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Genética y Biotecnología
Guía de estudio Nro 2: Tecnología del ADN recombinante
1) Explica brevemente el significado del título “Tecnología del ADN recombinante”
2) ¿Qué son las Enzimas de Restricción? ¿A qué se debe su nombre?
3) ¿De dónde se obtienen y qué función cumplen allí?
4) ¿Para qué se las utiliza en biología molecular? ¿Por qué?
5) Define el significado de los siguientes términos y dá ejemplos:
a) Sitio de restricción b) Secuencia palindrómica c) Fragmento de restricción d) Extremos romos y
pegajoso
6) Hacé una lista de las enzimas mas usadas, indicando qué secuencias reconocen y de qué organismos se
obtienen
7) ¿Qué significa que una molécula de ADN tenga un sitio único de corte? ¿Cuántos fragmentos se generan?
8) Dada la siguiente secuencia de ADN
.....ATGCGAATTCCCGCCAAGCTTAGGTTATGCAA….
....TACGCTTAAGGGCGGTTCGAATCCAATACGTT
¿Cuántos y cuáles serían los fragmentos que originaría si se corta con la enzima de restricción EcoRI?
a) ¿Cuántos y cuáles serían los fragmentos que originaría si se corta con la enzima HindIII?
9) Las endonucleasas de restricción EcoRI y HhaI producidas por dos especies bacterianas reconocen las
siguientes secuencias y cortan por los puntos indicados con las flechas. ¿Cuántas bases tendrán en cada
caso los extremos cohesivos generados?
G- A- A- T- T- C
G –C –G -C
C- T- T -A- A- G
C--G-- C--G
EcoRI
HhaI
10) Considerá las dos muestras de ADN:
1 CAGTGATCTCGAATTCGCTAGTAACGTT
GTCACTAGAGCTTAAGCGATCATTGCAA
2
TCATGAATTCCTGGAAATCAGCAAATGCA
AGTACTTAAGGACCTTTAGTCGTTTACGT
Si ambas muestras son tratadas con la misma enzima de restricción (EcoRI), indicá:
a) Cuántos sitios de restriccíon posee cada muestra. Márcalas.
b) El número y el tamaño de cada fragmento de cada muestra
c) Porqué si ambas muestras poseen la misma cantidad de sitios de restricción no se generan fragmentos
iguales
d) ¿Como se puede saber cuantos fragmentos se generaron en cada tubo de ensayo
e) ¿Se puede saber el orden de los fragmentos? ¿Cómo?
11) Un fragmento circular de ADN se corta por separado con las enzimas de restricción 1 y 2, y luego con una
mezcla de ambas. Se obtienen los siguientes fragmentos:
Corte con E 1: 1 banda de 5 Kb
Corte con E 2: 1 banda de 4 Kb y 1 banda de 1 Kb
Corte con E 1 mas E 2: 1 banda de 1 Kb, 1 banda de 1,5 Kb y 1 banda de 2,5 Kb
a) Dibuja el mapa de restricción: para ello tené en cuenta cuál es el tamaño de dicho fragmento, cuantos
sitios de restricción posee para cada enzima
12) Una fragmento lineal de ADN fué incubado por separado con una enzima de restriccíon 1 y 2 y luego con
ambas. Se lo sometió una electroforesis en gel de agarosa obteniéndose las siguientes bandas:
Enzima 1: 1 banda de 40 Kb y una banda de 10 Kb
Enzima 2: 1 banda de 29 Kb, 1 banda de 15 Kb y 1 banda de 6 Kb
Enzima1/ 2 : 1 banda de 25 Kb, 1 banda de 15 Kb, 1 banda de 6 Kb y 1 banda de 4 Kb
a) Dibuja el gel
b) ¿Cuánto mide el fragmento entero?
c) ¿Cuántos sitios de corte para la enzima 1 posee? Porqué?
d) ¿y para la enzima 2?
e) Reconstruye el fragmento teniendo en cuenta los sitios de corte
13) Un fragmento lineal de ADN se corta por separado con las enzimas Hind III y Sma I, y luego con una
mezcla de ambas. Se obtienen los siguientes fragmentos:
Hind III: 2.5 Kb; 5 Kb
Sma I: 2 Kb; 5.5 Kb
Hind III/SmaI: 2.5 KB; 3 Kb; 2 Kb
a) Dibuja el mapa de restricción
b) La mezcla de los fragmentos producidos por la acción simultánea de ambas enzimas se corta con
EcoRI, desapareciendo entonces el fragmento de 3 Kb y apareciendo una banda de 1.5 Kb. Marcá la
posición del punto de corte de EcoRI sobre el mapa anterior.