Ecología Aplicada, 8(1), 2009 ISSN 1726-2216 Depósito legal 2002-5474 © Departamento Académico de Biología, Universidad Nacional Agraria La Molina, Lima – Perú. Presentado: 15/10/2008 Aceptado: 16/06/2009 EFECTOS ECOTOXICOLOGICOS DEL PETROLEO CRUDO, DIESEL 2 Y KEROSENE SOBRE EL CRECIMIENTO POBLACIONAL DE LA MICROALGA Chaetoceros gracilis Schutt ECOTOXICOLOGICAL EFFECTS OF CRUDE OIL, DIESEL 2 AND KEROSENE ON THE POPULATION GROWTH OF THE MICROALGAE Chaetoceros gracilis Schutt Giovanna Vera1, Jorge Tam2 y Edwin Pinto3 Resumen Se realizaron pruebas ecotoxicológicas para determinar los efectos del petróleo crudo, Diesel 2 y kerosene sobre el crecimiento poblacional de la diatomea Chaetoceros gracilis. Se determinó la concentración efectiva media (CE50%) a un tiempo de exposición de 96 h, siendo más tóxica la solución con Diesel 2 (90 mg·L–1), seguida de la solución con kerosene (98 mg·L–1) y la solución con petróleo crudo (867.5 mg.L–1). Además, se evaluó los efectos ocasionados en la tasa intrínseca del crecimiento poblacional y en la tasa de división de la especie expuesta a los tres compuestos orgánicos. Palabras clave: Chaetoceros gracilis, crecimiento poblacional, hidrocarburos de petróleo, pruebas ecotoxicológicas Abstract Ecotoxicological tests were carried out to determine the effects of crude oil, Diesel 2 and kerosene on the population growth of the diatom Chaetoceros gracilis. The mean effective concentration (CE50%) at an exposure time of 96 h was determined. The solution with Diesel 2 was more toxic (90 mg·L–1), followed by the solution with kerosene (98 mg·L–1) and the solution with crude oil (867.5 mg·L–1). In addition, the effects of the three organic compounds on the intrinsic population growth rate and division rate of Ch. gracilis were assessed. Key words: Chaetoceros gracilis, ecotoxicological bioassays, oil hydrocarbons, population growth _______________________________________________________________________________ Introducción. Una de las fuentes más importantes de contaminación marina en el Perú son los hidrocarburos de petróleo y sus derivados, especialmente durante el cabotaje. En 1990, se derramaron 14000 barriles de kerosene y 438 barriles de petróleo en 1995 (Sánchez & Orozco, 1997). Otros registros que datan de 1995 al 2001 sobre derrames de petróleo en nuestro mar fueron publicados por Vizcarra (2002). En el Perú, existen 39 lotes con contratos vigentes para operaciones petroleras, de las cuales 8 se encuentran distribuidas en la zona norte del mar peruano, abarcando los departamentos de Tumbes, Piura, Lambayeque, La Libertad y Ancash con las siguientes cuencas: Cuenca Progreso, Cuenca Lancones, Cuenca Talara , Cuenca Sechura, Cuenca Salaverry. Los otros lotes se encuentran distribuídos al interior del país. También se encuentran 6 plantas de refinamiento: Talara (Piura), La Pampilla (Lima), Conchán (Lima), El Milagro (Amazonas), Pucallpa (Ucayali) e Iquitos (Loreto), así como también 4 plantas de fraccionamiento: Pluspetrol (Ica), Pariña y EEPSA (Piura) y Aguaytía (Ucayali). En la costa peruana existen 18 plantas de abastecimiento: Talara, Piura, Chiclayo (Eten), Trujillo (Salaverry), Chimbote, Supe, Lima (9 plantas), Pisco, Mollendo e Ilo (MEM, 2006). El Instituto del Mar del Perú (IMARPE) ha realizado diversas evaluaciones de hidrocarburos de petróleo en las zonas de Paita, Talara, Bayóvar, Chimbote, Supe-Paramonga, Callao y Paracas encontrándose en muchos casos altas concentraciones de hidrocarburos en el mar (Guzmán, 1995; Jacinto y Cabello 1996, Jacinto et al. 1996, 1997, 1998; Guzmán et al., 1997 y Cabello et al., 1999). El primer impacto al producirse un derrame de hidrocarburo ocurre con el fitoplancton, debido a que los hidrocarburos forman una capa impermeable que obstaculiza el paso de la luz solar, fuente necesaria para realizar el proceso fotosintético. Las microalgas unicelulares cumplen un rol esencial en el normal funcionamiento de los ecosistemas marinos, ya que como productores primarios, son el primer eslabón de la cadena alimentaria, oxigenando el agua y participando en los ciclos biogeoquímicos de sustancias orgánicas e inorgánicas. Conocer los efectos ecotoxicológicos de los contaminantes de tipo EFECTOS ECOTOXICOLOGICOS EN Chaetoceros. gracilis Enero – Junio 2009 __________________________________________________________________________________________ orgánico a través de datos obtenidos en las pruebas de Cultivo de la microalga Las cepas de Ch. gracilis se mantuvieron en fase toxicidad usando especies sensibles, ayudará a predecir los posibles efectos sobre las poblaciones y líquida en un medio Guillard "f/2" modificado (Guillard, 1975 en González et al., 1995). La comunidades algales. En el Perú, existen pocos estudios acerca del composición del medio de cultivo utilizado se efecto de los hidrocarburos sobre los organismos presenta en la Tabla 1. marinos nativos (Ibañez & Huanes, Tabla 1. Composición del Medio de cultivo f/2 (Guillard, 1975 en González et al., 1999 y Alayo & 1995). Nutrientes Stock Medio Medio (mol.L-1) Reactivos Volumen Iannacone, 2002). En -1 -1 -1 (g.L ) (g.L ) (mL.L ) el presente trabajo, se eligió como Solución 1 1 NaNO3 75 0.075 8.83 x 10-4 organismo prueba la diatomea Solución 2 1 NaH2PO4 5 0.05 3.63 x 10-5 Chateoceros gracilis Schutt por ser de fácil Solución 3 1 Na2SiO4. 9H2O 10 0.01 3.25 x 10-5 manejo en laboratorio, tamaño Solución 4 1 FeCl3. 6H2O 3.15 0.00315 1.16 x 10-5 pequeño, y ciclo de vida corto, 955 Na2EDTA. 2H2o 4.36 0.00436 1.17 x 10-1 características que son ventajosas para la 1 Mn. Cl2. 4H2O 18 g .100 mL-1 0.00018 9.10 x 10-7 conducción de pruebas 1 ZnSo4. 7H2O 2.2 g .100 mL-1 0.000022 7.65 x 10-8 ecotoxicológicas. Esta especie ya ha 1 CoCl2. 6H2O 1.05 g.100 mL-1 0.0000105 4.42 x 10-8 sido usada como organismo prueba en 1 CuSO4. 5H2O 0.98 g.100 mL-1 0.0000098 3.93 x 10-8 otros estudios ecotoxicológicos 1 Na2MoO4. 2H2O 0.63 g.100 mL-1 0.0000063 2.62 x 10-8 (Vera et al., 2001, Alayo et al., 2004). Chaetoceros gracilis es una especie que forma Pruebas ecotoxicológicas parte de la flora fitoplanctónica del mar peruano La metodología usada para la obtención de las (Ochoa et al., 1999), y los efectos ecotoxicológicos de soluciones mezcla de hidrocarburos (petróleo crudo, las concentraciones de hidrocarburos presentes en las Diesel 2 y kerosene) y agua de mar, fue tomada de aguas marinas, son transmitidos a niveles tróficos D´Croz et al. (1988). De dos pruebas preliminares se superiores. obtuvieron los siguientes rangos de diluciones: Por tales motivos, se planteó como objetivo de la solución con petróleo crudo de 420 a 2500 mg·L-1, presente investigación evaluar los efectos solución con Diesel 2 de 67 a 400 mg·L-1 y solución ecotoxicológicos de los hidrocarburos de petróleo con kerosene entre 9 a 640 mg·L-1. La prueba fue de (petróleo crudo, el Diesel 2 y el kerosene) sobre el tipo estático, es decir, las concentraciones fueron crecimiento poblacional de la diatomea Chaetoceros añadidas al medio por única vez al inicio de la prueba. gracilis y determinar la concentración efectiva media Después de preparar las soluciones de (CE50%). hidrocarburos y agua de mar, se distribuyeron en matraces de 250 mL hasta 150 mL y se inocularon 10 Materiales y métodos. mL de microalgas (extraídas durante la fase Material biológico exponencial) para lograr una densidad inicial La diatomea Ch. gracilis se obtuvo del Cepario promedio de 30000 cél·mL-1. Las muestras de del Laboratorio de la Línea de Investigaciones en microalgas para el conteo, se colectaron en viales de 5 Ecotoxicología Acuática del Instituto del Mar del Perú mL, al inicio y cada 24 h, durante 96 h. Se colectaron (IMARPE). Esta alga es usada habitualmente como las muestras tanto de los controles como de las alimento de organismos reproductores de bivalvos y diferentes concentraciones de hidrocarburo y crustáceos en laboratorio, cuyas larvas se utilizan en derivados. Se ejecutaron los conteos celulares dentro las diferentes pruebas ecotoxicológicas. de las 24 h, utilizando una cámara de Neubauer. Las pruebas se realizaron en un ambiente con aire acondicionado a una temperatura de 20°C ± 1 °C. Un 2 G. VERA, J. TAM Y E. PINTO Ecol. apl. Vol.8 No1, pp. 1-7 __________________________________________________________________________________________ resumen de las condiciones de la ecotoxicológica se presenta en la Tabla 2. prueba Nt = Donde: r = Tasa intrínseca de crecimiento poblacional (día-1) Nt = Densidad celular en día t (cél·mL-1) No = Densidad celular en día 1 (cél·mL-1) K = Capacidad de carga (se asumió como la máxima densidad alcanzada) a = ln ((K-No)/No) Tabla 2. Condiciones de las pruebas ecotoxicológicas usando Chaetoceros gracilis expuesta a soluciones de petróleo crudo, Diesel 2 y kerosene. Organismo Prueba Chaetoceros gracilis Tipo de Prueba Agua de dilución Temperatura Fotoperiodo Tamaño de matraces Volumen de las soluciones Número de células por matraz Número de réplicas por concentración. Tasa de agitación Agua de dilución Concentraciones de prueba Punto final de la prueba K (1 + exp( a − rt )) Estática, 96 h Agua de mar filtrada estéril y saturada de oxígeno (6-7 mg·L-1) 20 ºC ±1 ºC . L:O = 24:0 250 mL La estimación del parámetro r se realizó mediante minimización de la función de error de los cuadrados residuales, usando la rutina de optimización numérica SOLVER de la hoja de cálculo EXCEL (método del gradiente conjugado, con derivadas centradas). La tasa de división (div·día-1) se calculó mediante la fórmula: D = 1/T Donde: T = Tiempo de división (días) = ln (2)/r 150 mL 30000 cél·mL-1. 2 3 veces al día, manualmente Medio de cultivo f/2 Guillard Resultados. Petróleo crudo A partir de las concentraciones de 1225, 1750 y 2500 mg·L-1 se observa una inhibición en el crecimiento poblacional dentro de las 24 h de exposición de 67 %, 70 % y 92 %, respectivamente, recuperándose al tercer día de exposición, siendo afectada la tasa de división por día en más del 50 % con respecto al control (Figura 1). La tasa intrínseca del crecimiento poblacional (r) para el control fue de 1.56 día–1 mientras que para las células expuestas al petróleo crudo estuvo entre 0.75 a 1.19 día–1. La tasa de división por día (D) para el control fue de 2.26 div·día-1, mientras que para las poblaciones expuestas al petróleo estuvo en rango de 1.08 a 1.71 div·día-1 (Tabla 3). Se obtuvo una CE50% de 867.5 mg·L –1 (Figura 2). Mínimo 6 y un control Inhibición del crecimiento poblacional (CE%) Análisis de datos El diseño experimental en las tres pruebas, comprendió 7 tratamientos (6 concentraciones + 1 control) y 2 repeticiones por cada tratamiento. La relación dosis-respuesta se obtuvo a partir de los datos de concentración como variable independiente y porcentaje de inhibición como variable dependiente. El porcentaje de inhibición del crecimiento poblacional fue calculado a 96 h de exposición, usando la siguiente fórmula (Joubert, 1980): ⎛ Ne ⎞ I = 100 ⎜1 − ⎟ ⎝ Nc ⎠ 2.2 log (inhibición) (%) Donde: I = Inhibición del crecimiento poblacional (%) Ne = Densidad celular expuesta al tóxico (cél·mL-1) Nc = Densidad celular del control (cél·mL-1) Con los datos de inhibición se determinó la concentración efectiva media (CE50%) utilizando el programa computacional PROBIT (Weber, 1993), que calcula la concentración de hidrocarburo que determina una inhibición del crecimiento poblacional del 50 %. Adicionalmente, se estimó la tasa intrínseca de crecimiento poblacional (r) y la tasa de división (D). La tasa intrínseca de crecimiento poblacional se estimó del modelo logístico contínuo, usando la siguiente fórmula (Franco, 1985): y = 1.0321x - 1.4977 r2 = 0.8146 2 1.8 1.6 1.4 1.2 2.5 2.7 2.9 3.1 3.3 3.5 log (concentración) (mg.L-1) Figura 1. Porcentaje de inhibición del crecimiento poblacional de Chaetoceros gracilis expuesta por 96 horas a una solución con petróleo crudo. 3 Concentración célular -1 (cel.mL ) EFECTOS ECOTOXICOLOGICOS EN Chaetoceros. gracilis Enero – Junio 2009 __________________________________________________________________________________________ división por día (D) para el control fue de 2.24 div·día-1, mientras que para las poblaciones expuestas al petróleo estuvo en rango de 0.89 a 2.14 div·día-1 (Tabla 3). Se obtuvo una CE50% de 90 mg·L –1 (Figura 4). Kerosene Concentraciones de kerosene de 640 y 320 mg·L-1 produjeron una inhibición en el crecimiento poblacional del 96 % y 83 % en el tercer y cuarto día de exposición, respectivamente. Mientras que en concentraciones entre 20 a 160 mg·L-1 causaron una inhibición entre el 8 % al 29 % (Figura 5). 1500000 1000000 500000 0 0 24 48 72 96 120 Tiempo de exposición (h) 0 1225 858 1750 600 2500 420 Figura 2. Curvas de crecimiento poblacional de Chaetoceros gracilis expuesta a diferentes concentraciones de petróleo crudo (mg·L-1). Tabla 3. Tasa intrínseca del crecimiento poblacional (r), tasa de división por día (D) y concentración efectiva media (CE50%) a 96 h, obtenidas en las pruebas ecotoxicológicas. Agentes tóxicos Petroleo crudo Kerosene Diesel 2 r (dia-1) 0.75-1.19 0.62-1.48 0.29-1.44 D (div·dia-1) 1.08-1.71 0.89-2.14 0.42-2.08 CE50% (mg·L-1) a 96 h 867.5 98 90 Concentración celular -1 (cel.mL ) 1000000 600000 400000 200000 0 0 48 72 96 120 0 67 96 196 280 400 137 Figura 4. Curvas de crecimiento poblacional de Chaetoceros gracilis expuesta a diferentes concentraciones de Diesel 2 (mg·L-1). 2.2 y = 0.7175x + 0.007 r2 = 0.9462 2.0 2.2 log (inhibición) (%) y = 0.732x + 0.2172 r2 = 0.7438 2.0 24 Tiempo de exposición (h) Diesel 2 Concentraciones de Diesel 2 mayores de 196, 280 y 400 mg·L-1 inhibieron el crecimiento de la población expuesta en 97 %, 100 % y 100 %, respectivamente, dentro de las 24 h de exposición, no se observó recuperación celular (Figura 3). log (inhibición) (%) 800000 1.8 1.6 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 1.4 0.4 1.2 1 1.4 1.6 1.8 2 2.2 2.4 2.6 1.5 2 2.5 3 2.8 log (concentración) (mg.L-1) Log (concentración) (mg.L-1) Figura 5. Porcentaje de inhibición del crecimiento poblacional de Chaetoceros gracilis expuesta por 96 horas a una solución con kerosene. Figura 3. Porcentaje de inhibición del crecimiento poblacional de Chaetoceros gracilis expuesta por 96 horas a una solución con Diesel 2. La tasa intrínseca del crecimiento poblacional (r) para el control fue de 1.47 día–1 mientras que para las poblaciones expuestas a diferentes concentraciones del kerosene comercial estuvo entre 0.29 a 1.44 día–1. La tasa de división por día (D) para el control fue de 2.12 La tasa intrínseca del crecimiento poblacional (r) para el control fue de 1.55 día–1 mientras que para las poblaciones expuestas a diferentes concentraciones del Diesel 2 estuvo entre 0.62 a 1.48 día–1. La tasa de 4 G. VERA, J. TAM Y E. PINTO Ecol. apl. Vol.8 No1, pp. 1-7 __________________________________________________________________________________________ div·día-1, mientras que para las poblaciones expuestas al kerosene estuvo en rango de 0.42 a 2.08 div·día-1 (Tabla 3). Se obtuvo una CE50% de 98 mg·L –1 (Figura 6). Concentración celular -1 (cel.mL ) crudo, el Diesel 2 y el kerosene se encuentran dentro de las primeras 24 horas de exposición, siendo más tóxico el Diesel 2 debido a que presenta mayor concentración de fracciones volátiles, tales como los hidrocarburos alifáticos de bajo 1000000 peso molecular desde metano hasta octano, que sin embargo son muy 800000 volátiles y se pierden rápidamente por evaporación desde la 600000 preparación petróleo-agua. 400000 Algunos de estos componentes pueden producir efectos narcóticos 200000 en animales marinos en concentraciones cerca a su 0 solubilidad acuosa (Crisp et al, 0 24 48 72 96 120 1967). Algo muy semejante ocurre Tiempo de exposición (h) con el kerosene, ésto apoyaría a 0 20 40 80 Craddock (1977 en Neff, 1987) 160 320 640 quien señala que la toxicidad aguda Figura 6. Curvas de crecimiento poblacional de Chaetoceros gracilis se incrementa conforme aumenta la concentración de hidrocarburos expuesta a diferentes concentraciones de kerosene (mg·L-1). aromáticos. Por otro lado, el petróleo crudo Discusión. La compleja composición del petróleo y la resultó menos tóxico, pues contiene hidrocaburos extrema variabilidad en la composición del petróleo y alifáticos de alto peso molecular que son tan los productos refinados del petróleo ha llevado a los insolubles que no es posible disolverlos investigadores a examinar la toxicidad de una mayor suficientemente en agua de mar para causar toxicidad diversidad de ingredientes químicos del petróleo en un en organismos marinos y éstos finalmente se esfuerzo por mejorar el entendimiento de las causas de acumulan en los sedimentos (Crisp et al, 1967). En las pruebas con petróleo crudo si bien es cierto la toxicidad (Wright & Welbourne, 2002), por tal motivo se consideró importante determinar la se produce un efecto inhibitorio a las 24 h, se puede toxicidad de los tres productos más usados en el Perú, observar una recuperación en la pendiente de para consumo doméstico, transporte terrestre y crecimiento celular a partir del segundo día, Tabla 4. Concentración efectiva media (CE50%, 96 h) de hidrocarburos de petróleo y derivados usando diferentes especies acuáticas. Mugil cephalus CE50% Estadio Agente tóxico (mg·L-1) Autor 96 h Juvenil Petróleo 680 Quevedo et al. (1983) liviano Juvenil Kerosene 628.6 Ibañez & Huanes (1999) Mugil curema Juvenil Petróleo crudo Mugil cephalus Juvenil Diesel 2 1350 Aguilera & Huq (1982 en Ibañez & Huanes, 1999) 694 Ibañez & Huanes (1999) Protothaca staminea Juvenil Petróleo crudo 14.7 Rice et al. (1976 en Weber et al., 2005) Paragrapsus quadridentatus 2020 Ahsanullah et al. (1982 en Weber et al., 2005) Paralithodes camtschatica Adulto Petróleo liviano Larva Petróleo crudo Acanthomysis pseudomacropsis Larva Petróleo crudo 8.99 Rice et al. (1976 en Weber et al., 2005) Orchomene pinguis Juvenil Petróleo crudo 7.4 Rice et al. (1976 en Weber et al., 2005) Organismo prueba Orthopristis ruber 5 Rice et al. (1976 en Weber et al., 2005) Chaetoceros gracilis Adulto Petróleo crudo Chaetoceros gracilis Adulto Diesel 2 867.5 Vera et al. (presente estudio) 90 Vera et al. (presente estudio) Chaetoceros gracilis Adulto Kerosene 98 Vera et al. (presente estudio) especialmente en células expuestas a bajas concentraciones del petróleo. Un comportamiento similar ocurrió en los trabajos realizados por D´Croz marítimo. En las pruebas realizadas en el presente trabajo se determinó que el efecto inhibitorio del petróleo 5 EFECTOS ECOTOXICOLOGICOS EN Chaetoceros. gracilis Enero – Junio 2009 __________________________________________________________________________________________ et al. (1988) quien determinó en otras condiciones de temperatura y salinidad un crecimiento celular después del segundo día tendiendo a igualar el crecimiento del cultivo control y después del tercer día parece estar estimulado, superando al cultivo control. Después de la volatilización de los hidrocarburos aromáticos hay una tendencia a la recuperación en los 3 casos, especialmente en los cultivos que tienen las más bajas concentraciones. Esto también explicaría la mayor toxicidad del petróleo crudo en comparación con Diesel 2 y Diesel 6 encontrada por Alayo & Iannacone (2002) usando rotíferos en pruebas de 48 h. Comparando los resultados obtenidos en el presente estudio para la especie Ch. gracilis, con los resultados en otras especies (Tabla 4), se obtuvo las siguientes secuencias de sensibilidad: - Petróleo crudo: Amphipoda (Orchomene pinguis) > Microalga (Chaetoceros gracilis) > Pez (Mugil curema) > Decapoda (Paragrapsus quadridentatus) - Diesel: Microalga (Chaetoceros gracilis) > Pez (Mugil curema) - Kerosene: Microalga (Chaetoceros gracilis) > Pez (Mugil curema) En el Perú, la Ley General de Aguas vigente (MINSA, 1969) no considera estándares de calidad para los hidrocarburos de petróleo. Sin embargo, en Alaska, el estándar de calidad acuática marina para el crecimiento y propagación de peces, mariscos, vida acuática y vida silvestre es de 15 µg·L-1 para hidrocarburos acuosos totales (HAT) (ADEC, 2003). Agradecimientos. Se agradece al Sr. José Ortega por el apoyo brindado durante la parte experimental del trabajo. Asimismo, agradecemos al M.Sc. Ricardo Oliveros por la revisión del manuscrito. Literatura citada. Alaska Department of Environmental Conservation (ADEC). 2003. Water quality standards. 18 AAC 70. Alayo M. & Iannacone J. 2002. Ensayos ecotoxicológicos con petroleo crudo, Diesel 2 y Diesel 6 con dos subespecies de Brachionus plicatilis Müller 1786 (Rotifera: Monogononta). Gayana. 66: 45-58. Alayo M., Iannacone J. & Arrascue A. 2004. Sensibilidad al cromo: microbiopruebas con las diatomeas marinas Isochrysis galbana Parke y Chaetoceros gracilis Schütt. Ecol. Apl. 3: 154-161. Cabello R., Jacinto M.E., Morón O. y Chang F. 1999. Evaluación de la calidad medio marino costanero en la Bahía de Talara y Aguas Adyacentes, 15-17 Abril 1997. Inf. Prog. Inst. Mar Perú. 106. Crisp D.J., Christhie O. & Ghobashy A. 1967. Narcotic and toxic action of organic compounds on barnacle larvae. Comp. Biochem. Physiol. 22: 629-649. D' Croz L., Torres J. & Gómez J. 1988. 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Las soluciones con petróleo crudo, Diesel 2 y kerosene produjeron un efecto de inhibición sobre el crecimiento poblacional de la diatomea Ch. gracilis, siendo las concentraciones efectivas media (CE50%) de 867.5, 90 y 98 mg·L-1, respectivamente. Este efecto inhibidor fue mayor dentro de las 24 h, siendo afectadas la tasa intrínseca de crecimiento y la tasa de división por día. La recuperación celular fue notable a partir del tercer día con una tendencia a alcanzar los cultivos controles en los días posteriores. Ch. gracilis fue una especie sensible a los derivados aromáticos del hidrocarburo de petróleo (petróleo crudo, Diesel 2 y kerosene), por lo que puede ser utilizada como organismo prueba para evaluar la toxicidad de otros compuestos orgánicos acuáticos marinos, siguiendo las condiciones recomendadas. Se recomienda realizar estudios subletales para observar los efectos en largos periodos de tiempo, para evaluar el daño potencial causado por un evento de derrame o una descarga crónica y para predecir el valor de recuperación del medio afectado o impactado. 6 G. VERA, J. TAM Y E. PINTO Ecol. apl. Vol.8 No1, pp. 1-7 __________________________________________________________________________________________ Joubert G. 1980. A bioassay application for quantitative toxicity measurements using the green algae Selenastrum capricornutum. Water Res. 14: 17591763. Ministerio de Energía y Minas (MEM). 2006. Lotes con contratos para operaciones petroleras en el Perú. Atlas minería y energía en el Perú 2001. En línea: http://intranet2.minem.gob.pe/web/archivos/ogp/public aciones/atlasmineriaenergia2001/hidrocarburos/2001_l otes_cont_oper_petro.pdf. Ministerio de Salud (MINSA). 1969. Ley General de Aguas (D.L. 17752). El Peruano. Neff J. 1987. Biological Effects of Oil in the Marine Environment. 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