CAPÍTULO 6 RESULTADOS 6.1 Caracterización del suelo En el siguiente cuadro se presenta la caracterización del suelo, mostrando un suelo pobre en nutrientes con textura franco arenosa, un pH ligeramente ácido y medianamente rico en materia orgánica. Tabla 6.1 Resultados de la caracterización fisicoquímica del suelo Propiedades fisicoquímicas Características Textura Arena Francosa Resultado Arena 71.28% Limo 20% Arcilla 8.72% pH 6.31 Ligeramente ácido Materia Orgánica 6.64% Medianamente rico Nitrógeno total 10.7 ppm Pobre 0.00107% < 0.032% Pobre > 0.222% Rico Fósforo asimilable 0.212 ppm Bajo < 5.5 ppm Bajo > 11 ppm Alto Humedad 5.01% 37 6.2 Concentración mínima inhibitoria En este experimento se hicieron soluciones de fenol al 10, 20, 30, 40 y 50% en tubos Falcon de 15 ml y se aforaron con medio caldo nutritivo hasta 10 ml. Ya que se tenían estas soluciones se procedió a poner en cada tubo 250 µl de cultivo de cada cepa. Después de 24 hrs de incubación se procedió a sembrar en medio sólido 2XYT para comprobar su crecimiento. Así solamente pudimos observar crecimiento en la solución de fenol al 10% (por lo que se tomó como base para proponer la degradación de la solución de fenol al 2%) y es por eso que trabajamos con esa concentración en esta tesis. 6.3 Cuenta viable en placa Uno de los objetivos específicos de esta tesis era obtener resultados de viabilidad de las células las bacterias encapsuladas a 4° C, se tomaron muestras cada semana y a los 30 días las células murieron. Por otra parte al final del experimento de degradación de fenol se tomó una muestra de suelo para determinar la viabilidad de las células a las 96 horas a temperatura ambiente y se vieron resultados satisfactorios para: • K. pn. pneumoniae encapsulado se encontró una viabilidad de 6X108 UFC • K. pn. pneumoniae no encapsulado se encontró una viabilidad de 1X108 UFC • Cultivo mixto encapsulado se encontró una viabilidad de 6X108 UFC • Cultivo mixto no encapsulado se encontró una viabilidad de 6X108 UFC 38 6.4 Generación de inóculos líquidos y sólidos Para generar los inóculos líquidos se obtuvieron los valores del número de UFC/ml (tomando en cuenta que a una absorbancia de 2.0 hay 109 células/ml) y la absorbancia a una longitud de onda 600 nm en el espectrofotómetro. Como siguiente paso utilizando la fórmula C1 V1 =C2 V2 se obtienen los valores de mililitros que se van a utilizar para ajustar la concentración de células a del valor más grande obtenido en un volumen final de 40 ml. Posteriormente para la producción de los inóculos sólidos (generación de perlas de carraginato de calcio), en la solución de carragenina se agregan 20 ml de la suspensión de células (20 ml de la suspensión de K. pneumoniae pneumoniae, o en el caso del inoculante mixto 10 ml de la suspensión K. pneumoniae pneumoniae + 5 ml de la suspensión de P. aeruginosa + 5 ml de la suspensión de S. paucimobilis). Así se obtuvieron 76.09 g de perlas de K. pneumoniae pneumoniae y 89.59 g de perlas del cultivo mixto. Ya que se tienen estos valores se hacen los cálculos necesarios para poner los mililitros necesarios para el inóculo líquido ya que se agrega 50 g de perlas (de cada tipo) para comenzar a montar el sistema de degradación. 6.5 Determinación de fenol en la solución de suelo En esta parte se obtienen los valores de absorbancia con el espectrofotómetro UV-Vis a 269 nm después de que las muestras son procesadas. Así, después se obtuvieron los valores de la concentración con la Ley de Lambert-Beer, A=εbc (para el fenol el coeficiente de extinción molar ε es de 1579 cm-1 M-1 con una longitud de onda λ=269 nm), siendo A la absorbancia a la longitud de onda establecida, ε el coeficiente 39 de extinción molar del compuesto (en este caso fenol), b es el grosor de la celda de cuarzo (1 cm), y c es la concentración molar del compuesto en solución. Y se obtuvieron los siguientes resultados. Concentración (ppm) Control del microsistema 1400 1200 1000 800 600 400 200 0 Control 0 20 40 60 80 100 Tiempo (hrs) Figura 6.1 Degradación de fenol con respecto al control Concentración (ppm) Degradación de fenol 2400 2000 Cultivo mixto no encapsulado Cultivo mixto encapsulado 1600 1200 800 400 0 0 20 40 60 80 100 Tiempo (hrs) Figura 6.2 Comparación de la degradación de fenol con respecto al cultivo mixto encapsulado y el cultivo mixto no encapsulado 40 Degradación de fenol 1800 Concentración (ppm) 1600 1400 Cultivo de K. pn. pneumoniae encapsulado 1200 1000 Cultivo de K. pn. pneumoniae sin encapsular 800 600 400 200 0 0 20 40 60 80 100 Tiempo (hrs) Figura 6.3 Comparación de la degradación de fenol con respecto al cultivo de K. pn. pneumoniae encapsulado y el cultivo de K. pn. pneumoniae no encapsulado Degradación de fenol Concentración (ppm) 2400 2100 1800 Cultivo de K. pn. pneumoniae encapsulado Cultivo mixto encapsulado 1500 1200 900 600 300 0 0 20 40 60 80 100 Tiempo (hrs) Figura 6.4 Comparación de la degradación de fenol con respecto al cultivo mixto encapsulado y el cultivo de K. pn. pneumoniae encapsulado 41 Concentración en ppm Degradación de fenol 2400 2000 Cultivo mixto no encapsulado 1600 1200 Cultivo de K. pn. pneumoniae no encapsulado 800 400 0 0 20 40 60 80 100 Tiempo (hrs) Figura 6.5 Comparación de la degradación de fenol con respecto al cultivo mixto no encapsulado y el cultivo de K. pn. pneumoniae no encapsulado Degradación de fenol Cultivo mixto no encapsulado 2400 Concentración (ppm) 2100 Cultivo mixto encapsulado 1800 1500 Cultivo de K. pn. pneumoniae encapsulado 1200 900 600 Cultivo de K. pn. pneumoniae no encapsulado 300 0 0 20 40 60 80 100 Control Tiempo (hrs) Figura 6.6 Comparación de la degradación de fenol entre los cuatro tipos de diferentes de inóculos 42