DrySpot Pneumo - Thermo Fisher Scientific

Key Code TSMX5773C
CA 1 855 805 8539
US 1 855 2360 190
ROW +31 20 794 7071
DrySpot Pneumo
DR0420M......................60 pruebas
ES
1.
Utilidad
“Oxoid DryspotTM Pneumo Test” es un ensayo de aglutinación de
látex para la detección del antígeno capsular de Streptococcus
pneumoniae, que permite una identificación rápida a partir de
aislados en placas de cultivo o hemocultivos..
2.
Fundamentos del Ensayo
Streptococcus pneumoniae es un patógeno primario productor
de neumonía bacteriana, meningitis y otitis media. Uno de
los elementos clave en la virulencia del microorganismo lo
constituyen las propiedades antifagocíticas de la cápsula
compuesta de polisacáridos1. El neumococo puede hallarse
como comensal inocuo en el tracto respiratorio superior, pero
puede llegar hasta los pulmones por aspiración y provocar una
neumonía aguda. Además, desde los pulmones puede invadir
el torrente circulatorio y las meninges, provocando infecciones
agudas purulentas muy graves2.
“Oxoid Dryspot Pneumo Test” utiliza partículas de látex azul
sensibilizadas y desecadas en tarjetas, que reaccionan con
la mayoría de los serotipos conocidos de neumococo3,4. Las
partículas de látex aglutinan en presencia de una concentración
suficiente de antígeno y forman grumos visibles. El ensayo
proporciona, por tanto, un procedimiento rápido y sensible de
cribado de la presencia de Streptococcus pneumoniae en cultivos.
3.
Componentes del Equipo (DR420M)
DR421M – Tarjetas con Reactivo Dryspot Pneumo
Partículas de látex azul recubiertas de anticuerpos de conejo
reactivos contra los serotipos conocidos de neumococo y
desecadas en la tarjeta (Area de Prueba).
Partículas de látex azul con globulina no reactiva (Area de Control).
Dos bolsas, cada una con 10 tarjetas y un saquito deshumectante.
En cada tarjeta hay 3 Areas de Ensayo y 3 Areas de Control – 60
pruebas en total.
DR422M – Tiras de Control Positivo (10 tiras – manchas rosas)
Extracto antigénico de Streptococcus pneumoniae teñido de rosa.
DR423M – Tiras de Control Negativo (10 tiras – manchas verdes)
Extracto inactivado de Aerococcus viridans teñido de verde.
Tampón fosfato salino (PBS) Ph 7,3 (+/–)
Contiene 0,095% de azida sódica como conservante.
Espátulas mezcladoras
Folleto de instrucciones
2 broches (clips) para cerrar las bolsas.
8.
Notas Importantes al Procedimiento
No se debe tocar los círculos de las tarjetas ya que pueden
contaminarse y afectar a los resultados.
Asas microbiológicas estériles
En ambientes muy húmedos no se debe dejar las bolsas abiertas
más de 2 minutos. No utilice las tarjetas si hay evidencia de
humedad en las manchas de las áreas de reacción.
Desinfectante de laboratorio, p.e. solución de hipoclorito sódico
>1,3% p/v
www.oxoid.com/ifu
Europe +800 135 79 135
4.
Material Necesario No Suministrado
Solución salina (Cloruro sódico al 0,9% en agua destilada o
desionizada)
Centrífuga.
5.
Precautions
Este producto es para uso diagnóstico in vitro
exclusivamente.
Las muestras pueden contener microorganismos patógenos, por
lo que se deben manejar con las precauciones adecuadas.
6.
Storage and Opening
El equipo se debe conservar entre 2 y 25°C. Si se conserva
refrigerado, se debe dejar que las bolsas se atemperen antes de
abrirlas, para evitar la condensación de humedad en las tarjetas.
Los reactivos Dryspot se deteriorarán y podrán dar resultados
falsos si absorben humedad.
No se debe añadir la solución salina directamente sobre las
manchas con látex desecado.
Se recomienda guardar los broches de plástico para cerrar las
bolsas para usos posteriores, como tener abiertos múltiples
paquetes. Si bien se pueden conservar a temperatura ambiente,
tanto los equipos como las bolsas no deben almacenarse cerca de
fuentes de calor, ni tampoco en sitios donde la exposición a la luz
solar pueda provocar temperaturas elevadas.
9.
Toma y Preparación de la Muestra
A. Cultivo
Para unas instrucciones detalladas de recogida y preparación de
las muestras consúltese un manual estándar5.
Abra las bolsas cortando con tijeras por debajo del área sellada.
Se puede analizar colonias de gérmenes -hemolíticos, grampositivos,
catalasa-negativos, aisladas en los siguientes medios de cultivo:
Una vez abierta la bolsa, extraiga las tarjetas necesarias para los
análisis inmediatos (a realizar en 10 minutos) y vuelva a sellar la
bolsa con uno de los broches de plástico suministrados.
Agar Sangre, Agar Triptona Soja con 5% de sangre, Agar Columbia
con Sangre, Agar Columbia CNA, Agar Chocolate.
Si se han de realizar menos análisis de los posibles en una
tarjeta, ésta se puede cortar por las líneas indicadas y devolver
a la bolsa la parte que no se ha de utilizar. No devuelva nunca a
la bolsa tarjetas o porciones usadas, puesto que provocarían la
contaminación de las remanentes no utilizadas.
Las tiras de Control vienen también suministradas en bolsas
impermeables a la humedad y se debe seguir las mismas
precauciones que con las tarjetas, a fin de evitar el deterioro
provocado por la condensación de humedad.
Si se conservan en las condiciones indicadas, los reactivos
mantendrán su actividad hasta la fecha de caducidad impresa en
la caja del equipo.
7.
Procedimientos de Control
Añada una gota de 50 μl de solución salina al círculo pequeño
de la base del área oval de reacción. Extraiga una Tira de Control
Positivo de su bolsa, separándola del resto por la línea perforada,
con cuidado de no tocar el extremo flexible donde se encuentran
las manchas secas. Cierre de nuevo las bolsas interior y exterior.
Gire la tira y colóquela sobre la tarjeta, de modo que las manchas
estén en contacto con el líquido. Presione para que el extremo
de la tira se doble por la línea de articulación premarcada y
mezcle con movimiento circular durante 10 segundos, a fin de
rehidratar el reactivo desecado. Con la misma tira extienda el
líquido por toda el Area de Prueba hasta que todos los reactivos
estén completamente rehidratados y formen una suspensión
homogénea. Rote a mano la tarjeta con un movimiento circular y
observe la aparición de aglutinación. Este mismo procedimiento
debe repetirse con una tira de control negativo.
El control positivo debe producir aglutinación en un lapso de 60
segundos.
El control negativo no debe producir aglutinación en un lapso de
60 segundos.
No utilice el equipo si las reacciones de los controles son
incorrectas.
Se recomienda el uso de cultivos frescos de 18–36 horas de
incubación. La tendencia de los gérmenes a la autoaglutinación
aumenta con periodos de incubación de más de 36 horas.
B. Hemocultivos
Se puede tomar una muestra para analizar de hemocultivos a
partir de 18–24 horas de incubación, o tan pronto como se detecte
crecimiento bacteriano. La presencia posible de Streptococcus
pneumoniae se debe confirmar mediante una tinción de Gram.
10.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
11.
1.
Método de Ensayo – Cultivo
Añada una gota (50 μl) de solución salina (0,9%) al círculo
pequeño (del fondo de cada área oval), tanto al Area de
Prueba como a la de Control, evitando que el líquido se
mezcle con los reactivos de látex desecado.
Mediante un asa microbiológica estéril, o una de las
espátulas suministradas, tome varias de las colonias a
identificar del medio de cultivo y aplíquelas sobre el Area
de Control. Emulsione las colonias en la solución salina
hasta obtener una suspensión ligeramente opalescente.
Asegúrese de que la suspensión es uniforme (lisa).
Mediante el asa microbiológica o la espátula, mezcle la
suspensión obtenida con las manchas de látex desecado
hasta su completa resuspensión y extiéndala hasta cubrir
toda la superficie del área de reacción. Deseche el asa o la
espátula de acuerdo con el procedimiento apropiado.
Usando un asa o espátula nueva, proceda del mismo modo
con el Area de Prueba.
Rotar manualmente la tarjeta durante 60 segundos,
observando la aparición de aglutinación bajo condiciones
normales de iluminación. No utilice lupas.
Una vez completado el ensayo, deseche las tarjetas en un
contenedor con desinfectante.
Método de Ensayo – Hemocultivos
Centrifugue una alícuota de 1–2 ml a fin de sedimentar
las células sanguíneas, por ejemplo a 1000 g durante 5–10
minutos. Realice el ensayo de aglutinación de látex con el
sobrenadante.
2.
Añada una gota del sobrenadante en el círculo pequeño (del
fondo de cada área oval) de ambas Areas de Reacción, de
Prueba y de Control, evitando que el líquido se mezcle con
los reactivos de látex desecados.
3.
Mediante un asa microbiológica estéril, o una de las
espátulas suministradas, mezcle el sobrenadante con el
reactivo de látex del Area de Reacción de Control hasta su
total disolución. Deseche el asa o la espátula de acuerdo
con el procedimiento apropiado.
4.
Usando un asa o espátula nueva, proceda del mismo modo
con el Area de Prueba.
5.
Rotar manualmente la tarjeta durante 60 segundos,
observando la aparición de aglutinación bajo condiciones
normales de iluminación. No utilice lupas.
6.
Una vez completado el ensayo, deseche las tarjetas en un
contenedor con desinfectante.
7.
La presencia de Streptococcus pneumoniae en hemocultivos
positivos en este ensayo de aglutinación de látex, se debe
confirmar mediante una tinción de Gram de una extensión
del sedimento.
12.
Lectura e Interpretación de los Resultados
Resultado Positivo
El resultado es positivo si se observa una aglutinación de las
partículas de látex en el Area de Reacción de Prueba, en un plazo
de 60 segundos para la confirmación de cultivos y de 2 minutos
para los hemocultivos. Este resultado es indicativo de presencia
de Strep. pneumoniae.
Resultado Negativo
El resultado es negativo si no se observa una aglutinación de las
partículas de latex en al Area de Reacción de Prueba, en un plazo
de 60 segundos para la confirmación de cultivos y de 2 minutos
para los hemocultivos.
Cualquier reactividad que pueda producirse más allá de los plazos
indicados debe ser ignorada.
Resultado Ininterpretable
El ensayo es ininterpretable si aparece aglutinación con el
Reactivo de Control, lo que es indicativo de que el cultivo es
autoaglutinante.
Reacciones Granulares o Filiformes
En ocasiones se pueden observar reacciones granulares o
filiformes, debido a la naturaleza particulada de la muestra. Estas
reacciones se deben interpretar de acuerdo con los criterios
siguientes:
El resultado es positivo cuando se observa una mayor
transparencia del fondo azul con el Reactivo de Prueba que con
el Reactivo de Control.
El resultado es negativo cuando no hay diferencia en la
transparencia del fondo azul entre el Reactivo de Prueba y el
Reactivo de Control.
13.
Limitaciones
Las espátulas mezcladoras suministradas no son estériles. Se
pueden esterilizar mediante autoclave si se considera necesario.
Dryspot Pneumo Test proporciona un resultado presuntivo. Los
resultados positivos se han de confirmar mediante pruebas
bioquímicas.
La positividad en los hemocultivos depende de la presencia de
un nivel detectable de antígeno en el medio del hemocultivo. Los
ensayos realizados en muestras clínicas se deben considerar sólo
como ensayos de cribado y no deben sustituir a los procedimientos
completos de cultivo.
Se pueden producir reacciones falsas negativas en caso de utilizar
un número insuficiente de colonias para el ensayo. Si no se
dispone de un número suficiente de colonias, se debe proceder a
realizar una resiembra y subcultivo del aislado, a fin de disponer
de material suficiente para el ensayo.
Las razas de neumococo que no poseen antígeno capsular no
pueden ser identificadas mediante técnicas inmunológicas.
Se pueden encontrar reacciones falsas positivas con algunas razas
de estreptococos Grupo G, Streptococcus mitis, Streptococcus
mitori, Streptococcus sanguis y Streptococcus oralis6. Además,
se han observado reacciones serológicas cruzadas entre el
neumococo y algunas bacterias gramnegativas, como E. coli,
Klebsiella sp. y H. influenzae7,8.
14.
CaRaCteRÍstiCas de FunCionamiento
muestras de Cultivos
El Centro Nacional de Referencia de Estreptococos y Difteria del
Reino Unido realizó una evaluación del Dryspot Pneumo kit9. Se
utilizaron cultivos en agar Columbia con 5% de sangre de caballo
de 216 razas (144 de Streptococcus pneumoniae y 72 de otras
especies). Tras la incubación, los cultivos puros se analizaron con
el Dryspot Pneumo kit y con otro equipo de aglutinación de látex
disponible comercialmente.
La sensibilidad del Dryspot Pneumo kit fue del 96,9% y la
especificidad del 93,2%. Trece razas de las otras especies dieron
un resultado inintrepretable (aglutinación del látex de control)
con el Dryspot Pneumo y 16 con el otro equipo de aglutinación
de látex. De las cuatro razas de otras especies que dieron un
resultado falso positivo con Dryspot Pneumo, tres correspondían
a microorganismos con reactividad serológica cruzada conocida
con Streptococcus pneumoniae6. El funcionamiento de Dryspot
Pneumo fue equivalente o mejor que el del otro equipo evaluado.
muestras de Hemocultivos
También se evaluó el funcionamiento del Dryspot Pneumo para la
detección de Streptococcus pneumoniae a partir de hemocultivos,
en este caso en Oxoid Ltd9. La evaluación se realizó inoculando
botellas de hemocultivo de Oxoid Signal y de otras dos marcas
disponibles comercialmente, con 37 razas de Streptococcus
pneumoniae y 35 de otras especies. Tras la incubación, los cultivos
se analizaron con el Dryspot Pneumo kit y con otros dos equipos
de aglutinación de látex de adquisición comercial.
Con los hemocultivos Oxoid Signal, la sensibilidad del Dryspot
Pneumo kit fue del 97,3% y la especificidad del 96,8%. Los
resultados con los otros hemocultivos fueron similares. Cuatro
razas de las otras especies dieron un resultado ininterpretable
con los tres equipos en los tres tipos de hemocultivo.
El funcionamiento de Dryspot Pneumo kit fue equivalente o
mejor que el de los otros equipos evaluados.
15.
ReFeRenCias
1.
Kalin, M. (1998). Thorax 53: 159–162.
2.
Feldman, C. and Klugman, K. (1997). Current opinions in Infectious
Diseases 10: 109–115.
3.
Henrichsen, J. (1995). J. Clin. Microbiol. 33: 2759–2762.
4.
Lee, P, and Wetherall, B. L. (1987). J. Clin. Microbiol. 25: 152–153.
5.
Miller, M. M. and Holmes, H. T. (1999). In Manual of Clinical
Microbiology. Murray, P. R., Baron, E. J., Pfaller, M. A., Tenover, F. C.
and Yolken, R. H. (ed) Seventh Edition. p. 33–63. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
6.
Cowan, S. T. and Steel, K. J. (1965). Characters of Gram-positive
bacteria. In Manual for the identification of Medical Bacteria. Barrow,
G. I. and Feltham, R. K. A. (ed) Third Edition. p. 50–90. Cambridge
University Press. Cambridge, U.K.
7.
Kilpper-Bälz, R., Wenzig, P. and Schleifer, K. H. (1985). Int. J. System.
Bacterial. 35: 482–488.
8.
Lund, E. and Henrichsen, J. (1978). Chapter XI: 241–262. Methods in
Microbiology XII, ed. Bergan and Norris, Academic Press, Orlando.
9.
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