UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2000 Estudios morfo-anatómicos en nectarios de dos especies de Sapindaceae Drganc, Mariel S. - Ferrucci, María S. Cátedra de Morfología de Plantas Vasculares - Facultad de Ciencias Agrarias - UNNE. Instituto de Botánica del Nordeste. Sargento Cabral 2131 - (3400) Corrientes - Argentina. Tel./Fax: +54 (03783) 427309 / 427131 - E-mail: ibone@espacio.com.ar ANTECEDENTES Sapindaceae es una familia de distribución tropical y subtropical, con 134 géneros y cerca de 2000 especies. Radlkofer (1931-1934) consideró para la familia 14 tribus, de las cuales sólo Paullinieae posee especies con hábito trepador, las restantes son arbóreas o arbustivas. Son plantas monoicas o menos frecuente dioicas o polígamas, presentan flores imperfectas, unas funcionalmente pistiladas, con estambres cuyas anteras tienen polen pero son indehiscentes y otras estaminadas con el gineceo reducido a un pistilodio, por excepción flores perfectas. Entre los caracteres reproductivos los nectarios florales son interesantes ya que están presentes en toda la familia y tienen valor sistemático. Sin embargo en la bibliografía disponible para la familia no se hallaron antecedentes referidos a la histología de mismos, a excepción del estudio en flores estaminadas de C. grandiflorum (Drganc & Ferrucci, 1998). Las especies aquí tratadas, Cardiospermum grandiflorum Sw. y Allophylus edulis (A. St.-Hil., A. Juss. et Cambess.) Radlk., “cocú”, pertenecen a géneros de las tribus Paullinieae y Thouinieae respectivamente, las más evolucionadas de la familia. Cardiospermum presenta 14 especies, son plantas trepadoras, en su mayoría neotropicales, sólo 3 son cosmopolitas, entre éstas C. grandiflorum. Mientras Allophylus es cosmopolita, cuenta con ca. de 255 especies, son arbustos o árboles, propios de regiones tropicales y subtropicales; en Argentina viven tres especies entre ellas A. edulis. Este trabajo tiene por objetivo el estudio de la anatomía del nectario de flores estaminadas en A. edulis, así como el análisis cuantitativo de estomas en las flores estaminadas y pistiladas de A. edulis y C. grandiflorum. Este estudio permitirá conocer si hay diferencias en las características anatómicas del nectario entre las dos especies estudiadas y además permitirá observar si hay diferencias en las características de los estomas entre ambos tipos de flores en la misma especie. MATERIALES Y METODOS Los ejemplares del material estudiado están depositados en el herbario del Instituto de Botánica del Nordeste. Los datos de procedencia de los mismos son los siguientes: Cardiospermum grandiflorum Argentina. Corrientes. Dep. Capital, Corrientes, Ferrucci 32 (CTES). Allophylus edulis. Argentina Corrientes. Dep. Capital, Corrientes, Ferrucci 68 (CTES). El estudio se llevó a cabo con material conservado en FAA. Se trabajó con botones florales y flores abiertas. Para el análisis anatómico se realizaron preparados permanentes. La deshidratación se llevó a cabo mediante una serie de deshidratantes y aclarantes-preimpregnantes de Biopur ® (González & Cristóbal, 1997), luego el material fue incluido en parafina (Johansen, 1940). Los cortes transversales seriados se realizaron con micrótomo rotativo en espesores de 10-12 µm, se tiñeron con safranina-azul de Astra (Luque et al. 1996). El estudio anatómico se realizó con un microscopio Olympus BX50. Las fotomicrografías correspondientes se obtuvieron con el microscopio electrónico de barrido (MEB) Jeol 5800 LV a 10 kV (UNNE). El material conservado fue sometido a una serie creciente de acetona, secado en punto crítico con CO2 .La metalización se llevó a cabo con un delgado baño de oro-paladio. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2000 Para el recuento de estomas se utilizó el siguiente método: se diafanizaron 7 flores estaminadas y 7 pistiladas por especie con solución concentrada de hipoclorito de sodio. Luego se enjuagaron con agua destilada para sacar el exceso de hipoclorito de sodio, nuevamente se enjuagaron con agua-ácido acético (3:1) y posteriormente fueron teñidas con lugol. El diámetro de los estomas se midió con microscopio óptico con ayuda de un ocular graduado. Se midieron 15 estomas en 3 flores estaminadas y en 3 pistiladas en ambas especies. Para el análisis de los parámetros estomáticos, longitud y ancho de ambas células oclusivas se incluyó el poro. En ambos tipos de análisis las variables se compararon entre flores pistiladas y estaminadas de la misma especie mediante la prueba t. RESULTADOS Morfología de la flor Allophylus edulis posee flores reunidas en tirsos axilares, espiciformes, de menor longitud que las hojas. Las flores son zigomorfas, blanquecinas y de pequeño tamaño, 2-4 mm. El cáliz posee 4(5) sépalos, es dialisépalo. La corola presenta 4(5) pétalos glandulosos, con escama basal soldada por sus márgenes al pétalo, bífida a bipartida. El disco nectarífero es anular, amarillo-oro o anaranjado en la flor estaminada y amarillo pálido en la pistilada. En la flor estaminada el androceo es excéntrico con 8 estambres exertos y el gineceo está reducido a un pistilodio. La flor pistilada posee el gineceo excéntrico, 3 (2)-carpelar, el ovario es súpero, el estilo es ginobásico y el estigma es trífido, los estambres son breves, con las anteras indehiscentes. Estructura del nectario Epidermis: El análisis realizado con MEB permite observar que las células epidérmicas son de contorno cuadrangular a subrectangular; sólo se observan suaves estriaciones a 3000 aumentos. Con MO en corte transversal se observa una cutícula fina, la epidermis es uniestratificada, las células epidérmicas son subcuadrangulares a rectangulares, con la pared externa algo convexa, la vacuola desplaza el citoplasma y el núcleo hacia la periferia de la célula. Entre las células epidérmicas especializadas los estomas son los más importantes, se trata de estomas modificados a través de cuales se exuda el néctar. Los estomas son del tipo anomocítico y se ubican en el borde superior externo del disco. En vista superficial las células oclusivas son arriñonadas y delimitan un poro u ostíolo que siempre se observa abierto, la cutícula es lisa. Se hallan ubicados al mismo nivel o algo por encima de las células epidérmicas, la cámara subestomática es pequeña. En corte transversal se observan engrosamientos en la pared anticlinal externa e interna, en esta última son más notables; en el citoplasma sólo se visualiza el núcleo. También se observan dispersas en la epidermis idioblastos con taninos, son células de mayor tamaño. Parénquima: Bajo la epidermis se halla el tejido secretor que consta de 8-24 capas de células. Las mismas son de contorno poligonal, paredes delgadas, núcleo grande y el citoplasma es denso. Los espacios intecelulares son pequeños. El parénquima subyacente no secretor se caracteriza por las células de mayor tamaño, vacuolizadas, con el núcleo en posición parietal. Dispersos en el parénquima se observan idioblastos taníferos, éstos se hallan aislados o en grupos de 2 ó 3 células en el parénquima secretor y son más abundantes en el parénquima no secretor. Vascularización: El nectario está inervado por trazas de floema que sólo encontramos en el parénquima subyacente al parénquima secretor. El análisis de la vascularización en los cortes seriados permitió observar que las trazas de floema derivan de la estela, no están relacionadas con un verticilo particular. En el corte transversal se observan los miembros de tubos cribosos, que miden entre 34-53 µm de longitud. Las trazas están orientadas tanto en forma longitudinal como transversal pero es dominante la primera orientación. Características de los estomas del nectario en las flores estaminadas y pistiladas de C. grandiflorum y A. edulis: Los valores de los parámetros analizados se presentan en la Tabla 1. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2000 Tabla 1. Características de los estomas del nectario de flores estaminadas y pistiladas de C. grandiflorum y A. edulis. Los valores indican las medias ± desviación estándar. Especie C. grandiflorum A. edulis Carácter Flor estaminada Flor pistilada Análisis estadístico Anchura (µm) 13.81 ±2.11 15.40 ±2.72 t 3.08 p 0.0029 Longitud (µm) 23.57 ±3.48 24.32 ±1.81 t 1.28 p 0.20 Nº de estomas / nectario 98.85 ±9.78 89-113 169 ±22.92 131-191 t 7.45 p 0.0001 Anchura (µm) 18.88 ±1.88 14.02 ±2.22 t 11.15 p 0.000 Longitud (µm ) 18.72 ±2.02 16.90 ±2.10 t 4.17 p 0.0001 Nº de estomas/ nectario 70.57 ±5.41 64-79 66 ±11.63 52-85 t 0.94 p 0.37 El análisis estadístico de los parámetros analizados puso en evidencia que la diferencia en anchura de los estomas entre las flores estaminadas y las pistiladas de C. grandiflorum es significativa, como así también la diferencia en la cantidad de estomas entre el nectario de ambos tipos de flores. Mientras que para A. edulis son significativas las diferencias observadas entre las flores estaminadas y las pistiladas en el ancho y largo de los estomas, no así en el número de estomas de los nectarios entre ambos tipos de flores. DISCUSIÓN El nectario floral en Allophylus edulis de acuerdo con la clasificación de Fahn (1985) corresponde al tipo: 2b. nectario talámico anular. Es un disco extraestaminal, generalmente lobulado, el número de lóbulos coincide con el de los pétalos, pero es algo irregular. Considerando la anatomía y modo de secreción del néctar corresponde a nectarios que exudan néctar a través de los estomas. Por presentar un tejido nectarífero diferenciado es un nectario estructurado (Zimmermann, 1932), este carácter lo diferencia de C. grandiflorum que posee un nectario no estructurado. Según Frey-Wyssling (1955) se trataría de un nectario evolucionado que posee su propio tejido vascular, y al igual que lo observado en C. grandiflorum (Drganc & Ferrucci, 1998) los miembros de tubo criboso son relativamente cortos y bastante angostos. De acuerdo con la clasificación propuesta por Smets (1986) para nectarios florales, ambas especies presentan nectarios persistentes, carácter considerado como apomórfico en Magnoliatae. Entre las características histológicas que permiten diferenciar los nectarios en ambas especies se pueden citar la presencia de idioblastos taníferos en A. edulis , los que están ausentes en C. grandiflorum y por otra parte la ausencia de drusas en A. edulis, idioblastos comunes en C. grandiflorum. BIBLIOGRAFÍA Drganc, M. S. & M. S. Ferrucci. 1998. Estudios preliminares sobre estructura del nectario floral de Cardiospermum grandiflorum (Sapindaceae). Resúmenes de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 1998 – Universidad Nacional del Nordeste 3: 6-89-6-91. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2000 Fahn, A. 1985. Anatomía vegetal. Ed. Pirámide, S. A. Madrid. Frey-Wyssling, A. 1955. The phloem supply to the nectaries. Acta Bot. Neerl. 4(3): 358-369. González, A. M. & C. L. Cristóbal. 1997. Anatomía y ontogenia de semillas de Helicteres Lhotzkyana (Sterculiaceae). Bonplandia 9(3-4): 287-294. Johansen, D. A. 1940. Plant Microtechnique. McGraw-Hill Book Co. New York. Luque, R., H.C. Sousa & J. E. Kraus. 1996. Métodos de coloração de Roeser (1972) – modificado- E Kropp (1972), visando a substituição do Azul de Astra por Azul de Alcião 8GS ou 8GX. Acta bot bras. 10(2): 199212. Radlkofer, L. 1931-34. Sapindaceae, in Engler, Pflanzenr. 4(165): 1-1539. Smets, E. 1986. Localization and systematic importance of the floral nectaries in the Magnoliatae (Dicotyledons). Bull. Jard. Bot. Nat. Belg. 56: 51-76. Zimmermann, J. G: 1932. Über die extrafloralen Nektarien der Angiospermen. Beih. Bot. Centralbl. 49: 99196. Dato tomado de Fahn (1985). Nota: Las autoras agradecen a la Dra. A. M. González por el asesoramiento en las técnicas histológicas y a la Ing. Agr. S. Mazza por la asistencia en el análisis estadístico.