CLORUROS BIOLABO www.biolabo.fr Método colorimétrico FABRICANTE: BIOLABO SAS, Les Hautes Rives 02160, Maizy, France Reactivo para la determinación cuantitativa de los iones cloruros en plasma, suero, líquido céfalo-raquídeo humano (LCR), o en orina. REF 80005 R1 2 x 125 mL R2 1 x 5 mL CODIGO CNQ : E3 | SOPORTE TECNICO Y PEDIDOS Tel: (33) 03 23 25 15 50 IVD USO IN VITRO Fax: (33) 03 23 256 256 SIGNIFICACION CLINICA (1) PREPARACION DE LOS REACTIVOS Los iones Cl- son los más representados en el medio extracelular. Al igual que el sodio, los iones Cl- están implicados en el mantenimiento de la distribución del agua, la presión osmótica y el equilibrio ácidobase de los líquidos extracelulares. Una disminución de la concentración plasmática en Cl- acompañada de una hiponatremia se observa en los casos de nefritis con pérdida de sales (Ej. píelonefritis crónica). Las secreciones gástricas persistentes y los vómitos prolongados, sea cual sea la causa, conducen a una perdida significativa en Cl- y finalmente a una hipocloremia y una depleción del Cl- total del organismo. Concentraciones plasmáticas elevadas en Cl- aparecen en caso de deshidratación, acidosis renal tubular proximal (ART), enfermedad renal aguda, acidosis metabólica con diarrea prolongada y pérdida de bicarbonato sódico… Los reactivos están listos para el uso. ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Almacenar a 18-25°C, en el vial de origen bien cerrado y protegido de la luz. • Standard (vial R2): transvasar la cantidad necesaria, tapar bien de nuevo el vial y almacenar a 18-25°C. • Utilizados y almacenados en las condiciones adecuadas, los reactivos (viales R1 y R2) son estables, en ausencia de contaminación, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta de la caja. No utilizar el reactivo (vial R1) si hay turbidez o si su absorbencia es > 0.100 a 500 nm. No utilizar el reactivo de trabajo después de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta de la caja. PRINCIPIO (1) (4) (5) Hg(SCN)2 + 2Cl- HgCl2 + 2SCN- 3(SCN)- + Fe3+ Fe(SCN)3 Los iones Cl- reaccionan con el tiocianato mercúrico no disociado para formar cloruro mercúrico no disociado e iones tíocianatos libres. Los iones tíocianatos reaccionan con el hierro férrico para formar un compuesto coloreado en rojo, el tíocianato férrico en el cual la absorbencia es proporcional a la cantidad de Cl- en la muestra y es medida a 500 nm (450-500). REACTIVOS Vial R1 REACTIVO TIOCIANATO Nitrato férrico Cloruro mercúrico Tíocianato mercúrico Acido nítrico Tensio-activo 22,2 0,55 1,33 30 1 mmol/L mmol/L mmol/L mmol/L mL/L R33 : Peligro de efectos acumulativos Vial R2 STANDARD Cloruros 100 mmol/L Suero o plasma heparinizado, no hemolizados. Orina o LCR. Los iones cloruros son estables en la muestra: 1 semana a temperatura ambiente o a 2-8°C. INTERFERENCIAS (3) Bilirrubina: No hay interferencia significativa hasta 100 µmol/L (6.0 mg/dL). Más allá, ligera sobrestimación de los resultados no excediéndose de 2 mmol/L entre 100 y 375 µmol/L de bilirrubina. Turbidez: Si hay opalescencia, sobrestimación de aproximadamente 4 a 8 mmol/L. Si hay lactescencia, hay resultados muy sobrestimados para que sean apropiados. Para reducir la interferencia, hacer una muestra blanca o trabajar en dicromatismo (§ modo de empleo). Hemoglobina: Sobrestimación de 5 mmol/L a partir de 205 µmol/L (330 mg/dL) de hemoglobina en la muestra. Acido ascórbico: No hay interferencia de la vitamina C hasta 10 mg/dL en la muestra. Young D.S. ha publicado una lista de las sustancias que interfieren con la prueba. REACTIVOS Y MATERIAL COMPLEMENTARIO PRECAUCIONES Los reactivos BIOLABO están destinados únicamente a profesionales, para uso in vitro. • Verificar la integridad de los reactivos antes de su utilización. • Utilizar equipamientos de protección (bata, guantes, gafas). • No pipetear con la boca. • En caso de contacto con la piel o los ojos, enjuagar abundantemente y consultar al médico. • La ficha de datos de seguridad puede obtenerse por petición. • Eliminación de los deshechos: respetar la legislación en vigor. • Por medida de seguridad, tratar toda muestra como potencialmente infecciosa. Respetar la legislación en vigor. Made in France TOMA Y PREPARACION DE LA MUESTRA (2) (6) 1. Equipamiento de base del laboratorio de análisis médico. 2. Sueros de controles normales y patológicos. CALIBRACION (7) • Standard de la caja (vial R2) o BIOLABO Multicalibrator REF 95015 trazable sobre srm909b. • O cualquier otro calibrador trazable sobre un método o un material de referencia. La frecuencia de calibración depende de las prestaciones del analizador y de las condiciones de conservación del reactivo. Se recomienda calibrar en los siguientes casos: 1. Cambio de lote del reactivo. 2. Después de operación de mantenimiento sobre el analizador. 3. Los valores de control obtenidos salen de los límites de confianza, incluso después de la utilización de un segundo vial de suero de control recién reconstituido. Ultima Versión: www.biolabo.fr Versión: 26/07/2011 CONTROL DE CALIDAD CODIGO CNQ: E3 LIMITE DE LINEALIDAD • BIOLABO EXATROL-N Tasa I REF 95010. • BIOLABO EXATROL-P Tasa II REF 95011. • Cualquier otro suero de control titulado para este método. • Programa externo de control de calidad. Es recomendado controlar en los siguientes casos: • Al menos un control por rutina. • Al menos un control cada 24 horas. • Cambio de vial del reactivo. • Después de operación de mantenimiento sobre el analizador. Cuando un valor de control se encuentra fuera de los límites de confianza recomendados, aplicar las siguientes acciones correctivas: 1. Repetir el test utilizando el mismo control. 2. Si el valor obtenido queda fuera de los límites, preparar un suero de control recién reconstituido y repetir el test. 3. Si el valor obtenido queda fuera de los límites, utilizar otro calibrador o un calibrador recién reconstituido y repetir el test. 4. Si el valor obtenido queda fuera de los límites, calibrar nuevamente utilizando otro vial de reactivo y repetir el test. 5. Si el valor obtenido queda fuera de los límites, contactar el servicio técnico BIOLABO o el distribuidor local. La reacción es lineal entre 70 y 140 mmol/L. La diferencia máxima es de + 3% en relación al valor teórico. Para valores inferiores a 70 mEq/L, establecer una curva de calibración (a partir de soluciones a 20, 40, 60 mEq/L) o aumentar el volumen de la muestra. Más allá de 140 mmol/L, diluir la muestra con agua desmineralizada exenta de iones cloruros o disminuir el volumen de la muestra y hacer de nuevo la prueba teniendo en cuenta la dilución en el cálculo del resultado. El límite de linealidad depende de la relación de dilución muestra/reactivo. MODO DE EMPLEO (TECNICA MANUAL) Poner el reactivo y las muestras a temperatura ambiente. Medir en tubos de ensayo bien identificados: Blanco Standard Prueba Reactivo 1 mL 1 mL 1 mL Agua desmineralizada 10 µL Standard INTERVALOS DE REFERENCIA (2) Muestra En el suero o en el plasma Cloruros mEq/L [mmol/L] En el cordón 96-104 [96-104] Prematuro 95-110 [95-110] de 0 a 30 días 98-113 [98-113] 98-107(108) [98-107(108)] > a 90 años 98-111 [98-111] Notas: Procedimientos específicos están disponibles para los analizadores automáticos. Contactar el servicio técnico BIOLABO. Una muestra blanca puede entonces ser realizada reemplazando el reactivo tíocianato por una solución de NaCl 9 g/L. La muestra blanca medida a 500 nm contra NaCl 9 g/L es deducida de la medida de absorbencia sin muestra blanca. Una lectura en dicromatismo entre 500 y 600 nm permite reducir al 50% la interferencia de la turbidez de la muestra, no obstante una perdida de sensibilidad de aproximadamente 10%. La sensibilidad es mejor a 450-460 nm, pero la reacción está menos sujeta a las interferencias entre 480 y 500 nm. En orinas de 24 horas mEq/L [mmol/L] Recién nacido 2-10 [2-10] Niño < 6 años 15-40 [15-40] 6-10 años, Niño 36-110 [36-110] 6-10 años, Niña 18-74 [18-74] [64-176] 10 µL Mezclar bien. Incubar 5 minutos a temperatura ambiente. Inscribir las absorbencias a 500 nm (450-500) contra el blanco reactivo. La reacción es estable 30 minutos protegida de la luz. hasta 90 años Cloruros 10 µL CALCULO El resultado está determinado según la fórmula: 10-14 años, Niño 64-176 10-14 años, Niña 36-173 [36-173] Adulto 110-250 [110-250] > 60 años 95-195 [95-195] Resultado = Abs (Prueba) Abs (Standard) x concentración del Standard BIBLIOGRAFIA En el LCR Cloruros mEq/L [mmol/L] Niño 110-130 [110-130] Adulto 118-132 [118-132] (1) (2) (3) Se recomienda a cada laboratorio definir sus propios intervalos de referencia para la población estimada. (4) (5) (6) PRESTACIONES (7) Intra-serie Tasa débil N = 20 Tasa elevada Inter-serie N = 20 Tasa débil Tasa elevada Media mmol/L 85,1 136,3 Media mmol/L 84,6 133,4 S.D. mmol/L 0,51 0,94 S.D. mmol/L 0,67 1,95 C.V. % 0,60 0,69 C.V. % 0,79 1,5 Límite de detección: rd TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3 Ed. C.A. Burtis, E.R. Ashwood, W.B. Saunders (1999) p. 1063—1064, p.1104. Clinical Guide to Laboratory Test, 4th Ed., N.W. TIETZ (2006) p. 234-239. YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995) p. 3-137 à 3-141 ZALL D.M., FISHER D., GARNER D.O., ANAL. CHEM. 28, 1665 (1956). FLORENCE T.M. AND Y.J. FARRAR : SPECTROPHOTOMETRIC DETERMINATION OF CHLORIDE AT THE PARTSPER-BILLION LEVEL BY THE MERCURY (II) THIOCYANATE METHOD, ANAL. CHIM. ACTA., 54 : 373-377 (1971). HENRY R. J.(ED), CLINICAL CHEMISTRY: Principles and technics(2nd éd.), Harper and Row, p.718-719 (1974). SRM: Standard Reference Material ® aproximadamente 1,4 mmol/L Sensibilidad para 100 mmol/L: aproximadamente 0,350 Abs a 500 nm. Estudio de comparación con un reactivo comercial: y = 1,0391 x – 2,9153 r = 0.9944 IVD Fabricante REF Fecha de caducidad Uso in vitro Temperatura de conservación Made in France → LOT Referencia del producto Consultar instrucciones Numero de lote Protegido de la luz Suficiente para Diluir con Ultima Versión: www.biolabo.fr Versión: 26/07/2011