VIROLOGÍA VETERINARIA Talleres de Aprendizaje Guías de Estudio Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA Introducción El Curso de Virología Veterinaria tiene un sólido soporte en las actividades participativas (AP) en talleres de integración temática con metodología expositiva y de trabajo grupal. Cada AP dispone de una guía de preguntas y problemas que los estudiantes dispondrán previamente, y que serán consignas de trabajo a desarrollar en los encuentros, con la guía del docente responsable. Objetivo: Disponer de una guía de actividades prácticas con distintas estrategias pedagógicas para el aprendizaje de los contenidos del curso con participación activa del estudiante. La guía presenta trabajos relacionados con los contenidos de cada módulo del programa, con cuestionarios- guía comprensión de textos científicos resolución de casos tratamiento de situaciones nuevas Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA MODULO I – INTRODUCCIÓN Objetivos: Que los estudiantes: a) Incorporen conocimientos sobre las características generales de los virus. b) Comprendan el origen y evolución de los virus. c) Valoren el aporte de la Virología a las Ciencias Biológicas y Veterinarias. • Concepto de virus. • Propiedades de los virus que los ubica entre los seres vivientes. • Diferencias entre un virus y una célula. • La visualización de los virus. Microscopía electrónica. • Diferencias entre los virus y otros agentes subcelulares como: a) Viroides. b) Virusoides. c) Priones. • Influencia de los virus sobre la historia humana y animal. • Teorías acerca del origen de los virus. Fundamentos y comparaciones. • Diseminación de los virus entre las especies terrestres. • La Virología como disciplina. Su relación con: a) Las enfermedades infecciosas y otras disciplinas. b) La Biología molecular. • Situación de la Virología Veterinaria en la actualidad. Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA ACTIVIDADES TALLER 1- ACTIVIDADES DEL GRUPO LEER EL TEXTO DEBATIR IDEAS PRINCIPALES EXPLICAR BREVEMENTE CON SUS PALABRAS SU CONTENIDO 2- ACTIVIDAD DEL GRUPO GENERAL: EXPOSICION ORAL DE CONCLUSIONES GRUPO 1- Genoma viral El genoma viral está compuesto por ADN o ARN. Un virion no contiene ADN y ARN simultáneamente. El ADN puede ser: de una sola cadena (ss por sus siglas en inglés) (parvovirus y circovirus), de doble cadena (ds por sus siglas en inglés) (polyomavirus, adenovirus, herpesvirus), o parcialmente de doble cadena (hepadnavirus). El genoma de ADN puede tener sus extremos covalentemente ligados el uno al otro (circular = polyomavirus, circovirus) o no estar unido por sus extremos (lineal = adenovirus, herpesvirus, parvovirus). El genoma de los virus de viruela (poxvirus) es ssADN cuyos extremos están covalentemente unidos uno al otro. Cinco formas estructurales básicas De acuerdo a su morfología básica, y tal como se mencionó anteriormente, hay cinco estructuras virales básicas diferentes. Estas formas, con ejemplos, se enlistan a continuación: • icosaédrico desnudo - adenovirus y picornavirus. • helicoidal desnudo - virus del mosaico del tabaco; no se conocen virus de humanos o de animales que tengan esta estructura. • icosaédrico envuelto - togavirus y flavivirus. • helicoidal envuelto - rhabdovirus y paramyxovirus. • complejos - bacteriófagos y virus de viruela GRUPO 2 Todos los genomas virales de ARN son lineales. La mayoría de estos son cadena sencilla y unos pocos son de cadena doble (reovirus, bornavirus). La mayoría de los virus de ARN tienes sus genomas en una sola pieza (monopartita) mientras que otros lo tienen dividido en 10 segmentos (reovirus), 7 u 8 segmentos (ortomyxovirus), tres segmentos (bunyavirus) y dos segmentos (arenavirus). En cuanto a ssARNs, hay dos posibilidades importantes de secuencia: • Si el ssARN funciona como mensajero para la traducción de proteínas (tiene la misma orientación que el mARN), se le llama sentido positivo. Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA • En contraste, si el ARN viral es antisense (o complementario) a ese mARN - y entonces no puede ser traducido directamente - se dice que es sentido negativo. • En algunos virus (Arenavirus y Bunyavirus) se transcriben porciones del genoma de ARN, generando ARNs mensajeros que son entonces traducidos. La copia de estos mARNs (complementaria, supuestamente ARNs sentido negativo) puede ser también traducida. Este arreglo es único entre los virus, y se dice que es ambos sentidos (ambisense). Los genes contenidos dentro del genoma pueden codificar desde unos pocos productos génicos diferentes (Polyomavirus, 6 - 7 genes, 5000 nucleótidos de longitud) hasta más de 70 - 100 productos génicos diferentes (Herpesviridae, 60 a 120 genes, 120,000220,000 pares de bases de nucleótidos de longitud). En general, los genomas de los virus ARN son más pequeños, con un tamaño máximo de 30,000 nucleótidos como se ve en los Coronavirus. Una hipótesis para esto es que las polimerasas ARN virales tienden a cometer más errores que las polimerasas ADN. Así, la fidelidad de la replicación puede limitar el tamaño. En contraste, los genomas de virus de ADN pueden alcanzar un tamaño de hasta 300,000 nucleótidos, como se ve en algunas especies de Herpesvirus. GRUPO 3 Partículas atípicas asociadas con infecciones Virus defectuosos Los virus defectuosos son aquellos cuyo genoma carece de un gen o genes específicos, debido a mutación o deleción. Como resultado de lo anterior, los virus defectuosos no son capaces de llevar a cabo un ciclo de vida productivo en las células. Sin embargo, si la célula infectada con el virus defectuoso está co-infectada con un "virus ayudante" el producto del gen que carece el virus defectuoso es complementado por el virus ayudante, y el virus defectuoso puede replicarse. Es interesante que, para algunos virus, durante la infección se produce una mayor cantidad de viriones defectuosos que de viriones infecciosos (tanto como 100:1). La producción de partículas defectuosas es característica de algunas especies virales y se cree que modera la severidad de la infección/enfermedad in vivo. Los virusoides, que son ejemplo de virus defectuosos, se discutirán más adelante en esta sección. Pseudoviriones Los pseudoviriones pueden ser producidos durante la replicación viral cuando el genoma del hospedero se fragmenta. Como resultado de este proceso algunos fragmentos del ADN del hospedero se incorporan en la cápside en lugar del ADN viral. Entonces, los pseudoviriones poseen la cápside viral a la cual los anticuerpos pueden unirse y facilitar el anclaje y penetración en la célula hospedera, pero no pueden replicarse una vez que logran el acceso a la célula, debido a que no tienen ninguno de los genes virales esenciales para el proceso de replicación. Priones Aunque no son virales, los priones son partículas proteicas infecciosas asociadas con Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA encefalopatías espongiformes transmisibles (TSE por sus siglas en inglés) de humanos y de animales. TSE incluye la enfermedad de Creutzfeldt-Jacob en humanos, "scrapie" en ovejas y encefalopatía espongiforme bovina. Priones y TSEs en animales se discuten detalladamente en el capítulo 29. En el análisis a la necropsia, el cerebro presenta grandes vacuolas en las regiones de la corteza y del cerebelo, por lo que la enfermedad causada por priones se llaman "encefalopatías espongiformes". Una examinación más detallada del tejido cerebral revela la acumulación de fibrillas y placas amiloideas asociadas con proteínas de priones. Estas enfermedades se caracterizan por la pérdida del control motor, demencia, parálisis, desgaste y eventualmente la muerte. Los detalles de la patogenia son en su mayoría desconocidos. Viroides Los viroides son ácidos nucleicos de bajo peso molecular, desnudos, extremadamente resistentes al calor, a la radiación ultravioleta y la radiación ionizante. Estas partículas se componen exclusivamente de una pieza de ARN circular de cadena sencilla, con algunas regiones de cadena doble. Los viroides causan en su mayoría enfermedades de plantas, como la enfermedad del tubérculo ahusado de la papa. Virusoides Los virusoides (también llamados ARN satélites) son similares a los viroides en el sentido de que son ácidos nucleicos desnudos, de bajo peso molecular, extremadamente resistentes al calor y a las radiaciones ultravioletas y ionizantes. Sin embargo, dependen de un virus ayudante para la replicación. Los virusoides se replican en el citoplasma de la célula a través de una polimerasa ARN dependiente de ARN. GRUPO 4 Categorías taxonómicas El esquema básico de clasificación jerárquica de los virus es: Orden - Familia - Subfamilia -Género- Especie - Cepa / Tipo. Ciertas características virales, referidas más adelante, definen cada una de estas categorías taxonómicas. Los Órdenes tienen el sufijo -virales, las Familias tienen el sufijo -viridae, mientras que los Géneros contienen el sufijo -virus. Una Especie viral está constituida por un linaje replicante que ocupa un nicho ecológico por ejemplo, una enfermedad en particular. Los virus se clasifican en familias con base en muchas características. Una característica básica es el tipo de ácido nucleico (ADN o ARN) y la morfología, esto es, el tamaño y forma del virión así como la presencia o ausencia de una envoltura. También se usan el rango de hospederos y las propiedades inmunológicas del virus (serotipos). También se usan en la clasificación las propiedades físicas y fisicoquímicas como masa molecular, densidad de flotación, inactivación térmica, estabilidad al pH y sensibilidad a varios solventes. Algunos aspectos importantes de la taxonomía actual de los virus son si su material genético es ADN o ARN, si es de cadena sencilla o doble, la organización de su genoma y la presencia de ciertos genes. Todo lo anterior se utiliza para ubicar a los virus en órdenes o familias particulares. Por ejemplo, el orden Mononegavirales está compuesto por aquellos virus que poseen genoma de cadena sencilla de ARN con orientación negativa. Finalmente, la clasificación se basa en las macromoléculas Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA producidas (proteínas estructurales y enzimas), propiedades antigénicas y propiedades biológicas (por ejemplo, acumulación de viriones en las células, infectividad) CUESTIONARIO GUIA PARA ESTUDIO DEL MÓDULO 1- ¿Qué característica/s presentan los virus que los obliga a ser parásitos intracelulares obligatorios? ¿Se los considera seres vivos? 2- Enumere las diferencias entre un virus y una célula bacteriana. 3- Qué son los virus no convencionales? Mencione características estructurales y de resistencia de los mismos. 4- ¿Por qué se considera que los virus co-evolucionaron con sus especies hospedadoras? 5- Tamaño viral. ¿Qué unidad de medición se utiliza para las partículas virales y cómo la define? ¿Qué instrumento se utiliza para su visualización? Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA MODULO II – LOS VIRUS COMO PARTÍCULAS EXTRACELULARES Objetivos: Que los estudiantes: a) Analicen y relacionen la estructura y composición de los virus. b) Desarrollen la capacidad de inferir parámetros para la clasificación taxonómica de los virus. • La partícula viral. Sus componentes. • Construcción de la cápside y la envoltura. Sus funciones. • Diseños básicos para la construcción de las cápsides: a) Helicoidal. b) Icosaédrico. c) Complejo. • Los mapas topográficos. Su utilidad. • Interacción entre proteínas y ácido nucleico. Encapsidación del genoma. • La diversidad genómica de los virus de vertebrados. La clasificación de Baltimore. (otros tipos de clasificación viral) • Familias de virus que infectan vertebrados. Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA 1.- INDIQUE LAS PARTES DE LAS SIGUIENTES PARTICULAS VIRALES Y EL TIPO DE SIMETRIA SIMETRIA: ------------- ----------------- -------------------- --------------------- 2.- MENCIONE PARTES DE LA CÉLULA DONDE UN VIRIÓN PUEDA OBTENER MEMBRANAS BILIPÍDICAS PARA SU ENVOLTURA. 1-Estructura de un virus envuelto: a-Indique en el esquema los diferentes componentes de la estructura viral. b-Mencione las funciones de cada componente. c-Mencione un agente viral que reúna estas características. Actividad 1. Mencione los componentes básicos de una partícula viral y sus funciones. 2. ¿Qué tipo de simetría de cápside existe? Mencione ejemplos de agentes virales para cada una de ellas. 3. Mencione la diversidad de genomas que existe en los virus de vertebrados. 4. ¿En qué se basa la Clasificación de Baltimore? 5. ¿Qué se tiene en cuenta para la clasificación taxonómica de los virus? Actividad Identificar características morfológicas en los siguientes esquemas y ejemplificar con agentes de interés en la medicina veterinaria dentro de la taxonomía viral. Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA 1 5 2 6 Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA 3 4 MODULO III – INTERACCIÓN VIRUS CÉLULA Objetivos: Que los estudiantes: a) Integren los conocimientos previos y los relacionen para comprender: - Las estrategias de los virus para penetrar a las células blanco. - Las estrategias de los virus para replicar su genoma y transcribir sus proteínas. - Las estrategias de los virus para abandonar la célula blanco. • Tipos de infecciones in vivo. • Tropismo • El ciclo vital de los virus. • Mecanismos de penetración de los virus a las células. • Los receptores y antireceptores. • Estrategias de los virus para la replicación de su genoma. • Transcripción, modificaciones pos-transcripcionales, síntesis de proteínas. • Ensamblado de los virus. • Abandono de la célula por la progenie viral. Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA 1. ¿Qué efectos puede producir la infección viral sobre la célula hospedadora? 2. Algunas familias virales de Tipo I (según Clasificación de Baltimore) replican en el núcleo: ¿por qué? Dé un ejemplo y explique su replicación. 3. Mencione las familias virales de genoma a DNA que utilizan la polimerasa celular. 4. Explique la replicación del virus de la fiebre aftosa. 5. ¿Qué familias virales portan RNA polimerasa RNA dependiente y por qué? 6. Enumere las etapas del ciclo de replicación de los miembros de la familia Retroviridae. 7. ¿Qué sucede en la etapa de maduración? 8. ¿Cómo se organiza la salida de un virus envuelto? 1- a) Mencione las etapas correspondientes a la replicación de un virus envuelto. b) Describa las funciones de las proteínas tempranas y tardías en el ciclo de replicación. c) Explique el mecanismo de adquisición de envoltura 2- Elija un virus de replicación tipo IV: a) Describa sus características morfológicas (tipo de genoma, simetría, si esenvuelto o desnudo). b) Explique las vías de ingreso y de salida del organismo. c) Explique los mecanismos de transmisión. 3- Replicación viral tipo V según la clasificación de Baltimore: a) Indique qué familias virales integran este tipo. b) Dé 3 ejemplos de virus que pertenezcan a este tipo de replicación mencionando cuáles son las especies animales que afectan y sus células. c) ¿Algunas de las familias mencionadas en el punto a) presentan arbovirus? ¿Cuáles? 4- Elija un agente viral de replicación tipo I (según la clasificación de Baltimore): a-Describa sus características morfológicas (tipo de envuelto o desnudo). b-Explique las vías de ingreso y de salida del organismo. c-Explique los mecanismos de transmisión. genoma, simetría, si es 1. Mencione las etapas del ciclo vital de los virus. 2. ¿Qué son los anti-receptores y dónde se encuentran? 3. Mencione la función de los receptores virales y dé ejemplos. 4. Describa el mecanismo de entrada de los virus envueltos a su célula hospedadora. 5. ¿De qué depende el tropismo de un virus por su célula hospedadora? Mencione ejemplos de agentes virales que tengan tropismo hacia células digestivas. Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA MODULO IV – EPIDEMIOLOGÍA VIRAL Objetivos: Que los estudiantes: a) Comprendan las estrategias de los virus para persistir en la naturaleza. b) Comprendan las estrategias de los virus para transmitirse entre hospedadores. c) Comprendan las estrategias de los virus para evadir las defensas del hospedador. • Rango de hospedadores de un virus. • Virus que infectan varios filum: Arbovirus. • Zoonosis virales. • Niveles de riesgo biológico de los virus. • Virus que infectan varias especies. • Virus específicos de especie. • Persistencia de los virus. • Mecanismo de transmisión. • Vías de penetración viral a un organismo. Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA • Estrategias de los virus para eludir las barreras naturales y la respuesta inmune del hospedador. (Módulo IV) Cuestionario A 1- Explique el concepto de arbovirus, cite 3 ejemplos de agentes virales que sean arbovirus mencionando a qué familias pertenecen y sus características morfológicas. Menciones cuáles serían las medidas de control epidemiológico para dicho agente. 2- Elija un virus que produce zoonosis; indique: a) A qué familia pertenece. b) Tipo de ácido nucleico y sitio celular de replicación. c) Cuáles son sus características morfológicas. d) Cuáles son sus células blanco. e) Si tiene reservorios y cuáles son. 3-Seleccione cuál/cuáles de los siguientes agentes virales es/son Virus zoonóticos: virus de la hepatitis infecciosa canina - virus de la encefalitis equina del este- virus de la influenza porcina a) Explique el concepto de zoonosis. b) Mencione a qué familia/s pertenece/pertenecen. c) Mencione cuál sería el nivel de bioseguridad en laboratorio para dicho/s agente/s. 1) Qué factores pueden favorecer el ingreso de los virus en un organismo? Mencione un ejemplo. 2) Mencione 3 vías de ingreso de los virus en el hospedador citando un ejemplo de agente viral para cada una de ellas. Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA 3) Cuáles de los mecanismos de transmisión viral pueden favorecer la producción de epidemias? Por qué? 4) Cuál es la diferencia entre un vector MECÁNICO y uno BIOLÓGICO? 5) Considerando los diferentes mecanismos de transmisión, qué tipo de infección viral sería más difícil de controlar en el medio ambiente? Por qué? 6) Cuál es la diferencia entre una ZOONOSIS DIRECTA y una METAZOONOSIS? 7) Qué factores pueden favorecer la emergencia de zoonosis? Por qué? Cuestionario B 1) Explique un mecanismo utilizado por los virus para persistir a nivel celular. Mencione un ejemplo de agente viral que utilice esta estrategia. 2) Qué mecanismos pueden utilizar los virus con genoma de ADN para persistir en un organismo infectado? 3) Mediante qué estrategias pueden persistir en un organismo los virus de RNA? Mencione un ejemplo. 4) Cuáles serían los pasos del ciclo biológico de los virus para persistir en la naturaleza?. 5) Cuáles son los factores que condicionan la persistencia de los virus en la naturaleza? 6) Porqué los individuos de una población determinada, que poseen inmunidad contra un virus, pueden ser susceptibles a re-infecciones con ese virus? 7) Explique el mecanismo de transmisión de los ARBOVIRUS. Mencione un ejemplo. 8) Mencione dos ejemplos de factores que evitan la extinción viral. 9) Por qué se clasifica a los virus exóticos, en un país o región, en el máximo nivel de riesgo biológico aunque no representen riesgo aparente para la salud humana? 10) Con qué nivel de bioseguridad se debería proceder frente a la sospecha de una infeción viral con un virus desconocido? Justifique. 11) Con qué recursos contaron los investigadores para controlar la viruela en el mundo? 12)¿qué factores socio-ambientales dificultan el control de la diseminación viral? Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA 13) Qué conocimientos del agente viral se necesitan para su clasificación taxonómica? 14) Qué medidas de control implementaría frente a una enfermedad viral con vectores y reservorios? 15) Definir vector y y reservorio, y dar un ejemplo dentro de una enfermedad viral. MATERIAL DE CONSULTA DISPONIBLE EN LA PÁGINA DE VIROLOGÍA: EPIDEMIOLOGÍA DE LAS ENFERMEDADES VIRALES ZOONOSIS VIRALES NIVELES DE RIESGO BIOLÓGICO DE LOS VIRUS PERSISTENCIA VIRAL Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA MODULO V – PATOGENIA VIRAL Objetivos: Que los estudiantes: a) Comprendan el efecto in vivo de la infección viral a nivel celular y de los diferentes sistemas afectados en el hospedador. • Infecciones virales del sistema respiratorio. • Infecciones virales del sistema digestivo. • Infecciones virales del sistema nervioso. • Infecciones virales del sistema reproductivo. • Infecciones virales de piel y mucosas. • Infecciones virales sistémicas. Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA Modulo 5 Sindromes reproductivo y respiratorio 1- Mencione agentes virales de las siguientes familias que estén involucrados a fallas reproductivas e indique a que especies afectan: BUNYAVIRIDAE PARVOVIRIDAE REOVIRIDAE ARTERIVIRIDAE FLAVIVIRIDAE CIRCOVIRIDAE HERPESVIRIDAE 2- Por qué vía se pueden trasmitir los agentes virales que afectan el tracto reproductivo? Mencione ejemplos 3- Cuáles son los mecanismos de defensa del hospedador que pueden limitar el inicio de una infección respiratoria? 4- Mencione tres agentes virales que estén involucrados en el síndrome respiratorio e indique a que familia pertenecen y a que especies afectan. 5- Explique el concepto de AISLAMIENTO VIRAL, mencionando su utilidad. 6- ¿Cuáles serían las muestras adecuadas para aislamiento viral de cuadros respiratorios? 7- ¿cuál es el momento óptimo en el curso de una infección para recolectar muestras para aislamiento viral? 8- ¿Cuáles son los sustratos adecuados para el aislamiento viral? BIBLIOGRAFIA SUGERIDA Página Facultad: 1) Familias virales relacionadas a cuadros respiratorios 2) Familias virales relacionadas a cuadros reproductivos 3) Diagnóstico viral Sindromes digestivos 1- Elija un virus que afecte sistema digestivo; indique: a) A qué familia pertenece. b) Tipo de ácido nucleico y sitio celular de replicación. c) Cuáles son sus características morfológicas. d) Cuáles son sus células blanco. e) Los mecanismos de transmisión. Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA 2- Elija un virus que cause infección sistémica; indique: a) A qué familia pertenece. b) Tipo de ácido nucleico y sitio celular de replicación. c) Cuáles son sus características morfológicas. d) Cuáles son sus células blanco. e) Los mecanismos de transmisión 1.- Mencione dos agentes virales que produzcan enfermedades digestivas en caninos, e indique a qué familias pertenecen y cuáles son las características (simetría, genoma, tipo de replicación etc.) de dichas familias. 2.- Mencione 3 factores orgánicos que pueden inhibir la infección viral en el sistema digestivo. Síndrome Nervioso 8- En el siguiente párrafo referente al diagnóstico de rabia canina TACHE LO QUE NO CORRESPONDA: La rabia canina se diagnostica con un método de laboratorio que es la inmunofluorescencia directa/ aislamiento viral. Para ello, se envían al laboratorio muestras de sangre / tejido nervioso tomadas en la necropsia del perro. Para detectar la presencia de antígenos / anticuerpos se añade anticuerpos marcados/ cultivos celulares. La detección de fluorescencia / efecto citopático indica el resultado positivo. 9-En un ELISA para diagnóstico de anticuerpos contra el virus de la diarrea viral bovina: ¿qué anticuerpo conjugado debo usar, y contra qué está dirigido? 10- En la siguiente tabla complete los datos de agentes virales relacionados a sindromes nerviosos: Agente viral Familia Características morfológicas/ replicación Mecanismos de Transmisión Mét. de diagnóstico Solicitado Virus de la rabia canina Virus de la encefalitis equina Bibliografía: Diagnóstico viral- Virología veterinaria-Técnicas de laboratorio – virus que afectan sistema nervioso – síndromes digestivos ( material sitio web FCV) Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA Respuesta inmune y Técnicas de Laboratorio para detección de Antígenos, Genomas y Anticuerpos. a) ¿Qué tipo de respuesta inmune es más efectiva para controlar una infección viral? Fundamente b) Mencione tres funciones de los anticuerpos contra las partículas virales. c) ¿Qué tipo de vacunas despiertan una mejor respuesta inmune humoral y celular y por qué? d) ¿Cuándo y por qué se usa la técnica de PCR? e) ¿En qué se basa la técnica de inmunofluorescencia indirecta? ¿Qué puede detectarse mediante la misma? f) ¿En qué se basa la técnica de Western Blot? ¿Qué puede detectarse mediante la misma? g) ¿Cuál es la aplicación práctica y el fundamento de la técnica de Neutralización viral? h) ¿Qué métodos conoce para almacenar virus? 1- Diagnóstico serológico: Curso clínico Dias 0 10 21 25 a) Complete el gráfico anterior indicando cuáles son los momentos óptimos de toma de muestras para aislamiento viral y para la obtención de sueros pareados para el diagnóstico serológico b) ¿Qué entiende por conversión serológica y cuál es su aplicación práctica? 2-Si desea efectuar la técnica de aislamiento viral usando como sustratos cultivos celulares: a- Mencione un procedimiento para la toma de muestras en una lesión de mucosas b- Indique cuál sería el momento óptimo en el cuadro clínico para la toma de muestras para intento de aislamiento viral. c- Que técnica utilizaría para detectar antígenos virales en la superficie de las células infectadas? Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA 3 .- ESQUEMATICE una TÉCNICA DE inmunofluorescencia directa para detectar antígenos virales en una muestra de células infectadas. Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA MODULO VI – DIAGNÓSTICO Y CONTROL DE LOS VIRUS Objetivos: Que los estudiantes: a) Adquieran los criterios de aplicación de técnicas para el diagnóstico de las infecciones virales. b) Conozcan herramientas para la prevención y control de infecciones virales. • Dinámica de la infección viral en las poblaciones. El fenómeno “iceberg”. • Diagnóstico de las infecciones por virus. • La prevención de la diseminación de los virus. • Vacunas antivirales. • Efecto de agentes físicos y químicos sobre los virus. • Fármacos antivirales. • Virus emergentes. Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA MATERIAL: ARTÍCULO REVISTA NATIONAL GEOGRAPHIC (EN FOTOCOPIADORA) a) Clasifique al Virus Influenza según tipo de replicación (clasificación de Baltimore); mencione su Familia. b) ¿Con qué síndromes se relaciona y a qué especies afecta? c) Describa su genoma. ¿Qué característica del mismo tiene mayor relevancia y por qué? d) ¿Cuáles son los antígenos de superficie que sirven para la clasificación de los distintos aislamientos del Virus Influenza a nivel mundial en todas las especies? e) ¿Por qué es importante el continuo análisis epidemiológico y seguimiento de los aislamientos regionales de este virus? f) 1- ¿Qué causa importante menciona el artículo por la cual puede aparecer una zoonosis viral emergente? ¿cuáles agentes virales cita como ejemplos ? g) 2- ¿A qué se llama "derrame" en la trasmisión viral y cómo se explica? h) 3-¿Qué se pudo descubrir del virus Hendra desde su primer brote en 1994, y cuáles datos restan conocer aún para optimizar su control? i) 4- En la búsqueda de datos de la circulación viral entre especies ¿ qué pruebas moleculares podría utilizar el investigador ? Justifique sus elecciones j) 5- Qué factores contribuyen a la instalación de brotes de enfermedades virales en una especie? Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA EPIDEMIA! SIMULACION DE CASOS RESOLUCION DE PROBLEMAS 1- A partir de un cuadro clínico con signos reproductivos en vaquillonas, se toman muestras para aislamiento viral y se remiten al laboratorio de Virología. a) ¿Qué cultivo celular utilizaría y por qué? b) ¿Cómo se evidencia en un cultivo celular un resultado positivo y cómo podría confirmarlo? c) ¿Cómo determinaría la concentración viral en el sobrenadante del cultivo celular infectado? 2- En un criadero de caninos se detectó un cuadro clínico respiratorio, de características virales, en un gran número de animales. Tres animales jóvenes presentan un cuadro agudo con sintomatología característica (tos, estornudos, descarga nasal abundante, conjuntivitis con secreción). a) ¿Qué muestras tomaría para enviar al laboratorio de virología? b) De acuerdo a cada una de las muestras recolectadas, ¿qué técnicas diagnósticas solicitaría al laboratorio para cada una de ellas?, qué intenta buscar? c) De acuerdo a cada una de las muestras recolectadas, ¿qué técnicas diagnósticas solicitaría al laboratorio para cada una de ellas? La técnica mencionada le permite antígenos, anticuerpos o genoma viral? Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA 3- A partir de un cuadro clínico con signos en piel y mucosas en terneros, se toman muestras para aislamiento viral y se remiten al laboratorio de Virología. a) ¿Qué sustrato celular corresponde utilizar para esta determinación y por qué? b) ¿Cómo se evidencia un resultado positivo y cómo se confirma? c) ¿Cómo determinaría la concentración viral? 4- En un criadero de aves se detectó un cuadro clínico respiratorio, de características virales, en un gran número de animales. Tres animales jóvenes presentan un cuadro agudo con sintomatología característica (tos, estornudos, descarga nasal abundante, conjuntivitis con secreción). a) ¿Qué muestras tomaría para enviar al laboratorio de virología? b) De acuerdo con las muestras recolectadas, ¿qué técnicas diagnósticas solicitaría al laboratorio? 5- En un criadero de cerdos se detectó un cuadro clínico reproductivo con abortos, de características virales, en un gran número de animales. a) Mencione al menos tres muestras que tomaría para enviar al laboratorio de virología. b) Explique el correcto acondicionamiento de cada una de las muestras para su envío al laboratorio. De acuerdo a cada una de las muestras recolectadas, ¿qué técnicas diagnósticas solicitaría al laboratorio?, ¿intenta buscar antígenos, anticuerpos o genoma viral? Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA Facultad de Ciencias Veterinarias UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO Tandil- ARGENTINA