PRÁCTICO N° 8 CONTROL DE CALIDAD DE AGUA OBJETIVOS Incorporar conocimientos generales sobre los posibles contaminantes en agua. Conocer los parámetros microbiológicos que debe reunir el agua ya sea para consumo humano o para algún uso específico (agrícola, riego, recreacional etc.). Conocer la metodología analítica disponible para realizar el control de calidad de aguas para consumo humano. Adquirir habilidades y/o destrezas para evaluar la calidad sanitaria de muestras de agua mediante la búsqueda de microorganismos mesófilos totales. Valorar la responsabilidad, interacción, cooperación y respeto para fomentar una eficiente labor grupal. Instructivo para la toma de muestras de agua Análisis microbiológicos recipientes estériles Análisis químicos recipientes limpios Si es de grifo situado en una cañería de agua corriente Limpiar la boca del grifo Dejar correr el agua por 2 o 3 minutos Esterilizar el grifo Dejar correr el agua Tomar la muestra Si es de un grifo situado en una cañería de un pozo semisurgente. Grifos que estén conectados directamente a las cañerías ascendentes del pozo Pozo de uso continuo: correr el agua por 30 minutos Pozo fuera de servicio: dejar correr el agua por 5 horas. Se procede a la toma de muestra como en el punto anterior • Llenado de frascos hasta 2-3 cm antes de la tapa para agitar Evaluación de la calidad microbiológica del agua Recuento de microorganismos mesófilos totales Presencia-Ausencia de Pseudomonas aeruginosa Recuento de organismos Coliformes totales y fecales o termotolerantes Presencia-ausencia de Escherichia coli Evaluación de la calidad microbiológica del agua Recuento de microorganismos mesófilos totales Medio PCA (Agar para conteo en placa) Método de inmersión o embebido Incubación a 28-30°C por 48 horas Evaluación de la calidad microbiológica del agua Presencia-Ausencia de Pseudomonas aeruginosa Siembra por estriado en dos medios de cultivo diferenciales Incubación a 37°C por 24 hs Fluoresceína + Piocianina + Medio King B: observación de fluorecencia bajo luz UV Medio King A Evaluación de la calidad microbiológica del agua Recuento de organismos Coliformes Método del Número más Probable (NMP) Medio liquido Mc Conkey Coliformes totales: incubación a 35-37ºC por 48 hs Coliformes fecales o termotolerantes: incubación a 44-45ºC por 48 hs Positivo: producción de gas y viraje de color acidificación del medio. Negativo: sin viraje de color y sin producción de gas. Evaluación de la calidad microbiológica del agua Presencia-ausencia de Escherichia coli Medio sólido EMB-Levine Incubación a 44-45ºC por 48 hs Colonias presuntivas de E. coli de color negro con brillo verde metalizado Método para la determinación de microorganismos mesófilos y coliformes Mesófilos y Coliformes totales Muestra de agua 1 ml 10 ml 1 ml 9 ml H2O destilada 1 ml 10 -1 Recuento de mesófilos totales Concentración doble 1 ml Organismos coliformes totales Incubar a 37 °C por 48 hs LECTURA Método para la determinación de microorganismos mesófilos y coliformes Coliformes fecales o termotolerantes se repican mediante la técnica del NMP en medio líquido Mac Conkey Incubar 44-45ºC por 48 hs Tubos positivos para coliformes totales Lectura Método para la determinación de microorganismos mesófilos y coliformes Escherichia coli Se siembra por estriado en medio sólido EMB-Levine Incubar 44-45ºC por 48 hs colonias presuntivas de E. coli Tubos positivos para coliformes fecales o termotolerantes Confirmación mediante métodos bioquímicos. Normas de calidad de agua para consumo humano, uso recreacional y efluentes Valores limites permitidos Mesófilos totales (UFC/mL) Coliformes totales (Bacterias/100 mL) Coliformes fecales (Bacterias/100 mL) Pseudomonas aeruginosa (Ausencia/100 mL) E. coli (Ausencia/100 mL) Agua potable (CAA) 500 <3 NE Ausente Ausente Agua envasada (CAA) 500 <3 NE Ausente Ausente Recreacional (EPA) NE NE NE 126 126 Efluentes (SRH) NE < 5000 <1000 NE NE NE: no especifica. CAA: Código Alimentario Argentino. U.S. EPA: Agencia de Protección Ambiental de los EEUU. SRH: Subsecretaría de Recursos hídricos. Normas calidad de agua para riego según la OMS (Organización Mundial de la Salud) Valores limites permitidos /100 mL Categoría A: riesgo para consumidores y trabajadores (cultivos hortícolas, campos de deportes y parques públicos) Categoría B: riesgo para (cereales, forrajeras, árboles Coliformes fecales E. coli <100 Ausente <1000 Ausente <1000 <1 trabajadores Categoría C: sin riesgo para consumidores ni trabajadores (forestaciones) Actividades 1. Siembra de microorganismos mesófilos totales -Trabajando en condiciones de asepsia, realizar la siembra de muestras de agua de distinta procedencia (agua para consumo humano, bebedero de animales y tambo). 2. Interpretación de resultados - Realizar el recuento de coliformes fecales y comparar con normas de referencia. - Observar colonias de E. coli creciendo sobre medio EMB-Levine.