ÁCIDOS NUCLEICOS

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SEMINARIO
ÁCIDOS NUCLEICOS

La información genética es almacenada y transmitida
por los ácidos nucleicos: ADN y ARN.

Poli nucleótidos: Macromoléculas polímeros de
nucleótidos.

Química: poliésteres fosfóricos.
ACIDO NUCLEICO
NUCLEOTIDOS
NUCLEOSIDO
PENTOSA
D-Ribosa o D-Desoxirribosa
ACIDO FOSFORICO
BASES PURICAS
O PIRIMIDINICAS
La unión de una “osa” (ribosa o desoxirribosa) con base nitrogenada con
enlace N-glicosídico se llama nucleósido.
La esterificación de un nucleósido con un ácido fosfórico es un nucleótido.
ESTRUCTURA DE LOS NUCLEOTIDOS
Nucleósido = Pentosa + Base nitrogenada
Nucleótidos = pentosa + base nitrogenada + fosfato
Enlace N-glicosídico
Marcado carácter aromático. Resisten la oxidación. Absorben en el
UV, propiedad utilizada para su caracterización.
Los nucleótidos almacenan energía química en la célula
Algunos nucleótidos de adenina son componentes de cofactores enzimáticos
El NAD y el FAD actúan como coenzimas en reacciones de oxido-reducción
Estructura primaria
Encadenamiento entre
nucleótidos mediante
enlaces covalentes con
el ácido fosfórico que
produce un éster doble
en las posiciones 5’ de
uno y 3’ del otro
ESTRUCTURA DEL DNA
La doble hélice es dextrógira y la forma B
Tiene 11 pb por vuelta

EXTRACCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE DNA DE CELULAS
VEGETALES

Muestra : tejido vegetal (cebolla).

Rotura mecánica.

Solución de lisis celular: detergente, bicarbonato y cloruro de
sodio.
Objetivo

Rotura de la membrana celular y nuclear.

Liberación de las moléculas de ácidos nucleicos.

Alcohol etílico
Objetivo : Desnaturalizar la estructura B-ADN, por lo que se vuelve
insoluble en alcohol.

Precipitación del ADN por calentamiento.

10 g Cebolla rallada + 25 ml solución lisis.

20 min.a T ambiente

Filtrar en gasa

4 ml filtrado + 2 volúmenes de etanol sin mezclar.

En interfase formación de hebra blanca.

Aspirar la interfase con pipeta Pasteur

Precipitar DNA por calentamiento suave
CARACTERIZACION DNA

Reacción DIFENILAMINA: para desoxipentosa

ADN con difenilamina ------ compuesto azul
con absorción máxima a 595 nm.

La reacción la dan en general las 2desoxipentosas y no es específica para el
ADN.

Se evidencia indirectamente el DNA
TUBO A
TUBO B
AGUA DEST
1 ml
--
EXTRACTO
--
1 ml
Rvo
2 ml
2 ml
Difenilamina
Hervir 10 minutos, enfriar y observar

IDENTIFICACIÓN DE PENTOSA: ribosa o
desoxirribosa.

Reacción de Bial

La pentosa del DNA y RNA puede evidenciarse por
la reacción con orcinol.

El ácido sulfúrico hidroliza las uniones fosfodiester y
N-glicosídicas, liberando ribosa, bases púricas,
pirimidínicas y acido fosfórico.

La pentosa en medio ácido se deshidrata
originando furfural que reacciona con el orcinol
dando un producto verde que demuestra la
presencia de DNA y RNA.
Reacción de Bial
TUBO A
TUBO B
AGUA DEST
1 ml
--
EXTRACTO
--
1 ml
Rvo Orcinol
2 ml
2 ml
Hervir 10 minutos, enfriar y observar
IDENTIFICACIÓN DE GRUPO FOSFATO
Formación de azul de fosfomolibdeno
El fosfato reacciona con el molibdato de sodio para dar
fosfomolibdato, el cual es reducido por el acido ascórbico a
azul de molibdeno.
El arsenito/ citrato se combina con el exceso de molibdato
impidiendo su reacción posterior con el exceso de fosfato
liberado de los esteres lábiles,.
Agua dest
Extracto
Rvo 1
Blanco
Problema
0,1 ml
-0,5 ml
-0,1 ml
0,5 ml
Mezclar y esperar 30 seg
Rvo 2
0,5 ml
0,5 ml
Mezclar y esperar 30 seg
Rvo 3
0,75 ml
0,75 ml
Mezclar, incubar a 37° y observar color
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