6CFE01-193 2/12 Evaluación del enraizamiento en estaquillado semileñoso de castaño. LÓPEZ VILLAMOR, A.1 y FERNÁNDEZ-LÓPEZ, J.1 1 Centro de Investigación Forestal de Lourizán (Pontevedra). Resumen El programa de mejora que del Centro de Investigación Forestal de Lourizán (CIFL) tiene como uno de sus objetivos la creación de nuevos genotipos mediante polinizaciones controladas entre 16 individuos de una Población Élite, seleccionados por características de vigor, de calidad de madera, de resistencias a las enfermedades de la tinta y el chancro y a la sequia y por su capacidad de enraizamiento. Los individuos obtenidos se evalúan para estos caracteres. Se eligió el estaquillado como método de propagación clonal por ser rápido y económico. Los objetivos de este ensayo fueron evaluar la influencia de la posición de la estaquilla en la planta donante, de los diferentes sustratos y de las distintas concentraciones de AIB en el enraizamiento de estas. Para el estaquillado se usó un sistema de nebulización que mantiene una atmósfera rica en humedad, disminuyendo así la pérdida de agua por transpiración y evitando el estrés hídrico de las estaquillas. En cuanto la posición de la estaquilla, la posición basal es la que produce mayor número de raíces. Con respecto al tipo de sustrato, el 1:1 (Perlita: Turba) da mayor número de raíces. Por último, en cuanto a la concentración de hormona, la de 2g/litro de AIB es la que produce la mayor emisión de raíces. Palabras clave Castanea, topofisis, AIB, sustratos 1. Introducción El programa de Mejora Genética del Castaño para Galicia del CIFL busca aumentar la producción de madera, su calidad y la resistencia a los factores limitantes, mediante cruzamientos controlados entre individuos de una Población Élite para la obtención de nuevos materiales de reproducción (TOVAL G., 2010). La Población Élite está formada por 16 individuos con las mejores características de vigor, calidad de madera, resistencia a sequía y resistencia a Phytophthora cinnamomi Rands y/o Cryphonectria parasitica. Uno de los objetivos es clonar las familias procedentes de las polinizaciones controladas para así poder evaluar el mismo individuo en diferentes ensayos. La propagación vegetativa para la obtención de castaños autorradicados se realiza por acodo, estaquillado y micropropagación. Nos inclinamos por el estaquillado por dos motivos fundamentales: la cantidad de genotipos a clonar, lo cual sería inviable por cualquiera de los otros dos métodos y la eficiencia en términos de rapidez, manejo y costo (HARTMANN H.T., KESTER D. E., 2010). El castaño es generalmente clasificado como una especie difícil de enraizar (URQUIJO P., 1959). Por ese motivo se recurre a material juvenil, procedente tanto de plantas jóvenes como de rebrotes de la base del tronco de individuos adultos. Si la presencia endógena de auxinas es insuficiente para la inducción de raíces, se puede mitigar usando auxinas exógenas. La auxina más usada es el ácido indolbutírico (AIB), que produce mayor número de raíces adventicias, con desarrollo acrobasal y menor presencia de callo que otras auxinas debido al mayor tiempo de permanencia en la estaquilla (STEFANCIC et al, 2005). Las estacas son propensas al estrés hídrico hasta que se forman las raíces, este estrés por 3/12 un lado retrasa y evita la aparición de estas y por otro lado causa la disminución del número de raíces en estacas enraizadas (PURI & THOMPSON 2003). Para evitar esto se usan instalaciones que mantienen una atmósfera rica en humedad, disminuyendo así la pérdida de agua por transpiración y evitando el estrés hídrico de las estaquillas. STEFANCIC et al (2007) confirmaron que el sistema de nebulización es un sistema de alta calidad para la reproducción vegetativa. Este sistema aumenta la humedad ambiental mediante la formación de una niebla de finas gotas de agua, lo que mantiene la humedad entre 90-100%. El enraizamiento por estaquillado semileñoso se ha utilizado en el programa de mejora de castaño del CIFL desde 1992 para la multiplicación de genotipos ((FERNÁNDEZ-LÓPEZ J., PEREIRA S., 1992) y ha sido utilizado desde entonces por dos viveros gallegos para la reproducción de planta comercial. Castanea sativa Mill. es sensible a P. cinnamomi,; por este motivo se procedió en el pasado en Galicia a la introducción y creación de híbridos interespecíficos, que presentan resistencia (FERNÁNDEZ-LÓPEZ, 2011; MIRANDA-FONTAÍÑA M. E., FERNÁNDEZLÓPEZ J., 2007). La influencia del tipo de sustrato en el enraizamiento de las estacas es elevada Considerando que es necesario probar nuevos sustratos se han realizado una serie de experimentos para la puesta a punto de las técnicas de evaluación de progenies, en su aptitud al enraizamiento. 2. Objetivos El objetivo de los ensayos fue determinar la influencia de diferentes concentraciones de AIB, de diferentes sustratos y de la posición de la estaquilla en la rama donante, en el enraizamiento de estacas de distintos híbridos de C. sativa x C. crenata. 3. Materiales y métodos Diseño de los experimentos El enraizado de las estaquillas se llevó a cabo en el invernadero de estaquillado del CIFL. Se usó un sistema de nebulización (fog-air) que aseguró una elevada humedad (90-100%); este sistema está controlado por un programador que causa ráfagas de fina niebla de duración 20 s y de 90s de parada, durante las horas de luz. La nebulización no se llevó a cabo por la noche, por la disminución de la transpiración. El experimento empezó el 9 de Abril y se llevó a cabo la toma de datos el día 15 de Mayo. Las estaquillas se cogieron de brotes del año, de plantas de un año de edad procedentes de semillas de polinizaciones controladas, realizadas el año 2010, cultivadas en los invernaderos del CIFL. Los brotes utilizados para el estaquillado fueron cortados con tijeras de podar, dando lugar a estaquillas con cuatro yemas y con dos hojas en las yemas superiores de cada una. Las estaquillas se plantaron en bandejas con diferentes sustratos. A estas bandejas se les suministró un fungicida (Captan con una concentración 3g/litro) para su desinfección. Antes de la plantación las estaquillas se desinfectaron también mediante la inmersión del tallo en una solución acuosa con Captan (concentración 3 g/litro) manteniéndose 2 minutos aproximadamente. Luego se traspasan a otra solución acuosa con hormona de enraizamiento; la hormona utilizada fue indole-3-butyric acid (AIB) (se usaron tres concentraciones dependiendo 4/12 del caso: 0, 1 y 2g/litro); permanecieron en esta solución 5 minutos. Las estaquillas se plantaron en bandejas se mantienen en condiciones controladas de humedad entorno al 100% suministrada por el sistema fog-air durante el día y de temperatura para que la temperatura no bajara (con calefacción) o subiese (con cooling) de 22 ºC. Experimento1 En este experimento se estudian los efectos de las diferentes concentraciones de AIB y la variación entre clones en la formación de raíces en estaquillas juveniles con hojas. Las concentraciones evaluadas de AIB fueron 3: 0, 1 y 2 g/litro. Se utilizaron cinco clones diferentes (2522, 90025, 16, CA-15, U-7810). Por lo tanto se usaron 75 estaquillas (3 hormonas x 5clones x 5 repeticiones) colocadas en bandejas de alveolos. El diseño utilizado fue de bloques al azar de dos factores. El medio de enraizamiento fue perlita. Experimento2 En este segundo experimento se estudió el efecto de diferentes sustratos y clones sobre el enraizamiento de estaquillas juveniles con hojas. Se utilizaron seis clones (2522, 16, 111, CA-15, U-7810, 90025). Fueron ocho los sustratos de enraizamiento, incluyendo entre ellos perlita y vermiculita puras, distintas mezclas de perlita, corteza de pino compostada, turba, vermiculita y dos mezclas comerciales con perlita. Perlita: corteza de pino compostada 1:1 ((P:C)1:1) Perlita: corteza de pino compostada 2:1 ((P:C)2:1) Perlita: (vermiculita:sustrato(Shamrok) 1:9) 1:1 ((P:(VS))1:1) Perlita: (vermiculita:sustrato(Shamrok) 1:9) 2:1 ((P:(VS))2:1) Vermiculita 100% (V100%) Perlita: turba 1:1 ((P:T)1:1) Perlita: turba 2:1 ((P:T)2:1) Perlita 100% (P100%) Se usaron en total 144 estaquillas (6 clones x 3 repeticiones x 8 sustratos), los sustratos se colocaron en bandejas de alveolos. El diseño del ensayo fue split-plot. La hormona utilizada fue AIB con una concentración de 2g/litro. Experimento3 En este tercer experimento se estudió el efecto de la posición de la estaquilla en el brote anual sobre el enraizamiento de estaquillas juveniles con hojas. Las posiciones identificadas fueron la apical, la media y la basal. La hormona utilizada fue AIB con una concentración de 2g/litro; perlita como sustrato y colocado en bandejas de 40x60cm; el material vegetal utilizado fue tres familias diferentes procedentes de polinizaciones controladas (Parede2 x 2522, Parede1 x 23M09, Parede1 x CA-15) y de las cuales tres plantas por familia. Se usaron en total 54 estaquillas (3 familias x 3 plantas x 3 posiciones x 2 repeticiones). Análisis de los datos Una vez levantadas las estaquillas se procedió al escaneado de las raíces mediante un escáner de gráficos A3 (EPSON EXPRESSION 10000XL). Las imágenes obtenidas fueron analizadas mediante el paquete informático para Windows WinRHIZOTM 2005a,b (Régent Instuments Inc). Las variables registradas fueron sustrato, supervivencia, presencia de callo, presencia de brote, brote vivo, presencia de raíz, longitud de raíz total, área de raíz, promedio del diámetro de la raíz y volumen de la raíz. 5/12 Análisis estadístico Las variables relacionadas con el enraizado se analizaron con el procedimiento GLM del paquete estadístico SAS (versión SAS 9.2). La comparación de medias entre diferentes niveles de cada factor significativo en los ANOVAS fue hecha por el test Student-Newman-Keuls (SNK) para un nivel de significancia de P≤0,05. Para el experimento 2 (split-plot) se utilizó el test H y para la prueba de hipótesis de cuadrados medios tipo IV de las variables Sustrato y Réplica del se usó Réplica x Sustrato como término de error. 4. Resultados y Discusión Experimento 1 La presencia de raíz total del experimento fue baja en torno a un 24% Este bajo enraizamiento pudo ser debido al tipo de sustrato y al tipo de bandeja usada. En cuanto al porcentaje de supervivencia fue elevado, en torno al 98%, y el de formación de callo a un 80%. El valor de F del ANOVA indica diferencias significativas de la variable presencia de raíz con respecto a la concentración de AIB (Tabla 1). Con lo que respecta a la variable la presencia de callo el valor de F indica diferencias significativas solo entre clones (Tabla 1). Aunque el valor de F no es significativo para la relación entre clones para la presencia de raíz (Tabla 1) está muy cerca de ser significativo por ese motivo nos aparecen diferentes agrupaciones en la prueba de medias SNK (Tabla 2). Con respecto al porcentaje de enraizamiento relacionado con la concentración de AIB, la concentración de 2g/L produjo un enraizamiento del 40% en contra posición a la concentración de 0g/L que no produjo apenas emisión de raíces (Tabla 2). Siendo el clon con mayor porcentaje el CA-15 con un 40% y el menor el U-7810 con un 0%. En el caso de la formación de callo fue el clon 2522 el que presentó menor porcentaje con un 57% y el clon U7810 el que presentó mayor porcentaje con un 100% (Tabla 2) Tabla 1. Análisis de varianza para evaluar el efecto de los factores concentración de AIB y clon en las variables Presencia de raíz y Presencia de Callo. F. de V. Clon AIB Replica Clon x Auxina Clon x Réplica Auxina x Réplica Residuo ** g.l. 4 2 4 8 16 8 30 PreRaíz C.M. Fns 0,346 0,059ns 0,658 0,015* 0,013 0,982ns 0.226 0,149ns 0,182 0,237ns 0,218 0,166ns 0.136 C.M. 0,432 0,025 0,214 0,053 0,172 0,090 0,132 Callo Fns 0,024* 0,825ns 0.194ns 0,907ns 0,258ns 0,703ns Muy significativo con P≤ 0.01; *significativo con P≤0.05; ns = no significativo con P = 0.05; gl = grados de libertad. 6/12 Tabla 2. Test de comparación de medias SNK para los factores clon y concentración de AIB para las variables Presencia de raíz y Presencia de callo. N 15 15 14 14 15 Clon CA-15 16 90025 2522 U-7810 media 0,40 a 0,33 ab 0,28 ab 0,21 ab 0,00 b PreRaíz N 25 24 24 AIB AIB2 AIB1 AIB0 media 0,40 a 0,29 a 0,04 b N 15 15 15 14 14 Callo Clon U-7810 CA-15 16 90025 2522 media 1,00 a 0,93 ab 0,86 ab 0,71 ab 0,57 b Experimento 2 La presencia de raíz total del experimento fue de un 61%; hubo diferencias significativas entre clones para esta variable siendo el clon 16 el que presentó mayor porcentaje con un 79% y el clon U-7810 el de menor enraizamiento con un 33% (Tabla 3). En cuanto a los sustratos el ANOVA no dio diferencias significativas entre el porcentaje de estaquillas enraizadas pero si en su supervivencia y calidad. La presencia de callo en las estaquillas también fue elevada entorno al 88% habiendo diferencias significativas entre sustratos (Tabla 3). La presencia de brotes fue escasa en general, en torno al 16%, pero cabe destacar que hubo diferencias significativas entre los sustratos (Tabla 3) siendo el que induce mayor formación de brotes el de Perlita: Turba 2:1 con un 44% y total ausencia de brotes en Perlita y Vermiculita (Tabla 4). El sustrato que presentó un mayor porcentaje de enraizamiento fue el Perlita: Turba 1:1 con un 78% y el que presentó menor porcentaje fue el de Perlita con un 37% (Tabla 4). Con respecto a la supervivencia de las estaquillas fue elevada, en torno al 90% y presentó diferencias significativas tanto entre clones como entre sustratos (Tabla 5 y 6). Se observó en el análisis de ANOVA que existe una interacción muy significativa entre el sustrato y el clon para la variable supervivencia siendo esta de tipo cualitativo (Figura 1), ya que cada clon actúa de forma diferente en cada sustrato. También se observó que hay cuatro sustratos en los que se produjo la supervivencia de todas las estaquillas de cada clon, siendo estos sustratos los que presentaron mejor drenaje. En cuanto a los coeficientes de correlación de Pearson entre variables (Tabla 7) se observó una correlación moderada pero inversamente proporcional entre la presencia de callo y las variables presencia de brote y presencia de raíz. También se observó que hay una correlación moderada y directamente proporcional entre la presencia de brote y presencia de raíz. La interacción de sustrato x clon con respecto a la variable presencia de raíz también es significativa (Tabla 8) y se observa también una relación cualitativa (Figura 2) pero con cierta tendencia a aumentar el enraizamiento en los sustratos mejores para esta variable. 7/12 Tabla 3. Análisis de varianza para evaluar el efecto de los factores sustrato y clon en las variables Callo, Brote y Presencia de raíz. F. de V. Sustrato Réplica Réplica x Sustrato Clon Sustrato x Clon Residuo Callo Fns Brote C.M. Fns PreRaíz C.M. Fns g.l. C.M. 7 0.376 0.009** 0.491 0.000** 0.348 0.260ns 2 0.013 0.857ns 0.000 0.992ns 0.039 0.852ns 14 0.087 0.454ns 0.068 0.851ns 0.239 0.352ns 5 0.058 0.648ns 0.111 0.435ns 0.763 0.006** 33 68 0.165 0.086 0.013** 0.153 0.113 0.146ns 0.215 0.212 0.470ns Usado Réplica x Sustrato como residuo de Sustrato y de Réplica. Tabla 4. Test de comparación de medias SNK por sustrato y por clon para las variables Callo, Brote y Presencia de Raíz. N 18 18 15 18 14 18 16 13 Callo Sustrato (P: C)1:1 V100% P100% (P:C)2:1 (P:T)1:1 (P:(VS1:9))1:1 (P: (VS1:9)2:1 (P:T)2:1 Media 1.00 a 1.00 a 0.94 ab 0.89 ab 0.89 ab 0.86 ab 0.80 ab 0.67 b N 18 18 15 18 14 18 16 13 Brote Sustrato (P: T)2:1 (P: T)1:1 (P:(VS1:9))2:1 (P: C)2:1 (P:(VS1:9))1:1 (P:C)1:1 P100% V100% Media 0.44 a 0.33 ab 0.20 ab 0.11 b 0.07 b 0.05 b 0.00 b 0.00 b N 24 24 23 17 24 18 PreRaíz Clon 16 90025 CA-15 2522 111 U-7810 Media 0.79 a 0.75 a 0.69 ab 0.58 ab 0.42 ab 0.33 b Tabla 5. Análisis de varianza para evaluar el efecto de los factores sustrato y clon para la variable supervivencia. Superviv F. de V. Sustrato g.l. Réplica 2 Réplica x Sustrato 14 Clon 5 Sustrato x Clon 35 Residuo 80 7 C.M. Fns 0.234 0.000** 0.132 0.029* 0.029 0.600ns 0.444 0.000** 0.156 0.033 0.000** Usado Réplica x Sustrato como residuo de Sustrato y de Réplica. 8/12 Tabla 6. Test de comparación de medias SNK por sustrato y por clon para la variable supervivencia. N 24 24 24 24 24 24 Clon 111 16 90025 CA-15 U-7810 2522 Superviv N Sustrato 18 Perlita: turba 1:1 18 Perlita: turba 2:1 18 Perlita: corteza 1:1 18 Perlita: corteza 2:1 18 Perlita 100% 18 Perlita: (vermi: sus 1:9) 2:1 18 Perlita: (vermi: sust 1:9) 1:1 Vermiculita 100% Media 1.00 a 1.00 a 1.00 a 0.95 a 0.75 b 0.71 b Media 1.00 a 1.00 a 1.00 a 1.00 a 0.89 ab 0.83 abc 0.78 bc 0.72 c Tabla 7. Correlaciones de Pearson entre las variables Callo, Brote Presencia de raíz y Promedio de diámetro. Callo Callo Brote PreRaíz -0.41 -0.41 0.25 0.31 0.03 Brote -0.41 PreRaíz -0.41 0.31 PromDiam 0.25 0.03 PromDiam 0.16 0.16 Tabla 8. Análisis de varianza para evaluar el efecto de los factores sustrato y clon para la variable promedio de diámetro de raíces. F. de V. Sustrato Réplica Réplica x Sustrato Clon Sustrato x Clon Residuo g.l. PromDiam C.M. Fns 7 0.084 0.089ns 2 0.004 0.886ns 13 0.036 0.304ns 5 0.011 0.839ns 28 23 0.058 0.028 0.042* Usado Réplica x Sustrato como residuo de Sustrato y de Réplica 9/12 Interacción Sustrato*Clon 1.2 1 Superviv 0.8 0.6 0.4 0.2 111 2522 90025 CA- 15 (P -T )2 -1 (P -T )1 -1 P) 21 (P -C P) 11 R PE 16 (P -C LI TA -1 S) )2 -1 S) )1 (P -(V VE R (P -(V M IC U LI TA 0 U- 7810 Figura 1. Interacción Sustrato* Clon para la variable Supervivencia. LI TA U LI TA M IC R VE R PE 2522 (P -T )2 -1 16 (P -T )1 -1 P) 21 (P -C P) 11 (P -C -1 S) )2 (P -(V S) )1 -1 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 (P -(V PromDiam interacción Sustrato*Clon 111 90025 CA- 15 U- 7810 Figura 2. Interacción Sustrato* Clon para la variable Promedio de raíz(mm). 10/12 Experimento 3 La presencia de raíz total fue de un 59%; la familia la que presentó mayor porcentaje de enraizamiento fue Parede1 x CA-15 con un 78% y la que menor Parede1 x 23M09, con un 39%. En cuanto a la posición de la estaquilla en la rama, las estaquillas de todas las posiciones produjeron raíces siendo las que presentaron mayor porcentaje las procedentes de las posiciones media y basal con unos valores respectivamente de 61% y 67% y la apical con menor porcentaje de enraizamiento, un 50%. La longitud total de la raíz presentó diferencias significativas tanto entre familias como en la posición (Tabla 9), sin embargo la prueba de medias SNK (Tabla 10) para la familia las agrupa en un mismo grupo. En cuanto a la presencia de callo hubo diferencias significativas entre familias (Tabla 11) siendo la que presenta mayor porcentaje Parede2 x 2522 con un 100% y menor la familia Parede1 x CA-15, con un 55% (Tabla 12). Por otro lado la presencia de brotes es altamente significativa tanto entre familias, como entre posiciones de la estaquilla en la rama (Tabla 11); la familia Parede1 x CA-15 fue la que presentó un mayor porcentaje de brotes con un 61% y la menor la familia Parede1 x 23M09 con un 22% (Tabla 12). En cuanto a los coeficientes de correlación de Pearson (Tabla 13) existe correlación moderada pero inversamente proporcional entre la presencia de callo y las variables presencia de raíz y longitud raíz total. Tabla 9. Análisis de varianza para evaluar el efecto de los factores familia y posición para la variable longitud raíz total. F. de V. Familia Posición Familia x Posición Familia x Réplica Posición x Réplica Residuo g.l. LongRaízT C.M. Fns 2 2 4 2 2 18 20599.3 19070.5 1672.6 1201.8 2150.1 4246.5 0.021* 0.026* 0.810ns 0.757ns 0.611ns Tabla 10. Test de comparación de medias SNK por familia y por posición para la variable longitud raíz total. N 14 11 7 Familia Parede1 x CA-15 Parede2 x 2522 Prede1 x 23M09 LongRaízT Media N 176.0 a 11 112.3a 9 104.3a 12 Posición Media Apical Basal Media 179.9 a 138.2 ab 100.5 b 11/12 Tabla 11. Análisis de varianza para evaluar el efecto de los factores familia y posición para las variables callo y brote. F. de V. Familia Posición Familia x Posición Familia x Réplica Posición x Réplica Residuo g.l. Callo C.M. Fns Brote C.M. Fns 2 0.962 0.011* 0.796 0.009** 2 0.018 0.908ns 2.463 0.000** 4 0.101 0.713ns 0.185 0.317ns 2 0.000 1.000ns 0.018 0.885ns 2 40 0.166 0.191 0.427ns 0.018 0.151 0.885ns Tabla 12. Comparación de media SNK por familia y por posición para las variables callo y brote N 18 18 18 Callo Familia Parede2 x 2522 Parede1 x 23M09 Parede1 x CA-15 Media 1.00 a 0.66 b 0.55 b N 18 18 15 Brote Media N 0.61 a 18 0.55 a 18 0.22 b 18 Familia Parede1 x CA-15 Parede2 x 2522 Prede1 x 23M09 Posición Basal Media Apical Media 0.77 a 0.55 a 0.05 b Tabla 13. Correlaciones de Pearson para las variables Callo, Brote, Presencia de raíz y Longitud de raíz total. Callo Callo Brote PreRaíz -0.13 -0.32 -0.46 0.17 0.29 Brote -0.13 PreRaíz -0.32 0.17 LongRaíT -0.46 0.29 LongRaíT . . 5. Conclusiones Hay una relación significativa entre la presencia de raíz y la concentración de AIB aplicada en la base de las estaquillas, siendo la que produce mejor enraizamiento la concentración de 2g/L. En cuanto a los datos obtenidos para los clones ensayados se puede sacar como conclusión que el clon U-7810 tiene mal enraizamiento, lo que complica su uso en mejora. El sustrato no influye significativamente en el porcentaje de estaquillas enraizadas pero si en su supervivencia y calidad. Tenemos tres sustratos: perlita: corteza 1:1, vermiculita y perlita que producen mayor porcentaje de callo lo que implica menor presencia de brote y menor presencia de raíz. Por otro lado hay un sustrato el de perlita: turba 1:1 que presenta mayor presencia de brote, mayor supervivencia y mayor emisión de raíz y que por tanto será utilizado en los ensayos de enraizamiento. 12/12 En cuanto a la posición originaria de la estaquilla en el brote anual, las posiciones media y basal son las que producen mayor presencia de raíz, siendo la posición media la que produce mayor longitud de raíz total. Ya que en el ensayo 3 se utilizaron plantas de tres familias obtenidas en el nuevo programa de mejora, compartiendo las tres el parental femenino (De Parede) cruzado con diferentes parentales masculinos, es interesante comentar que existen diferencias entre familias, siendo la que presenta mejores características para el enraizamiento la Parede1 x CA-15, la Parede2 x 2522 características intermedias y la Parede1 x 23M09 las más bajas. 6. Agradecimientos El trabajo se ha desarrollado dentro de los objetivos de los proyectos RTA-2009-00163 (Ministerio de Ciencia e Investigación) y 10MRU5020RR (INCITE, Xunta de Galicia). Los autores expresan su agradecimiento al personal del vivero por el apoyo proporcionado para la realización de este estudio. 7. Bibliografía HARTMANN, H.T.; KESTER, D.E. 2010. Plant propagation: principles and practice, 8th ed. 280-414. FERNÁNDEZ-LÓPEZ, J.; PEREIRA, S. 1992. Fog and substrate conditions for chesnut propagation by leafy cuttings. Symposium proceedings Mass Production Technology for Genetically improved fast growing species, AFOCEL/IUFRO, Tome 1, 379-383. FERNÁNDEZ-LÓPEZ, J., 2011. Identification of the genealogy of hybrids between Castanea sativa, Castanea crenata and Castanea mollissima. Forest Systems 20(11): 65-80. MIRANDA-FONTAÍÑA, M.E.; FERNÁNDEZ-LÓPEZ, J. 2007. Resistance of Castanea clones to Phytophthora cinnamomi : testing and genetic control. Silvae Genetica, 56(1). 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