EFICACIA DE IVERMECTINA FRENTE A Oestrus ovis EN OVEJAS

EFICACIA DE IVERMECTINA FRENTE A Oestrus ovis EN OVEJAS MEDIANTE
ELISA-INDIRECTO
RAMÍREZ, M., SUÁREZ, J.L., GARCÍA-ALBA, C., DÍAZ, P., SCALA, A.1, ARIAS, M.,
MORRONDO, M.P., DÍEZ-BAÑOS, P., PAZ-SILVA, A., SÁNCHEZ-ANDRADE, R..
Parasitología y Enfermedades Parasitarias, Dpto. Patología Animal. Facultad de
Veterinaria, Universidad de Santiago de Compostela, 27002-Lugo (SPAIN). ). 1Sezione di
Parassitologia e Malatie Parassitarie, Dipartimento di Biologia Animale, Facoltà di
Medicina Veterinaria, Università degli Studi di Sassari (ITALY).
INTRODUCCIÓN
La oestrosis (Oestrus ovis) es una miasis obligatoria que afecta principalmente a ovejas y
cabras mantenidas en pastoreo. Está comprobado que la infestación de los ovinos por O.
ovis disminuye la rentabilidad de las explotaciones, al reducirse la ingesta de alimentos
(Kaufman, 1996; Urquhart et al., 2001), ocasionando hasta un 22% de menor ganancia de
peso, un 16% de disminución en la producción de lana y hasta el 10% de menor producción
láctea. El principal inconveniente para el control de esta parasitosis radica en la dificultad
para realizar su diagnóstico,
El principal mecanismo para el control de la oestrosis ovina consiste en la administración
de tratamientos frente al parásito, pero de nuevo surge la dificultad de evaluar la eficacia de
dichos tratamientos. Por ello, resulta evidente disponer de un método de diagnóstico
específico de la oestrosis ovina, rápido, automatizable, capaz tanto de detectar tanto las
infestaciones que cursan sin sintomatología clínica como de evaluar la eficacia
antiparasitaria. El conocimiento de que el estrecho contacto de las larvas con la mucosa
nasal estimula la respuesta inmunitaria por parte del hospedador ha constituido la base para
el diagnóstico de la oestrosis mediante técnicas inmunoenzimáticas (Scala et al., 2002).
MATERIAL Y MÉTODOS
Con objeto de valorar la eficacia de un tratamiento con ivermectina sobre O. ovis en el mes
de septiembre, se tomaron muestras de sangre de un rebaño de 98 ovejas de raza guirra de
Pola de Valbona (Valencia), en el mes de septiembre (pre-tratamiento) y enero (posttratamiento). La elección de estos animales y de la época de la toma de muestras, se basó en
las condiciones climáticas de la zona, que favorecen el desarrollo de la fase activa del ciclo
del parásito hasta noviembre-diciembre.
Las muestras de sangre se dejaron desuerar a temperatura ambiente, y los sueros se
conservaron a -30ºC hasta su utilización. Mediante ELISA-indirecto y antígeno de
excreción/secreción de larvas 2 de O. ovis, se establecieron los valores de IgG, IgM e IgA
en cada animal. Para ello, se siguió el protocolo descrito por Suárez et al (2005):
Protocolo del ELISA empleado
Inmunoglobulina
IgG
IgM
IgA
[Ag]
Sueros
ml-1
2 µg
ml-1
Inmunoconjugado
Revelado
Anti-IgG ovino
3 µg
1:50 en PBS
+ Tween +
leche
descremada
1:1000 en PBS + Tween + leche
Anti-IgM ovino
1:1000 en PBS + Tween + leche
10 µg
Anti-IgA ovino
ml-1
1:1000 en PBS + Tween + leche
OPD + H2O2 +
tampón citrato
(pH 5)
Para conseguir antígenos de excreción/secreción de larvas 2 de O. ovis (OL2ES), se
recogieron cabezas de ovejas sacrificadas en un matadero local de Sassari (Cerdeña, Italia),
que se abrieron en sentido sagital para recoger las larvas del parásito (Yilma y Dorchies,
1991).
Las larvas identificadas como L-2 se lavaron en tampón fosfato PBS, y a continuación se
incubaron a temperatura ambiente y atmósfera de CO2 al 5% durante 3 días, renovándose el
medio cada 6-8 horas aproximadamente (Sánchez-Andrade et al., 2005). El antígeno así
obtenido se pasó por un filtro de 0’22 µm para eliminar los detritus, y se congeló a -80ºC.
Se calculó la concentración proteica antes de su utilización mediante el kit BCA® (Pierce,
Illinois, USA).
Con los sueros de las ovejas sacrificadas en Sassari se calcularon los valores de
sensibilidad, especificidad, valores predictivos positivo y negativo, y razones de
verosimilitud (likelihood) positiva y negativa, de acuerdo con las fórmulas enunciadas por
Thrusfield (1997).
Para determinar si un suero se consideraba positivo o negativo frente a OL2ES, se
estableció el punto de corte, que se calculó como el valor medio de las absorbancias de un
grupo de cinco corderos que habían permanecido siempre estabulados para evitar toda
posibilidad de infestación por O.ovis más 3 veces la desviación estándar (Scala et al.,
2002), de modo que este valor resultó 0’3634 para la IgM, 0’1123 para la IgA y 0’3415
para la IgG.
La presencia del párasito se determinó mediante el sacrificio de algunos animales en
matadero.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
a) Análisis estadístico
En el siguiente cuadro se recogen los valores de sensibilidad, especificidad, valor predictivo
positivo (VPP) y negativo (VPN) obtenidos con las inmunoglobulinas analizadas.
Parámetros estadísticos obtenidos con el ELISA-indirecto.
IgM
IgG
IgA
% Sensibilidad
96’1
97’4
73’2
% Especificidad 55’8
90’4
49’1
% VPP
86’7
96’8
68’8
% VPN
82’8
92’2
72’2
RVP
2’17
10’14
1’44
RVN
0’07
0’028
0’54
Los mejores resultados se obtuvieron con la estimación de la respuesta IgG, ya que los
valores más elevados de sensibilidad, especificidad, valores predictivos positivo y negativo
se obtuvieron al analizar esta inmunoglobulina. Aunque estos parámetros también fueron
altos para la IgM, el porcentaje de especificidad sólo llegó al 55’8%, lo que quiere decir
que cuando el estudio de la prevalencia de oestrosis se realiza en función de la respuesta
IgM frente a los antígenos OL2ES, el 44’2% de los negativos se considerarían positivos
(falsos positivos).
b) Valoración del tratamiento con ivermectina
El análisis de las muestras antes del tratamiento mostró que el 99% de las ovejas eran
positivas a IgG, el 8’1% a IgM y el 89% a IgA (Fig. 1).
IgA
IgM
IgG
0
20
40
60
80
100
Fig. 1. Respuesta anticuerpo frente a OL2ES en ovejas con oestrosis.
Después de la aplicación de la ivermectina, el porcentaje de animales positivos a IgG se
redujo al 56’1% y al 17’3% en el caso de IgA. No se detectó ningún animal positivo a la
IgM después del tratamiento.
Fig. 2. Respuesta anticuerpo frente a OL2ES en ovejas después
del tratamiento con ivermectina.
IgA
IgM
IgG
0
20
40
60
80
100
Es importante destacar que Suárez et al. (2005) demostraron que la presencia de L-1
estimulaba la respuesta IgM, mientras que cuando estaba activa la fase endógena del ciclo
la respuesta predominante era la IgG; de igual modo, Jacquiet et al. (2005) comprobaron
que esta respuesta estaba relacionada con la presencia de L-2.
Los resultados obtenidos en el presente estudio indican que la determinación de IgM es útil
para valorar la eficacia de ivermectina frente a O. ovis en ganado ovino, lo que sin duda
contribuirá a mejorar las posibilidades del control de esta miasis.
BIBLIOGRAFIA
Jacquiet, P., Trinh Tran, T.N., Nouvel, X., Prevot, F., Grisez, C., Hailu, T.Y., Bergeaud,
J.P., Hoste, H., Dorchies, Ph., Tabouret, G. (2005). Regulation of Oestrus ovis (Diptera:
Oestridae) populations in previously exposed and naive sheep. Veterinary Immunology and
Immunopathology, 105: 95–103.
Kaufmann, J. (1996). Parasitic Infections of Domestic Animals. A diagnostic manual. Ed.
Basel Birkhäuser Verlag (Alemania).
Sánchez-Andrade, R., Suárez, J.L., Pedreira, J., Díaz, P., Arias, M., Paz-Silva, A.,
Panadero, R., Díez-Baños, P., Morrondo, P., Scala, A. (2005). Comparison of Oestrus ovis
metabolic and somatic antigens for the immunodiagnosis of the zoonotic myasis oestrosis
by immunoenzymatic probes. Immunological Investigations, 34: 91–99.
Scala, A., Paz-Silva, A., Suárez, J.L., López, C., Díaz, P., Díez-Baños, P., SánchezAndrade Fernández, R. (2002). Chronobiology of Oestrus ovis (Diptera: Oestridae) in
Sardinia, Italy: guidelines to chemoprophylaxis. Journal of Medical Entomology, 39: 652–
657.
Suárez, J.L., Scala, A., Romero, J.A., Paz-Silva, A., Pedreira, J., Arias, M., Díaz, P.,
Morrondo, P., Díez-Baños, P., Sánchez-Andrade, R. (2005). Analysis of the humoral
immune response to Oestrus ovis in ovine. Veterinary Parasitology, 134: 153–158.
Thrusfield, M. (1997). Veterinary Epidemiology. Iowa State Press.
Urquhart, G.M., Armour, J., Duncan, J.L., Dunn, A.M., Jennings, F.W. Parasitología
Veterinaria (2ª Edición). Ed. Acribia, Zaragoza.
Yilma, J.M., Dorchies, Ph. (1991). Epidemiology of Oestrus ovis in Southwest France.
Veterinary Parasitology, 40: 315-323.