conformación, así como presentan mayor proporción de musculo. (Bavera
y Peñafort. 2006).
Entretanto, estas ventajas, pierden valor comercial por la calidad de la canal,
principalmente, en función de la deficiencia de grasa de cobertura.
OVN | 17
Con la falta de cobertura de grasa, la canal de los bovinos enteros durante el
enfriamiento, desarrolla un oscurecimiento de la parte externa de los
músculos, que perjudica el aspecto y, consecuentemente, deprecia el valor
comercial. Esto justifica, en parte, el descuento que los mataderos
acostumbran imponer sobre el valor en el sacrificio de los animales enteros.
(Severin, et al, 2006)
Los efectos de la castración dependen del momento en que esta se realice.
Si se realiza antes de la pubertad ocasionara una completa interrupción del
desarrollo de las características sexuales secundarias, por falta de las
hormonas producidas por los testículos, lo que convierte al novillo en un
animal bien diferente del toro. Si la castración fuese realizada después de la
pubertad los efectos son menos pronunciados, causando apenas la
regresión de algunas características sexuales secundarias, alteraciones de
comportamiento y variaciones en el desempeño.
El mercado del ganado de carne hoy está necesitando de una nueva
alternativa que le permita al productor generar animales pesados en poco
tiempo y de fácil manejo. Trabajando con machos enteros logramos
animales pesados y precoces, pero el manejo se dificulta debido su
temperamento, con animales castrados logramos animales dóciles pero
perdemos en peso.
OVN | 18
Indiferentemente de los parámetros genéticos y raciales, uno de los factores
que influencia el peso de los animales es la distribución de sus distintos
componentes tales como musculo, vísceras, grasa y hueso, siendo
finalmente musculo y hueso los más importantes. Lo anterior aplica para los
animales que son comercializados en pie ya que el parámetro de
negociación es el peso vivo, lo cual incluye los pesos tanto de musculo,
grasa, vísceras y hueso.
Por tales razones es que se debe buscar la manera de obtener animales que
alcancen los niveles productivos de los animales enteros con la
mansedumbre de los animales castrados.
Para lograr esto se propone el uso de una técnica que a demás de ser
novedosa y sencilla tiene un fundamento científico y fisiológico bastante
amplio, se trata de la cauterización del ducto incisivo del órgano
vomeronasal.
El sistema vomeronasal es un sistema que no solo se encarga de la
percepción de feromonas, este sistema se conecta al hipotálamo y a otros
centros nerviosos del encéfalo, para desencadenar respuestas endocrinas
relacionadas con las conductas sexuales y/o grupales de los individuos, así
como también sobre las gónadas a través del eje hipotálamo-hipófisisgónadas (Halpern 1987).
OVN | 19
Con la cauterización del ducto incisivo del órgano vomeronasal en los
animales enteros lo que se busca es poner en el mercado animales con una
buena ganancia de peso, más dóciles y de fácil manejo para los
productores, ya que lo que se espera es que con la cauterización los
animales disminuyan el lívido y las actitudes agresivas de conducta grupal,
pero que su desempeño productivo sea tan bueno como el de los animales
enteros.
Teniendo en cuenta que la densidad ósea está directamente relacionada con
el peso vivo de los animales, podemos usar este dato como parámetro para
comparar los niveles productivos de los animales tratados con los animales
enteros y los animales castrados.
OVN | 20
1.1 OBJETIVOS
Objetivo general
Evaluar los efectos de la cauterización del ducto incisivo del órgano
Vomeronasal sobre la densidad ósea, la conformación testicular y la
producción de testosterona.
Objetivos específicos
a. Obtener datos como densidades Oseas, proporciones volumétricas del
testículo, niveles de testosterona y
medición de los núcleos de las
células de leydig en bovinos castrados, enteros y sometidos a bloqueo
del órgano Vomeronasal.
b. Realizar un
estudio estadístico
que
nos permita
analizar
el
comportamiento productivo, reproductivo y de ganancia de peso en cada
uno de los grupos de bovinos a estudiar.
c. Realizar un análisis de resultados que nos permita comparar las
densidades óseas, proporción de los compartimentos intersticial en los
testículos.
d. Obtener una serie de resultados que nos llevaran a descartar o confirmar
la hipótesis que existe sobre el OVN y su función.
OVN | 21
2.0 REVISION DE LITERATURA
2.1 Introducción
En el año 1809 se reportó la descripción de un órgano situado en la cavidad
nasal de los mamíferos conocido en nuestros días como órgano
vomeronasal (OVN) o de Jacobson. (Ludwig Jacobson 1783-1843,
anatomista). Jacobson dibujo la cabeza de un cuervo demostrando la
posición del órgano y los nervios a lo largo del septo nasal conduciendo el
órgano vomeronasal al bulbo olfatorio. Su descripción original fue basada
principalmente en animales domésticos en los cuales estaban
perros,
cerdos, caballo, vacas y ovejas y otros como león marino, búfalo, camello y
tigre. El órgano está ausente en algunos peces y en todas las aves, no se
encuentra en cocodrilos y camaleones sin embargo está presente en
serpientes donde está muy bien desenvuelto. (DOVING, K. B.; TROTIER, D
1998).
Jacobson describió un órgano que presentaba
serosas
y
una doble inervación con
abundantes glándulas
una irrigación
sanguínea
característica, y fue nombrado órgano vomeronasal de Jacobson por el
Anatomista. Después de eso Jacobson asumió que
descubrió un órgano
con función secretora y lo clasifico como un órgano secretorio, por esto
sospechaba que también fuera un órgano sensitivo.
TROTIER, D. 1998).
(DOVING, K.B.;
OVN | 22
Hasta en el siglo XIX se descubrió que el órgano tenia funciones sensitivas y
quimiorreceptoras por y fue desenvuelto en tejidos olfatorios de embriones
de cobras. (DOVING, K.B.; TROTIER, D. 1998).
Los vertebrados poseen un sistema olfatorio el cual esta divido en dos
sistemas los cuales difieren en su anatomía como en su función. Los dos
sistemas anteriormente citados son sistema olfatorio principal (SOP) y
sistema olfatorio
accesorio (SOA) o sistema vomeronasal (SVN)
(MENDOZA 1993)
El sistema olfatorio principal (SOP) es capaz de responder y reconocer una
grandísima gama de olores de diferentes tipos en los cuales están olores del
ambiente, olores ecológicos y olores sociales. (GUILLAMÓN, A; SEGÓVIA
1997) El sistema olfatorio accesorio (SOA) o sistema vomeronasal (SVN)
tiene la capacidad de responder a olores volátiles como a los no volátiles.
El sistema olfatorio accesorio (SOA) está directamente ligado a las
estructuras límbicas del cerebro las cuales son transmitidas
para el
desarrollo y expresión de comportamientos primarios como son el
comportamiento sexual, el comportamiento agresivo, el comportamiento
maternal y en la activación de vías neuroendocrinas
reproducción (POWER, J. B.; WINAS, S. 1975).
utilizadas en la
OVN | 23
2.1.1 Anatomía del Órgano Vomeronasal
El órgano vomeronasal
está situado en la base del septo nasal con
estructuras tubulares a lo largo de la porción
anterior del septo nasal que
se abre en una extremidad y forma un fondo de saco. La localización de esa
abertura varía de acuerdo a la especie, en bovinos se abre directamente en
la cavidad oral. El órgano vomeronasal consiste en un par de divertículos
tubulares, revestidos por una membrana mucosa y situados en la superficie
de la cavidad nasal en los dos lados del septo nasal. Este se encuentra
relacionado con los procesos palatinos del hueso incisivo y con el hueso
vómer. (KEVERNE, E. B. 1999). En los carnívoros, ungulados y primates
este órgano desemboca en el canal incisivo el cual llega a la cavidad bucal
atreves de un estrecho foramen. (BARONE, R.; LOMBARD, M. 1996)
(KEVERNE, E.B. 1999).
Los túbulos del órgano vomeronasal están separados del resto de la mucosa
olfatoria por una capsula formada por un cartílago hialino o por el propio
hueso vómer. Por dentro de la capsula, generalmente es encontrado un
parénquima con sangre. (KEVERNE, E.B 1999).
El órgano vomeronasal posee una
parte cóncava
y otra convexa esta
última es dotada de un epitelio pseudoestratificado ciliado
convexa por un epitelio
y
la parte
neuro-sensitivo especializado de este son
proyectados axones del nervio vomeronasal para el bulbo olfatorio teniendo
OVN | 24
conexiones
directas
con el hipotálamo medio basal,
órgano vomeronasal está íntimamente conectado
nervioso central más específicamente
responsable por la variación
de esa forma el
con áreas del sistema
con el sistema límbico que es
del comportamiento de reconocimiento
materno y reproductivo. (HALPERN, M. 1987).
En los bovinos aparece como un órgano par, tubular, hueco y que mide
entre 18 Y 25cm de acuerdo
al tamaño y edad de la raza, el extremo
posterior de la luz del tubo es ciego y el anterior es abierto en forma de
hendidura que se comunica con la cavidad nasal y con la cavidad oral. La
luz del órgano está recubierta de un epitelio quimiosensorial constituido por
dos tipos de neuronas bipolares especializadas. La
cara externa está
cubierta de células ciliadas no sensoriales. La cara interna de la cavidad es
cóncava y en ella se ubican las neuronas sensoriales que con sus largos
axones forman el nervio terminal vomeronasal, esas fibras forman dos o tres
troncos que entran al cráneo y terminan en el bulbo olfatorio accesorio o
bulbo vomeronasal, desde allí se conectan al hipotálamo y a otros centros
nerviosos del encéfalo, incluso con mecanismos de retroalimentación, para
desencadenar
respuestas
endocrinas,
reproductivas
y
conductuales
específicas a través del eje hipotálamo-hipófisis-gónadas. (POWERS, J.B.;
WINANS, S.S 1975.) (HALPERN, M. 1987).
OVN | 25
2.1.2 Histología del Órgano Vomeronasal
La organización histológica del (OVN), los receptores de neuronas primarios
del órgano presentan axones largos que penetran en la cavidad encefálica a
través de los forámenes de la lamina cribiforme subetmoide terminando en
el bulbo olfatorio accesorio. (DOVING, K. B.; TROTIER, D. 1998).
El lumen con forma creciente es revestido internamente por receptores de
neuronas y generalmente se encuentra lleno de fluidos provenientes de las
glándulas vomeronasales, las cuales se encuentran en las paredes dorsal y
ventral del lumen. (KEVERNE, E. B. 1999).
Estas glándulas presentan
cortos ductos secretorios. Lateralmente al lumen de estos túbulos son
encontrados
grandes vasos sanguíneos los cuales están inervados por
fibras del sistema nervioso autónomo que induce la vasodilatación o
vasoconstricción. (KEVERNE, E. B. 1999).
En la superficie convexa del órgano se encuentra una fila de células ciliadas
no sensoriales. En la parte inferior del órgano se encuentra
un tejido
cavernoso que fue llamado de ¨Cuerpo de Cogumelo¨ (DOVING, K. B.;
TROTIER, D. 1998).
OVN | 26
2.1.3 Funciones del Órgano Vomeronasal
El órgano vomeronasal hace parte de un conjunto de estructuras anatómicofuncionales, ubicadas en la cavidad nasal de los mamíferos, para detectar
distintas sustancias químicas provenientes del medio, como es el caso de
las feromonas. Así como el epitelio olfatorio, El órgano septal de Masera, El
órgano septal Gruneberg, y El sistema guanidilciclasa tipo D, El órgano
vomeronasal o de Jacobson tiene una función específica que es realizar la
detección de feromonas emitidas por otros individuos de la misma especie.
En 1987 ya se empieza a hablar sobre que el sistema vomeronasal era
importante el cual tenía efectos quimiorreceptores mediados por feromonas
en la regulación endócrina y comportamiento sexual, también fue
demostrado en serpientes que el sistema vomeronasal era muy importante
en la respuesta a las sustancias químicas de la presa.
En los últimos años al órgano vomeronasal le han descrito
algunas
funciones, los puntos más importantes;
1) se dice que hay una variedad de tipos de señales químicas, que van
desde las feromonas clásicas a la cualidad de las señales de olor las
cuales son muy importantes para la comunicación.
OVN | 27
2) El órgano vomeronasal es primariamente responsable por la
mediación de respuestas de algunas más no todas las señales
suministradas por las feromonas.
3) Los sistemas vomeronasal y olfatorio generalmente integrados para
mediar respuestas de señales odoríferas. (JOHNSTON, 1998).
Johnston en 2000 y posteriormente en 2001 definió señales químicas como
compuestos o misturas liberadoras por un individuo que afecta un segundo
individuo de la misma especie, y sugiere que ese término debe ser usado
como un término genérico para olores envueltos en la comunicación. En las
cuales se encuentran
feromonas (compuestos químicos simples que tiene
efectos de señales químicas), mistura de feromonas (mistura de péquenos
números de compuestos que son efectivos solamente en proporciones
precisas), grupos de olores (mezcla de grandes números de compuestos
que tiene efectos de señales químicas). El órgano vomeronasal en los
mamíferos tiene un papel importante en el comportamiento reproductivo y
sexual, también no se descarta la posibilidad de otras funciones como la
detección de algunos tipos de sustancias odoríferas, característicos por
bajo peso molecular. (SALAZR, I.; QUINTEIRO, P.S; CIFUENTES, J.M.
1995).
Las moléculas entran en el órgano vomeronasal a través de un mecanismo
bombeador inervado por los nervios eferentes del nervio naso palatino
que
succiona las moléculas y las disuelve en el moco además de eso
OVN | 28
algunos mecanismos comportamentales están envueltos en el transporte
de sustancias para el órgano vomeronasal. (DOVING, K. B.; TROTIER, D.
1998).
Algunos de estos mecanismos son:
1) El reflejo de Flehmen
que ocurre
durante la interacción
sexual
después de la percepción de olores en que el animal eleva la cabeza
y el labio superior y para de respirar por un momento. (DOVING, K.
B.; TROTIER, D. 1998).
2) La lambida es otro mecanismo utilizado por los toros después de
detectar las hembras en celo, el toro usa la lengua con el fin de
comprimir el paladar duro causando alteración en la presión del
órgano vomeronasal y por ese medio las sustancias químicas son
impulsadas para dentro del órgano. (DOVING, K. B.; TROTIER, D.
1998).
3) Hay otro mecanismo descrito en el hámster, en el cual se cree que
hay una estimulación en las neuronas
noradrenérgicas por las
sustancias odorantes presentes en la orina y fluidos vaginales, el
cual se encuentra situado en el hipotálamo provocando la inhibición
de la secreción de prolactina por la hipófisis anterior. La prolactina por
ser luteotrópica reduce la vida media del cuerpo lúteo, y con esto
generar una reducción de los niveles de progesterona permitiendo
un aumento en los niveles de GnRH, siendo permisivo el retorno del
crecimiento folicular. (DOVING, K. B.; TROTIER, D. 1998).
OVN | 29
2.2 TESTICULOS
2.2.1 INTRODUCCION
Los testículos son órganos pares, contenidos en la cavidad del escroto.
Poseen como los ovarios
una función
gametogenica
y una función
endocrina. La función gametogenica consiste en la producción de gametos
masculinos o espermatozoides, la estructura que está a cargo son los
túbulos seminíferos. La función
hormonas
sexuales
endocrina
masculinas
comprende la secreción de
(andrógenos),
principalmente
la
testosterona por células denominadas intersticiales o de Leyding. El término
griego para testículo es orchis, del cual se derivaron varios términos como
orquite (inflamación del testículo), orquiectomia (extirpación del testículo),
mesorquio, etc.
Los testículos en el toro deben ser similares en tamaño, aproximadamente
pesan de 350 a 400g y en su evaluación además de la palpación se tiene en
cuenta el diámetro testicular y se complementa con el análisis espermático
en el toro el testículo se halla dividido incompletamente por el mediastino
que actúa como un tabique parcial, la longitud de los túbulos seminíferos
en los toros se han calculado
de 4,8 km donde cada túbulo tiene
aproximadamente 200 micras de diámetro y se considera que el 80% del
peso del testículo
del toro está constituido por los túbulos seminíferos.
(DAVID, O. P.; MARIO, D. 2000).
OVN | 30
En los toros cada testículo se
origina de una gónada indiferenciada
localizada en la región abdominal del embrión, a medida que avanza la
gónada se transforma en un testículo, el peritoneo que recubre la cavidad
abdominal
se protruye
y forma
una invaginación
en la región del
gubernaculo de aspecto gelatinoso y abultado, se dirige hacia el escroto allí
por el proceso vaginal pasa al testículo el cual arrastra una porción de
peritoneo en el descenso hacia el escroto, el testículo del toro pasa por el
anillo inguinal profundó del canal inguinal, estos anillos poco a poco se
cierran y evitan que el testículo regrese nuevamente al abdomen, cuando el
canal inguinal no se cierra podemos encontrara que el testículo regresa y
nos dará origen a la criptorquidia, sin embargo esta no es la única alteración
que podemos encontrar durante el descenso de los
pueden configurarse inflamaciones
testículos, ya que
de las venas o varicoceles, también
puede organizarse verdaderos sacos
de agua o hidrocele. Cuando los
testículos permanecen dentro del abdomen del toso es infecundo a causa
de que se inhibe
la espermatogenesis
por el incremento de la T°, sin
embargo las células intersticiales siguen produciendo hormona masculina,
esto quiere decir que la retención de los testículos no impide la presentación
de las características masculinas solo que el semental
no produciría
espermatozoides, en el caso de que en el toro descienda solamente un
testículo se le conocerá como criptorquido unilateral generalmente el toro es
fértil pero no se recomienda su empleo como semental, ya que se considera
esta alteración como un defecto de herencia. (DAVID, O. P.; MARIO, D.
2000).
OVN | 31
2.2.2 Anatomía de Los Testículos
En los rumiantes los testículos están posicionados verticalmente en el
escroto, posee una forma ovoide y alargada. En el toro adulto miden 10.0 a
12.0 cm de largura y 6,0 a 8,0 cm de diámetro, presentan un peso medio
de 300 g, tales valores están sujetos a variaciones raciales siendo en los
testículos de bovinos europeos consistentemente mayores y más pesados
que los bovinos cebús, en los cuales el peso medio esta en torno de 250 g.
Los testículos
provienen
de la diferenciación
del sexo gonadal ene l
individuo (después de la diferenciación de sexo genético) por que las células
germinativas primordiales (gonocitos) van migrando para la crista gonadal
donde, por multiplicación y sobre influencia
del TDF (Factor De
Diferenciación Testicular), darán origen a los cordones sexuales primarios,
en este caso los cordones testiculares. (VALE FILHO, V.R 1997. 2v)
Los testículos están cubiertos por una capa de tejido conectivo dicha capa
es de aspecto blanquecino y muy resistente, se la conoce anatómicamente
como túnica vaginal visceral encontramos la túnica albugínea la cual
colabora
también en el sostén
de los testículos en su mayor parte el
testículo está compuesto de túbulos seminíferos y de células intersticiales.
(DAVID, O. P.; MARIO, D. 2000)
OVN | 32
Cada testículo presenta dos extremidades, extremidad apical y extremidad
caudal, y dos faceas, facea lateral y facea medial, y dos bordes, borde libre
y borde epididimal. Las dos extremidades receben el nombre de capitata y
caudata debido a ser relacionadas
respectivamente con la cabeza y la
cauda del epidídimo. En los rumiantes la extremidad capitata esta girada
dorsalmente y la extremidad caudata ventralmente, las faceas lateral y
medial son convexas, pero la facea medial, esta
girada para
el septo
escrotal. Esta presenta una convexidad menos acentuada que la facea
lateral.
El testículo del toro es oval y alargado, se encuentra suspendido dentro de la
bolsa escrotal por el cordón espermático, está compuesto de la arteria
espermática enrollada en forma de sinuosa por las venas espermáticas
que forman e l plexo por el plejo o plexo pampiniforme y por el musculo
cremaster
interno, el
extremo distal
del testículo
se encuentra fijo al
escroto por el denominado ligamento escrotal, los testículos descienden del
abdomen al escroto en un periodo de tiempo de
gestación. (DAVID, O. P.; MARIO, D. 2000)
cuatro meses
de
OVN | 33
2.2.3 Funciones Testiculares
El toro tiene un par de testículos que se encuentran en posición vertical uno
al lado del otro dentro del escroto, los
testículos tienen dos funciones
que son la de producir espermatozoides y la otra es la producción de la
hormona sexual masculina.
Los
testículos poseen dos funciones básicas, y controladas por las
hormonas gonadotroficas de la hipófisis las cuales son:
-
Función exocrina o citogenética que es ejercida por los túbulos
seminíferos y correspondiente a la producción
de gametos
masculinos: los espermatozoides
-
Función endocrina que consiste en la producción de hormonas
sexuales (por ejemplo: la testosterona producida por las células
intersticiales de leydig). (HAFEZ, E.S.E; 1982 720p)
El testículo en el toro es pendular con su eje longitudinal en posición
vertical, actualmente en el toro se utiliza
la medida
de la dimensión
testicular la cual es esta muy correlacionada con la medida del órgano
después de que este ha sido extirpado, esto permite entender que existe
una elevada correlación entre el diámetro testicular
del testículo. (DAVID, O. P.; MARIO, D. 2000)
y el peso propiamente
OVN | 34
La función de los testículos consiste en la formación de las células
germinativas masculinas (espermatozoides) y
testosterona,
bajo
la
influencia
de
la
la secreción de la
testosterona
ocurre
un
desenvolvimiento de las características sexuales secundarias masculinas y
el estimulo para la formación de semen. En las glándulas sexuales
accesorias la testosterona estimula la formación de substancias (glucosa,
fructosa, citrato) que son importantes para la capacidad de locomoción de
los espermatozoides y para la
capacidad de tampón
en el esperma.
(HAFEZ, E.S.E; 1982 720p). La formación de los espermatozoides se da en
los canalículos seminales (túbulos seminíferos) los cuales presenta un
trayecto acentuadamente curvilíneo y que final mente desembocan en la
rete testis. Entre los canalículos seminales se encuentran las células
intermediarias (células de leydig) en las cuales se procesa la formación de
testosterona bajo la influencia de ICSH.
Los canalículos seminales de disposición lobular, presentan un trayecto
acentuadamente
curvilíneo, a partir de la capsula
hasta la rete testis.
Através de las curvas de los canalículos se obtiene un enorme aumento de
la superficie de tejido formador de esperma. A partir de la rete testis salen
los ductos deferentes testiculares, através de los cuales se da el transporte
de los espermatozoides hasta el epidídimo y en los cuales ocurren los
proceso de maduración de los espermatozoides.
Los canalículos seminales consisten en varias
camadas celulares
sobrepuestas, que se delimitan para afuera con una membrana basal. Las
OVN | 35
células
inmediatamente próximas a la membrana (espermatogonias) se
dividen y forman los espermatocitos de primera línea, que pasan por medio
de una nueva división, a espermatocitos de segunda línea.
Los espermatocitos de segunda línea finalmente forman las espermátides
(pre-espermátides), que se transforman en espermatozoides. Durante
maduración de las epermatides
la
el tamaño de las células se reduce,
formándose la cola de los espermatozoides, la porción de la unión contiene
las mitocondrias
la cual fornece ATP
para el propio movimiento del
espermatozoide después de la eyaculación.
Entre las espermatogonias se
localiza las células basales de Sertoli, que con sus prolongaciones entran
profundamente en
el interior
de los canalículos seminales y llevan
espermatozoides en su superficie.
Las células basales presentan una
función trófica para los espermatozoides y forman una proteína capaz de
ligar la testosterona, con cuya ayuda la testosterona es transportada de los
testículos para el epidídimo. (E. KOLB,1984)
OVN | 36
2.2.4 Histología Testicular
El ciclo del epitelio seminífero es la progresión através de una completa
serie de modificaciones celulares de localización definida
en forma de
camadas escalonadas gradualmente, a lo largo del túbulo seminífero. El
tiempo requerido para esta progresión les la duración del ciclo del epitelio
seminífero y es único para cada especie, por ejemplo, en un toro es en torno
de 61 días. (Senger, 2003)
Dentro de cualquier sección
para evaluación microscópica
se puede
observar cuatro a cinco camadas de células germinativas, o sea, en un
corte donde se ven en un determinado estadio, se pueden observar cuatro a
cinco
generaciones de espermatogonias. Se debe resaltar que el tipo
celular mas inmaduro se encuentra próximo a la membrana basal y los
estadios más avanzados están localizados en la periferia de la célula de
sertoli. (Senger, 2003)
Los túbulos seminíferos comienzan en el fondo del saco, son retorcidos y
meden cerca de de 0,2 mm de diámetro por 30 a 70 cm largura. Ellos
terminan en la región posterior del testículo, en los túbulos rectos que se
anastomosan en una red de túbulos, que es llamada de red testicular de
donde parten de 8 a 15 ductos deferentes
cefálica del epidídimo.
que penetran en la porción
OVN | 37
Evaluando cortes histológicos de toros (raza Angus con 12 mese de edad)
con normal proceso de gametogénesis, se encontró 10.8% de túbulos
seminíferos seccionados sin la presencia de ninguna célula germinativa,
2,5% de espermatogonia
A1 5,5 % de espermatocitos en la fase de
paquiteno, 37,5% de espermátides arredondeadas, 33% de espermátides
alongadas y 10% de las secciones con espermátides maduras. En toros con
espermiogenesis imperfecta observaron que 90% de las secciones de los
túbulos no poseían ninguna célula germinativas y existían apenas algunas
espermatogonias A1, revelando la eficiencia de los cortes histológicos en
detectar animales con espermiogenesis imperfecta. (Moura. ; Erickson,
2001)
El número de células de sertoli por testículo no diferido con la
gametogénesis normal y anormal entre tanto el número de células de leydig
por testículo y el diámetro de los testículos de los animales normales fueron
mayores en cuanto el número de células de leyding por grama de
parénquima, fue menor para los animales normales comparados con los
animales que tenían espermatogenesis imperfecta. (Moura e Erickson, 2001)
Los niveles hormonales
no diferían entre los animales, animales con
espermiogenesis normal tenían niveles más bajos de testosterona y de la
misma forma algunos con la gametogenesis anormal tenían
niveles
elevados de esa hormona, reforzando la idea de la alta variabilidad de esta,
se tomo
otro hecho de relevancia, es que tales resultados pueden ser
explicados por el hecho de que son necesarios bajo niveles de testosterona
OVN | 38
para mantener la gametogénesis normal. De esa forma con base en esos
números observados parece probable que la causa de la reducción de
fertilidad en toros sea preferiblemente debido a los factores localizados en el
testículo que de la síntesis hormonal hipotálamo-hiposiario-gonadal en toros
maduros. (Moura e Erickson, 2001)
El
peso
testicular,
el
numero
de
receptores
de
andrógenos
intracitoplasmatico, el numero y volumen de las células de Leydig, el
diámetro de los túbulos seminiferos, el volumen y el tamaño del núcleo de
las células de sertoli, como el numero de espoermatogonias A1 y el numero
de espermatocitos primarios son características que son significativamente
correlacionadas entre sí, y además demostraron súbitas elevaciones en el
periodo pre puberal, y también se vio observado aumento de la testosterona,
tales resultados sugieren que la testosterona ejerce un control positivo en
sus propios receptores actuando como acción local en ese periodo.(MonetKuntz.;1984. Bagu.;2006).
Contando, tanto la testosterona intracelular como la sérica no fue altamente
correlacionada
con
características
asociadas
gametogénesis en conejos maduros, como:
con
la
eficiencia
el diámetro
de
del túbulo
seminífero, numero de células de sertoli por túbulo, la proporción de células
germinativas (espermatogonia, espermatocitos primarios y espermátides
arredondeada y alargada) y la razón de células de sertoli y las células
germinativas. Solamente el porcentual de volumen nuclear de las células de
leydig (r = 0,82) y el número de células de leydig por gama de testículo
OVN | 39
(r=0,83) fue altamente relacionada con los niveles de testosterona sérica
intratesticular. Los resultados soportan la idea de que a partir de cierta
concentración de testosterona adquirida en el evento de la pubertad (=25%
de la cantidad normal) es necesario bajo nivel de la hormona para mantener
la espermatogenesis normal del conejo. (Castro.;2002).
Los túbulos seminíferos consisten en una túnica de tejido conjuntivo, una
alamina basal y una camada interna formada por un epitelio especial, el
cual es un
epitelio germinativo
o seminífero, donde se originan los
espermatozoides. El tejido conjuntivo que envuelve los túbulos seminíferos
contiene las células mióides con características de células de musculatura
lisa.
OVN | 40
2.2.5 Espermatogenesis
La espermatogenesis constituye una secuencia de transformaciones por las
cuales la espermatogonia pasa hasta dar origen a una célula complexa y
altamente especializada, el espermatozoide. La espermatogenesis ocurre
en un ambiente único criado por los testículos. El testículo de los mamíferos
consiste de dos distintos compartimentos:
-
Un compartimento intersticial con contenido de células de leydig,
macrófagos, vasos sanguíneos, linfáticos y células semejantes a
los fibroblastos.
-
El otro compartimento de túbulos seminíferos,
el cual es
delimitado por células peritubulares mioides, las células de sertoli,
en
las cuales en su citoplasma ocurre la espermatogenesis.
(Castro,1955).
El epitelio germinativo es constituido por las células de Sertoli y las células
que constituyen el linaje espermatogenico o seminal. Las células del linaje
seminal se disponen de cuatro a ocho camadas, las cuales ocupan el
especio entre la lamina basal y la luz del túbulo semiínfero, esas células se
dividen varias veces y se diferencian en espermatozoides. (E. KOLB, 1984)
OVN | 41
El proceso de la espermatogenesis puede ser divido en tres distintas fases:
(1) La fase espermatogonial,
durante la cual la espermatogenesis
prolifera y origina un espermatocito primario, en cuanto mantenga la
populación espermatogonial necesaria para la continuación del
proceso conocido como renovación de las células del tronco o del
linaje germinativo.
(2) La fase meiotica, envolviendo divisiones
de espermatocitos y
formación de espermátides (células haploides).
(3) La fase de diferenciación o fase espermatogenica, en la cual
espermátides se transforman en células altamente especializadas o
espermatozoides. (Castro,1995).
El proceso se inicia con la célula germinativa primitiva la espermatogonia,
la cual es una célula que se localiza próximo a la membrana basal. Las
espermatogonias se dividen por mitosis y las células neoformadas pueden
seguir dos caminos: (a) continúan semejantes a la célula madre y sufren
nuevas mitosis, portando una fuente
de espermatogonias; (b) paran de
dividirse y crecen, tornándose mayores que las espermatogonias siendo
llamadas de espermatócitos de primera orden o citos I.
Estas últimas células entran en meiosis, un proceso reduccional de numero
de cromosomas que consiste en dos divisiones celulares, habiendo síntesis
de DNA solamente antes de la primera división. Al iniciarse la primera
división meiotica, o cito I tiene 46 cromosomas mas el doble de la cuantidad
OVN | 42
de DNA (4N). Como la profase de esa división es muy demorada, pasando
por las fases de leptóteno, zigóteno, paquíteno e diplóteno, la mayoría de
los citos vistos
en preparados histológicos están en esa fase (primera
profase de la meiosis).
Los citos I son las mayores células del linaje espermatogenica
caracterizan por
y se
la presencia de cromosomas en diferentes fases de
condensación. De esa primera división meiótica resultan células menores
llamadas espermatogonias de segundo orden o citos I, los cuales poseen
23 cromosomas cada uno. Por lo cual ocurre una disminución del número
de cromosomas por célula, por eso cada cromosoma es duplo, de modo que
el núcleo del espermatocito II tiene la cantidad de DNA típica de la especie
(2N). Los citos II están más próximos de la luz de los túbulos seminíferos y
es difícil observarlos en cortes histológicos, ya que entran después en la
segunda división
meiotica. De esta resultan
las espermátides
con 23
cromosomas y apenas la mitad del DNA de la especie, (N) ya que en la
segunda división meiotica no hay síntesis de DNA.
Las espermatides se
caracterizan
por presentar
un pequeño tamaño,
nucleó con zonas de cromatina condensada, y por eso se localizan casi en
la luz de los túbulos seminiferos. Las espermátides termina la fase de las
divisiones celulares de la espermatogenesis. De ahí para adelante cada
espermatide sufrirá unos procesos de modificaciones complejas, llamadas
espermiogenesis, que lleva a la formación de los espermatozoides.
OVN | 43
La espermatogenesis puede ser resumida de la siguiente forma:
(1) El complejo de Golgi produce una vesícula que contiene
una
partícula densa, el acrosoma. Esa estructura vesicular se mueve junto
con el complejo de Golgi, en dirección al núcleo, ligándose a este y
cubriendo parte de su superficie, formando el capuz cefálico o
acrosomico.
(2) Simultáneamente los centriolos migran y se modifican, de uno de ellos
surge un flagelo que formara la cauda del espermatozoide. El otro
forma un anillo en torno de la cauda.
(3) Al mismo tiempo, el
citoplasma
se disloca en dirección asía
flagelo, cubriendo parte de este. A medida
el
que los procesos
avanzan, partes del citoplasma se destacan de la célula, reduciendo
considerablemente su volumen.
(4) Gradualmente, las mitocondrias
se dirigen para el flagelo,
colocándose como un espiral en torno de la parte inicial del
espermatozoide, esa localización de las mitocondrias es un ejemplo
de concentración de esos organelos en lugares relacionados con el
movimiento celular y el grande consumo de energía.
(5) El núcleo se achata y toma una forma de almendra. En consecuencia
del procesos descrito, el espermatozoide maduro presenta una
presencia de varias enzimas, entre ellas hialorunidasa, fosfatas acida,
neuraminidasa y proteasa.
OVN | 44
(6) Los
espermatocitos
y
células
subsecuentes
de
la
línea
espermatogenica, resultantes de la división de una espermatogonia,
no
se
separan
totalmente,
estando
unidas
por
puentes
citoplasamaticos. Esos puentes intercelulares tienen importancia en la
coordinación de la espermatogenesis, posibilitando el tránsito de
moléculas informacionales entre esas células.
(7) El flagelo del espermatozoide tiene función motora y la localización de
las mitocondrias está relacionado con el fornecimiento de la energía
para el movimiento flagelar. La fuente
de esa energía son los
glicosidos, principalmente fructuosa, producida por las glándulas
anexas.
(8) La espermatogenesis no es sincronizada en toda la extensión del
túbulo seminífero, pero ocurre como si fuese por ondas, a lo largo de
cada túbulo. Eso explica porque se ven a lo largo de esos túbulos
regiones con fases diferentes de la espermatogenesis.
OVN | 45
2.3.
ANDROGENOS Y HUESO
El dimorfismo sexual asumido por el hecho de que los hombres poseen un
esqueleto mas fuete y denso con mayor masa muscular que el de las
mujeres sugiere la hipótesis de que, por lo menos en parte, sea debido al
mayor nivel de andrógeno circulante en los hombres (Clarke e Khosla,
2008). Tal hecho llega a sugerir que La diferencia en peso corporal de
animales enteros en relación a los castrados sea también, aunque no
solamente, a su efecto directo o indirecto sobre los huesos.
Los andrógenos son esteroides caracterizados como hormonas anabólicas,
con efectos en varios tejidos incluso el cerebro, el sistema inmune, el
cardiovascular, el músculo, el tejido adiposo, el hígado y el hueso.
Entretanto, los efectos específicos de los andrógenos en el esqueleto
permanecen probablemente caracterizados y entendidos. La osteoporosis es
frecuentemente asociada con el hipogonadismo tanto en hombre como en
mujer, siendo que en ellas, tal enfermedad es bastante frecuente después
de la menopausia, de esa forma los esteroides están envueltos en la
manutención de la salud del esqueleto. Aunque el estradiol como los
andrógenos estén circulante en hombres y mujeres, en diferentes niveles, la
influencia de cada uno en el esqueleto es distinta. De esa forma terapias
combinadas de estrógenos asociados con andrógenos en mujeres después
OVN | 46
de la menopausia fue más efectivo que la utilización de solo estradiol (Leder
et al., 2003).
Estudios con inmunohistoquimica tienen detectado que receptores de
andrógeno están presentes en todas las capas de de las placas de
crecimiento de las epífisis de los huesos en todas las edades tanto en
machos como en hembra, pero en los ratones tales receptores están
presentes solo en animales adultos e viejos, siendo que en los machos se
presento en mayor numero comparado con las hembras. De esa forma, es
probable que los andrógenos estén envueltos directamente en el crecimiento
longitudinal del hueso durante el inicio de la pubertad y en el cierre de las
placas epifisiarías en el final de la pubertad. Con todo esto, la expresión de
los receptores de estrógenos α e β (REα e REβ), respectivamente presentes
en las placas epifisiarias en humanos revelan que los andrógenos también
actúan indirectamente vía aromatización en el crecimiento puberal en el
cierre de las placas de crecimiento epifisiario de los huesos largos (Nillson et
al., 1999; Bord et al., 2001).
Los estrógenos actúan en el mantenimiento de la masa ósea en adultos a
través de la inhibición de la reabsorción ósea por los osteoclastos,
protegiendo el esqueleto de la perdida de matriz ósea. Andrógenos no
aromatizables como la 5α-dihidrotestosterona han sido reportados como
agentes anabólicos aumentando la formación de la densidad mineral del
hueso (DMO) (Kenny e Raisz, 2002).
OVN | 47
Dando soporte al efecto de la testosterona en el hueso, no ha sido
demostrada correlación positiva entre DMO y tal hormona en hombres
viejos. Tratamientos a base de esa hormona redicen la perdida ósea durante
el envejecimiento. Pero tal efecto fue observado solamente en hombres con
bajos niveles de andrógenos (ej: terapia de reducción de testosterona en
individuos portadores de cáncer de próstata), sugiriendo que el tratamiento a
base de testosterona solamente presenta efecto en personas con bajos
niveles Bouloux, 2005).
Con todo esto, existe una controversia en la literatura al respecto de la real
importancia de los andrógenos en la homeostasis del tejido esquelético. Es
decir, si los efectos de los andrógenos en el hueso son debidos a la acción
directa ó si es por la acción en tejidos que están asociados a la salud del
hueso, por ejemplo, los músculos, siendo así, el hueso se adaptaría
aumentando la DMO en respuesta a un mayor fortalecimiento muscular. Otro
hecho que soporta la idea del mecanismo indirecto es el hecho de que la
testosterona sirve como precursor para la síntesis de estradiol a través de la
enzima aromataza, de ese modo los andrógenos ejercerían su función el
hueso actuando sobre los receptores de estrógenos. Entretanto, el hueso ha
sido caracterizado por ser un tejido alvo de acción directa de la testosterona
ya que fueron observados receptores de andrógenos en el estroma
mesenquimal, en los osteoblastos, osteocitos y osteoclastos (Wiren et al.,
2008).
OVN | 48
Los andrógenos también pueden actuar de forma indirecta regulando, por
mecanismos paracrinos y autocrinos, la síntesis de citoquinas y de factores
de crecimiento tales como: el factor de crecimiento transformador (TGF)- β y
el factor de crecimiento semejante a insulina (IGFs) los cuales estimulan la
síntesis
ósea
y
la
interleuquina-1
(IL)-6
la
cual
estimula
la
osteoclastogenesis (Kasperk et al., 1997). Los andrógenos inhiben la
paratormona (PTH) y la síntesis de prostaglandina E2 inducida por la
interleuquina-1 (IL-1) y estimulan la producción de interleuquina-1 β (IL-β)
potencializando el efecto mitogénico del factor de crecimiento fibroblastico
(FGF) en osteoblastos cultivados. La dihidrotestosterona provoca reducción
en los niveles de osteoprotegerina (OPG), en lo cual incrementa la actividad
de los osteoclastos (Bellido et al., 1995).
La orquiectomia estimula la proliferación y diferenciación de los osteoclastos.
De esa manera, hay una rápida perdida ósea asociada con la reducción de
los sitios trabeculares y cortinas con aumento de los marcadores
bioquímicos de reabsorción ósea, lo cual fue observada en individuos
después de la orquiectomia (Clarke e Khosla, 2009).
Frente a la complejidad del tejido óseo, la administración sistémica de
andrógenos ha demostrado ha demostrado diferentes respuestas en los
distintos
compartimientos
esqueléticos
(las
porciones
corticales,
trabeculares, e intermembranosas). En individuos hipogonadales una
respuesta benéfica a la terapia de andrógenos fue observada en el
compartimiento trabecular resultado en el aumento de la masa ósea, tal
OVN | 49
hecho fue explicado por la inhibición de la reabsorción ósea, con
modificaciones en la microarquitectura traducido en aumento de área
trabecular y no en densidad ósea (Moverare et al., 2003).
Los andrógenos parecen ejercer una importante función en la formación
ósea intermembranosa. Estudios que evaluaron los efectos de los
andrógenos en el hueso reportan incremento de la masa ósea cortical como
consecuencia de aumento en el espesor y expansión de la superficie
periostal (Turner et al., 2004). Tratamientos con altas dosis de testosterona
durante dos años en mujeres transexuales resulto en aumento de la DMO en
la cabeza del fémur, siendo que, en esta condición el estradiol descendió a
niveles semejantes a aquellos pos menopausia.
Juntamente con tales
hechos fue observado que en hombres con atraso en la pubertad la
expansión periosteal fue perjudicada (Yap et al., 2004). Estos estudios
indican que los andrógenos actúan in vivo en el mantenimiento de la masa
ósea trabecular a través de la inhibición de la actividad de los osteoclastos y
en la expansión cortical del hueso en la superficie periosteal (Wiren et al.,
2008). Entretanto, el aumento de la formación ósea a través de la activación
de los osteoblastos y osteocitos maduros permanecen sin ser totalmente
lucido, sin embargo algunos autores sugieren que la testosterona actúe
inhibiendo la apoptosis de los osteocitos y osteoblastos y también en la
diferenciación de estos últimos. (Clarke e Khosla, 2008).
En estudios con ratones Wiren et al., (2008), observaron que la activación de
receptores androgenicos conducía a una reducción “turnover” de la
OVN | 50
población de osteoblastos maduros (osteositos), reducirían la formación y
reabsorción ósea en el área trabecular para aumentar el volumen trabecular
y promover una significante reducción en el área cortical de hueso debido a
la inhibición de la formación ósea en la superficie endocortical por los
osteoblastos/osteocitos resultando en pérdidas de la calidad de la matriz, en
la competencia bioquímica y en la resistencia total del hueso. Entretanto la
estimulación de los receptores de andrógenos aumenta la formación ósea en
los sitios periosteales y el crecimiento óseo en los sitios intramenmbranosos.
Análisis moleculares permitirían afirmar que la reducción en la síntesis de
colágeno y de osteocalcina (proteína que une el calcio a la matriz ósea) en
los osteoblastos y osteocitos fueron los causantes de esa pérdida de calidad
en la matriz en detrimento de la geometría o de la masa ósea en la
presencia de altos niveles de testosterona.
En estudios realizados por Pederson et al., 1999, los autores sugieren que
los andrógenos pueden actuar directamente en los osteoclastos inhibiendo
la reabsorción ósea y/o reduciendo la respuesta de tales células frente a los
estímulos de la paratormona.
OVN | 51
3.0 MATERIALES Y METODOS
3.1 Lugar de ejecución del proyecto
Este proyecto se desarrollo en una finca particular en el municipio de
Janaúva, Minas Gerais (MG) y dentro del laboratorio de biología de la
reproducción del Instituto de Ciencias Biológicas (ICB) de la Universidad
Federal de Minas Gerais (UFMG)
3.2 Animales experimentales y criterios de selección
Los animales del experimento se seleccionaron de un grupo de trescientos
animales machos bajo los siguientes criterios: Examen clínico general,
evaluación andrológica, edades de nacimiento, peso y raza, para de esta
manera obtener un grupo experimental lo más saludable y homogéneo
posible en cuanto a las características anteriormente mencionadas.
Después del pesaje, evaluación andrológica y pruebas de comportamiento
sexual, se seleccionaron los animales que cumplieron con los requisitos
del experimento
La muestra seleccionada para el experimento fue de 30 toros (Bos Indicus)
de raza Cebú Nelore 11 con cauterización del ducto incisivo
del órgano
OVN | 52
vomeronasal, 11 sin cauterización, enteros (control) y 8 los cuales se les
someterá a una orquiectomia bilateral, los cuales tenían una edad al inicio
del proyecto promedio 20 meses con un peso de 268 Kg en promedio,
estos serán mantenidos en potrero con forrajes Brachiaria decumbens y
Brachiaria brizantha y sal mineralizada a voluntad.
Los animales seleccionados se
distribuyeron
en los tres grupos
anteriormente mencionados de manera aleatoria y finalmente quedaran de
la siguiente manera:
Grupo 1. Animales enteros, este grupo de animales se
utilizaron como
grupo control.
Grupo 2. Animales sometidos a cauterización del órgano vomeronasal con la
utilización de un hierro caliente en el ducto incisivo.
Grupo 3. Animales sometidos al proceso de castración por el método de
orquiectomia bilateral con emasculador.
Estos animales se pesaron al inicio del experimento y al final en el momento
de alcanzar la edad de sacrificio, al rededor de los 480kg.
3.3 Toma de muestras
Todas las muestras necesarias fueron
tomadas el día en el que los
animales sean sacrificados de la siguiente manera:
OVN | 53
3.3.1 Peso de los animales en la edad de sacrificio:
Los animales fueron pesados de manera individual dentro de una balanza
electrónica, haciendo las anotaciones simultáneas de los datos arrojados por
el mecanismo.
3.3.2 Toma de muestra de fragmento de hueso:
Una vez abatidos todos los animales, se realizo un corte transversal para
retirar el órgano vomeronasal se aprovechará para obtener un fragmento de
la mandíbula disecada y cortada transversalmente en el local de mayor
diámetro.
Este corte se realizo en forma segmentaria, en la porción rostral de la
calavera específicamente a nivel de la escotadura nasoinsiciva (se cortan
las apófisis nasales del incisivo), porción laterorostral del maxilar
y por
ventral apófisis palatinas del incisivo.
Posterior a esto se realizo la identificación de cada pieza con papel
plastificado e hilo de nilón y las muestras se transportaron en una solución
de formol al 10% hasta el laboratorio.
Una vez las muestras en el laboratorio, se procedió a tomar un fragmento
del hueso maxilar de aproximadamente 5mm de espesura de cada una de
OVN | 54
las muestras, estos fragmentos fueron puestos individualmente en solución
de alcohol al 70%. Dentro de frascos plásticos de 50ml debidamente
identificados.
3.3.3 Toma de muestras de testículo:
En el momento del sacrificio se extrajeron los testículos de los animales. A
partir de allí se tomaron muestras de 5cm aproximadamente, las cuales
fueron perfundidas en una solución salina para lavarlas y posteriormente
inmersas en formol a 10% para la conservación de las estructuras celulares
del
parénquima testicular
en frascos de 50 ml los cuales fueron
debidamente identificados.
3.4 Criterios de exclusión:
Una vez tomadas las muestras de los animales y antes de iniciar el
procesamiento de las mismas, se realizo la exclusión de los animales en los
cuales los procedimientos anteriormente descritos no fueron exitosos. Se
determinara como no exitoso el proceso de la cauterización del ducto
incisivo del órgano vomeronasal cuando al realizar la prueba de perfusión
del órgano esta de positiva. Esta prueba se realizara inyectando agua
destilada a través del ducto nasal del órgano vomeronasal y evaluando si
hay o no salida de liquido por el ducto incisivo; en el caso que haya salida de
OVN | 55
liquido se tomara la prueba como positiva y por tal motivo éste animal y sus
datos serán excluidos del análisis.
3.5 Determinación de densidad ósea
a. La densidad ósea se determino a partir de los fragmentos de hueso
maxilar, previamente obtenidos, aplicando la formula básica de la
densidad en donde se tiene que densidad es equivalente a masa
sobre volumen (D=M/V). Esto se realizo de la siguiente manera:
b. Extracción mecánica del periostio, para garantizar la medición única
de hueso y no alterar los datos con fragmentos de otro tejido.
c. Posteriormente se procedió a realizar el pesaje de cada fragmento de
forme individual en una balanza analítica de precisión (Master) para
determinar la masa (gr) de la muestra.
d. Una vez obtenida la masa de cada fragmento se procedio a obtener el
volumen de cada muestra a través del método de peso de volumen
desplazado, en donde se tiene un Becker con un “x” volumen de agua
el cual es pesado en una balanza analítica de precisión,
inmediatamente obtenido el volumen uno, se procede a introducir el
fragmento dentro del Becker de tal manera que permanezca
suspendido dentro del agua para no alterar la lectura de la balanza y
se toma el volumen dos.
OVN | 56
Ya obtenidos volumen uno y dos se procede a restar al volumen dos
el volumen uno y de esta manera se obtiene el volumen total
desplazado por el hueso, que en este caso sería equivalente al
volumen del hueso.
e. Adquiridos los datos de masa y volumen da cada una de las muestras
se procedió a aplicar la formula de la densidad y a tomar nota de los
resultados obtenidos.
3.6 Histología del hueso y testículo.
Antes que nada, para realizar cualquier tipo de proceso histológico con
muestras de hueso es preciso realizar la descalcificación del mismo,
atendiendo a esto la descalcificación de las muestras se realizo poniéndolas
dentro de de solución Perenji* durante un periodo aproximado de 21 días en
frascos de plástico individuales de 50ml.
De acuerdo con los recursos en el laboratorio de trabajo se determinó
realizar el proceso de histología de las muestras de hueso y testículo en
metacrilato. Una vez con las muestras de hueso descalcificadas se procedió
con el siguiente protocolo:
a. Corte de muestras de tamaño histológico (4mm Aproximadamente),
teniendo en cuenta con el hueso de tomar dentro de la misma muestra
parte de hueso esponjoso y parte de hueso compacto.
OVN | 57
b. Lavado de las muestras con alcohol 70% para quitar
residuos de
acido (solamente para hueso).
c. Poner las muestras, con el nuevo tamaño, en los tubos de
deshidratación pre infiltración.
d. Deshidratación de las muestras, para metacrilato, con alcohol de
manera creciente (alcohol 75%/60minutos, alcohol 85%/60minutos,
alcohol
95%/45minutos,
alcohol
95%/30minutos,
alcohol
absoluto/30minutos y alcohol absoluto/30minutos). (Tabla 1)
Tabla 1 - Deshidratación de las muestras en series decrecientes de etanol con tiempos
establecidos, para iniciar el proceso de preinfiltracion de las muestras. Belo Horizonte,
2009.
e. Pre infiltración en metacrilato: inmersión de muestras en una solución
de
50%
metacrilato
y
peróxido
de
dibenzoile
(100ml/1gr
respectivamente) y 50% de alcohol absoluto durante 24 horas a 4 Cº.
f. Infiltración en metacrilato: las muestras son retiradas de los tubos de
pre infiltración para ser secadas rápidamente con papel filtro y
posteriormente puestas en los moldes de infiltración, donde se ubica la
OVN | 58
muestra de manera centrada y es cubierta por completo de una
solución de metacrilato con solución polimerizadora JB-4 Plus
Polysciences. Posterior a esto se sobreponen los bloques de PVC que
soportaran la muestra en el momento del corte.
g. Secado de las muestras: una vez infiltradas todas la muestras se
ponen para secar en la estufa por 12 horas
h. Con los bloques de metacrilato secos se prosigue a realizar los cortes
correspondientes de cada muestra en un micrótomo ultramicrótomo
Reichert-Jung, de cada bloque se pretenden sacar tres láminas cada
una con por lo menos 4 cortes de 3nm.
i.
Coloración: la coloración de las laminas se realizará con una solución
de 5% de Azul de toludina y 1% de Borato de sodio, sumergiendo las
laminas durante un minuto en esta solución y posteriormente
realizando el enjuague de estas con agua durante 12 minutos para
evitar la sobre coloración.
j.
Una vez secas las laminas se procedió a cubrir los corte con
lamínulas y Entelan (NEW MERCK).
3.6.1 Datos histológicos del hueso (Densitometría)
El análisis que se realizo fue un análisis que permitió evaluar la densidad
del hueso un poco más de cerca determinando las proporciones entre hueso
OVN | 59
compacto y esponjoso comparando los datos de los animales de los tres
grupos.
Para lograr lo anterior se procederá a tomar doce (12) fotos digitales con
aumento de 10x de las láminas obtenidas de cada animal, de las doce (12)
fotos seis (6) serán de hueso esponjoso y seis (6) de hueso compacto.
El paso a seguir es realizar la impresión de estas fotos las cuales una vez
impresas serán usadas para realizar el conteo proporcional de puntos; el
cual consiste en sobre poner una cuadricula de 400 puntos sobre la foto, así
obtendremos 400 espacios de los cuales unos coincidirán con espacio
ocupado por el tejido y otros coincidirán con intersticio o espacios vacíos,
esto en el caso de el hueso esponjoso. En el caso de hueso compacto
tendremos la misma cuadricula con 400 puntos pero esta vez lo que se
pretende contar son aquellos puntos en donde la cuadricula coincida con
núcleos celulares.
Una vez realizado el conteo finalmente tendremos un total de 2400 puntos
contados de cada muestra para hueso esponjoso y un tanto igual para
hueso compacto, este número de datos obtenidos par cada muestra nos
permitirá realizar un análisis de proporción.
OVN | 60
3.6.2 Datos histológicos de Testículo
Morfometria testicular:
Para lograr lo anterior se procedio a tomar cuatro (4) fotos digitales con
aumento de 10x de las láminas obtenidas de cada animal. Una vez con
estas fotos se procedió a imprimirlas.
Se procede a estimar el área correspondiente a cada uno de los tejidos, en
los cuales se opta por medir el espacio intersticial y el área de la porción de
los túbulos seminíferos. Esto se realizara tomando una cuadricula con 400
intersecciones dibujada en una acetato trasparente la cual es colocada
sobre la fotografía del tejido testicular y se cuentan las intersecciones que
coincidan con cada una de las estructuras histológicas a determinar
(Intersticio y Túbulos seminíferos)
La cuadricula utilizada para estimar las proporciones del área ocupada por
cada uno de los tejidos es de un formato homogéneo compuesta por 20
líneas verticales y 20 líneas
intersecciones.
horizontales
dando un total de 400
OVN | 61
3.7 Determinación de producción de testosterona:
Se procedio a realizar unas observaciones sobre las laminas de tejido
testicular directamente en un microscopio de luz Nikon, utilizando una lente
de inmersión (100x aumento de magnificación) y un ocular con reglilla que
nos permita determinar el diámetro de los núcleos de las células de leydig en
el intersticio, las cuales están estrechamente relacionadas con la producción
de testosterona. (Abercrombie., 1945) y (Lennox., 1979 )
3.7.1 Determinación del volumen de las células de leidyg:
El volumen de las células de leidyg fue calculado mediante una fórmula de
volumen de (esfera maciza):

4π x R3
V=
-------------------
3

π x D x d2
V=
---------------------------
6
OVN | 62
Donde:
V = Volumen
π = Pi
R = Radio
D = Diámetro mayor de la célula de leidyg
d = Diámetro menor de la célula de leidyg (Baracat et al., 1991),
(Zirking
et al., 1988). (Lennox et al., 1979)
3.8 ANALISIS DE DATOS OBTENIDOS
Los datos obtenidos se analizaron a través de un estudio de comparación
entre los datos de los grupos. Utilizando las siguientes variables de análisis:
a) Media de densidad ósea de los tres grupos.
b) Media de pesos de los testículos de los grupos 1 y 2.
c) Media de los diámetros de las células de Leydig.
d) Medias de ganancia de peso.
Posterior mente se realizo un análisis de correlación entre los datos de
densidad y otros datos tales como, el peso y la producción estimada de
testosterona testicular de los animales.
OVN | 63
3.8.1 Análisis estadístico.
Los datos se analizaron utilizando el paquete de recursos computarizados
del software R.
Se realizo la comprobación de supuestos para análisis
parámetricos con el 99% de confianza encontrando que todas las variables
con excepción de células de Leydig cumplían con dichos supuestos. Se
realizo un Análisis de varianza (ANOVA) para cada grupo animal y cada una
de las diferentes variables a evaluadas. Para la variable volumen de células
de Leydig se realizó la prueba de Kruskall-Walis que es una prueba de
distribución libre, ya que ésta no presento normalidad.
OVN | 64
RESULTADOS Y DISCUCIÓN
El análisis comparativo de los tres grupos presento los siguientes resultados:
4.1 RESULTADOS DESCRIPTIVOS
A partir de los datos obtenidos se determino que el peso de canal de los
animales del grupo control fue de 268,91 ± 6,70 kg, según el peso mínimo
de 231,2 kg y el máximo de 300,4 kg. El peso de canal de los animales del
grupo tratado fue de 266,04 ± 9,10 kg, según el peso mínimo de 254,2 kg y
el máximo de 277,6 kg. El peso de canal de los animales del grupo castrado
fue de 259,68 ± 6,70 kg, según el peso mínimo de 251,2 kg y el máximo de
271,4 kg. Para ésta variable, se observo que no hay evidencia de diferencias
estadísticamente significativas entre los grupo evaluados con una confianza
del 95% (Gráfico 1.)
OVN | 65
350
300
Peso (kg)
250
200
150
100
50
0
Castrado
Control
Tratado
Grupo
Gráfico 1. Peso en canal dado en kilogramos para animales sometidos a diferentes
tratamientos en la evaluación del efecto de la cauterización del ducto incisivo del OVN en
toros. Belo Horizonte (Brasil), 2009.
Por otra parte el porcentaje de ganancia de peso de los animales del grupo
control fue de 43,06 ± 5,60 %, según el porcentual mínimo de 33,23 %y el
máximo de 50,64 %. El porcentaje de ganancia de peso de los animales del
grupo tratado fue de 43,1 ± 2.25 %, según el porcentual mínimo de 38,23 %
y el máximo de 51,11 %. El porcentaje de ganancia de peso de los animales
del grupo castrado fue de 41,71 ± 3,77 %, según el porcentual mínimo de
35,41 % y el máximo de 46,45 %. Para ésta variable, se observo que no hay
evidencia de diferencias estadísticamente significativas entre los grupo
evaluados con una confianza del 95% (Grafico 2) y (Gráfico 3).
OVN | 66
60,00%
Porcentaje
50,00%
40,00%
30,00%
20,00%
10,00%
0,00%
Castrado
Control
Tratado
Grupo
Gráfico 2. Porcentaje de ganancia de peso para animales sometidos a diferentes
tratamientos en la evaluación del efecto de la cauterización del ducto incisivo del OVN en
toros. Belo Horizonte (Brasil), 2009.
180
160
140
Peso (kg)
120
100
80
60
40
20
0
Castrado
Control
Tratado
Grupo
3. Ganancia de peso en kilogramos para animales sometidos a diferentes
tratamientos en la evaluación del efecto de la cauterización del ducto incisivo del OVN en
toros. Belo Horizonte (Brasil), 2009.
Gráfico
OVN | 67
De manera similar se comporto la variable densidad ósea donde para los
animales del grupo control presento una media de 1,54 ± 0,086 kg/m3, según
la densidad mínima de 1,43 kg/m3 y la máxima de 1,65 kg/m3. La media de
densidad ósea de los animales del grupo tratado fue de 1,54 ± 0,041 kg/m3,
según la densidad mínima de 1,48 kg/m3 y la máxima de 1,61 kg/m3. La
media de densidad ósea de los animales del grupo castrado fue de 1,52 ±
0,041 kg/m3, según la densidad mínima de 1,44 kg/m3 y la máxima de 1,57
kg/m3 (Gráfico 4).
1,8
1,6
Densidad (gr)
1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
Castrado
Control
Tratado
Grupo
3
Gráfico 4. Densidad ósea expresada en kg/m para animales sometidos a diferentes
tratamientos en la evaluación del efecto de la cauterización del ducto incisivo del OVN en
toros. Belo Horizonte (Brasil), 2009.
OVN | 68
En la variable peso testicular el promedio de los animales del grupo control
fue de 326,36 ± 69,82 gr, según el peso mínimo de 225 gr y el máximo de
425 gr. El peso testicular promedio del grupo tratado fue de 303,82 ± 48,73
gr, según el peso mínimo de 230 gr y un máximo de 365 gr. Para ésta
variable, se observo que no hay evidencia de diferencias estadísticamente
significativas entre los grupo evaluados con una confianza del 95%
(Gráfico_5).
450
400
350
Peso (gr)
300
250
200
150
100
50
0
Control
Tratado
Grupo
Gráfico 5. Peso testicular dado en gramos para animales sometidos a diferentes
tratamientos en la evaluación del efecto de la cauterización del ducto incisivo del OVN en
toros. Belo Horizonte (Brasil), 2009.
OVN | 69
A diferencia de todas la variables anteriores la variable volumen de células
de Leydig si presento una diferencia estadística significativa, donde el
promedio del volumen de células de Leydig para el grupo control fue de
205,19 ± 4,65 µm3, según el peso mínimo de 196,86 µm3 y el máximo de
211, 62 µm3. El promedio del volumen de células de Leydig para el grupo
control fue de 140,66 ± 7,39 µm3, según el peso mínimo de 126,78 µm 3 y el
máximo de 151,52 µm3 (Gráfico 6).
250
Volumen (nm)
200
150
100
50
0
Control
Tratado
Grupo
3
Gráfico 6. Volumen de las células de Leydig expresado en µm para animales sometidos a
diferentes tratamientos en la evaluación del efecto de la cauterización del ducto incisivo del
OVN en toros. Belo Horizonte (Brasil), 2009.
OVN | 70
4.2 RESULTADOS
Usando la prueba de ANOVA para comparar valores de los grupos control,
tratado y castrado encontramos que Pr(>F) = 0.3012 para peso de canal,
Pr(>F) = 0.7794 para porcentaje de ganancia de peso, Pr(>F) = 0.6276 para
densidad ósea, Pr(>F) = 0.3903 para peso testicular; Mostrando así que no
existe diferencias significativas entre los tres grupos estudiados para las
variables anteriormente mencionadas.
Para la variable volumen de celulas de Leydig se aplico la prueba KruskalWallis donde P-value = 0.0001571, demostrando así que hay diferencia
significativa entre el grupo control y el castrado.
Tabla 2. Datos tomados para peso canal, volumen de células de Leydig, peso testicular,
ganancia de peso, para animales sometidos a diferentes tratamientos en la evaluación del
efecto de la cauterización del ducto incisivo del OVN en toros. Belo Horizonte (Brasil), 2009.
Tabla 3 – Peso en canal, volumen de células de Leydig, peso testicular, ganancia de peso,
y densidad ósea de cada uno de los grupos experimentales. Belo Horizonte, 2009.
OVN | 71
4.3. DISCUSIÓN
En este estudio experimental se busco analizar las posibles alteraciones
de desarrollo productivo en toros cebuinos de raza Nélore, a partir de la
exposición a tres tratamientos distintos, Evaluando 5 diferentes variables,
donde las variables peso de canal, ganancia de peso, densidad ósea, peso
testicular no presentaron diferencia estadísticamente significativa. Por el
contrario la variable volumen de células de Leydig si evidencio una
diferencia significativa, Sabiendo que este volumen ésta directamente
relacionado con la producción de testosterona producida por los testículos
como fue mencionado por Santos (2008) y Zirkin (1988). Se puede deducir
que la producción de testosterona testicular del grupo tratado fue
significativamente menor que la del otro grupo control contra el cual fue
comparado.
Esta diferencia en la producción de testosterona testicular se puede explicar
a partir de la cauterización del ducto incisivo del OVN, ya que a través de
esta técnica lo que se produce es una obstrucción del ducto, impidiendo así,
una correcta recepción de algunas hormonas, las cuales generan un
estimulo sobre la producción de testosterona testicular; al reducirse la
presencia de estas hormonas lógicamente la producción de testosterona
también se verá disminuida. Ya que el órgano vomeronasal es un sistema
que no solo se encarga de la percepción de feromonas, este se conecta al
hipotálamo y a otros centros nerviosos del encéfalo, para desencadenar
OVN | 72
respuestas endocrinas relacionadas con las conductas sexuales y/o
grupales de los individuos, así como también sobre las gónadas a través del
eje hipotálamo-hipófisis-gónadas (Halpern 1987).
Si bien, esta diferencia en la producción de testosterona testicular parece no
afectar estadísticamente la producción de los animales de ninguno de los
grupos, pero al revisar el análisis descriptivo se evidencian una serie de
tendencias que nos indican algún posible tipo de alteración productiva
cuando comparamos las variables de tipo productivo con el volumen de las
células de Leydig.
La variable de peso de canal muestra una correlación directa entre la
producción de testosterona testicular (volumen de células de leydig) y los
desempeños en canal de cada uno de los grupos, poniendo en el primer
lugar al grupo control, seguido por el grupo tratado y dejando por último al
grupo castrado. Bavera y Peñafort (2006) mencionaron que las carcasas
de bovinos enteros y castrados son comparadas, y los resultados han
demostrado que los animales enteros son superiores en peso y
conformación, así como presentan mayor proporción de musculo. Por ende
nuestro grupo tratado comparado con el grupo castrado nos muestra un
mejor desempeño en su canal debido a que con la cauterización del ducto
incisivo del órgano vomeronasal no se presenta la remoción de gónadas
y con ello no hay a ausencia de las hormonas testiculares. Por ende el
aspecto
en gano de peso
y eficiencia alimenticia, manifiesta una
OVN | 73
superioridad de los
afirmado por
animales enteros
frente a los castrados, como fue
Restle (1999) atribuido a la acción de las hormonas y
andrógenos producidos en los testículos.
Se atribuyo a la acción de las horrmonas y andrógenos producida en los
testículos, el mayor rendimiento de la canal y mayor proporción de musculo
en la canal de los animales enteros, presentando una mejor conformación
que los castrados (Restle 1999), (Ribeiro 2004). Teniendo en cuenta que las
hormonas y andrógenos
provenientes de los
testículos parecen tener
mayor efecto en la fase en que los animales tienen mayor incremento de
peso. (Lee 1990).
Si enfrentamos nuestro grupo tratado con el grupo control notamos una no
muy marcada diferencia en peso de la canal, lo cual nos lleva a deducir que
por el efecto de la cauterización del ducto incisivo del órgano vomeronasal,
la recepción de feromonas se ve afectada, por lo cual no va desencadenar
respuestas endocrinas relacionadas con conductas sexuales, ni sobre las
gónadas a través del eje hipotálamo-hipófisis-gónadas como fue citado por
Halpern (1987), generando unos niveles de testosterona menores y con
esto una menor pero no muy marcada ganancia de peso en canal.
Esta tendencia también se repite para la variable peso testicular
(Grafico 7 y 8).
OVN | 74
270
250
268
Peso (kg)
264
150
262
100
260
258
Volumen (µm³)
200
266
Canal
Celulas de Leydig
50
256
254
0
Castrado
Control
Tratado
Grupo
3
Gráfico 7. Relación entre el volumen de las células de leydig (µm ) y peso de canal (Kg)
para animales sometidos a diferentes tratamientos en la evaluación del efecto de la
cauterización del ducto incisivo del OVN en toros. Belo Horizonte (Brasil), 2009.
250
330
325
320
315
150
310
100
305
Volumen (µm³)
Peso (g)
200
Peso Testicular
Celulas de Leydig
300
50
295
0
290
Control
Tratado
Grupo
3
Gráfico 8. Relación entre el volumen de las células de leydig (µm ) y peso testicular (gr)
para animales sometidos a diferentes tratamientos en la evaluación del efecto de la
cauterización del ducto incisivo del OVN en toros. Belo Horizonte (Brasil), 2009.
OVN | 75
La variable densidad ósea muestra una tendencia muy atrayente, ya que los
valores de los grupo tratado y control se muestran muy similares en cuanto a
densidad ósea pese a una marcada diferencia en el volumen de células de
Leydig, Mientras que el grupo castrado se encuentra por debajo debido a
que su producción de testosterona testicular es igual a cero (Grafico 9).
Se han realizado estudios de los efectos de los andrógenos sobre el hueso,
demostrando así, que existe una alta correlación entre los niveles de
andrógenos y la densidad ósea, siendo que a mayor cantidad de
andrógenos mayor densidad ósea. Lo cual quiere decir que el tener
animales más pesados es posible si se mantienen altos los niveles de
andrógenos, que en el caso de los machos bovinos el más importante es la
testosterona producida en los testículos como fue comprobado por Bavera
y Peñafort (2006).
Indicando así que la resistencia esquelética de los animales con
cauterización del ducto incisivo del OVN es muy similar a la de los animales
enteros y superior a la de los castrados esto puede ser debido al mayor
nivel de andrógeno circulante en los machos como fue argumentado por
Clarke e Khosla (2008).
OVN | 76
18
250
16
Kg/m³
12
150
10
8
100
6
4
Volumen (µm³)
200
14
Densidad osea
Celulas de Leydig
50
2
0
0
Castrado
Control
Tratado
Grupo
3
Gráfico 9 Relación entre el volumen de las células de Leydig (µm ) y densidad ósea
3
(Kg/m ) para animales sometidos a diferentes tratamientos en la evaluación del efecto de la
cauterización del ducto incisivo del OVN en toros. Belo Horizonte (Brasil), 2009.
Por otra parte, la variable ganancia de peso muestra un comportamiento
positivo para el grupo tratado pese a que la diferencia entre grupo control y
tratado fue muy mínima, mientras la diferencia del grupo castrado frente a
los otros dos grupos si fue bastante evidente (Grafico 11).
Esta tendencia también se repite para la variable de ganancia de peso en
relación con la densidad ósea. (Grafico 10).
El comportamiento de esta variable se explica a partir de la influencia de los
andrógenos, en especial la testosterona, sobre el desarrollo corporal de los
machos; lo cual hace que los animales castrados por la ausencia de los
testículos se vean perjudicados en cuanto a esto. A demás esa mínima
diferencia entre grupos control y tratado, a favor del tratado, se puede
OVN | 77
atribuir al menor gasto energético de los animales tratados debido a
44%
250,000
43%
200,000
43%
150,000
42%
100,000
42%
50,000
41%
0,000
Castrado
Control
Volumen (µm³)
Porcentaje
docilidad.
Ganancia de peso
Celulas de Leydig
Tratado
Grupo
3
Gráfico 10- Relación entre el volumen de las células de leydig (µm ) y ganancia de peso
(%) para animales sometidos a diferentes tratamientos en la evaluación del efecto de la
cauterización del ducto incisivo del OVN en toros. Belo Horizonte (Brasil), 2009.
1,545
146
1,54
Kg/m³
1,53
142
1,525
140
1,52
1,515
Peso (kg)
144
1,535
138
1,51
Densidad osea
Ganancia de peso
136
1,505
1,5
134
Castrado
Control
Tratado
Grupo
3
Gráfico 11 Relacion entre el la densidada osea (Kg/m ) y ganacia de peso (Kg) para
animales sometidos a diferentes tratamientos en la evaluación del efecto de la cauterización
del ducto incisivo del OVN en toros. Belo Horizonte (Brasil), 2009.
OVN | 78
A pesar que los resultados estadísticos de este estudio solo evidenciaron
diferencias estadísticamente significativas para la variable volumen de
células de Leydig, el análisis descriptivo si muestra una tendencia marcada
en la cual el grupo tratado supera en todos los aspectos al grupo castrado y
se acerca en gran manera a los desempeños productivos del grupo control.
Lo cual lleva a pensar que si en un periodo de seis meses de tratamiento los
grupos muestran una clara tendencia, con un periodo más prolongado de
exposición a los distintos tratamientos se podría llegar a encontrar
diferencias estadísticamente significativas en los parámetros productivos de
los animales estudiados, ya que la variación en cuanto a la producción de
testosterona testicular si es evidente.
OVN | 79
6. CONCLUCIONES
A partir de los resultados obtenidos
para toros de la raza Nélore, se
concluye que los animales sometidos a la cauterización del ducto incisivo del
OVN presentan un menor volumen de células de Leydig que los animales
enteros sin cauterización y por ende se deduce que la producción de
testosterona testicular se comporta de igual manera.
Lo anterior se ve reflejado en que los animales sometidos a la cauterización
del ducto incisivo del OVN presentan cierta tendencia a ser animales de
condiciones productivas intermedias entre los animales enteros y los
castrados, es decir, presentan un desempeño mejor que los animales
castrados y menor que los animales enteros, a pesar que estas diferencias
sean prácticamente imperceptible y sin diferencias estadísticamente
significativas para los siguientes aspectos:
 Porcentaje de ganancia de peso.
 Densidad ósea.
 Peso de la canal.
 Peso testicular.
Los animales cauterizados evidencian reducciones en la producción de
testosterona suficientes para generar animales mas dóciles pero no tan
basales para alterar su productividad, mostrando una seria tendencia a ser
superiores productivamente a los animales castrados.
OVN | 80
8. REFERENCIAS
ABERCROMBIE, M. Estimation of nuclear population from microtome
sections. Anat. Rec. , v. 49, p. 238- 248, 1946.
AZAMBUJA, R. C, et al. Desempenho e rendimento de carcaça de novilhos
nelore e braford submetidos a diferentes idades de castração. Universidade
Federal de Pelotas, Faculdade de Veterinária - Departamento de
Clínicas Veterinária, Núcleo de Pesquisa, Ensino e Extensão em
Pecuária (NUPEEC). 2007.
BARONE, R.; LOMBARD, M. ; MORAND, M. Organe de Jacobson, nerf
vomeronasal et nerf terminal du chien. Bulletin de la Societe des Sciences
Veterinaries de Lyon, v. 68, n. 3, p. 257-270, 1966.
BARACAT, E.C.; SIMÕES, M.J.; NOVO, N.F.; JULIANO, Y.; LIMA, G.R.;
LIMA, F.O.A.; KULAY, J.L. Morphologic and morphometric aspects of the
uterine tube epithelium during the menstrual cycle. Revista Paulista de
Medicina, v. 109, n. 5, p. 204-212, 1991.
BAVERA, G; PEÑAFORT. Cursos de Producción Bovina de Carne, FAV
UNRC. 2006.
BELLIDO, T.; JILKA, R. L.; BOYCE, B. F.; et al.. Regulation of interleukin-6,
osteoclastogenesis, and bone mass by androgens. J. Clin. Invest.. V. 95, p.
2886–2895, 1995.
BOULOUX, P.. Testim 1% testosterone gel for the treatment of male
hypogonadism. Clin. Ther.. V. 27, p. 286–298, 2005.
CLARKE, B. L.; KHOSLA, S.. Androgens and bone. Steroids. V. 74, p.
296-305, 2009.
DOVING, K.B.; TROTIER, D. Structure and function of the vomeronasal
organ. The Journal of Experimental Biology, v.201 , p. 2913-2925, 1998.
E. KOLB.; Fisiologia Veterinaria 4 Ed Rio de Janeiro: Guanabara Koogan
p 378- 388,1984.
OVN | 81
GUILLAMON, A.; SEGOVIA, S. Sex differences in the vomeronasal system.
Brain Research Bulletin, v.44, n. 4, p. 377-382,1997.
HAFEZ, E.S.E. Reprodução animal. 6 ed. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan. p.59-94, 1995.
HALPERN, M. The organization and function of the vomeronasal system.
Annual Review of Neuroscience, v. 10, p. 325-362, 1987.
HALPERN, M.; MARCOS, A. M. Structure and function of the vomeronasal
system: an update. Progress in Neurobiology, v. 70, n. 3, p. 245-318,
2003.
H. P. GODINHO.; F. M. CARDOSO; A. C. CASTRO: Anatomia Dos
Rumiantes Domesticos 1 ed. Belo Horizonte - Minas Gerais , p 255 -262,
2006.
JOHNSTON, R.E. Pheromones, the vomeronasal system, and
communication. From hormonal responses to individual recognition. Annals
of the New York Academy Science, v. 855, p. 333-348, 1998.
JOHNASTON, R.E Chemical communication and pheromnones: the types of
chemical signals and the role of the vomeronasal system.
The
Neurobiology of taste and smell , second ed. Wiley, New York,2000, p.
101-127.
K. M. DYCE; W. O. SACK.; C. J. WENSING.; Tratado De Anatomia
Veterinaria 3 ed. Rio de Janeiro; Elsevier Editorial Ltda. p 182 – 186, 691 –
698, 2004.
KASPERK, C. H.; WAKELY, G. K.; HIERL, T.; et al.. Gonadal and adrenal
androgens are potent regulators of human bone cell metabolism in vitro. J.
Bone Miner. Res.. V. 12, p. 464–471, 1997.
KENNY, A.; RAISZ, L.. Mechanisms of bone remodeling: implications for
clinical practice. J. Reprod. Med.. V. 47, p. 63–70, 2002.
OVN | 82
KEVERNE, E.B. The vomeronasal organ. Science, v. 286, p. 716-20, 1999.
KEVERNE, E. B. The accessory olfactory system and its role in
pheromonally mediated changes in prolactin, in; Olfation and Endocrine
Regulation, London: IRL press, 1982, p. 127-140.
L. D. RUSELL.; A. H. PAYNE.; M. P. HARDY: The Leydig Cell. 1 ed.
Vienna: Cache River Press. p 46- 87,1996.
L. C. JUNQUEIRA. CARNEIRO; Histología Basica 9 Ed Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan p 355- 358, 1999.
LEE, C.Y.; HENRICKS, D.M. et al. Growth and hormones response of intact
and castrate male cattle to trenbolone acetate and estradiol. Journal of
Animal Science, v.68, n.9, p.2682-2689, 1990.
LEDER, B; LEBLANC, K; SCHOENFELD, D.; et al.. Differential effects of
androgens and estrogens on bone turnover in normal men. J. Clin.
Endocrinol. Metab. V. 88, p. 204–210, 2003.
LENNOX. B.; LOGUE. D. N,; Tubule length and Leydig cell volume in the
normal bull testis. The Veterinary Record. V. 104, p. 431-433, 1979.
MENDOZA, A.S. Morphological studies on the rodent main and accessory
olfactory systems: the region olfactoria and vomeronasal organ. Annals of
Anatomy. v. 175, p 425-446, 1993.
MOVERARE, S.; VENKEN, K.; ERIKSSON, A.; et al.. Differential effects on
bone of estrogen receptor alpha and androgen receptor activation in
orchidectomized adult male mice. Proc. Natl. Acad. Sci.. V. 100, p. 573–
578, 2003.
NILSSON, L. O.; BOMAN, A.; SAVENDAHL, L.; et al.. Demonstration of
estrogen receptor immunoreactivity in human growth plate cartilage. J. Clin.
Endocrinol. Metab.. v. 84, p. 370–373, 1999.
OVN | 83
PEDERSON, L.; KREMER, M.; JUDD, J.; et al.. Androgens regulate bone
resorption activity of isolated osteoclastos in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci.. V.
96, p. 505-510, 1999.
POWERS, J.B.; WINANS, S. S. Vomeronasal organ: critical role in mediating
sexual behavior in the male hamster. Science, v. 187, p, 961-963, 1975.
REDVET. Revista electrónica de Veterinaria. ISSN: 1695-7504, 2009 Vol.
10, Nº 7
RESTLE, J.EIFERT, E, C; ALVES FILHO, D. C.; VAZ, F. N.; BRONDANI, I.
L.; PASCOAL, L. L. Características da carne de novilhos terminados em
diferentes sistemas de alimentação. In: Reunião anual da sociedade
brasileira de zootecnia, 37, 2000
RESTLE, J. et al. Machos não-castrados para produção de
carne.
Confinamento, pastagens e suplementação para a produção de
bovinos de corte. Santa Maria: UFSM. Cap.10, p.215-231, 1999.
RIBEIRO, E.L.A. et al. Growth and carcass characteristics of pasture fed
LHRH immunocastrated, castrated and intact Bos indicus bulls. Meat
Science, Exeter, v.68, p.285-290, 2004.
SANTOS, M.; KLEYTON , B.; PORTILHO, C.; MENDES, J.; FREITAS, S.;
COSTA, S.; SIMÕES, M. Testes morphology and sperm quality of Nelore
bulls fed a gossypol-enriched diet. R. bras. Ci. Vet., v. 15, n. 3, p. 134-139,
2008
SALAZAR, I.; QUINTEIRO, P.S.; CIFUENTES, J. M. Comparative anatomy
of the vomeronasal cartilage in mammals: mink, cat, dog, pig, cow and
horse. Annals of Anatomy, v. 177, p 475-481, 1995.
TURNER, A.; CHEN, T.; BARBER, T.; et al.. Testosterone increases bone
mineral density in female-to-male transsexuals: a case series of 15 subjects.
Clin. Endocrinol.. V. 61, p. 560–566, 2004.
WIREN, K. M.; SEMIRALE, A. A.; ZHANG, X. W.; et al.. Targeting of
androgen receptor in bone reveals a lack of androgen anabolic action and
inhibition of osteogenesis: a model for compartment-specific androgen action
in the skeleton. Bone. V. 43, p. 440-451, 2008.
OVN | 84
YAP, F.; HOGLER, W.; BRIODY, J.; et al.. The skeletal phenotype of men
with previous constitutional delay of puberty. J. Clin. Endocrinol. Metab.. V.
89, p. 4306–4311, 2004
ZIRKIN B. R.; EWING L. L. Comparison of Components of the Testis
Interstitium With Testosterone Secretion in Hamster, Rat, and Guinea Pig
Testes Perfused In Vitro. The American Journal Of Anatomy. V. 181, p.
12-22, 1988.