Efecto del genotipo y del tipo de explante sobre la obtención de vástagos de Paraíso (Melia azedarach L.) mediante el cultivo in vitro de explantes foliares1 Vila, Silvia K. - Rey, Hebe Y. - Mroginski, Luis A. Instituto de Botánica del Nordeste (IBONE) - Facultad de Cs. Agrarias - UNNE. Sargento Cabral 2131 - C.C. 209 - (3400) Corrientes - Argentina. Tel./Fax: +54 (03783) 427309 / 427131 E-mail: ibone@agr.unne.edu.ar 1. Trabajo parcialmente financiado por la Secretaría General de Ciencia y Técnica - UNNE ANTECEDENTES El paraíso (Melia azedarach L.) es una especie originaria del sur de Asia. En algunas regiones tiene relativamente fácil crecimiento (Pennington 1981). Es un árbol de uso ornamental y forestal que se destaca por las características tecnológicas de su madera (Mangieri et al. 1977). Debido a que se propaga por semillas, hay variabilidad en las poblaciones sembradas. Este inconveniente puede ser subsanado con la aplicación de métodos de multiplicación vegetativa como el cultivo in vitro de tejidos (Domecq 1988, Ahmad et al. 1990, Thakur et al. 1998, Shahzad & Siddiqui 2001). La producción de plantas a partir del cultivo in vitro de porciones de hojas de especies forestales Angiospermas ha sido poco frecuente (Thorpe et al. 1991), en el paraíso aun no se han publicado trabajos que informen acerca de la obtención de plantas a través del cultivo de hojas de plantas crecidas a campo. El propósito de este trabajo es estudiar el efecto del genotipo y del tipo de explante sobre la obtención de plantas, a partir del cultivo in vitro de porciones de hojas de paraíso gigante (Melia azedarach). MATERIALES Y METODOS Se ensayaron 7 clones de paraíso gigante (14, 24, 4, J1, J2, Lp y R). Se cultivaron porciones de folíolos (distal y proximal) y raquis secundario (Fig. 1) provenientes de hojas de 0,5 - 1; 2 - 4 y 10 cm de longitud, de plantas crecidas en macetas. Los explantes fueron desinfectados en etanol al 70% (10 seg), seguido de su inmersión en NaOCl al 0,27% + 2 gotas de Tween (5 min), finalmente fueron lavados, 4 veces, con agua destilada estéril. Los explantes fueron asépticamente cultivados sobre la combinación de sales minerales y vitaminas de Murashige y Skoog (1962), (MS) suplementado con 1 mg/L de bencilaminopurina (BAP) + 0,1 mg/L de cinetina (CIN) + 3 mg/L de hemisulfato de adenina (SA). La incubación de los cultivos fue hecha a 27 ± 2oC, mantenidos en oscuridad. Fig. 1 - Distintas porciones de hojas cultivadas in vitro Porción distal Raquis secundario Porción proximal RESULTADOS Y DISCUSION A los 35 días de cultivo fue posible apreciar la regeneración de vástagos a partir de porciones de hojas de paraíso. Si bien en todos los clones fue posible la obtención de vástagos, hubo gran variabilidad en cuanto al porcentaje de explantes con vástagos (3,3 - 30), dependiendo de los clones (Fig. 2). El número de vástagos por explante también fue variable entre los distintos genotipos ensayados (Fig 3). El clon que resultó ser el más apto, tanto en el porcentaje como en el número de vástagos obtenidos por explante, fue el clon 4 (Fig. 2 y 3). El mejor explante, independientemente del clon, fue el raquis secundario, incluso, en algunos clones, (J1, Lp y R) es el único explante que responde. En general, para todos los clones, los raquis secundarios de las hojas de 10 cm son las que produjeron mejores respuestas, sin embargo, con el clon 14 sólo hubo respuesta en las hojas de 0,5 cm de longitud. Cerca del 50% de los vástagos obtenidos, en la mayoría de los clones ensayados, enraizaron cuando se subcultivaron a un medio compuesto de MS + 2,5 mg/L de ácido indolbutírico (IBA), durante 4 días, y posteriormente a MS sin hormonas (Fig 4). Las plantas obtenidas fueron transferidas a macetas y mantenidas en invernáculo y luego fueron llevadas a campo. Fig. 4 - Efecto del genotipo sobre el enraizamiento de vástagos de paraíso. Enraizamiento (%) 100 75 50 25 0 4 24 J1 Lp J2 R 14 Clones CONCLUSIONES Se demuestra que existe variabilidad en cuanto a la capacidad organogénica entre los distintos clones, siendo el mejor el clon 4. Además, se determinó que, en la mayoría de los clones el mejor explante para la obtención de vástagos y posteriormente de plantas fue el raquis secundario de las hojas de 10 cm de longitud. BIBLIOGRAFIA Ahmad, Z., Zaidi, N., Shah, F.H. Pak. J. Bot. 22: 172-178, 1990. Domecq, C. Phyton 48: 33- 42, 1988. Mangieri, H.R.; Tinto, J.C.; Leonardis, R.J.; Alonzo, A.; Reuter, H.R. En: Libro del Árbol. Celulosa Argentina (ed.) Buenos Aires. III: 62, 1977. Murashige, T., Skoog, F. - Physiol. Plant. 15: 473-497, 1962. Pennington, T.D. Monograph No 28. Meliaceae. The New York Botanical Garden, New York: 24 - 25, 1981. Shahzad,A., Siddiqui S.A. Phytomorphology 51 (2): 151 - 154, 2001 Thakur, R., Rao, P.S., Bapat, V.A. Plant Cell Rep. 18: 127-131, 1998. Thorpe, T.A., Harry, I.S., Kumar, P.P. In: Debergh, P.C., Zimmerman, R.H. (ed.): Micropropagation. Pp. 311- 336. Kluwer Acad. Publ, Dordrecht 1991. Fig. 2 - Efecto del tamaño de explante y porción de la hoja cultivada sobre el porcentaje de obtención de vástagos de paraíso, en el medio MS + BAP 1mg/L + CIN 0,1 mg/L + SA 3 mg/L. Clon 24 80 60 40 20 0,5 - 1 2-4 40 20 0 0,5 - 1 2-4 Clon 4 Clon J1 Explantes con vástagos (%) 60 40 20 2-4 10 100 80 60 40 20 0 10 0,5 - 1 2-4 Tamaño de la hoja en cm Tamaño de la hoja en cm Clon 14 Clon Lp 100 10 100 80 60 40 20 0 60 Tamaño de la hoja en cm 80 0,5 - 1 80 Tamaño de la hoja en cm 100 0 100 10 Explantes con vástagos Explantes con vástagos (%) 0 Explantes con vástagos (%) Explantes con vástagos (%) 100 0,5 - 1 2-4 80 60 40 20 0 10 Tamaño de la hoja en cm Explantes con vástagos (%) Explantes con vástagos (%) Clon J2 0,5 - 1 2-4 10 Tamaño de la hoja en cm Clon R 100 80 60 40 20 0 0,5 - 1 2-4 10 Tamaño de la hoja en cm Porción proximal Porción distal Raquis secundario Fig. 3 - Efecto del tamaño de explante y porción de la hoja cultivada sobre el número de vástagos obtenidos, en el medio MS + BAP 1mg/L + CIN 0,1 mg/L + SA 3 mg/L. Clon J2 Clon 24 N de vástagos 8 6 4 2 0 4 2 0,5 - 1 2-4 0 10 0,5 - 1 2-4 Tama ño de la hoja en cm Tama ño de la hoja en cm Clon 4 Clon J1 N de vástagos 6 6 4 o o 4 2 2 0 0,5 - 1 2-4 0 10 0,5 - 1 2-4 10 Tama ño de la hoja en cm Tama ño de la hoja en cm Clon Lp Clon 14 8 N de vástagos 8 6 6 4 o 4 o N de vástagos 10 8 8 N de vástagos 6 o o N de vástagos 8 2 2 2-4 0 10 0,5 - 1 2-4 10 Tama ño de la hoja en cm Tama ño de la hoja en cm Clon R 8 6 4 o 0,5 - 1 N de vástagos 0 2 0 0,5 - 1 2-4 10 Tama ño de la hoja en cm Porción proximal Porción distal Raquis secundario