UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTÍN SELAB 2015 TOXICOLOGÍA ANALÍTICA Dr. Wilfredo Hernán Revilla Cahuana Perito Químico farmacéutico Forense Representante Regional de TIAFT en Perú Representante en Perú de la Asociación Latinoamericana de Ciencias Forenses Miembro de la Academia Internacional de Ciencias Forenses y Criminalística Vicepresidente del Instituto Peruano de Ciencias Forenses CRIMINALÍSTICA “La profesión y disciplina científica dirigida al reconocimiento, individualización y evaluación de la evidencia física mediante la aplicación de las ciencias naturales en cuestiones legales.” EVIDENCIAS ACUSACIÓN LUGAR DELITO AUTOR VÍCTIMA •ARMA DE FUEGO •DCVCS: MUERTES VIOLENTAS SUSTANCIAS TOXICAS •DCLS: •HOMICIDIO •SUICIDIO SUICIDIO ABORTO •VIOLACION SEXUAL Y SUBSECUENTE MUERTE •NO • VOLUNTARIO • ACCIDENTAL • CRIMINAL •DCP: HURTO ROBO •TID: NARCOTRAFICO IQF •DCMA: AIRE, SUELO, AGUA •DCFP: ESTAFAS OBJETIVOS • Diagnóstico de la presencia de una sustancia tóxica en el marco de un proceso judicial. • Diagnóstico clínico con el fin de brindar tratamientos terapéuticos de rehabilitación METODOLOGÍA TIPO DE LAB. DOTACION ÁMBITO ESQUEMA POLARIZADO NATURALEZA DE LA INVESTIGACIÓN. MATERIAL DISPONIBLE INVESTIGADOR MUESTRA REMITIDA PROTOCOLOS DISEÑADOS ÁMBITO FORENSE RAPIDEZ. DESARROLLO DE TÉCNICAS CUALITATIVAS CUANTITATIVAS CANTIDAD SUFICIENTE TOMA DE MUESTRA PRESENCIA DE ADITIVOS REQUISITOS DE LA MUESTRA ALMACENAMIENTO TRANSPORTE TOXICOCINÉTICA SELECCIÓN DE LA MUESTRA INTOXICACIÓN ES AGUDA O CRÓNICA TIPO DE TÓXICO SOSPECHADO CINÉTICA DEL TÓXICO OBTENCIÓN DE LA MUESTRA N MUERTE POR ENFERMEDAD O AGENTES QUÍMICOS. E C SIGNOS DE INTOXICACIÓN (+) (-) R O OBTENER LA MUESTRA P S I A ORIENTA LA INVESTIGACIÓN TOXICOLÓGICA HALLAZGOS EN LA NECROPSIA CORRELACIONADOS CON AQT En personas: 1. El perito es responsable de la rotulación, conservación y almacenamiento 2. La toma de la muestra debe ser supervisada 3. análisis de drogas de abuso: orina 4. Si se sospecha de adulteración: Pruebas 5. Almacenar muestras refrigeradas 6. mantener una completa seguridad y confidencialidad CONSERVACION DE LA MUESTRA FRASCOS DE BOCA ANCHA NO PRESERVANTES VÍSCERAS MUESTRAS SEPARADAS Conservación de muestras Conservación de muestras SELLADO HERMÉTICAMENTE R O NOMBRE DEL IMPLICADO (VÍCTIMA / SOSPECHOSO. T U TIPO DE MUESTRA L A FECHA Y HORA DEL INCIDENTE D O FECHA, HORA, LUGAR DE NECROPSIA/TOMA DE M. PAQUETE LACRADO Y EXTERNAMENTE: PROCEDENCIA Y N° DE DOCUMENTO DE REFERENCIA Rotulación de muestras Rotulación de muestras REMISIÓN Y TRANSPORTE DE MUESTRAS Entidad que solicita el peritaje Nombre y apellidos del implicado, edad y peso Fecha, hora de la comisión del hecho y de la toma o recojo de muestras. Tipos de muestras que se colectan o remiten Antecedentes del caso (motivo de la investigación) Especificar el tipo de análisis REMISIÓN Y TRANSPORTE DE MUESTRAS Adjuntar copia simple del protocolo de necropsia en caso de cadáveres. Cuando se trata de personas enviar el resumen de su historia clínica. En casos de sospecha de consumo de drogas: Sustancias consumidas en las últimas horas o días, tiempo aproximado del último consumo, patrón de consumo, Temperatura y pH de la muestra (orina) en el momento de su colección. TIPOS DE MUESTRAS PARA ANÁLISIS QUÍMICO TOXICOLÓGICO Muestra: Biológica • • • • • • Sangre Orina Humor vítreo Vómitos Contenido gástrico Vísceras • • • • Cabellos Alimentos Vísceras de animales Otros fluidos biológicos Muestra: No Biológica • • • • Sustancias en polvo Sustancias líquidas Sustancias sólidas Productos vegetales • Comprimidos, cápsulas (no medicamentos) • Medicamentos • Tejidos, objetos, utensilios, etc. MUESTRAS PARA ANALISIS QUIMICO TOXICOLOGICO drogas Et-OH plaguicidas fármacos X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X sangre orina contenido gástrico cerebro hígado y bilis riñon pulmón pelo evidencia no biológica X X X X X X metales gases X Esquema de Análisis Toxicológicos * * * * • Detección de xenobióticos es difícil se necesitan reactivos y equipamientos caros biotransformación parcial o total buena preparación por partes de los toxicólogos desarrollo de técnicas de laboratorio sensibles y específicas * contar con los patrones de referencia * Debido a la variedad es difícil tener esquema único * se determinan en muestras biológicas y no biológicas y de manera directa e indirecta 1- Análisis Directo en Fluidos Biológicos: se lleva a cabo cuando los antecedentes del caso apuntan hacia la misma o si se quieren hacer determinaciones cuantitativas. 2- Análisis Indirecto en Fluidos Biológicos: Esta modalidad implica la aplicación de un " Screening ", hasta lograr la identificación, pudiendo posteriormente aplicar una técnica directa para aumentar la eficiencia de los análisis. El Screeening puede variar algo dependiendo de la muestra biológica Pasos Fundamentales 1- Preparación de la Muestra: homogeneización de las muestras, ajustes de pH, procedimientos de hidrólisis, precipitación, centrifugación 2- Aislamiento del analito: El método dependerá de la naturaleza del tóxico que se quiere buscar. con solventes orgánicos, permite el ahorro de solventes y de tiempo, obteniéndose extractos limpios y mayor recobrado de los analitos. 3- Concentración del extracto: El objetivo de este paso es colocar el analito en el menor volumen posible para de esta manera aumentar la sensibilidad de los análisis. 4- Identificación del Analito: existen diferentes niveles de complejidad para la detección de las mismas. Así tenemos: • Nivel primario: • Reacciones Cromáticas • cambios de color, precipitación • Deben ser inmediatas, • solo es de orientación no son de confirmación. Nivel secundario: • Cromatografía en Capa delgada • Espectrofotometría UV. Nivel terciario / confirmatorias: • cromatografía de gases y la Líquida de alta resolución ya sea para Screening como para la determinación directa, del mismo modo se puede utilizar acoplando la Espectrofotometría de masas. Diagrama Esquemático de una Cromatografía de Gas 5- Cuantificación del Analito: • Una vez identificado el analito la cuantificación del mismo se puede realizar por una técnica directa, bien ajustada y utilizando patrones de referencia puros para análisis. • Esta técnica directa generalmente es una técnica cromatográfica gas- liquida o líquidalíquida y la Espectrometría acoplada a estas dos anteriores. Al concluir el caso se elaborará un Informe de los resultados dirigido a quien lo solicitó, el cual debe reflejar no solo los resultados de los análisis sino también el método empleado. Procedimientos Operativos Normalizados • • • • Técnicas Registros Archivo de efectos De pases por tarea específica intralaboratorio y extralaboratorio. • Etc. Ingreso de Material en Mesa de Partes Asignación de Perito Resguardo de muestra, Cadena de custodia Informe del Perito Reserva de muestra media / Archivo Inicio de pericia Técnicas y procesamiento GRACIAS POR SU ATENCION email: wilrevilla@hotmail.com