06_Alternativas al uso de formaldehído

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Alternativas al uso de
formaldehido
Dr. Miguel Ángel Carrasco
Jefe de Servicio de Anatomía Patológica
Hospital General de Catalunya. Hospital Universitari Sagrat Cor. Clínica del Vallés
Jornada FormalCat. Barcelona 5 nov 2015
Puntos fuertes del formol
• Fijador “gold standard” en Anatomía Patológica:
• Estudios histopatológicos
• Estudios inmunohistoquímicos y moleculares
• Kits de farmacodiagnóstico FDA, EMA
CH2O
2
Peligros del formol
• Vapores irritantes
• Sensibilizante cutáneo
• Cancerígeno grupo 1, 2011 IARC
3
PROBLEMAS INCLUSIÓN FORMOL
4
R.D. 665/1997
HOSPITAL GENERAL DE CATALUNYA
• 2002 Comité Seguridad
y Salud
• Substitución formol
• Fijador basado en
glioxal (Glyo-fixx)
2014. Servicio de Anatomía Patológica
• Servicio transversal
• 26.786 muestras de biopsia y piezas quirúrgicas
• 58% HGC
• 34% HUSC
• 8% CDV
• Todo tipo de biopsias y piezas quirúrgicas
Uso de fijadores tisulares
• FIJACIÓN MIXTA. ¿Por qué no todo?
• Glyo-fixx. 70%
• Greenfix. 10%
• Formol. 20%
8
Glyo-fixx
• Concentrado. Garrafas de 3,8
lt (Shandon Thermo Fisher
Scientific)
• Agua destilada 70-75 %, Etanol absoluto 5-10 % ,
Glioxal 15-25 %, Ácido acético 3-5 %
• Dilución:
• 11,6 l agua destilada y 3,5 l etanol absoluto
• Solución de trabajo 18,9 l:
• 75-77 % agua destilada, 20-22
% etanol y 3-4% glioxal
• HGC y HUSC
C2H2O2
Fijadores empleados
• Greenfix (DiaPath)
• Botes prellenados de 50 cc
• 15-20% etanol absoluto, 1-3% etandial (glioxal) i 7080% agua destilada
• Logística y costes: CDV
• Formol 4%
• HGC, HUSC y CDV
Glyo-fixx. GreenFix
• Relación fijador/tejido similar a formol
• Tiempo fijación similar
• Fijación a temperatura ambiente
• No son buenos conservantes del tejido a medio
plazo
Principios fijación mixta
• Patología tumoral: Formol
• Patología no tumoral: Fijador alternativo
ESTRATEGIA FIJACIÓN MIXTA
• Reducir la fijación con formol
• Mínimo de biopsias
• Mínimo posible de la pieza quirúrgica. Evitar trabajar
sobre superficies impregnadas de formol
• Relación consumo fijadores alternativos/formol:
7-9/3-1
Fijación mixta en piezas quirúrgicas
• Las piezas se reciben en fresco:
• Tejido en perfectas condiciones
• Mínima manipulación de formol en quirófanos
• Fijación mixta
• Formol: Tumor una porción o todo
• Fijador alternativo: Resto del tejido
Fijación mixta en piezas quirúrgicas
Adenocarcinoma colon
Leiomiosarcoma uterino
Fijación mixta en piezas quirúrgicas
Carcinoma de mama
Colitis isquémica
16
Ahorro de formol
17
Fijación mixta muestras pequeñas
• Biopsias de tumores o sospechosos siempre
formol
• Mama
• Colon
• Pulmón
• SNC...
• Lesiones inflamatorias piel y enfermedades por
eosinófilos formol. En revisión cambio a Greenfix
• Resto de biopsias: No formol
19
Sala de inclusión macros en HGC
20
21
Zona macros de recepción de botes
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Glyo-fixx. Macroscopía
• Aspecto macroscópico
de los tejidos parecido al
formol aunque con el
paso de los días los
vuelve oscuros
• No endurece tanto los
tejidos
Glyo-fixx. Macroscopía
• Disección ganglionar
• Identificación visual más fácil.
Color blanquecino
• Identificación por tacto más
difícil
• No buen conservante de
tejidos en periodos largos.
Tiempo inclusión autopsias
similar piezas. Opción de
conservación posterior tejidos
en formol
Glyo-fixx. Macroscopía
• Excelente calidad
(nuclear y
citoplasmática) de los
tejidos teñidos con HE
Se pierde la granularidad
eosinófila en eosinófilos
Glyo-fixx. Inmunohistoquímica
• Buenos resultados
• Dependiente plataforma
inmuno: Dako, Ventana,
Leyca.
• Protocolos diferentes de
formol
• Marcadores nucleares
difíciles
p16
CD3
PR
HER2
Ki67
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Glyo-fixx. Patología molecular
• Kit HER2 CISH pharmDx™ Dako. Adecuación
protocolos especialmente en tiempo de
digestión enzimática
• Estudio deleciones cromosomas 1p y 19q en
oligodendrogliomas
• RAS en neoplasia colon
• EGFR en neoplasia pulmón
• Necesidad de estudios para validación
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Prevención y eliminación residuos
• Guantes nitrilo y gafas
protección
• No necesidad de
mascarillas ni vitrinas
aspiración en macros
• Residuos
• Biodegradable
• Planta de residuos
biológicos
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Toxicidad Glioxal 40%
• Glyoxal is listed on Annex I of Directive
67/458/EEC in the EU chemical legislation (since
26th – 28th ATP; Annex I Index# 605-016-007)
with a classification as:
• Xn; Muta. Cat. 3; R68
• Xi; R43 May cause sensitization by skin contact.
Concentration limit for labelling 1%
• Xn; R36/38 Irritating to eyes and skin.
Concentration limit for labelling 10%
29
Toxicidad glioxal
• Ingesta de hasta 10 mg/día
• Alimentos: Café, tostadas, fritos y asados de carnes,
pescados, setas, salchichas, aceite, salsa de soja,
cerveza, brandis, productos lácteos y verduras
fermentadas…
• Productos cosméticos hasta 100 ppm
• Humo del tabaco
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Problemas Glyo-fixx
• Eosinófilos, hematíes, Paneth
• Tinciones de Warthin (HP)
• No conserva bien los tejidos a medio plazo
• Alternativas para larga conservación:
• Solución alcohólica de Glyo-fixx (60% etanol).
Ausencia de estudios de validación de tiempos.
• Formol como fijador secundario
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Problemas Inmuno e HIS con Glyo-fixx
• Marcadores nucleares: Ki 67, TTF1, PMS2
• Comportamiento diferente de los monoclonales
según plataforma:
• Ventana, Dako, Leyca
• SISH HER 2 Ventana vs. CISH HER 2 Dako
• Algunos protocolos Glyo-fixx diferentes formol
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Fijación Greenfix
• Componentes fórmula similares a Glyo-fixx
• Comportamiento tinciones similar a Glyo-fixx
• Visualización de eosinófilos, hematíes, Paneth
• Buen comportamiento en inmunohistoquimia
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Coste fijadores alternativos
• Coste de compra superior a formol
• Menor coste si compra en formato concentrado
• Pocos fijadores se ofrecen concentrados (Glyo-fixx)
• Manipulación tejidos formol. Coste superior
•
•
•
•
Mesas tallado con aspiración
Recambios filtros y mantenimiento mesas
Eliminación residuos
10-20 minutos aseo diario del personal
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Ventajas fijadores alternativos
• Escasa peligrosidad para la salud y medio ambiente
• Fijación adecuada de las piezas
• Muy buena calidad en HE, histoquimia e
inmunohistoquimia con adecuación de protocolos
• No precisan de protección respiratoria
• Eliminación del producto menos peligrosa para el
personal
• Coste final inferior al formol
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Desventajas fijadores alternativos
• Pérdida granulación en eosinófilos. Glyo-fixx
• Conservación mala de los tejidos para largos
períodos si no es alcohólico. Conservación
posterior en formol.
• Marcadores nucleares en inmuno algo más
débiles
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Desventajas fijadores alternativos
• Técnicas farmacodiagnóstico no
estandarizadas
• Técnicas biología molecular no
estandarizadas
• Dificultad interconsultas con otros centros
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Fijadores alcohólicos
• 60-70% etanol
• Glyo-fixx alcohólico
• Greenfix plus
• Finefix
• Inflamables
• Armarios para inflamables
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Detectores niveles de formol
• Lecturas cruzadas entre formol y alcoholes,…
39
Conclusiones
• Formol y bacon cancerígenos
grupo I
• Substitución del 100% formol.
Hoy no es posible
• La fijación mixta permite
reducir consumo formol a
mínimos aceptables
• Fijadores alternativos:
•
•
•
•
Glyoxal
Alcohólicos
Técnicas no estandarizadas
Problemas interconsultas
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Muchas gracias
Dr. Miquel Àngel Carrasco
Tel 935047940
mcarrasco@quironsalud.es
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