INSTITUTO TECNOLÓGICO DE SONORA DIRECCIÓN DE INVESTIGACIÓN Y ESTUDIOS DE POSGRADO EVALUACIÓN DE UN ADITIVO ENZIMÁTICO EN EL TRATAMIENTO BIOLÓGICO AERÓBICO DE AGUAS RESIDUALES PROCEDENTES DE UN RASTRO TIF TESIS QUE PARA OBTENER EL GRADO DE MAESTRO EN CIENCIAS EN RECURSOS NATURALES PRESENTA HÉCTOR GILBERTO LEYVA BARRERAS CD. OBREGÓN, SON. SEPTIEMBRE DE 2001 AGRADECIMIENTOS A Dios, por la vida que me ha prestado y por permitirme retomar el camino que siempre he querido. A mi familia, por su comprensión y apoyo. A nuestro Instituto Tecnológico de Sonora, por su incansable labor en la educación. A mi asesor, M. en I. Anacleto Félix Fuentes, por compartir sus conocimientos, su tiempo y su voluntad hacia la mejora continua. A nuestro Coordinador, M. en C. Francisco Montaño, por su trabajo y apoyo para llegar a nuestra meta. A mis revisores, M. en C. Guadalupe Aguilar Apodaca y M. en C. Iram Mondaca, por su gran disposición y apoyo para la realización de este trabajo. Al personal de la DIEP, que cooperaron para la realización de este trabajo, especialmente al Ing. Rafael Angulo I. Al Departamento de Ecodesarrollo, al M. en C. Luciano Castro E., Dr. Fernando Lares V., M. en C. Martín Villa, M. en C. Ramón Zavala F., a mis compañeros tesistas, practicantes y servicio social. Al Ing. Víctor M. Olea Ruiz, por su apoyo y comprensión para la realización de estos estudios. Al Biol. Salvador Meza G., Dr, Jared P. Jones, por su ayuda. A mis compañeros: Ing. Beatriz Torres, Ing. Arturo López, Quim. Jorge Valenzuela y Biol. Humberto Ruelas, por su apoyo y amistad prestada. DEDICATORIA A mi madre y hermanos: Guadalupe, Carlos y Víctor, por su amor y apoyo . A mi familia: Angélica, Héctor Ulises, Gilberto y Angel, Lilia, Rafael, Mauro, Rodrigo, Marina, Jesús y Lilián, por su amor y ayuda. A mis abuelos: Joaquín y Catalina A mis tíos: Gregorio, Jesús, María Elena, Plácido, Francisco, Esthela, Isidro, Manuela, Angelita, Lorenza, Eduardo, Ramón, Ramona, Francisca, Joaquín, Eduwiges. A mis amigos: Javier, Enrique, Angelita, Inocente, Beatriz, Fernando, Socorro. América, José y ÍNDICE Página LISTA DE CUADROS iv LISTA DE FIGURAS v TABLAS vi RESUMEN vii INTRODUCCIÓN 1 1.1. Antecedentes 1 1.2. Planteamiento del problema 4 1.3. Justificación 5 1.4. Objetivo 5 1.5. Hipótesis 5 1.6. Delimitación del proyecto 6 FUNDAMENTACIÓN 7 2.1. Situación del agua en México y su contaminación 7 2.2. Problemática local 9 2.3. Aguas residuales 10 2.3.1. Definición 10 2.3.2. Clasificación de las aguas residuales por su origen 10 2.3.3. Características físicas, químicas y biológicas de las aguas residuales 12 2.3.3.1. Características de los compuestos orgánicos 12 2.3.3.2.Características de los componentes inorgánicos 13 2.3.3.3. Características del contenido de sólidos 13 2.3.3.4. Características de los componentes microbianos 14 2.3.4. Principales contaminantes de las aguas residuales 2.4 Tratamiento de las aguas residuales 16 17 2.4.1. Tipos de tratamientos del agua residual 18 2.4.1.1. Tratamiento primario 18 2.4.1.2. Tratamiento secundario 18 2.4.1.3 Tratamiento terciario 20 2.5. Microbiología de las aguas residuales 20 2.5.1.Géneros de microorganismos en el agua residual 20 2.5.2. Metabolismo microbiano 21 2.5.3. Necesidades nutritivas de los microorganismos 23 2.5.4. Necesidades de fuentes nitrogenadas 24 2.5.5. Necesidades de fuentes de minerales 24 2.5.6. Necesidades de fuentes de carbono 25 2.6. Enzimas 25 2.6.1. Clasificación de enzimas por su actividad 26 2.6.2. Función de las enzimas 26 2.6.3. Utilización de las enzimas en la industria alimentaria 27 2.6.4. Antecedentes de la utilización de las enzimas en el tratamient o de las aguas residuales 28 2.7. Los minerales y su efecto durante el tratamiento de los residuos agroindustriales 29 2.8. Normatividad sobre aguas residuales 30 2.8.1. Norma oficial que regula las descargas y tr atamiento de aguas residuales (NOM-001-ECOL 1996) 30 2.8.2. Norma oficial qu e regula la operación y disposición de residuos en los rastros 31 MÉTODO 32 3.1. Zona de estudio 32 3.2. Localización del experimento 33 3.3. Diseño experimental 33 3.4. Descripción del sistema 33 3.4.1. Estabilización del sistema 34 3.4.2. Pretratamiento de la muestra y funcionamiento del sistema 34 3.4.3. Parámetros fisicoquímicos evaluados en los tratamientos 35 RESULTADOS Y DISCUSIÓN 37 4.1. Remoción de materia orgánica (Demanda Química de Oxígeno soluble) 37 4.2. Remoción de nitrógeno y fósforo 39 4.3. Remoción del contenido de microelementos Zinc, Cobre, Fierro, Cadmio y Plomo 41 4.4. Remoción de Coliformes 42 4.5. Remoción de sólidos totales volátiles 42 4.6. Temperatura 43 4.7. pH 44 4.8. Oxígeno 46 4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 47 5. BIBLIOGRAFÍA 49 ANEXOS 54 Anexo A. Metodología de técnicas analíticas para aguas residuales 54 Anexo B. Norma oficial mexicana NOM-CCA-022-ECOL/1993 76 LISTA DE CUADROS Cuadro No. Descripción 1. Parámetros fisicoquímicos evaluados. Página 35 2. Análisis de varianza de la remoción de DQO, durante el tercer día del experimento. 3. 38 Resultados de la comparación de medias, durante el tercer día del experimento. 38 4. Porcentaje de remoción de DQO soluble. 39 5. Remoción de fósforo. 41 6. Contenido mineral en los diferentes tratamientos y en el producto utilizado. 41 7. Valores de la evaluación de la contaminación por coliformes antes y después del tratamiento. 8. Remoción de sólidos totales volátiles. 42 43 LISTA DE FIGURAS Figura No. Descripción Página 1. Laguna de oxidación del rastro TIF. 32 2. Distribución de los reactores en el experimento. 33 3. Cribado de la muestra. 35 4. Remoción de la DQO soluble. 39 5. Remoción de Nitrógeno. 40 6. Comportamiento del pH por tratamiento. 45 7. Producción de espuma en los reactores 46 LISTA DE TABLAS Tabla No. Descripción 1. Clasificación de algunos de los parámetros del agua residual. Página 11 2. Características físicas, químicas y biológicas del agua residual y su procedencia. 15 3. Principales elementos que constituyen la célula microbiana. 23 4. Clasificación de enzimas por la reacción que catalizan. 26 5. Rango normal de operación en tratamientos biológicos aeróbicos. 44 RESUMEN La utilización del agua dentro del proceso de obtención de la carne, produce un volumen de agua residual de 600 litros por animal sacrificado (rastro TIF), cuyo contenido contaminante es alto en materia orgánica. La utilización de tratamientos biológicos incompletos, da a lugar a que se generen aguas residuales fuera de norma (NOM-CCA022-ECOL/ 1993), las que al ser descargadas a colectores agrícolas originan malos olores y potenciales problemas a la salud. El presente trabajo tiene por objeto demostrar la utilidad de un concentrado enzimático y minerales traza en el tratamiento biológico aeróbico, pretende contribuir a la mejora de la calidad del agua residual del rastro TIF y reducir el impacto sobre colonias aledañas, la Bahía de Lobos y del Golfo de California. La fase experimental de este trabajo evaluó tres dosis 20, 30 y 40 ppm de un concentrado enzimático Waste Water Treatment + TM , utilizando un diseño experimental completamente al azar de cuatro tratamientos con tres repeticiones, utilizando un sistema batch aeróbico de 16 reactores con un volumen útil de trabajo por reactor de 10 litros. Las evaluaciones realizadas fueron la remoción de la materia orgánica, sólidos volátiles totales, sólidos suspendidos volátiles, nitrógeno, fósforo, coliformes fecales, minerales traza, comportamiento de temperatura, oxígeno disuelto y pH. El tiempo de retención hidráulica en los tratamientos fue 7 días. Los resultados obtenidos demuestran que un aditivo enzimático a razón de 30 ppm logró remover al tercer día 36.78 % de DQO soluble, acumulando el 88.77 % hasta ese día, mientras que el blanco removió 24.42 %, acumulando 71.36% de DQO soluble. Por lo que la utilización de un aditivo enzimático a esta concentración en dicho tiempo aumenta un 19.66% más la eficiencia. Asimismo este tratamiento al término de 7 días reduce 87.33 % de nitrógeno orgánico, 72.86% de nitrógeno total, 63.91% de nitrógeno amoniacal, 99.99 %de fósforo total, así mismo el contenido de coliformes se reduce en un 99.5% y 54. 23% de sólidos totales volátiles. Las concentración de Zn, Pb, Cd, Fe, Cr y Cu, cumplieron con las normas oficiales para descargas, en todos los tratamientos. Los valores promedio de oxígeno disuelto en mg/l, se mantuvo entre 1 a 3 ppm, en lo que respecta a temperatura, ésta fue de 26º C en promedio, el pH durante el experimento, estuvo entre 7.5 a 9. Por los resultados obtenidos en el presente trabajo se concluye que la utilización de concentrados enzimáticos en el agua residual del rastro TIF, representa una opción para reducir el tiempo de tratamiento de las aguas residuales y evitar gastos por la construcción de nuevas áreas para tratamiento biológico aeróbico. I. INTRODUCCIÓN 1.1 Antecedentes La contaminación ambiental es un problema generalizado a nivel mundial; el agua, el aire y el suelo han sufrido un deterioro grave generado por el hombre durante la búsqueda de mejores niveles de vida. México no ha sido la excepción y la problemática ambiental es causada en gran parte por la cantidad de aguas contaminadas generadas de las diferentes actividades humanas como la doméstica, industrial y agropecuaria (Quintero,1994). Sonora cuenta con diferentes clases de actividades productivas, entre ellas la producción agrícola que abarca el 47.5%, la ganadera el 36.1% y otras 16.4%. En el municipio de Cajeme las actividades productivas están distribuidas en: el sector agrícola con un 84.6% , el sector ganadero con un 10.5% y la industria y otras actividades se engloban a un 5.1%(INEGI,1991). El municipio de Cajeme ha desarrollado actualmente la actividad pecuaria como una alternativa para complementar la actividad agrícola. Siendo la porcicultura una de las que ha alcanzado más crecimiento en la actualidad. El proceso de comercialización del cerdo y la necesidad de obtener mejores ingresos económicos a través de la venta de canales y cortes de carne a nivel nacional y extranjero, ha llegado a construir dos rastros para el sacrificio de 28951 reses y 140486 cerdos anualmente (INEGI, 2000). Los rastros como instalaciones industriales dedicadas al sacrificio animal y procesado de carnes, requieren de agua para las diversas actividades como: limpieza, consumo humano y enfriamiento de equipo de refrigeración. Siendo el agua un recurso natural limitante para la vida y observando la facilidad con la que es contaminada durante su utilización en actividades industriales de los rastros, como alternativa de solución se considera optimizar el consumo de agua y generar alternativas de tratamiento para el agua contaminada antes de su descarga. La generación de aguas residuales en los rastros se da a razón de 600 litros en promedio por animal sacrificado, la composición está dada por heces fecales, orina, sangre y restos de tejidos principalmente. El grado de degradación biológica que presentan este tipo de contaminantes nos índica que puede ser utilizado como medida de remediación tratamientos biológicos que ayuden a recuperar las características originales del agua a costos rentables. Las aguas residuales originadas en los rastros de Cajeme contienen alta cantidad de compuestos orgánicos, las cuales por disposiciones gubernamentales no deben descargarse sobre colectores, sin tratamiento previo a fin de evitar daños en los cuerpos de agua como ríos, lagos ó ecosistemas marinos (NOM-001-ECOL-1996). El tratamiento de esta agua se ha dado por procedimientos biológicos lagunares de tipo anaeróbico y facultativo principalmente, teniendo como resultado un proceso lento en la recuperación de la calidad del agua de desecho, lo cual ha origina que haya descargas a colectores fuera de norma. La corrección al proceso de tratamiento de agua nos solicita hacer inversiones mayores al necesitar más espacio para construir más lagunas de tratamiento o invertir en equipos de aireación que favorezcan el crecimiento aeróbico de microorganismos con objetivo de reducir los tiempos de residencia hidráulica y con ello el crecimiento de microalgas que al final del tratamiento constituyen también otro problema al descargar el agua residual a los colectores hidráulicos del Valle del Yaqui. La ubicación de los rastros dentro de la ciudad no favorece la utilización de lagunas para tratamientos biológicos como el anaeróbico y facultativo, por la producción de malos olores y proliferación de mosquitos. Asimismo el costo del terreno es alto, lo que da como resultado que la solución al tratamiento del agua residual se de al descargar el agua residual a la red urbana de drenaje. Ocasionando con ello problemas graves de asolvamiento de tuberías y descontrol en el proceso de tratamiento de las plantas de tratamiento de agua de origen urbano. Las aguas residuales de los rastros son típicamente orgánicas y se pueden tratar tanto por métodos primarios como por secundarios (biológicos). Afortunadamente un alto porcentaje de materia orgánica es susceptible de descomponerse. Contiene nutrientes suficientes para que las bacterias aeróbicas conviertan los desperdicios en productos acabados de CO2 y agua, con la condición de que exista suficiente oxígeno en el agua. La falta de oxígeno hace que disminuyan las bacterias aeróbicas aumentando las anaeróbicas, provocando la producción de complejos orgánicos y gases como metano y ácido sulfhídrico. En el tratamiento primario, intervienen métodos que eliminan los sólidos de las aguas residuales por medios mecánicos, utilizando rejas, filtros, tanques de flotación y/o sedimentación y cámaras de arena. Si se emplea este tipo de equipos y se recuperan sólidos, grasa y sangre, con ello se logra resolver la mayor parte de los desperdicios del rastro. No obstante la calidad microbiológica del agua y los parámetros que se enmarcan en las normas oficiales no se cumplen con solo utilizar tratamientos primarios. El tratamiento secundario puede eliminar más del 90% de las bacterias de las aguas residuales, utilizando la misma microflora del tratamiento. Las formas más comunes del tratamiento secundario, incluyen un sistema de filtración por goteo, un sistema de activación por sedimentación, un sistema de lagunas, evaporación/irrigación o una combinación. La fase final incluye un sistema de añadir cloro para desinfectar el efluente. Un tratamiento de 15 a 30 minutos antes de la descarga asegura una eliminación de un 99% de los microorganismos (Libby, James1981). Una alternativa para incrementar la eficiencia del tratamiento biológico del agua residual es utilizar complejos enzimáticos los cuales ayudan a acelerar la degradación de todos los contaminantes a sustancias químicas más simples, para así hacerlas asimilables para los microorganismos que intervienen en el proceso biológico. Estos compuestos enzimáticos se complementan con minerales traza, a fin de construir el medio de cultivo que proporcionará las condiciones necesarias para el buen desarrollo de las cepas microbianas involucradas en el proceso de tratamiento biológico. Atlas (1991) indica que la utilización de microorganismos , compuestos enzimáticos y minerales traza para el tratamiento de aguas residuales, es un proceso que implica un gasto considerable, así como también constituye un riesgo de toxicidad, por lo que evaluar la efectividad de este tipo de tratamientos en la recuperación de la calidad del agua tratada es de suma importancia. 1.2. Planteamiento del problema Debido a complejidad de compuestos orgánicos que componen a las aguas residuales provenientes de los rastros y los problemas de malos olores provocados actualmente. Se plantea un estudio de tratamiento biológico aeróbico de dichas aguas utilizando un aditivo enzimático adicionado con minerales traza a fin de evaluar la eficiencia que aportan al tratamiento en la recuperación de la calidad del agua. 1.3. Justificación Cd. Obregón cuenta actualmente con dos rastros para el sacrificio de cerdos y bovinos. Siendo anualmente un total de 28951 bovinos y 140486 cerdos los procesados (INEGI, 2000). Para ello se utiliza un promedio de 600 litros de agua por animal sacrificado en el Rastro TIF. Normalmente las aguas residuales son arrojadas a colectores municipales y agrícolas, debido al alto contenido de materia orgánica de éstas y a la falta de capacidad de sus tratamientos biológicos, provocan malos olores y malestar a los habitantes de colonias aledañas. Mediante esta investigación se pretende eficientar los tratamientos biológicos aeróbicos en el agua, para mejorar su calidad y así reutilizarlas en actividades agrícolas para evitar posteriores problemas a la salud, lo que redunda en beneficio tanto para las colonias de la zona norte de Cd. Obregón, así como para habitantes de las poblaciones por donde están ubicados los colectores. 1.4. Objetivo Verificar la eficiencia que proporciona un aditivo enzimático complementado con minerales traza en el tratamiento biológico aeróbico de aguas residuales procedentes de un rastro, con el fin de mejorar su calidad sanitaria y poder así destinarla al riego agrícola. 1.5. Hipótesis El uso de aditivos enzimáticos complementados con minerales traza, aumenta la eficiencia del tratamiento biológico aeróbico de aguas residuales de los rastros TIF. 1.6. Delimitación del proyecto La investigación se realizará con aguas residuales provenientes de un rastro TIF de Cd. Obregón. Utilizando un montaje experimental en el Laboratorio de Agua, Suelo y Planta de la Dirección de Investigación y Estudios de Posgrado del Instituto Tecnológico de Sonora. El experimento se realizó durante un mes, limitándose a una semana el tiempo de retención hidráulica, tiempo necesario para observar en el agua una variación en los parámetros fisicoquímicos iniciales que se presentan al momento de la descarga hasta llegar posiblemente a la recuperación de la calidad sanitaria de la misma, que se señala por la NOM-001-ECOL-1996, para límites máximos permisibles de contaminantes en las descargas de aguas residuales en aguas y bienes nacionales, y que posteriormente se destine a riego agrícola. II. FUNDAMENTACIÓN 2.1. Situación del agua en México y su contaminación México cuenta con suficiente volumen de agua para satisfacer las demandas de abastecimiento de todos los sectores, sin embargo su distribución no es homogénea. Se estima que la extracción de agua en México, para usos principales, ascendió en 1995 a 186.7 km³, de los cuales 73.5 km³ se destinaron a usos consuntivos, es decir a usos que sólo regresan al ciclo hidrológico una parte del agua utilizada, distribuidos de la siguiente manera: 61.2 km³ para riego agrícola, 8.5 km³ para uso doméstico, 2.5 km³ para la industria, 1.3 km³ para la acuacultura intensiva. Los 113.2 km³ restantes se destinaron a la generación de energía hidroeléctrica, clasificada como demanda no consuntiva (INEGI, 1997). Los grandes polos de desarrollo demandan cada vez mayores volúmenes de agua; aportando también mayor volumen de contaminantes, al descargar sus aguas residuales municipales e industriales en los cuerpos receptores, la mayoría de las veces sin tratamiento alguno (Diario oficial, 1990). En México, las principales fuentes de contaminación se han agrupado de acuerdo a su procedencia en tres sectores: social, correspondiente a las descargas de aguas residuales municipales de origen doméstico y público; el agropecuario, representado por efluentes de granjas y terrenos agrícolas; y el industrial, representado por las descargas originadas por las actividades de extracción, transformación de recursos naturales, producción de bienes de consumo y satisfactores para la población (Diario oficial 1988). A nivel nacional se genera una carga contaminante de 2.4 millones de toneladas al año (medidas como DBO), correspondiendo el 36% al sector municipal y el 64% al sector industrial (Diario oficial 1990). La generación a nivel nacional de aguas residuales asciende a 184 metros cúbicos por segundo, 200 litros por habitante por día, de los cuales el 43% proviene de actividades industriales y el resto de descargas domiciliarias y de servicios (Lacy, 1993). La actividad pecuaria del país representa actualmente un aspecto crítico, en cuanto al deterioro ambiental y sanitario en las regiones en donde se práctica, debido a la agresividad de los desechos que produce, al escaso o nulo tratamiento que reciben y a su inadecuada disposición (Diario oficial ,1988). El tratamiento de aguas residuales de origen industrial y municipal a nivel nacional se realiza en muy baja escala, hecho que se demuestra considerando que actualmente se cuenta con 223 plantas de tratamiento de aguas residuales municipales, con una capacidad de 16.5 metros cúbicos por segundo, en el sector industrial se cuenta con 177 plantas de tratamiento con capacidad de 12 metros cúbicos por segundo. De lo anterior se deriva que solo se trata el 15.7% de las aguas residuales municipales y el 15.5% de las industriales (Diario Oficial, 1990). En el análisis de las instalaciones de tratamiento de aguas residuales municipales, se detectan deficiencias importantes. A esto se le agrega que el país no cuenta con la tecnología suficiente para fabricación de equipo de medición y de tratamiento (Diario Oficial,1990). La contaminación del agua junto con el aire y el suelo, así como la disposición inadecuada de residuos sólidos, es un fenómeno que aún no se ha resuelto en nuestro país. No obstante que desde hace más de 20 años se cuenta con ordenamientos legales que obligan al control de fuentes de contaminantes, las actividades productivas y la urbanización siguen teniendo prioridad sobre la ecología. 2.2. Problemática local Ciudad Obregón está ubicada dentro del Valle del Yaqui, donde los recursos como suelo y agua, dan lugar a diversas actividades entre ellas las más importantes la agricultura con un 84.6%, ganadería con 10.3% y otras 5.1% (INEGI, 1991). Como una medida para mejorar los ingresos de las actividades primarias, se ha desarrollado la actividad industrial. Tanto las actividades primarias como secundarias han originado grandes volúmenes de aguas residuales que se descargan a los esteros, bahías y playas del Mar de Cortés. El volumen de agua promedio anual que se maneja desde el sistema hidráulico del Valle del Yaqui es mayor a 2000 millones de metros cúbicos, de los cuales entre 400 y 500 millones de metros cúbicos se infiltran en el suelo. El agua restante se utiliza en agricultura, por la población e industria (Distrito de Riego del Río Yaqui, 1997). Las descargas de aguas residuales procedentes de la población son llevadas para su tratamiento a dos plantas, las cuales funcionaron durante 1999 con un influente de 516 lps y 488 lps, en la zona norte y sur respectivamente (Solaqua, 1999). Las descargas de aguas residuales industriales en su mayoría sin tratamiento alguno, son descargadas directamente a colectores agrícolas que desembocan al Mar de Cortés. Siendo estas las que contienen mayor cantidad de contaminantes. Los impactos adversos que se han generado al ecosistema y a la salud humana se ha estudiado desde hace tiempo. A partir de los estudios realizados en los tres colectores principales de aguas residuales, se puede establecer que las aguas residuales son altamente contaminadas en carga microbiana y moderadamente en plaguicidas. Por lo cual es necesario un tratamiento previo a su descarga (ITSON,1993). 2.3. Aguas residuales 2.3.1. Definición Se define como aguas residuales aquellas de composición variada provenientes de las descargas de usos municipales, industriales, comerciales, de servicios, agrícolas, pecuarios, domésticos, incluyendo fraccionamientos y en general de cualquier otro uso, así como la mezcla de ellas (NOM-001-ECOL-1996). 2.3.2. Clasificación de las aguas residuales por su origen Las aguas residuales dependiendo de su origen se clasifican en urbanas, agrícolas o industriales (Quintero,1981). El diferente contenido físico, químico y microbiológico del agua proporciona una herramienta para la identificación de la procedencia del agua (tabla 1). Las aguas residuales urbanas no son tan complejas como las industriales y sus principales características son: se presentan en grandes volúmenes, con alto contenido de materia orgánica, alto contenido de microorganismos patógenos, con poca variación en su composición y con variación horaria. Tabla 1. Clasificación de algunos de los parámetros del agua residual Clase Físico Parámetro Sólidos totales Sólidos totales en suspensión Temperatura pH Color Olor Químico Carbohidratos Proteínas Lípidos Grasas, aceite DBO5,DQO,COT,DTO Alcalinidad Arenas Metales pesados N,P Cloruros Azufre Ácido sulfhídrico Gases Microbiológicos Bacterias Algas Protozoos Virus Fuente: Metcalf y Eddy, (1991). Las aguas residuales industriales se presentan en grandes volúmenes, con gran variación en la composición, con descarga continua o periódica. Las aguas residuales agrícolas ocurren de acuerdo a la precipitación, técnica de riego agrícola, permeabilidad del suelo, componentes del suelo, fertilización y aplicación de plaguicidas (López Mercado V., 1985). 2.3.3. Características físicas, químicas y biológicas de las aguas residua les La caracterización del agua residual es una necesidad para poder definir su manejo, tratamiento, definir las descargas del agua residual a los cuerpos de agua o establecer el reuso de las mismas. Las propiedades físicas y los constituyentes químicos y biológicos de las aguas residuales se encuentran, junto con su procedencia en la tabla 2. 2.3.3.1. Características de los compuestos orgánicos Los componentes orgánicos de las aguas residuales comprenden un gran número de compuestos que tienen en común la posesión de cuando menos un átomo de carbono. La demanda bioquímica de oxígeno (DBO) de 5 días y a 20 oC, mide una propiedad en común: la combinación de oxígeno para la generación de energía para funciones vitales de los microorganismos, así midiendo la cantidad de oxígeno consumido, se obtiene la estimación de la materia orgánica presente (Romero, 1985). La DQO de un desecho es en general, mayor que la DBO porque son más los compuestos que pueden ser oxidados químicamente que en forma biológica, para muchas aguas residuales es posible correlacionar DQO con DBO; esto puede ser muy práctico porque la DQO se puede determinar en tres horas, comparado con los cinco días de la DBO. Una vez establecida la correlación, las mediciones de DQO pueden ser usadas con ventaja para el control y operación de plantas de tratamiento (Metcalf y Eddy, 1991). 2.3.3.2. Características de componentes inorgánicos Los diversos compuestos inorgánicos de las aguas residuales y aguas naturales son importantes en el establecimiento y control de la calidad del agua (Metcalf y Eddy,1991). El nitrógeno total presente en el agua comprende al nitrógeno orgánico, amoniacal, nitratos y nitritos. El nitrógeno orgánico es determinado por el método Kjeldahl, la muestra acuosa es primero calentada para liberar el nitrógeno amoniacal y después es digerida; durante la digestión el nitrógeno orgánico es convertido a nitrógeno amoniacal. El nitrógeno total es determinado de manera semejante al orgánico sólo que el nitrógeno amoniacal no es separado para la digestión. Los nitritos y nitratos son usualmente determinados por métodos colorimétricos (Horan, 1990). Las formas usuales de fósforo en soluciones acuosas incluyen los ortofosfatos, polifosfatos y fosfatos orgánicos. Los ortofosfatos pueden ser determinados por adición directa de una sustancia tal como el molibdato de amonio que da una reacción coloreada. La determinación de los contaminantes tóxicos tales como pesticidas, insecticidas y metales pesados que son comúnmente utilizados en agricultura e industria, puede variar mucho, algunos de los métodos usados son instrumentales como la cromatografía y la espectroscopía de absorción atómica. También se recurre a bioensayos con organismos como peces u otros organismos sensibles capaces de ayudar en el establecimiento de la dosis letal media (LD50). 2.3.3.3. Características del contenido de sólidos El contenido de sólidos totales representa una de las características más importantes en las aguas residuales, estos comprenden material flotante, material sedimentable, material coloidal y material en solución (Metcalf y Eddy, 1991). La importancia de la determinación de los sólidos totales radica en que son indicadores de la concentración de las aguas residuales y de la intensidad del tratamiento necesario (Murrieta, 1990). Los sólidos totales equivalen a la cantidad de sólidos disueltos y sólidos suspendidos. Los sólidos totales son definidos como los residuos de evaporación a 103105oC, y son clasificados como sólidos no filtrables o filtrables por pasar un volumen conocido de agua a través de un filtro, regularmente de fibra de vidrio (Whatman GF/C) con poro de 1.2 micrómetros. La fracción filtrable consiste de sólidos coloidales y disueltos; la fracción coloidal está formada de material de .001 a 1 micrómetro que no puede removerse por sedimentación y los sólidos suspendidos son moléculas inorgánicas, orgánicas e iones que forman una verdadera solución en el agua (Metcalf y Eddy,1991). Cada uno de los tipos de sólidos(totales, disueltos y suspendidos) pueden ser clasificados en base a su volatilidad a 550 +/- 50 oC, la fracción oxidada a esta temperatura se denomina volátil y la restante fija. El análisis de los sólidos volátiles es más comúnmente utilizado como una medida aproximada de la cantidad de materia orgánica en el agua residual. Otro grupo de sólidos de importancia para determinar la necesidad en el diseño de tanques de sedimentación son los sólidos sedimentables cuya prueba se efectúa ordinariamente en un cono Imhoff permitiendo tiempos de sedimentación de una hora (Metcalf y Eddy, 1991). 2.3.3.4. Características de los componentes microbianos En las aguas residuales se puede encontrar una gran variedad de organismos patógenos (bacterias, virus, hongos y nematodos) cuyos orígenes son muy diversos. El objetivo principal de estos estudios es detectar la presencia de organismos patógenos que podrían constituir un peligro para la salud humana a través del contacto con el agua contaminada. Por la misma razón, fundamentalmente se recurre al uso de microorganismos o bacterias indicadoras, estos necesariamente, no causan enfermedad, sin embargo, su presencia índica que es posible la existencia de microorganismos patógenos (Horan,1990). Tabla 2. Características físicas, químicas y biológicas del agua residual y su procedencia. Características Procedencia Propiedades físicas Color Olor Sólidos Temperatura Constituyentes químicos Orgánicos: Carbohidratos, grasas animales, proteínas. Pesticidas Fenoles, agentes tensoactivos Aguas residuales domésticas, industriales y desintegración de materia orgánica. Agua residual en descomposición, vertidos industriales. Agua de suministro, agua residual doméstica, industrial, infiltración y conexiones incontroladas. Aguas residuales industriales y domésticas. aceite y Aguas residuales domésticas, comerciales e industriales. Residuos agrícolas Vertidos industriales y aguas residuales domésticas. Constituyentes químicos Inorgánicos: Alcalinidad Cloruros Metales pesados Nitrógeno pH Fósforo Azufre Compuestos tóxicos gases: Ácido sulfhídrico Metano Oxígeno Constituyentes biológicos: Animales Plantas Protistas Virus Aguas residuales domésticas, infiltración del agua subterránea, aguas de suministro. Aguas de suministro, aguas residuales domésticas, infiltración de agua subterránea, ablandadores de agua. Vertidos industriales Aguas residuales domésticas, residuos agrícolas. Vertidos industriales Aguas residuales domésticas, industriales y agrícolas. Aguas de suministro, residuales domésticas e industriales. Descomposición de aguas residuales domésticas. Descomposición de aguas residuales domésticas. Aguas de suministro, infiltración del agua superficial. Cursos de agua y plantas de tratamiento. Cursos de agua y plantas de tratamiento. Aguas residuales domésticas y plantas tratamiento. Aguas residuales domésticas. Fuente: Metcalf y Eddy, (1991). de Existen tres indicadores de contaminación: el grupo coliforme, Streptococcus faecalis y Clostridium perfringes( Yañes, 1993). El grupo coliforme es el que ofrece mayores ventajas como organismo indicador, por ser el grupo más numeroso y fácil de determinar. El grupo incluye coliformes fecales y totales y su determinación se puede hacer por la técnica de tubos de fermentación multiples o por la técnica de filtro de membrana. También se reporta las concentraciones bacterianas de coliformes (fecales y totales) como el número más probable en 100 ml(NMP/100 ml) (Metcalf y Eddy, 1991). El uso de la prueba de coliformes fecales es una herramienta más valiosa que la de coliformes totales, para la evaluación de la calidad de aguas contaminadas, puesto que excluye la presencia de organismos no fecales que pueden estar sujetos a reproducción posterior (Yañez, 1993). 2.3.4. Principales contaminantes de las aguas residuales De los componentes del agua residual podemos citar como de mayor importancia a: sólidos en suspensión, materia orgánica biodegradable, patógenos, nutrientes, materia orgánica refractaria, metales pesados y sólidos inorgánicos disueltos. Los sólidos en suspensión pueden conducir al desarrollo de depósitos de fango y de condiciones anaerobias cuando se vierte agua residual sin tratar al entorno acuático. La materia orgánica biodegradable compuesta principalmente por proteínas, carbohidratos, grasas animales, materia orgánica biodegradable, se mide como DBO y DQO. Si se descarga al entorno sin tratar, su estabilización biológica puede llevar al agotamiento de los recursos naturales de oxígeno. Los patógenos pueden transmitir enfermedades contagiosas presentes. Los nutrientes tanto el nitrógeno como el fósforo, junto con el carbono, son esenciales para el crecimiento. Cuando se vierten al entorno acuático, estos pueden llevar al crecimiento de una vida acuática no deseada. Cuando se vierten al terreno pueden conducir a la contaminación del agua subterránea. La materia orgánica refractaria constituída por agentes tensoactivos, fenoles, y pesticidas, tiende a prevalecer después de los tratamientos del agua residual. Los metales pesados, son el resultado de la utilización del agua en los procesos industriales, para reciclar esta agua será necesario removerlos. Los sólidos inorgánicos disueltos están constituídos por elementos como el calcio, sodio y sulfatos. Son añadidos al agua como resultado del uso y es necesario eliminarlos si se va a reciclar el agua. 2.4. Tratamiento de aguas residuales Se denomina tratamiento de aguas residuales al conjunto de operaciones y procesos ideados a principio de siglo cuya característica fundamental es acelerar, en varios ordenes de magnitud los procesos naturales para eliminar los contaminantes del agua (López, 1985). La utilización de tratamiento para aguas residuales, por pequeña que sea la cantidad con lleva tres beneficios inmediatos: a). Satisfacer con mayor facilidad la demanda de agua de primer uso puesto que, en general, el reuso disminuye la demanda. b). Disminuir la cantidad de desechos vertidos al agua y, en consecuencia, abatir un poco los niveles de contaminación en los cuerpos receptores. c). Reducir si no es posible eliminar, los daños ecológicos que se originan en las regiones en donde se toma el agua para satisfacer las necesidades de lugares muchas veces distantes. 2.4.1. Tipos de tratamiento del agua residual Son muchos los métodos y equipos utilizados para el tratamiento de los efluentes líquidos. Un sistema completo de tratamiento puede incluir de forma general los siguientes procesos: tratamiento primario, tratamiento secundario y tratamiento terciario, los cuales pueden ser aplicados independientemente aunque siempre de manera secuencial y acorde con la finalidad que se persiga, aumentando su costo de manera proporcional al grado de descontaminación que se desee alcanzar (Pompa, et.al,1993). 2.4.1.1. Tratamiento primario Consiste en la separación de sólidos suspendidos más pesados que el agua. Se realiza en tanques circulares o rectangulares y existen cuatro formas de hacerlo: por sedimentación, por coagulación, por floculación y por precipitación química (Quintero, 1981). 2.4.1.2. Tratamiento secundario Tiene como objeto fundamental eliminar la materia orgánica disuelta en el agua; utilizando métodos químicos o biológicos. La precipitación química se hace con polielectrolitos, Fe2(SO4)3, Al2(SO4)3, que forman un lodo que se sedimenta. Da buenos resultados pero es costoso. La oxidación biológica es sin duda el método preferido; consiste en la oxidación de la materia orgánica por medio de microorganismos en condiciones aeróbicas, anaeróbicas o facultativas. Existen tres métodos para efectuar la oxidación biológica: por lagunas de oxidación, estabilización o aeriación, filtros biológicos y lodos activados. Las lagunas de estabilización por su naturaleza pueden ser: aeróbicas, facultativas y anaeróbicas. Lagunas de estabilización aeróbica. En su forma más simple, son grandes depósitos excavados en el terreno, de poca profundidad, en las que el tratamiento de aguas residuales se da por medio de procesos naturales que incluyen la utilización tanto de algas como de bacterias. Una laguna de estabilización aerobia contiene bacterias y algas en suspensión prevaleciendo las condiciones aerobias en toda su profundidad que va desde .5 a 1.5 metros. El tiempo de residencia para recuperación de las aguas residuales es de 10 a 40 días, con un porcentaje de remoción de la DBO5 del 80 a 95%, temperatura de operación de 0 a 30oC, a un pH de 6.5 a 10.5, soporta una carga orgánica superficial de 65 a 224 en kg DBO5/ ha /día , con necesidad de iluminación y oxigenación (Metcalf y Eddy, 1991). Laguna de estabilización anaeróbica. En este tipo de lagunas se desarrollan microorganismos que no requieren de oxígeno molecular libre en solución, ya que las necesidades para su subsistencia las obtienen de compuestos inorgánicos aceptores de electrones como lo son los nitritos, nitratos y sulfatos. Una laguna de estabilización anaeróbica tiene una profundidad de 2.5 a 5 m, con un tiempo de residencia para el agua residual de 20 a 50 días, soporta una carga orgánica de 200 a 1500 kg DBO5 / ha / día, con un porcentaje de remoción de sólidos del 58 a 85%, con un rango de temperatura de operación de 10 a 50 oC, pH requerido de 6.5 a 7.5. Laguna de estabilización facultativa. Este tipo de lagunas de estabilización consiste en la combinación de los dos procesos anteriores e intervienen microorganismos aerobios, microaeroflicos, anaerobios y de tipo facultativo (Luna ,1993). Una laguna de estabilización facultativa tiene una profundidad de 1.5 a 2.5 m, con un tiempo de residencia del agua residual de 5 a 30 días, soportando una carga orgánica superficial de 50 a 300 kg DBO5/ha/día, un porciento de remoción de DBO5 del 80 a 95, temperatura de operación de 0 a 50 oC, requiriendo ventilación superficial y oxigenación natural y fotosintética. 2.4.1.3. Tratamiento terciario Pueden ser procesos biológicos o fisicoquímicos, siendo los objetivos del proceso biológico la remoción de material nitrogenado disuelto en el agua residual (nitratos, nitritos o amoniaco), fósforo, algunos metales bioacumulables. Dentro de los fisicoquímicos se les utiliza para remover sustancias que dan color, metales pesados, sólidos suspendidos y desinfección del agua tratada. 2.5. Microbiología de las aguas residuales En general la ecología microbiana de los sistemas de tratamiento de aguas residuales es compleja. Por consecuencia tiene una amplia variedad de especies e incorpora varios ciclos nutricionales completos (Lares, 1994). 2.5.1. Géneros de microorganismos en el agua residual Los mecanismos de remoción de contaminantes se dan a través de bacterias autotrófas y heterótrofas, las cuales oxidan la materia orgánica; a su vez los productos de esta degradación son utilizados por algas. Los géneros de bacterias que predominan son Pseudomonas, Bacillus, Brucella, Mycobacterium, Salmonellaea, Alcalígenes Achromobacter, los tipos de algas más comunes son las verdes: y Chlorella, Chlamydomonas, Euglena; algas bentónicas: Phormidium; Diatomeas: Nitzchia y algas azul verdes o cianobacterias: Oscillatoria y Anabena. Los nemátodos presentes en el agua residual de importancia sanitaria: Ascaris spp., Enterobius spp.. Se aislan hongos en los estanques, poco se sabe de su papel y ecología (Metcalf y Eddy, 1991). También existen protozoarios cuya presencia puede tomarse como indicadores de la eficiencia del tratamiento aerobio ya que son organismos que se presentan cuando los niveles de oxígeno son adecuados. Entre los protozoarios se encuentran flagelados, ciliados fijos y rotiferas. También se han localizado crustáceos microscópicos (Daphnia y Cyclops) que se alimentan de algas y bacterias, por lo que cultivados en el último de los tanques del tratamiento contribuyen a reducir la proporción de algas del efluente (López M.,1985). En cuanto a Virus, es posible encontrarlos excretados por los humanos, los cuales son un peligro para la salud, entre ellos el virus del hepatitis y la poliomielitis 2.5.2.Metabolismo microbiano Los mecanismos de degradación de la materia orgánica presente en el agua residual se da a través de la oxidación que realizan las bacterias autótrofas presentes, utilizando el oxígeno que producen la microalgas mediante fotosíntesis. En general la descomposición aeróbica de materia orgánica se lleva a cabo por reacciones oxidativas de materiales tales como carbohidratos, proteínas y compuestos orgánicos azufrados o fosfatados hasta productos inorgánicos estables como: CO2 ,NH3, NO3, NO2, S04 y PO4 inorgánicos, mediante una secuencia ordenada de reacciones enzimáticas que comprende, en primer lugar, la hidrólisis de moléculas grandes de (polisacáridos, proteínas, lípidos, etc.) a unidades más simples (azúcares, aminoácidos, ácidos grasos), los cuales pueden pasar fácilmente a través de las membranas celulares de los microorganismos para ser metabolizadas. La continuación del proceso metabólico consiste en la transformación de tales productos en intermediarios de las rutas metabólicas que conducen a la degradación total( ácido pirúvico, acetil CoA, ácido acetoglutárico, etc.). Finalmente la incorporación de tales sustancias al ciclo de Krebs da lugar a la transformación total de tales compuestos orgánicos en CO2, H2O y energía (López M., 1985). La descripción cuantitativa de la descomposición de la materia orgánica por parte de las bacterias y el aprovechamiento por las algas se expresa a continuación mediante la siguiente ecuación (Yánez, 1993). CaHbNcOdPe+ (a+b/4-d/2+3c/2+2e)O2= aCO2+b/2H2O+cNO3+ePO4 Las algas utilizan el dióxido de carbono y otros nutrientes y con ayuda de la luz producen material celular y el oxígeno requerido por las bacterias, de acuerdo con la siguiente relación (Yánez,1993). 106CO2+ 90H2O+ 16NO3+ PO4= C106 H180 045 N16+154 ½ O2 Los mecanismos descritos anteriormente van a repercutir en las variaciones de los niveles de oxígeno y en el pH de las lagunas de estabilización. Las variaciones de pH se deben principalmente a la actividad fotosintética, se han encontrado cambios llegando a valores tan altos como 10 y 11, especialmente cerca de la superficie donde las concentraciones de algas y oxígeno son mayores, el dióxido de carbono producido por las bacterias no satisface a las necesidades de las algas durante el día, por lo que las algas extraen el dióxido de carbono de los bicarbonatos y carbonatos, ocasionando incremento en el pH (Yánez, 1993). 2.5.3. Necesidades nutritivas de los microorganismos El microorganismo requiere para su crecimiento de una fuente de energía y de fuente de nitrógeno, fósforo y minerales traza. En la mayoría de las fermentaciones industriales la fuente de energía y materia son la misma, pero es necesario que la fuente de materia contenga todos los elementos constitutivos de la masa celular en las proporciones requeridas por la composición interna del organismo, tabla 3. Tabla 3.Principales elementos que constituyen la célula microbiana Elemento Compuesto orgánico %Peso seco H Compuesto orgánico y agua 8 O Compuesto orgánico y agua 20 C Compuesto orgánico 50 N Proteína, ácido nucleico y coenzimas 14 S Proteínas y algunas coenzimas 1 P Ácidos nucleícos, fosfolípidos y coenzimas 3 Mg Cofactor de las reacciones enzimáticas 0.5 Mn Cofactor de algunas enzimas 0.1 Ca Cofactor de enzimas 0.5 Fe Citocromos, proteínas, cofactor enzimas 0.2 Co Vitamina B12 0.3 Zn Ciertas enzimas Cu Ciertas enzimas Mo Ciertas enzimas Fuente: Quintero, (1981). Para el crecimiento óptimo de los microorganismos se debe tener en el medio nutrientes que aporten carbono, nitrógeno y fósforo en las cantidades adecuadas, incluyendo varios micronutrientes (cobalto, molibdeno, manganeso, etc) y vitaminas (B12, B1, etc) (De la Noue y Pauw, 1988). La disponibilidad de nutrientes para el crecimiento de algas en lagunas de estabilización de aguas residuales es suficiente. La relación de C/N/P de 100/5/1 requerida es ampliamente satisfecha. Normalmente las cantidades de nitrógeno y fósforo son altas, por lo que no constituyen un factor limitante con respecto a nutrientes (Yánez, 1993). 2.5.4. Necesidades de fuentes nitrogenadas El nitrógeno constituye de 10 a 15 % del peso de las células en base seca. Pocas bacterias utilizan el nitrógeno libre o de compuestos minerales simples, como los nitritos o nitratos que son reducidos a amoniaco. El nitrógeno es asimilado por todas las bacterias como amoniaco. Este compuesto puede ser proporcionado por los aminoácidos y los péptidos. Algunos microorganismos degradan las proteínas naturales, como por ejemplo, la gelatina. 2.5.5. Necesidades de fuentes minerales Son necesarios en muy bajas concentraciones (mg/l de medio de cultivo). Entre ellos se tiene a los iones: sodio, potasio, calcio, magnesio, hierro, cloruro, cobre, zinc, cobalto y manganeso, los cuales son necesarios para la constitución de enzimas, la activación de algunas reacciones enzimáticas y la constitución de vitaminas, pigmentos, toxinas y antibióticos. Es importante el papel del calcio en la termorresistencia de las esporas bacterianas. 2.5.6. Necesidades de fuentes de carbono Este elemento es esencial ya que representa de 45 a 50 % del peso celular en base seca y se debe proporcionar en abundancia. Las fuentes de carbono son diversas y se pueden distinguir dos grandes categorías de microorganismos en base a la forma en que lo obtienen. Los autótrofos son capaces de utilizar el carbono a partir de compuestos más sencillos, no orgánicos del bióxido de carbono o los carbonatos. Estas bacterias poseen un poder de síntesis muy elevado, pudiendo elaborar compuestos orgánicos bacterianos complejos a partir de elementos minerales simples del medio. Los heterótrofos son microorganismos que requieren de compuestos orgánicos que sirven como fuentes energéticas, entre los que se encuentran: los carbohidratos simples como las pentosas y hexosas; los polisacáridos complejos como el almidón y la celulosa; también puede usarse sustancias hidrocarbonadas como ácidos orgánicos, lípidos y alcoholes. 2.6. Enzimas Las enzimas son compuestos orgánicos (proteínas) especializadas en la catálisis de las reacciones biológicas (Lehninger A.,1978). Son esenciales para el funcionamiento correcto de todos los organismos vivos. Se encuentran en las plantas, animales y microorganismos. Las enzimas son catalizadores; en otras palabras, juntan a las sustancias reactantes, pero se mantienen separadas de los productos finales de la reacción y no cambian en su estructura durante ésta. Como catalizadores biológicos la enzimas controlan y organizan miles de diferentes reacciones químicas. Las reacciones catalizadas por enzimas son de cien a mil millones de veces más rápidas que las mismas reacciones en ausencia de ellas. 2.6.1. Clasificación de enzimas por su actividad La Unión Internacional de Bioquímica en la edición de 1984 de la nomenclatura de enzimas, reconoció oficialmente 2122 tipos distintos de enzimas. Éstas se clasifican de acuerdo a las reacciones que catalizan, como se muestra en la tabla 4, en el cual se reconocen seis grandes grupos. Tabla 4. Clasificación de enzimas por la reacción que catalizan. Grupo de enzimas Reacción catalizada Oxidoreductasas Transferasas Hidrolasas Catalizan reacciones de oxidación Catalizan transferencia de grupos funcionales Catalizan reacciones de rompimiento de enlaces. Liasas Estas enzimas añaden o remueven los elementos del agua, amóniaco o CO2. Catalizan reacciones de isomerización. Catalizan reacciones de síntesis. Isomerasas Ligasas Fuente : Apligén, (1992). 2.6.2. Función de las enzimas Por ser las enzimas los catalizadores empleados por los seres vivos en la mayoría de sus reacciones, es necesario conocerlas para utilizarlas apropiadamente. Cuando una molécula de sustrato se ha difundido hasta la vecindad de la enzima, ésta es detenida y atraída por diferentes grupos. Las cadenas salientes de aminoácidos la atraen al mismo tiempo que otros grupos pueden atraer otra porción de esa misma molécula, lo que causa ruptura de alguna unión u otros cambios en la molécula. A esto se le conoce como reacción enzimática, ya que los sitios activos de la enzima pueden catalizar una reacción química convirtiendo una molécula en otra. Dada la compleja naturaleza de la enzima y del fenómeno enzimático en sí, la velocidad de reacción es afectada por: el tiempo, temperatura, pH y el sustrato (Quintero1981). 2.6.3. Utilización de las enzimas en la industria alimentaria La producción de enzimas representa una cifra anual de 1.5 millares de millones de francos, el 60% de ellos con utilización en la industria agroalimentaria. Las enzimas utilizadas en procesos agroalimentarios son objetos de una reglamentación estricta, en lo que concierne a su producción, su pureza química y microbiológica. Son biocatalizadores utilizados en la bioindustria o en otras industrias, que pueden provenir de varias fuentes: origen vegetal, animal o microbiano (Scriban René,1985). Las de origen vegetal, especialmente las proteasas son de interés tecnológico: la papaína que proviene de una planta tropical (Carica papaya L.), la bromelina extraída de la piña (Ananas comosus Merr), la ficina proveniente del higo (Ficus carica). Sus aplicaciones son numerosas, entre ellas se encuentra la industria cervecera, de la carne y la fabricación de hidrolizados de pescado. Las de origen animal son producidas a partir de órganos de animales como cerdos o bovinos, entre ellas están; la pepsina, tripsina, etc. Las de origen microbiano, se han logrado a partir de procesos de fermentación industrial que ha avanzado en la medida que la ciencia avanza. Las principales ventajas de las enzimas procedentes de la fermentación con relación a las enzimas procedentes de la extracción son las siguientes: una producción independiente de restricciones estacionales, la posibilidad de utilizar materias primas de fácil adquisición, los rendimientos en la producción se pueden aumentar en proporción importante al mejorar las cepas microbianas y aplicar óptimas condiciones de fermentación. Las principales producciones en el año de 1979 a nivel mundial fueron: proteasa (Bacillus) 500 toneladas, glucoamilasa ,300 toneladas, amilasa (Bacillus), 300 toneladas, glucosa isomerasa, 50 toneladas, pectinasa, 10 toneladas, proteasa (fúngica), 10 toneladas y renina microbiana, 10 toneladas y amilasa (fúngica), 10 toneladas (Scriban, 1985). 2.6.4. Antecedentes de la utilización de las enzimas en el tratamiento de aguas residuales Dentro de la industria de alimentos balanceados, se ha utilizado enzimas para mejorar la eficiencia metabólica de aves, cerdos y ganado bovino. Asimismo en el tratamiento de las aguas residuales de las granjas, donde su función principal es romper moléculas gigantes de carbohidratos, grasas y proteínas para ponerlas a disposición inmediata de los microorganismos a fin de recuperar la calidad del agua. La disposición y reutilización de los residuos orgánicos provenientes de granjas e industria, es un reto para la agroindustria ya que el conflicto entre la producción agropecuaria intensiva y el desarrollo urbano no muestra disminución. El estudio de residuos industriales y agropecuarios debe ser previo al desarrollo de cualquier proyecto, así como el estudio de aprovechamiento de subproductos en la industria y el programa de alimentación debe controlar el volumen de desecho sólido, cambiar la composición según sea necesario y reducir el riesgo de contaminación ambiental. La utilización de materias primas tanto en la industria como en actividades agropecuarias debe responder a una actividad ecológica sostenible. Las materias primas utilizadas en alimentación animal y sus desechos deben aportar nutrientes para el crecimiento microbiano dentro del tratamiento de los residuos. El papel del hombre dentro del ciclo alimenticio es prevenir desbalances o excesos los cuales lleguen a ocasionar problemas ambientales. Una buena administración sobre minimización de los desechos provenientes de granjas obedece a una adecuada reducción en el volumen de excretas a través de un buen plan de alimentación, optimización sobre las velocidades en la descomposición de residuos y el control sobre la composición de los residuos para su reutilización en la producción de fertilizantes o reformulación de alimentos. La reducción del volumen de contaminantes responde a una optimización en las necesidades de nutrientes de las especies, entre ellas están la cantidad y calidad de proteínas, demanda de energía y uso de minerales. Desafortunadamente, la situación económica y la regionalización de ingredientes afecta, lo que da como resultado una baja efectividad al querer disminuir el volumen de contaminantes mediante el manejo de la formulación, bajando digestibilidad en fibra, utilización de proteína y biodisponibilidad de minerales. Utilizando ayuda digestiva tal como levadura viva y enzimas específicas para ingredientes, los problemas en reducción de volumen de contaminantes se minimizan, reduciendo los niveles de nitratos y fósforo en las excretas. Pruebas realizadas sobre rumiantes y caballos, utilizando cultivo de levaduras vivas en la alimentación, ha demostrado incrementar la digestión de la fibra y la asimilación de minerales y proteínas. Adicionando betaglucanasa a raciones elaboradas con cebada, en la alimentación de aves ayudó en el consumo de glucanos sin afectar el consumo (Jacques, Bastein, 1989). 2.7. Los minerales y su efecto durante el tratamiento de los residuos agroindustriales El excesivo contenido mineral en las dietas de alimentación animal llega a causar problemas en la administración del tratamiento de los residuos. Los minerales son tóxicos para el tratamiento bacteriano de residuos y puede ocasionar la formación de depósitos que originen un desbalance en los minerales del suelo. Los nutriólogos proveen muchos minerales en exceso sobre los requerimientos del animal debido a la baja disponibilidad de ciertos minerales y al desconocimiento de la verdadera necesidad de la especie. La composición de los residuos afecta el crecimiento microbiano, por lo cual se requiere caracterizarlos y posteriormente monitorear tanto los niveles de macronutrientes, como los niveles de minerales. La principal actividad dentro del proceso de descomposición de residuos es la microbiana, está actividad es necesaria para el rompimiento de macromoléculas de residuos, ya sea en un proceso aeróbico, anaeróbico o facultativo. A más alto nivel de minerales y sal mineral en lagunas anaeróbicas, menor actividad microbiana. En pruebas realizadas para medir el efecto de incrementar la concentración de cationes sobre la actividad microbiana se encontró que el ión amonio fue el más tóxico, seguido en forma descendente por potasio, magnesio y calcio. Se obtuvo la recomendación de manejar la concentración de sal para mantener un nivel de conductividad eléctrica entre 4.0 a 8.0 mmho/cm. Más alta concentración decrece la actividad microbiana (Jacques,K.A.,Bastein,R.W.1989). 2.8. Normatividad sobre aguas residuales 2.8.1. Norma oficial que regula las descargas y tratamiento de aguas residuales (NOM-001-ECOL 1996) Esta Norma Oficial Mexicana establece los límites máximos permisibles de contaminantes en las descargas de aguas residuales en aguas y bienes nacionales, con el objeto de proteger su calidad y posibilitar sus usos, y es de observancia obligatoria para los responsables de dichas descargas. Esta Norma Oficial Mexicana no se aplica a las descargas de aguas provenientes de drenajes separados de aguas pluviales. 2.8.2. Norma oficial que regula la operación y disposición de residuos en los rastros Norma Oficial Mexicana NOM-CCA- 022-ECOL/1993, que establece los límites máximos permisibles de contaminantes en las descargas de aguas residuales a cuerpos receptores, provenientes de la industria de matanza de animales y empacado de cárnicos (anexo B). III. MÉTODO 3.1. Zona de estudio El lugar de muestreo para la realización del estudio fue el influente de una laguna de oxidación ubicada en un rastro TIF, en Cd. Obregón, Sonora, esta laguna de oxidación de tipo anaeróbico se complementa con otra laguna facultativa para tratar las aguas residuales previas a ser descargadas al dren agrícola (Loma Prieta), que posteriormente llega a descargar sobre el colector No.2, quién conduce las aguas residuales cruzando la ciudad y el Valle del Yaqui en un recorrido de 60 Km., hasta desembocar en Bahía de Lobos con un volumen promedio anual de 63.27 millones de metros cúbicos, (Quintero, 1994). Figura 1. Laguna de oxidación del rastro TIF. 3.2. Localización del experimento El experimento se realizó en las instalaciones del Laboratorio de Suelo-Agua-Planta, de la Dirección de Investigación y Estudios de Posgrado, del Instituto Tecnológico de Sonora, Unidad Obregón. Durante el mes de julio de 2001. 3.3. Diseño experimental El diseño experimental utilizado fue completamente al azar con cuatro tratamientos y tres repeticiones, realizándose análisis de varianza mediante la prueba F y comparación de medias mediante la prueba de diferencia mínima significativa. Figura 2. Distribución de los reactores en el experimento. 3.4. Descripción del sistema El sistema de experimentación se estableció a nivel laboratorio, consistente en dieciséis reactores de plástico abiertos, de 20 litros de capacidad, en los cuales se trabajó con un volumen de 10 litros manteniendo constante el nivel con agua destilada. La temperatura ambiental se controló mediante equipo de refrigeración en un rango de 25-28 oC, en lo que respecta al pH, se monitoreó su variación, con lecturas cada 12 hrs. Se evaluaron tres dosis de un aditivo enzimático y mineral comercial llamado Waste Water treatment + TM en cantidades de 20, 30 y 40 ppm. El fabricante del producto Cytozyme Laboratories Inc., recomienda la utilización de una dosis de 30 ppm en el tratamiento de aguas residuales con alto contenido de materia orgánica, similar a la usada en el experimento. La prueba se complementó con un tratamiento a una concentración 20 ppm y 40 ppm, a fin de observar si es significativo el efecto de la concentración sobre los resultados. En todos los tratamiento se utilizó un inóculo bacteriano (500 ml, el cual contenía 3613 ppm de SSV en promedio), proveniente de la laguna de oxidación del propio rastro TIF y aclimatado a nivel de laboratorio por una semana, trabajando sobre la misma agua de estudio. La aereación y agitación del sustrato se realizó por una corriente de aire constante obtenida de un compresor con una presión de 10 kg/cm2 , manteniendo una concentración de oxígeno disuelto en los reactores de 1 a 3 ppm, para poder mantener condiciones de un tratamiento aeróbico. 3.4.1. Estabilización del sistema Una vez construido el sistema se alimentó con agua residual del rastro TIF para que se desarrollaran las poblaciones de microorganismos, las cuales llevan a cabo la remoción de los contaminantes, para favorecer el crecimiento, se inoculó con lodos provenientes de la laguna de oxidación. 3.4.2. Pretratamiento de la muestra y funcionamiento del sistema El agua utilizada para la realización del experimento se obtuvo en forma puntual, durante el horario de mayor descarga de contaminantes, se sometió a un proceso previo, consistente en un tratamiento primario de cribado (figura 3) y sedimentación, en el cual primeramente se pasó a través de una malla número 20, colocándose la muestra cribada en dos tanques abiertos de 200 litros para sedimentar los sólidos, proceso que duró 30 minutos. Una vez terminado el proceso de sedimentación, el agua conteniendo sólidos disueltos y en suspensión, se colocó en un recipiente limpio para ser llevada al laboratorio y alimentar los reactores. Figura 3. Cribado de la muestra. Dichos reactores se llenaron antes de 6 horas, tiempo estipulado en la NOM – 001ECOL – 96, para manejo de muestra. Colocándose en cada uno de éstos 500ml de inóculo, 9.5 litros de agua residual y la dosis de aditivo enzimático, según el tratamiento evaluado. Una vez adicionado el aditivo, se inició con la aireación. 3.4.3. Parámetros fisicoquímicos evaluados en los tratamientos Para cada uno de los tratamientos evaluados, se llevaron a cabo los siguientes análisis. Cuadro 1. Parámetros fisicoquímicos evaluados. Parámetro Periodo realizado DQO (soluble) Inicial y cada 24 horas DBO5 (soluble) Inicial Relación DQO/DBO (soluble) Inicial Sólidos totales Inicial y final Sólidos totales volátiles Inicial y final Sólidos suspendidos volátiles Inicial y final Coliformes fecales Inicial y final Nitrógeno (total, amoniacal y orgánico) Inicial y final Fósforo Inicial y final Minerales traza (zinc, cobre, plomo, fierro y cadmio) Inicial y final pH Cada 12 horas Temperatura Cada 12 horas Oxígeno disuelto Cada 12 horas Estas determinaciones se realizaron de acuerdo a las técnicas establecidas por las Normas Oficiales Mexicanas en la regulación de aguas residuales (anexo A). IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 4.1. Remoción de materia orgánica (Demanda Química de Oxígeno soluble) En el análisis de varianza correspondiente a esta variable se consideró los valores obtenidos por día para cada tratamiento. Encontrándose que no existía diferencia significativa entre el blanco y los tratamientos durante los dos primeros días de la prueba. A partir del tercer día se observó diferencia significativa en la remoción de la DQO soluble (cuadro 2), siendo el tratamiento de 30 ppm, el que proporcionó la mayor remoción, como se muestra en el cuadro 3. Cuadro 2. Análisis de varianza de la remoción de DQO, durante el tercer día del experimento. FV GL SC CM Tratamientos 3 3086894.0000 1028964.6875 Error 12 411386.0000 34282.167969 Total 15 3498280.0000 F 30.0146** F(Tablas) F(Tablas) 5% 1% 3.49 5.95 C.V.= 15.36% Cuadro 3. Resultados de la comparación de medias, durante el tercer día del experimento. Tratamiento Media de DQO soluble al tercer día (mg / l) Identificador 20 ppm 1748.54 A Blanco 1403.125 B 40 ppm 1119.0551 B 30 ppm 549.525 C Dms = 285.2833 En el cuadro anterior se muestra que los tratamientos con letra igual, se consideran iguales en cuanto a remoción de DQO soluble, en cambio el que muestra la letra C representa el que logró la mayor remoción al tercer día (tratamiento con 30 ppm de concentrado enzimático). Dichos resultados indican que la hipótesis formulada, la cual indica que el uso de aditivos enzimáticos complementados con minerales traza, aumenta la eficiencia del tratamiento biológico aeróbico de aguas residuales de los rastros, se acepta. El porcentaje de remoción que mostró cada tratamiento por día se muestra en el cuadro 4 y figura 4. Cuadro 4. Porcentaje de remoción de DQO soluble. Días de Tratamiento 1 2 3 4 5 6 7 Blanco Tratamiento 20 ppm 31.99 33.99 14.95 3.27 24.42 27.05 7.80 25.16 3.66 5.22 4.71 2.47 6.44 .52 Tratamiento 30 ppm 29.95 22.04 36.78 1.56 3.08 .28 1.72 Tratamiento 40 ppm 28 26.91 22.25 14.01 .69 2.10 1.10 Remoción de DQO soluble 6000 mg / l de DQO 5000 4000 3000 2000 1000 0 inicial 1 Blanco 2 3 4 Días de tratamiento 20ppm 5 30ppm 6 7 40ppm Figura 4. Remoción de la DQO soluble. 4.2. Remoción de nitrógeno y fósforo El agua residual de los rastros contiene altos niveles de nitrógeno y fósforo debido al contenido alto en alimentos y a la baja eficiencia del metabolismo animal. Asimismo los residuos de carne y sangre aportan grandes volúmenes de estos nutrientes. Metcalf y Eddy (1991), citan que los tratamientos biológicos son medios efectivos para la eliminación de nitrógeno y fósforo, el nitrógeno se elimina por asimilación y por nitrificación-desnitrificación. La eliminación de fósforo mediante procesos biológicos se realiza forzando a los microorganismos para que consuman más fósforo del necesario para el crecimiento celular normal. Los resultados del experimento muestran alta remoción en general, observándose un máximo en el tratamiento de 20 ppm, después de 7 días de retención. Sin embargo el nivel de nitrógeno total no permite descargar el agua a cuerpos de agua a menos que se destine a riego agrícola, figura 5. 92.56% 84.40% 79.41% 91.40% 78% 70.30% 87.33% 72.86% 63.91% Porcentaje 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% 90.68% 65.35% 49.70% Blanco Tratamiento de 20 ppm %Remoción de nitrógeno total % Remoción de nitrógeno orgánico %Remoción de nitrógeno amoniacal Tratamiento de 30 ppm Tratamiento de 40 ppm Tratamiento Figura 5. Remoción de Nitrógeno. En lo que respecta a fósforo, la eliminación por tratamiento fue similar, como se muestra en el cuadro 5. Cuadro 5. Remoción de fósforo. Fósforo total inicial ppm Fósforo total final ppm % de Remoción de fósforo total Blanco Tratamiento 20 ppm Tratamiento 30ppm Tratamiento 40ppm 40300 40300 40300 40300 0.46 0.48 0.45 0.56 99.99% 99.99% 99.99% 99.99% 4.3. Remoción del contenido de microelementos Zinc, Cobre, Fierro, Cadmio y Plomo El contenido de estos microelementos en el agua residual antes del tratamiento, se encuentran por debajo de los límites que exige la norma oficial NOM-001-ECOL-1996 (cuadro 6). Para verificar si el aditivo enzimático aporta niveles que estén por encima de los límites que marca dicha norma, se realizó un análisis de dichos minerales, resultado que se muestra en el cuadro 6, observándose que en los tratamientos evaluados y al término del experimento, los niveles encontrados en el agua tratada fueron menores. Cuadro 6. Contenido mineral en los diferentes tratamientos y en el producto utilizado. Muestra Zn mg/l Cu mg/l Fe mg/l Cd mg/l Pb mg/l Agua residual sin tratar 1.13 0.16 4.63 .005 .063 Contenido aportado por el producto .1108 0.0346 0.0469 .000005 .0000855 Resultante del blanco 1.61 0.16 1.8 .006 .05 Resultante de aplicar 20 ppm 0.47 0.17 1.45 0.004 0.07 Resultante de aplicar 30 ppm 0.42 0.17 1.21 0.006 0.05 Resultante de aplicar 40 ppm 0.79 0.21 2.84 0.002 0.05 4.0 N.A. 0.10 0.20 Tolerancia máxima permisible en medición 10 promedio mensual NOM-001-ECOL-1996. Para proteger la vida acuática. N.A.= no es aplicable 4.4. Remoción de Coliformes Durante la valoración del agua residual se encontró que la contaminación por coliformes procedían de heces fecales de origen animal. La experimentación arrojó una eliminación de coliformes fecales de un 99.97% como valor máximo en el tratamiento de 20 ppm, después de 7 días de tratamiento y se obtuvo un valor mínimo de remoción de 99.95% para el blanco, no existiendo diferencia significativa entre los tratamientos con producto enzimático y el blanco. Asimismo esta cantidad final de coliformes no son aceptables para descargas de agua residual a los cuerpos de agua, lo que indica que se requiere más tiempo retención hidráulica o un tratamiento de cloración para descargar esta agua residual a estanques o canales sin que haya riesgo de enfermedades, cuadro 7. Cuadro 7. Valores de la evaluación de la contaminación por coliformes antes y después del tratamiento. Tratamiento Recuento inicial de coliformes fecales UFC/100 ml 24,000,000 24,000,000 Recuento final promedio de coliformes fecales. UFC/100ml 11000 6413 Agua sin tratamiento Agua con 20 ppm de tratamiento. Agua con 30 ppm de tratamiento. Agua con 40 ppm de tratamiento. % de remoción durante 7 días del tratamiento. 99.95 99.97 24,000,000 11612 99.95 24,000,000 9012 99.96 4.5. Remoción de sólidos totales volátiles Los análisis de los resultados en valores promedio, sobre sólidos totales volátiles al fin de 7 días de tratamiento, se observa que el tratamiento de 30 ppm removió 54.23% de los sólidos totales volátiles y el blanco removió 41.99%. Lo cuál significa que si hay una acción positiva en la utilización de aditivos enzimáticos sobre esta dosis, cuadro 8. Cuadro 8. Remoción de sólidos totales volátiles. Tratamiento Sólidos totales volátiles iniciales ppm 4957 Sólidos totales volátiles al fin del tratamiento ppm 2875.16667 % de Remoción por efecto del tratamiento Agua residual+20ppm 4957 2370.75000 52.17 Agua residual+30ppm 4957 2268.77778 54.23 Agua residual+40ppm 4957 2934.75000 40.79 Agua residual 41.99 Otros parámetros de gran importancia en el tratamiento de agua residual son: temperatura, pH y oxígeno. 4.6. Temperatura Las constantes de velocidad de reacción biológica, así como la velocidad de transferencia de los gases entre otros dependen de la temperatura, (Metcalf y Eddy 1991). Para un buen desarrollo de un proceso biológico es necesario buscar los parámetros óptimos a fin de obtener buenos resultados. El desarrollo del proceso biológico observó un rango de temperaturas entre los 25oC y 28 o C , con un promedio de 26oC., las cuales se encuentran dentro del rango de temperaturas óptimas para los microorganismos mesófilicos (tabla 5), quienes son predominantes para este tipo de tratamientos. Asimismo se puede decir que la actividad enzimática de los aditivos utilizados no se afectó por la temperatura del tratamiento. Tabla 5. Rango normal de operación en tratamientos biológicos aeróbicos. Parámetros Temperatura Rango normal 20-25 oC Significado de valores extremos <1 oC Congelación >35 oC Fuera de rango pH 8-9 <6.5 anaerobiosis >9.5 sobrecarga Oxígeno disuelto 6-35 mg/l <0 mg/l anaerobiosis >35 mg/l sobresaturación Conductividad eléctrica Nitrógeno amoniacal Nitrógeno total 400 umhos/cm .05-30 mg/l .05-40 mg/l >1200 umhos/cm, salinidad alta Mayor a 30 mg/l, mortandad de algas <.05 mg/l bajo desarrollo de algas. >40 mg/l nitrificación del efluente. Fósforo total DQO total DQO soluble DBO5 total 3-15 mg/l 200-600 mg/l 200-400 mg/l 60-300 mg/l > 30 mg/l sobrecarga de laguna Aumento de DQO por biomasa Medición de eficiencia Aumento en algunos casos DBO5 soluble 40-200 mg/l Buena remoción de DBO soluble Coliformes fecales (NMP) Huevos de helmintos Clorofila A, B 100-1000/100ml <1/l 0-900 ug/l >1000 no cumplimiento >1/l sedimentación pobre Valor grande aerobiosis Fuente: Quintero (1994). 4.7. pH Badui (1981), cita que la inhibición de las reacciones enzimáticas y del crecimiento microbiano en los alimentos se puede efectuar por un control del pH del sistema. La actividad de las enzimas depende mucho del pH del medio; esta dependencia puede deberse a cambios en los grados de ionización de los aminoácidos del sitio activo de la enzima, del sustrato, o bien del complejo enzima-sustrato. Asimismo se sabe que el pH tiene un efecto marcado en la estructura conformacional de los polipéptidos, lo cual puede ser otra causa de alteración de la actividad de las enzimas. Se ha estudiado el efecto del pH sobre la actividad enzimática y se ha encontrado que a un pH de 8.5 se logra una máxima actividad, en un rango de 7.5 a 9.5 se tiene estabilidad de la enzima, en rangos de 6 a 7.5 y de 9.5 a 10.5 se presenta inactivación reversible, y en rangos debajo de 6 y arriba de 10.5 hay inactivación espontánea. Por los resultados de pH obtenidos en los tratamientos al final de los siete días, se concluye que el tratamiento de 30 ppm y 40 ppm mantienen más tiempo el pH controlado a un rango de estabilidad enzimática. La tendencia a controlar el mismo pH de inició y final se observó con 40 ppm . El pH del medio ambiente también constituye un factor clave en el crecimiento de los microorganismos. La mayoría de las bacterias no toleran niveles de pH por debajo de 4, ni superiores a 9.5. En general el pH óptimo para el crecimiento bacteriano está entre 6.5 y 7.5 . Los hongos tienen un rango de tolerancia entre 2 y 9, con un óptimo de 5.6 . Conociendo que los tratamientos contienen gran diversidad de microorganismos, es predecible saber que especie predominará si se conoce el rango de fluctuación del pH. Es por ello que es importante controlar el pH y con ello dirigir el proceso de tratamiento del agua residual. Comportamiento del pH 10 8 7 24 :0 0: 00 36 :0 0: 00 48 :0 0: 00 60 :0 0: 00 72 :0 0: 00 84 :0 0: 00 96 :0 0: 00 10 8: 00 :0 0 12 :0 0 ci al 6 in i pH 9 Blanco 20 ppm 30 ppm 40 ppm Horas Figura 6. Comportamiento del pH por tratamiento. 4.8. Oxígeno La aireación a los tratamientos se realizó por medio de la inyección de aire comprimido a 10 kg/cm2, utilizando conexiones múltiples con válvulas y mangueras de 3/16”, terminando en difusores de material poroso para maximizar la distribución del oxígeno. La medición del oxígeno en los tratamientos logró promediar un rango entre 1 y 3 ppm, lo que permitió confiar en que el tratamiento se desarrolló en condiciones aeróbicas. La presencia de niveles bajos de oxígeno disuelto durante los primeros 3 días del experimento reflejaba alta demanda por el gran contenido de materia orgánica del agua residual. Después del tercer día el oxígeno disuelto fue aumentando hasta llegar a cantidades de 6.5 ppm. Esta situación refleja un descenso en el contenido de materia orgánica. La formación de espuma durante el tratamiento no permitió aumentar la inyección de oxígeno desde el inicio manteniendo constante la inyección durante todo el período del experimento (figura 7). Figura 7. Producción de espuma en los reactores. V. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES La utilización de un aditivo enzimático a razón de 30 ppm logró remover al tercer día 36.78 % de DQO soluble, acumulando el 88.77 % hasta ese día, mientras que el blanco removió 24.42 %, acumulando 71.36% de DQO soluble. Por lo que la utilización de un aditivo enzimático a esta concentración en dicho tiempo aumenta un 19.66% más la eficiencia, reduciendo con esto el tiempo de retención hidráulica. Este tratamiento al término de 7 días reduce 87.33 % de nitrógeno orgánico, 72.86% de nitrógeno total, 63.91% de nitrógeno amoniacal, 99.99 %de fósforo total, así mismo el contenido de coliformes se reduce en un 99.5% y 54. 23% de sólidos totales volátiles. Se recomienda la utilización de aditivos enzimáticos con el fin de reducir la necesidad de incrementar el área física destinada al tratamiento biológico, asegurando una buena aireación, ya que a medida que se aumenta la concentración de aditivo enzimático se demanda más oxígeno. Se sugiere caracterizar las aguas residuales previas a la aplicación de concentrados enzimáticos, ya que su dosificación depende de la concentración de materia orgánica y del contenido mineral. VI. BIBLIOGRAFÍA ATLAS, R. M., 1991. Bioremediation: Using Nature´s Helpers- Microbes and Enzymes-To Remedy Mankind´s Pollutants, Alltech Technical Publications,. Biotecnology in The Feed Industry, Edited by T.P. Lyons, Seventh Annual Symposium,pp255263, U.S.A. BADUI, S. 1981, Química de los Alimentos, Editorial Alhambra Mexicana, pp. 218-226, México. CAVASENO, V., et.al., 1980, Industrial Wastewater and Solid Waste Engineering, Engineering, Mc Graw-Hill Publication Co.,New York, N.Y. U.S.A.,pages 58-169. DIARIO OFICIAL DE LA FEDERACIÓN. 1988. Programa de conservación Ecológica. México. DIARIO OFICIAL DE LA FEDERACIÓN. 1990. Programa Nacional Para la Protec ción del Medio Ambiente. México. DISTRITO DE RIEGO DEL RÍO YAQUI. 1997. Boletí n Informativo. Obregón México. ECKENFELDER, W. 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PROCEDIMIENTO: El material de vidrio que deba utilizarse tiene que estar libre de contaminación con fósforo o arsénico. Como el vidrio Pyrex contiene 0.7 % de óxido de arsénico, es necesario someter los vasos nuevos a un ataque prolongado con H2SO4 caliente y con solución de dicromato por lo menos durante media hora antes de usarlos por primera vez. Para la limpieza del material no deberán usarse los jabones y detergentes, pero en caso de que se usen deberán eliminarse completamente con ácidos concentrados, ya que con frecuencia contienen fosfatos. Como última fase del proceso de limpieza, el material de vidrio se introduce o se lava con HCl 1 : 1 cuando ya está aparentemente limpio, se lava con agua de la llave y finalmente se enjuaga tres veces con agua destilada. Los reactivos y el papel filtro que se escojan deben estar libres de compuestos de fósforo. 1) Para la digestión de la muestra tomar una alícuota de 100 ml o una alícuota menor y llevar a este volumen con agua destilada, correr un blanco con agua destilada y ponerlo en vasos de precipitado de 250 ml y agregar 1 ml de ácido sulfúrico concentrado y 5 ml de ácido nítrico concentrado. 2) Calentar hasta la eliminación de vapores nitrosos y dejar enfriar. 3) Pasarlo a matraces volumétricos de 100 ml procurando lavar bien el recipiente donde se hizo la digestión con agua destilada y aforarlo a su volumen con esta misma agua. 4) Tomar de aquí un volumen adecuado y transferirlo a un matraz volumétrico de 100 ml, llevarlo a 50 ml con agua destilada aproximadamente. 5) Añadirle dos gotas de fenolftaleína y adicionarle hidróxido de sodio 6 N hasta que se torne de un color rosa tenue, añadirle ácido sulfúrico 1 N hasta que el color rosa desaparezca y aforar a 100 ml con agua destilada. 6) Colocar los matraces en el siguiente orden: blanco, estandares de menor a mayor y finalmente las muestras, adicionar 4 ml de solución de molibdato de amonio y agitar para homogenizar. 7) Adicionar 10 gotas de solución de cloruro estanoso y agitar para homogenizar, dejar reposar durante 10 minutos para leer a una longitud de onda de 690 nm, cuidando que el tiempo de lectura no exceda de 12 minutos. 8) La lectura se efectuará primero el blanco , después los estándares de menor a mayor y luego las muestras. 9) Con la lectura obtenida se construye una gráfica donde se sugiere usar las ordenadas para la absorbancia en nm de cada estándar y las abscisas para la concentración de en mg/l de fósforo. CÁLCULOS: µg de P (en volumen final aprox. De 104.5 ml) mg/l P = ──────────────────────────────── ml de muestra SÓLIDOS SUSPENDIDOS TOTALES FUNDAMENTO: La determinación de sólidos suspendidos es extremadamente valiosa en los análisis de aguas contaminadas y de aguas residuales. Es uno de los mejores parámetros usados para valorar la contaminación de las aguas residuales y domésticas, para determinar la eficiencia de las unidades de tratamiento. En el trabajo de control de la contaminación de corrientes, se considera que todos los sólidos suspendidos son sedimentables, no siendo el tiempo un factor limitante. La sedimentación se espera que ocurra a través de la floculación biológica y química; de aquí que la medida de sólidos suspendidos se considera tan significativa como la demanda bioquímica de oxígeno. INTERFERENCIAS: La determinación de sólidos suspendidos está sujeta a errores considerables si no se toman las precauciones adecuadas. Usualmente el tamaño de la muestra se limita a 50 ml o menos, debido a las dificultades encontradas para filtrar muestras de mayores volúmenes. El peso de los sólidos removidos raras veces excede de 20 mg, y a menudo es menor de 10 mg. Errores pequeños en las pesadas o pérdidas por el borde del filtro, pueden ser bastantes significativos. Es muy importante que los crisoles Gooch sean cuidadosamente preparados y llevados a peso constante antes de usarse para que se obtenga una mayor exactitud en la determinación es necesario filtrar una mayor cantidad de muestra. En aguas que han sido tratadas biológicamente o ligeramente contaminadas, a menudo se requiere filtrar 500 ml de muestra para producir un aumento de peso de 10 mg de sólidos. PROCEDIMIENTO: 1) Poner un disco de fibra con la superficie rugosa hacia arriba en el crisol Gooch, teniendo cuidado de que el disco cubra completamente las perforaciones del Gooch, para esto pase agua destilada a través del filtro. 2) Llevar a peso constante el crisol Gooch con el disco de fibra de vidrio, en la mufla, a una temperatura de 550 ± 25 °C durante 30 minutos. 3) Enfriar el crisol que contiene el disco de fibra de vidrio en un desecador usando pinzas para su manejo y pesar. 4) Colocar el crisol Gooch con el disco de fibra de vidrio en un matraz Kitazato con un porta Gooch y aplicar vacío. 5) lavar el disco con agua destilada, dejando que el agua drene totalmente. 6) Mezclar uniformemente la muestra extraída y vertir el volumen de muestra deseado o hasta que el filtro se halla tapado por el exceso de sólidos en suspensión de la muestra. 7) Suspender el vacío y llevar los crisoles a la estufa para evaporar la muestra durante por lo menos 30 minutos a 103 - 105 °C o hasta peso constante. 8) Enfriar el crisol en un desecador y pesarlo una vez frío usando pinzas para su manejo. CÁLCULOS: El contenido de sólidos suspendidos totales se calcula de acuerdo con la siguiente fórmula: ( P2 - P1) S S T = ───────── x 1000000 V donde: P1 = Peso del crisol, en g P2 = Peso del crisol más residuo de la muestra evaporada, en g V = Volumen de la muestra filtrada, en ml SST = Sólidos suspendidos totales, en mg/l SÓLIDOS SUSPENDIDOS VOLÁTILES FUNDAMENTO: La determinación de sólidos suspendidos es extremadamente valiosa en los análisis de aguas contaminadas y de aguas residuales. Es uno de los mejores parámetros usados para valorar la contaminación de las aguas residuales y domésticas para determinar la eficiencia de las unidades de tratamiento. En el trabajo de control de la contaminación de corrientes, se considera que todos los sólidos suspendidos son sedimentables, no siendo el tiempo un factor limitante. La sedimentación se espera que ocurra a través de la floculación biológica y química; de aquí que la medida de sólidos suspendidos se considera tan significativa como la demanda bioquímica de oxígeno. INTERFERENCIAS: La determinación de sólidos suspendidos está sujeta a errores considerables si no se toman las precauciones adecuadas. Usualmente el tamaño de la muestra se limita a 50 ml o menos, debido a las dificultades encontradas para filtrar muestras de mayores volúmenes. El peso de los sólidos removidos raras veces excede de 20 mg, y a menudo es menor de 10 mg. Errores pequeños en las pesadas o pérdidas por el borde del filtro, pueden ser bastantes significativos. Es muy importante que los crisoles Gooch sean cuidadosamente preparados y llevados a peso constante antes de usarse. Para obtener una mayor exactitud en la determinación es necesario filtrar una mayor cantidad de muestra. En aguas tratadas biológicamente o ligeramente contaminadas, a menudo se requiere filtrar 500 ml de muestra para producir un aumento de peso de 10 mg de sólidos. PROCEDIMIENTO: 1) Poner un disco de fibra con la superficie rugosa hacia arriba en el crisol Gooch, teniendo cuidado de que el disco cubra completamente las perforaciones del Gooch, para esto pase agua destilada a través del filtro. 2) Llevar a peso constante el crisol Gooch con el disco de fibra de vidrio, en la mufla, a una temperatura de 550 ± 25 °C durante 30 minutos. 3) Enfriar el crisol que contiene el disco de fibra de vidrio en un desecador usando pinzas para su manejo y pesar. 4) Colocar el crisol Gooch con el disco de fibra de vidrio en un matraz Kitazato con un porta Gooch y aplicar vacío. 5) lavar el disco con agua destilada, dejando que el agua drene totalmente. 6) Mezclar uniformemente la muestra extraída y vertir el volumen de muestra deseado o hasta que el filtro se halla tapado por el exceso de sólidos en suspensión de la muestra. 7) Suspender el vacío y llevar los crisoles a la estufa para evaporar la muestra durante por lo menos 30 minutos o hasta peso a una temperatura de 103 - 105 °C. 8) Enfriar el crisol en un desecador y pesarlo una vez frío, usando pinzas para su manejo. 9) Incinerar la muestra en la mufla a 550 - 600 °C durante 20 min. 10) Enfriar el Gooch en un desecador y pesarlo un vez frío. CÁLCULOS: El contenido de sólidos suspendidos volátiles se calcula de acuerdo con la siguiente fórmula: ( P2 - P3) S S V = ────────── x 1000000 V donde: P2 = Peso del crisol más residuo de la muestra evaporada, en g P3 = Peso del crisol más residuo incinerado de la muestra, en g V = Volumen de la muestra que se filtró, en ml SSV = Sólidos suspendidos volátiles, en mg/l NITRÓGENO AMONIACAL MÉTODO DE LA DESTILACIÓN Y VALORACIÓN ACIDIMÉTRICA FUNDAMENTO: El amoníaco se destila en medio alcalino, se absorbe en una solución de ácido bórico y se determina por valoración con ácido sulfúrico. INTERFERENCIAS: La glicerina, la urea, el ácido glutámico, los cianatos y la acetamida se hidrolizan muy lentamente en soluciones en reposo, pero sólo la urea y los cianatos se hidrolizan en la destilación a pH = 9.5. PROCEDIMIENTO: 1) En un matraz Kjeldahl de 800 ml de capacidad poner aproximadamente 500 ml de agua destilada y lavar el condensador hasta colectar aproximadamente de 50 a 100 ml de agua en el matraz receptor. 2) En un matraz erlenmeyer de 500 ml poner 50 ml de solución de ácido bórico al 2 % y colocarlo en el extremo receptor con el tubo sumergido dentro de la solución. 3) En un matraz Kjeldahl poner la cantidad de muestra de acuerdo a la tabla 1 según la cantidad de nitrógeno amoniacal esperada, si el volumen de muestra seleccionado es menor de 500 ml, llevar la muestra a un volumen de 500 ml con agua destilada. 4) Adicionarle perlas de vidrio para tener un mejor control de la ebullición. 5) Añadir 25 ml de solución buffer de borato, ajustar la solución a un pH = 9.5 con un potenciómetro o con papel indicador o bien añadir de 5 a 7 gotas de fenolftaleína y subir el pH por la adición de solución de hidróxido de sodio 6 N hasta un color rosa intenso. 6) Conectar inmediatamente el matraz al bulbo del aparato de destilación. 7) Destilar la muestra cuidando que la temperatura del condensador no pase de 29 °C. 8) Prepare un testigo con 500 ml de agua destilada y someterlo al mismo tratamiento que la muestra. 9) Recolectar el condensado con la punta del tubo del refrigerante sumergido en los 50 ml de solución de ácido bórico al 2 % en el matraz receptor. 10) Se da fin a la destilación cuando se hayan recolectado aproximadamente 300 ml de destilado, incluyendo los 50 ml de la solución de H3BO3 al 2 %. 11) Retirar el matraz colector y añadirle aproximadamente 0.6 ml de la solución de indicador mixto y valorar con solución de H2SO4 0.02 N hasta que la solución vire de un color verde esmeralda a un color morado. Selección del volumen de muestra: ───────────────────────────────────────────────────────── Nitrógeno amoniacal en la muestra mg/l de Nitrógeno ml de muestra ───────────────────────────────────────────────────────── 0-5 500 5 - 10 250 10 - 20 100 20 - 50 50 50 - 100 25 ──────────────────────────────────────────────────────── CÁLCULOS: ( A - B ) x N x 14 N - NH3 = ──────────────── x 1000 V donde: A = Volumen de H2SO4 gastados para la muestra, en ml B = Volumen de H2SO4 gastados para el testigo, en ml N = Normalidad de H2SO4 14 = Peso miliequivalente del ion nitrógeno 1000 = Factor para referir a 1 litro V = Volumen de la muestra usado, en ml N-NH3 = Nitrógeno amoniacal, en mg/l NITRÓGENO ORGÁNICO FUNDAMENTO: El nitrógeno de los compuestos orgánicos tales como: aminas, aminoácidos, amidas, imidas y nitroderivados, que se encuentran presentes en las aguas residuales domésticas de manera general en forma de proteínas o en forma de sus productos de degradación tales como son polipéptidos y aminoácidos que por medio de la digestión en presencia de ácido sulfúrico, sulfato de potasio y oxido de mercurio se convierten éstos compuestos en sulfato de amonio, también el amoníaco libre y el nitrógeno amoniacal se transforman en sulfato de amonio. La mayoría de los compuestos orgánicos que contienen nitrógeno producen amoníaco al ser oxidados. El método Kjeldahl emplea ácido sulfúrico como agente oxidante, y el amoníaco liberado se cuantifica por los métodos de titulación o bien por Nesslerización. Para determinar exclusivamente el nitrógeno orgánico, se lleva a cabo una remoción previa de nitrógeno amoniacal presente. Durante la digestión de la muestra con ácido sulfúrico, se añaden sulfatos de mercurio y sulfato de potasio para aumentar la temperatura de ebullición de la mezcla y asegurar así que todo el nitrógeno orgánico sea liberado en forma de amoníaco. Los cambios que sufre la muestra durante la digestión son los siguientes: 1.- Evaporación del agua para dejar que el ácido sulfúrico concentrado ataque a la materia orgánica. 2.- En el momento que empieza la digestión se forma gran cantidad de humos blancos. 3.- Al deshidratar el ácido sulfúrico la materia orgánica, de la mezcla se vuelve negra. 4.- Al oxidarse el carbono se forman burbujas extremadamente pequeñas debido a la liberación de CO2 y SO2. 5.- La destrucción de la materia orgánica finaliza cuando la solución se vuelve incolora. 6.- La digestión se debe continuar por lo menos 20 minutos más después que las muestras se han clarificado, para asegurar la destrucción completa de la materia orgánica. INTERFERENCIAS: La glicerina, la urea, el ácido glutámico, los cianatos y la acetamida se hidrolizan muy lentamente en soluciones en reposo, pero solo la urea y los cianatos se hidrolizan en la destilación a pH = 9.5. En presencia de gran cantidad de materia orgánica libre de nitrógeno, es necesario agregar 50 ml adicionales de la mezcla de ácido sulfúrico y sulfatos de mercurio y potasio, por cada gramo de material sólido en la muestra. PROCEDIMIENTO: 1) La determinación se realiza con el residuo que se usó para la determinación de nitrógeno amoniacal. 2) Dejar enfriar el residuo producto de la destilación, que está contenido en el matraz Kjeldahl. 3) Añadir 50 ml de la solución de digestión. 4) Encender el extractor del aparato para evitar que los vapores se encierren en el lugar donde se efectúa el análisis. 5) Encender el aparato de digestión para calentar la mezcla en el matraz Kjeldahl a una temperatura que no exceda los 371 °C hasta que los gases de SO3 (vapores blancos) se eliminen y la solución se torne incolora o amarillo pálido; a partir de este momento se mantiene el calentamiento por lo menos durante 20 min más. 6) La digestión se debe efectuar bajo condiciones satisfactorias de ventilación y extracción de gases. 7) Dejar enfriar la solución, dejando el extractor de gases encendido hasta que la solución deje de despedir vapores blancos. 8) En un matraz Kjeldahl poner aproximadamente 500 ml de agua destilada y lavar el condensador hasta obtener cerca de 50 o 100 ml de agua en el matraz receptor. 9) En un matraz erlenmeyer de 250 ml de capacidad poner 50 ml de solución de ácido bórico y 0.6 ml de solución indicador mixto, colocarlo en el extremo receptor con el tubo sumergido dentro de la solución. 10) Añadir 300 ml de agua a la cual se le determinó el contenido de N-NH3 y se disuelve el contenido del matraz. 11) Se le añade 1 ml de solución indicadora de fenolftaleína. 12) Poner el matraz en posición ligeramente inclinada y agregar por escurrimiento lento en las paredes del matraz y sin mezclar, 50 ml de la solución de hidróxido de sodio-tiosulfato de sodio hasta que el matraz se conecte al aparato de destilación, procurando formar dos capas. 13) Conectar inmediatamente el matraz al bulbo del aparato de destilación. Agitar y verificar la alcalinidad de la solución de acuerdo con el cambio de color de la solución (de incoloro a rosa). En caso de que no se haya alcanzado la alcalinidad, deberá agregarse un exceso de solución de hidróxido de sodio-tiosulfato de sodio hasta la obtención de una coloración rosa. 14) La muestra se destila y se cuida que la temperatura del condensador no exceda de 29 °C. 15) Se recolecta el condensado en el matraz receptor con la punta del tubo refrigerante sumergido en 50 ml de la solución de ácido bórico. 16) La destilación se suspende cuando se hayan recolectado aproximadamente 200 ml del destilado, incluyendo los 50 ml de la solución de ácido bórico con la solución indicadora mixta. 17) Retirar el matraz colector y valorar con solución de ácido sulfúrico 0.02 N hasta que la solución vire de un color verde esmeralda a un color morado. CÁLCULOS: ( A - B ) x N x 14 NITRÓGENO ORGÁNICO = ──────────────── x 1000 V donde: A = Volumen de H2SO4 gastados para la muestra, en ml B = Volumen de H2SO4 gastados para el testigo, en ml N = Normalidad del H2SO4 14 = Peso miliequivalente en mg del ion nitrógeno 1000 = Factor para referir a 1 litro V = Volumen de muestra usado, en ml DEMANDA BIOQUÍMICA DE OXÍGENO (DBO) MËTODO DE INCUBACION A 20 °C FUNDAMENTO: El método se basa en la cantidad de oxígeno que requieren los microorganismos para efectuar la oxidación de la materia orgánica presente en aguas naturales y residuales, y se determina por la diferencia entre el oxígeno disuelto inicial y el oxígeno disuelto al cabo de 5 días de incubación a 20 °C. INTERFERENCIAS: Interfieren con la determinación la acidez y/o alcalinidad presentes en las aguas, el cloro residual, una sobresaturación de oxígeno disuelto, la presencia de sustancias tóxicas para los microorganismos, y los procesos de nitrificación. Estas interferencias pueden removerse si se le da un pretratamiento a la muestra. PROCEDIMIENTO: PREPARACION DEL AGUA DE DILUCION.Agregar a cada litro de agua destilada 1 ml de la solución amortiguadora de fosfatos, 1 ml de la solución de sulfato de magnesio, 1 ml de la solución de cloruro de calcio y 1 ml de la solución de cloruro férrico y airear hasta completar saturación (7 minutos aproximadamente). Preparar el agua de dilución cada vez que se haga la determinación. MÉTODO DE LA DILUCIÓN: Este método se basa en el concepto fundamental de que la velocidad de la degradación bioquímica orgánica es directamente proporcional a la cantidad de material no oxidado. - Sin inóculo: 1) Preparar las diluciones según la tabla siguiente de acuerdo al tipo de muestra, éstas diluciones se hacen con el agua de dilución preparada anteriormente. Airee el agua de dilución hasta que se sature de oxígeno. Estime la dilución necesaria para producir un consumo de oxígeno entre 2 y 6 mg/l después de 5 días de incubación. Las diluciones recomendables son las siguientes según el tipo de muestra. ───────────────────────────────────────────────────────── Tipo de desecho en mg/l DBO (estimada) Por ciento de dilución ─────────────────────────────────────────────────────────Desecho industrial concentrado 500 - 5000 Aguas residuales domésticas 100 - 500 1.0 - 5.0 Efluentes tratados 20 - 100 5.0 - 25.0 5 - 20 25.0 - 100.0 Aguas contaminadas de ríos 0.1 - 1.0 ─────────────────────────────────────────────────────────- Utilizando como guía el valor estimado de DBO, se calculan las diluciones apropiadas para obtener el abatimiento deseado del contenido de oxígeno. La disminución del oxígeno disuelto inicial en un ámbito de 40 - 60 % dará los resultados más confiables. Las diluciones que muestran un oxígeno disuelto residual de cuando menos 1 mg/l y un consumo de cuando menos 2 mg/l se pueden considerar las más seguras. 2) Medir directamente por cada dilución volúmenes apropiados de la muestra en 3 botellas de 300 ml tipo DBO, con una pipeta volumétrica de punta alargada; llenar las botellas con el agua de dilución de manera que el tapón pueda colocarse sin dejar burbujas de aire. 3) La técnica de dilución se puede simplificar bastante cuando se miden directamente en las botellas de capacidad conocida, como pueden ser las botellas tipo DBO de 300 ml de capacidad, y poner cantidades apropiadas de la muestra, usando una pipeta volumétrica de punta alargada y la botella se llena con el agua de dilución justamente para que el tapón pueda colocarse sin dejar burbujas de aire. El extremo del conducto del agua de dilución debe permanecer sumergido mientras se llena la botella para evitar que le entre oxígeno atmosférico. 4) Para la determinación de la DBO5 se efectúan los siguientes pasos: - Determinación del oxígeno disuelto inicial en una de las botellas de DBO (ODI). - En otra botella determinar el oxígeno disuelto a los 15 min. de haber mezclado la muestra con el agua de dilución (OD15), para obtener la demanda inmediata de oxígeno disuelto (DIOD), ya que las sustancias oxidables por el oxígeno molecular, tales como fierro ferroso, sulfito y sulfuro, lo mismo que los aldehídos provocan una disminución en el oxígeno disuelto que se debe determinar. - La ultima botella se mete en la incubadora a 20 °C durante 5 días manteniendo el sello hidráulico; al cabo de éste tiempo determinar la cantidad de oxígeno disuelto en la muestra. - Incubación: Incube el testigo del agua de dilución y las muestras diluidas por 5 días a 20 °C en obscuridad absoluta. Selle hidráulicamente las botellas de DBO invirtiéndolos en una charola con agua en la incubadora o use un sello hidráulico en la parte superior del cuello de la botella especial tipo DBO. - Control del agua de dilución: Llenar 2 botellas para DBO con agua de dilución sin inóculo, taparlas, sellarlas hidráulicamente e incubarlas. Los resultados de OD en éstas dos botellas se usan como control de la calidad del agua de dilución; cualquier dato obtenido se deberá restar al resultado obtenido en la muestra, éste valor no debe ser mayor a 0.2 ml y es preferible que no exceda a 0.1 ml. CÁLCULOS: DIod - ODf DBO (mg/l) = ─────────── V donde: DIod = Oxígeno disuelto inmediato en mg/l ODf = Oxígeno disuelto después de 5 días de incubación en mg/l V = Volumen de muestra que se colocó en la botella DBO en ml - Con inóculo: 1) Hay muchos desechos industriales que no tienen flora bacteriana para la determinación de DBO, debido a su composición química o al proceso de manufactura utilizado. Desechos de ésta clase deben ser inoculados con el tipo y número apropiado de organismos para obtener valores de DBO más aproximados al valor exacto. Se denomina inóculo a la suspensión de microorganismos vivos que se han adaptado para reproducirse en un medio específico. El objeto del inóculo es introducir en la muestra una población biológica capaz de oxidar la materia orgánica que contenga. Cuando tales microorganismos ya están presentes, como en las aguas residuales domésticas o efluentes no clorados y en aguas superficiales, no es necesario inocular las muestras. Cuando haya razón para creer que la muestra contiene muy pocos microorganismos como resultado de temperaturas elevadas, cloración pHs extremos, debe inocularse el agua de dilución. 2) La selección del inóculo apropiado es un factor importante en la determinación de la DBO, por ejemplo si se desea determinar la DBO de los desechos de una planta procesadora de alimentos, se puede obtener un inóculo satisfactorio usando el líquido sobrenadante de las aguas residuales domésticas, el cual ha sido previamente incubando a 20 °C durante 24 - 36 horas en un recipiente destapado. 3) Muchos desechos industriales contienen compuestos orgánicos que están sujetos a la oxidación por el inóculo de las aguas residuales domésticas; en estos casos se puede usar un inóculo preparado a partir de suelo, aclimatado y desarrollado en el laboratorio, o agua receptora colectada abajo del punto de descarga del desecho en particular (de 3 a 5 Km abajo). Los dos últimos inóculos presentan mayores posibilidades. Indudablemente dará la mejor estimación de DBO usando el inóculo obtenido del agua de desecho del cuerpo de agua en estudio. El inóculo deberá colectarse en un punto donde se haya formado una biota (conjunto de microorganismos vivos) capaz de usar como alimento los compuestos orgánicos que están presentes. En algunos casos estos pueden asegurar la selección de un inóculo satisfactorio tomando el inóculo muchos kilómetros abajo del punto de descarga del desecho en estudio, pero no es práctico cuando hay desechos periódicos difícilmente susceptibles de oxidación biológica; es más conveniente formar un inóculo por aclimatación del desecho o agua receptora con pequeños incrementos diarios del desecho en particular, junto con el agua residual doméstica, hasta que se desarrolle un inóculo satisfactorio. 3) Preparación del agua de dilución con inóculo.- Se prepara el agua de dilución con el inóculo más satisfactorio para el desecho en estudio. Solamente las experiencias anteriores pueden determinar la cantidad efectiva de inóculo que se agrega por litro; sin embargo, puede servir como referencia usar 1 - 10 ml de agua residual doméstica por litro de agua de dilución o de 10 - 50 ml de agua de río por litro de agua de dilución, incubándose durante 24 - 36 horas. El agua de dilución inoculada se debe usar el mismo día en que se prepare. 4) Incubación con inóculo.- Calcular el porcentaje de inóculo que se requiere para producir por lo menos una DBO (5 días) de 0.5 mg/l. Calcular las diluciones del agua con el desecho en particular como se ilustra en la tabla anterior. Se disminuye la concentración del desecho lo suficiente para tomar en cuenta la utilización de oxígeno por el inóculo. Medir la cantidad de desecho que se requiera, según dicha tabla. Agregar a la muestra aproximadamente la mitad de la cantidad de agua de dilución que se requiere. Esto es necesario para asegurarse de que el desecho concentrado no es tóxico para los organismos del inóculo. Proceder a tomar de la muestra las porciones para su análisis y determinar el oxígeno disuelto a los 15 min y a los 5 días, como se indicó antes. 5) Corrección por demanda de oxígeno del inóculo.- El valor de la corrección por demanda de oxígeno del inóculo se obtiene determinando la DBO del inóculo mismo. Determinar el abatimiento de oxígeno del inóculo con una serie separada de diluciones de este y seleccionando aquélla que consuma del 40 - 70 % de oxígeno al quinto día. Uno de estos abatimientos se usa para calcular la corrección debida a la pequeña cantidad de inóculo en el agua de dilución. CÁLCULOS: DBO = B1 - B2 donde: DBO = DBO del inóculo en mg/l B1 = OD del agua de dilución inoculada antes de la incubación en mg/l B2 = OD del agua de dilución inoculada después de la incubación en mg/l La corrección por inóculo de la DBO5 queda expresada por: DBO5 = A - B donde: DBO5 = DBO en mg/l después de 5 días de incubación A = DBO de la muestra incubada con inóculo en mg/l B = DBO del inóculo en mg/l - Corrección de demanda inmediata de oxígeno disuelto Como se mencionó, algunos desechos industriales contienen sustancias reductoras como sulfitos, sulfuros, fierro ferroso y aldehídos que ocasionan una demanda química inmediata de oxígeno disuelto. Para estos desechos es necesario hacer la distinción entre las dos demandas para poder llegar a la verdadera demanda bioquímica de oxígeno. En éste caso deberá sembrarse una botella adicional para determinar el OD después de 15 minutos de siembra, éste tiempo ha sido arbitrariamente seleccionado. DBO5 = (ODi - ODf) - (ODi - OD15) donde: ODi = Oxígeno disuelto inicial en mg/l ODf = Oxígeno disuelto final en mg/l OD15 = OD después de 15 min de siembra en mg/l DEMANDA QUÍMICA DE OXÍGENO FUNDAMENTO: El método se basa en una oxidación enérgica de la materia orgánica y la inorgánica oxidable que se encuentra en el agua, en un medio fuertemente ácido, con una solución valorada de dicromato de potasio. El exceso de agente oxidante se determina con una solución valorada de sulfato ferroso amoniacal, en presencia de un complejo ferroso de ortofenantrolina como indicador interno. El método de la demanda química de oxígeno determina la cantidad de oxígeno necesario para oxidar la materia orgánica presente en un desecho, bajo condiciones específicas de un agente oxidante, bajo condiciones ácidas y de temperatura, transformando la materia orgánica en bióxido de carbono y agua. INTERFERENCIAS: Las sustancias inorgánicas como los iones ferroso (Fe++), Sulfuros (S=), Sulfitos (SO3=) y tiosulfatos (S2SO3-) se oxidan bajo ciertas condiciones y crean una DQO inorgánica, la cual interfiere cuando se estima el contenido orgánico del agua residual. El ion cloruro interfiere, pero se elimina al agregar el sulfato mercúrico. PROCEDIMIENTO: La muestra se debe de analizar inmediatamente después de su recolección, en caso contrario debe conservarse acidificada la muestra con H2SO4 concentrado hasta un pH menor de 2.00 y además refrigeración a 4 °C, la muestra así puede durar hasta 7 días. 1) Para muestras con una DQO mayores de 50 mg/l poner una muestra de 50 ml, o una alícuota diluida a 50 ml con agua destilada, dependiendo del origen de la muestra, y ponerla en un matraz erlenmeyer de 500 ml. Agregarle una cantidad adecuada de sulfato mercúrico (aproximadamente 1.0 g) y algunas perlas de vidrio. Añadir con cuidado 5 ml de la solución de sulfato de plata-ácido sulfúrico, mezclar para disolver el HgSO4, luego enfriar. Añadir 25.0 ml de la solución de dicromato de potasio 0.25 N y mezclar mediante un movimiento circular. 2) Conectar el matraz erlenmeyer al condensador y hacer circular el agua de enfriamiento. 3) Por el extremo superior del condensador agregar lento y cuidadosamente 70 ml de la solución de ácido sulfúrico-sulfato de plata y agitar cuidadosamente con movimientos circulares para homogenizar mientras se agrega la solución. 4) Mezcle perfectamente antes de aplicar calor; si no se hace esto, puede haber calentamientos locales en el fondo del matraz y la muestra puede ser expulsada del condensador. 5) El uso del HgSO4 es suficiente para formar un complejo con el ion cloruro. Si hay más cloruros se debe agregar más HgSO4 para mantener una proporción HgSO4-Cl de 10:1. Si se desarrolla un ligero precipitado no afecta la determinación. 6) Calentar el matraz que contiene la mezcla y mantener a reflujo durante 2 horas a partir del momento en que empieza la ebullición. Un período más corto de reflujo puede ser usado para desechos particulares si se encuentra que da la máxima DQO. 7) Dejar enfriar y lavar el condensador con agua destilada, es recomendable usar una piseta con punta alargada. 8) Añadir agua por el extremo superior del condensador hasta completar un volumen aproximado de 300 ml, retirar el matraz del condensador y enfriar a la temperatura ambiente. 9) Agregar 4 gotas de 1,10 fenantrolina como indicador y titular con la solución valorada de sulfato ferroso amoniacal 0.25 N hasta el cambio de azul verdoso a café rojizo. Aunque la cantidad de ferroín no es crítica, no debe variar en las muestras siguientes. El cambio de color es claro, el cual va del azul verdoso al café rojizo y debe tomarse como punto final aunque el color azul verdoso vuelva a aparecer. 10) Correr simultáneamente un testigo preparado con 20 ml de agua destilada en lugar de la muestra, junto con la misma cantidad de reactivos que se utilizan en el procedimiento cuidando que la ebullición empiece al mismo tiempo que en las muestras. - Procedimiento alternativo para usar otras cantidades de muestra. En situaciones particulares, una cantidad de muestra en el ámbito de 10.0 a 50.0 ml puede ser usada con tal de que los volúmenes, pesos y normalidades para los demás reactivos, estén en proporción. Para muestras menos contaminadas podrán reducirse los volúmenes de reactivos, en cantidades proporcionales según se muestra en la tabla siguiente: Muestra Dicromato de H2SO4- HgSO4 Normalidad del Vol final en ml potasio 0.25 N Ag2SO4 en g Fe(NH4)2(SO4)2 antes de titular en ml 10 5.0 15.0 0.2 0.05 70 20 10.0 30.0 0.4 0.10 140 30 15.0 45.0 0.6 0.15 210 40 20.0 60.0 0.8 0.20 280 50 25.0 75.0 1.0 0.25 350 * Los resultados serán satisfactorios si se mantienen éstas proporciones. CALCULOS: (A - B) x N x 8 D Q O = ────────────── x 1000 V donde: A = Gasto de sulfato ferroso amoniacal usado para la valoración del testigo, en ml B = Gasto de sulfato ferroso amoniacal usado para la valoración de la muestra, ml N = Normalidad de la solución de sulfato ferroso amoniacal 8 = Peso Miliequivalente en mg del oxígeno V = Volumen de muestra usada, en ml DQO = Demanda química de oxígeno, en mg/l 1000 = factor para referir a 1 litro DETERMINACIÓN DE COLIFORMES TOTALES POR LA TÉCNICA DE NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP) O TUBOS DE FERMENTACIÓN MÚLTIPLE Prueba presuntiva 1. A partir de las diluciones preparadas para efectuar la cuenta total viable, inocular 1 ml en 10 ml de caldo lactosado simple, teniendo cuidado de agregar campana Durham con el fin de poder visualizar la producción de gas. 2. Emplear diluciones 1:10, 1:100 y 1:1000, las cuales deben ser inoculadas por quintuplicado. 3. Inocular los tubos a 37º C durante 24 a 48 horas. 4. A las 48 horas, los tubos en los que se produjo gas y turbidez se consideran positivos. Los tubos en los que no se produjo gas se consideran negativos y se descargan. Prueba confirmativa A partir de los tubos que dieron positiva la prueba presuntiva: 1. Inocular 2 asadas en tubos que contengan 10 ml de caldo verde bilis brillante con su respectiva campana Durham. 2. Incubar a 37º C durante 24 a 48 horas. En los tubos que hay producción de gas y turbidez se confirma la presencia de organismos coliformes. DETERMINACIÓN DE COLIFORMES FECALES POR LA TÉCNICA DE NPM O TUBOS DE FERMENTACIÓN MÚLTIPLE Prueba presuntiva 5. A partir de las diluciones preparadas para efectuar la cuenta total viable, inocular 1 ml en 10 ml de caldo lactosado simple, teniendo cuidado de agregar campana Durham con el fin de poder visualizar la producción de gas. 6. Emplear diluciones 1:10, 1:100 y 1:1000, las cuales deben ser inoculadas por quintuplicado. 7. Inocular los tubos a 37º C durante 24 a 48 horas. 8. A las 48 horas, los tubos en los que se produjo gas y turbidez se consideran positivos. Los tubos en los que no se produjo gas se consideran negativos y se descargan. Prueba confirmativa A partir de los tubos que dieron positiva la prueba presuntiva: 3. Inocular 2 asadas en tubos que contengan 10 ml de caldo EC brillante con su respectiva campana Durham. 4. Incubar en baño María a 44.5 más menos .2 º C durante 18 a 48 horas. Determinación de NMP Para la determinación de NMP tanto de coliformes totales como fecales, se hace el conteo de los tubos positivos en cada una de las diluciones y se emplean tablas de estándares establecidas. ANEXO B. Norma oficial mexicana NOM-CCA-022-ECOL/1993 NORMA Oficial Mexicana NOM-CCA-022-ECOL/1993, que establece los límites máximos, permisibles de contaminantes en las descargas de aguas residuales a cuerpos receptores provenientes de la industria de matanza de animales y empacado de cárnicos. Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos MexicanosSecretaría de desarrollo Social. SERGIO LUJAN REYES, Presidente del Instituto Nacional de Ecología, con fundamento en los artículos 32 fracciones XXIV, XXV, XXIX, de la Ley orgánica de la Administración Pública Federal: 5º. Fracciones VIII y XV: 8º. Fracciones II y VII. 35. 31.117.118 fracción II. 119 fracción I inciso a). 123, 171 y 173 de la Ley General del Equilibrio ecológico y la Protección al Ambiente; 38 fracción II, 40 fracción X, 41, 43, 46, 47, 52, 62, 63 y 64 de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización, 85,86 fracciones I, III, VII, 92 fracciones II y IV y 119 fracción I de la Ley de Aguas Nacionales; Primero y Segundo del Acuerdo mediante el cual se delega en el Subsecretario de Vivienda y Bienes inmuebles y en el Presidente del Instituto Nacional de Ecología, la facultad de expedir las normas oficiales mexicanas en materia de vivienda y ecología, respectivamente y CONSIDERANDO Que las descargas de aguas residuales en las redes colectoras, ríos, cuencas, causes, vasos, aguas marinas y demás depósitos o corrientes de agua y los derrames de aguas residuales en los suelos o su infiltración en los terrenos provenientes de la industria de matanza de animales y empacado de cárnicos, provocan efectos adversos en los ecosistemas, por lo que es necesario fijar los límites máximos permisibles que deberán satisfacer dichas descargas. Que habiéndose cumplido el procedimiento establecido en la ley federal sobre metrología y Normalización para la elaboración de proyectos en normas oficiales mexicanas el C. Presidente del Comité Consultivo Nacional de Normalización para la protección Ambiental ordenó la publicación del proyecto de norma oficial mexicana NOM-PA-CCA-022/93. Que establece los límites máximos permisibles de contaminantes en las descargas de aguas residuales a cuerpos receptores provenientes de la industria de matanza de animales y empacado de cárnicos, publicada en el Diario Oficial de la Federación el 28 de Junio de 1993, con el objeto de que los interesados presentarán sus comentarios al citado Comité Consultivo. Que la Comisión nacional de Normalización determinó en sesión de fecha 1º.de Julio de 1993, la sustitución de la clave NOM-PA-CCA-022/93, con que fue publicado el proyecto de la presente norma oficial mexicana, por la clave NOM-CCA-022-ECOL/1993, que en lo subsecuente la identificará. Que dentro del mismo plazo, los interesados presentaron sus comentarios al proyecto de norma, los cuales fueron analizados en el citado Comité Consultivo Nacional de Normalización, realizándose las modificaciones procedentes. La Secretaría de Desarrollo Social, por conducto del Instituto Nacional de Ecología, publicó las respuestas a los comentarios recibidos en la Gaceta Ecológica, volumen V número especial de Octubre de 1993. Que mediante oficio de fecha 13 de octubre de 1993, la Secretaría de Agricultura y Recursos hidráulicos, a través de la Comisión Nacional del Agua expresó su conformidad con el contenido y expedición de la presente norma oficial mexicana. Que previa aprobación del Comité Consultivo Nacional de Normalización para la Protección Ambiental, en sesión de fecha 30 de Septiembre del año en curso, he tenido a bien expedir la siguiente NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-CCA-022-ECOL-1993. QUE ESTABLECE LOS LIMITES MÁXIMOS PERMISIBLES DE CONTAMINANTES EN LAS DESCARGAS DE AGUAS RESIDUALES A CUERPOS RECEPTORES PROVENIENTES DE LA INDUSTRIA DE MATANZA DE ANIMALES Y EMPACADO CARNICOS. 1. OBJETO Esta Norma oficial mexicana establece los limites máximos permisibles de contaminantes en las descargas de aguas residuales a cuerpos receptores provenientes de la industria de matanza de animales y empacados cárnicos. 2. CAMPO DE APLICACIÓN La presente norma oficial mexicana es de observancia obligatoria para los responsables de las descargas de aguas residuales a cuerpos receptores provenientes de los procesos de la industria de matanza de animales y empacado cárnicos. 3. REFERENCIAS NMX-AA-3 Aguas Residuales-Muestreo NMX-AA-4 Determinación de sólidos sedimentables en aguas residuales-Método de cono imhoff NMX-AA-8 Aguas-Determinación de pH Método potenciométrico NMX-AA-26 Aguas-Determinación de nitrógeno Total-Método Kjeldahl NMX-AA-28 Determinación de demanda bioquímica de oxígeno-Método de incubación por diluciones NMX-AA-34 Determinación de sólidos en aguaMétodo gravimétrico NMX-AA-42 Análisis de aguas-Determinación del número más probable de coliformes totales y fecales Método de tubos múltiples de fermentación 4. ESPECIFICACIONES 4.1 Las descargas de aguas residuales provenientes de la industria de matanz a de animales y empacado de cárnicos deben cumplir con las especificaciones que se indican en la tabla 1. Tabla 1 PARÁMETRO LÍMITES MÁXIMOS PERMISIBLES PROMEDIO INSTANTÁNEO DIARIO pH (unidades de pH) 6-9 6-9 Demanda bioquímica de oxígeno (mg/l) 200 240 Sólidos sedimentables (ml/l) 10 12 Sólidos suspendidos totales(mg/l) 200 240 Grasas y aceites (mg/l) 30 40 Nitrógeno amoniacal (mg/l) 20 30 4.1.1. Para fines de la presente norma se entenderá por límite máximo permisible promedio diario, los valores, rangos y concentraciones de los parámetros que debe cumplir el responsable de la descarga, en función del análisis de muestras compuestas de las aguas residuales provenientes de esta industria. 4.1.2. Para fines de la presente norma se entenderá por límite máximo permisible instantáneo, los valores, rangos y concentraciones de los parámetros que debe cumplir el responsable de la descarga, en función del análisis de muestras instantáneas de las aguas residuales provenientes de esta industria. 4.1.3. En el caso de que el agua de abastecimiento contenga alguno de los parámetros que se encuentran regulados en esta norma, no será imputable al responsable de la descarga, y éste tendrá el derecho a que la autoridad competente le fije, previa solicitud, condiciones particulares de descarga que tomen en consideración lo anterior. 4.2. Los límites máximos permisibles de coliformes totales, medidos como el número más probable por cada 100 ml, en las descargas de aguas residuales provenientes de la industria de matanza de animales y empacado de cárnicos, considerando o no las aguas de servicio son: 4.2.1. 10 000 como límite promedio diario y 20 000 como límite instantáneo cuando se permita el escurrimiento libre de las aguas residuales de servicios o su descarga a un cuerpo receptor, mezcladas con las aguas residuales del proceso industrial. 4.2.2. Sin límite, en el caso de que las aguas residuales de servicios se descarguen separadamente y el proceso para su depuración prevea su infiltración en terreno, de manera que no se cause un efecto adverso en los cuerpos receptores. 4.3. Condiciones particulares de descargas En el caso de que se identifiquen descargas que a pesar del cumplimiento de los límites máximos permisibles establecidos en esta norma causen efectos negativos en el cuerpo receptor, la Secretaría de Agricultura y Recursos Hidráulicos a través de la Comisión Nacional del Agua, fijará condiciones particulares de descarga para señalar límites máximos permisibles más estrictos de los parámetros de la tabla 1, además, podrá establecer límites máximos permisibles si lo considera necesario, en los siguientes parámetros: Color Conductividad eléctrica Fósforo total Sólidos disueltos totales 5. MUESTREO 5.1 Los valores de los parámetros en las descargas de aguas residuales provenientes de la industria de matanza de animales y empacados cárnicos a cuerpos receptores, se obtendrán del análisis de muestras compuestas que resulten de la mezcla de las muestras simples tomadas éstas en volúmenes proporcionales al caudal medido en el sitio y en el momento del muestreo de acuerdo con la tabla 2. Tabla 2 HORAS POR DÍA QUE OPERA EL PROCESO GENERADOR DE LA DESCARGA NÚMERO DE MUESTRAS HASTA 8 MÁS DE 8 Y HASTA 12 MÁS DE 12 Y HASTA 18 MÁS DE 18 Y HASTA 24 4 4 6 6 INTERVALO ENTRE TOMA DE MUETRAS SIMPLES (HORAS) MÍNIMO 1 2 2 3 MÁXIMO 2 3 3 4 5.2. En el caso que durante el período de operación del proceso generador de la descarga, esta no se presente en forma continua, el responsable de dicha descarga deberá presentar a consideración de la autoridad competente, la información en la que se describa su régimen de operación y el programa de muestreo para la medición de los parámetros contaminantes. 5.3. El reporte de los valores de los parámetros de las descargas de aguas residuales obtenidos mediante el análisis de las muestras compuestas a que se refiere el punto 5.1, se integrará en los términos que establezca la autoridad competente. 6. MÉTODOS DE PRUEBA Para determinar los valores de los parámetros señalados en la tabla 1, se deberán aplicar los métodos de prueba, que se establecen en las normas mexicanas referidas en le punto 3. 7. VIGILANCIA La Secretaría de Agricultura y Recursos Hidráulicos por conducto de la Comisión Nacional del Agua, es la autoridad competente para vigilar el cumplimiento de la presente norma oficial mexicana, coordinándose con la Secretaría de Marina cuando las descargas sean al mar y con la Secretaría de salud cuando se trate de saneamiento ambiental. 8. SANCIONES El incumplimiento de la presente norma oficial mexicana será sancionado conforme a lo dispuesto por la Ley General del Equilibrio Ecológico y la Protección al Ambiente, la Ley de Aguas Nacionales y demás ordenamientos jurídicos aplicables.