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RESOLUCIÓN OENO 6/2006
DOSIFICACIÓN DE LOS ÁCIDOS SÓRBICO, BENZOICO Y SALICÍLICO EN LOS VINOS POR
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO
LA ASAMBLEA GENERAL,
En virtud del artículo 2 párrafo 2 iv del acuerdo del 3 de abril de 2001 sobre la creación
de la Organización Internacional de la Viña y el Vino
A propuesta de la Subcomisión de métodos de análisis y de valoración de los vinos,
DECIDE remplazar el punto 2.2.2 A del método AS 4-02 RECANT que figura en el
Compendio de los métodos internacionales de análisis de los vinos y de los mostos por la
referencia al método de tipo IV siguiente:
TÍTULO
TIPO DE MÉTODO
Dosificación de los ácidos sórbico, benzoico y salicílico en
los vinos por cromatografía líquida de alto rendimiento
IV
1. Introducción
El ácido sórbico y su sal de potasio es un antiséptico utilizable en enología, pero
algunos países no toleran su presencia en los vinos, ni siquiera en estado de traza. Esto
se justifica, en particular, debido al olor de geranio que aparece durante la degradación
del ácido sórbico por las bacterias lácticas. Los ácidos benzoico y salicílico están siempre
prohibidos en los vinos, pero se utilizan en otras bebidas.
2. Ámbito de aplicación
Todos los vinos o mostos de uva, en particular los que son susceptibles de
contener únicamente trazas de ácido sórbico, benzoico o salicílico (puesta en evidencia a
partir de 1 mg/l).
3. Principio
Los antisépticos se dosifican por CLAR por inyección directa de la muestra en una
columna en modo isocrático con detección en la luz ultravioleta a 235 nm.
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4. Productos
4.1
4.2
4.3
4.4
4.5
Agua pura microfiltrada (por ejemplo de resistividad superior a 18,2 MΩ)
Tetrahidrofurano puro
Metanol puro
Ácido clorhídrico 0,1 M (preparado a partir de ampollas para diluir)
Agua con pH2. Lleve 650 ml de agua (4.1) a un pH = 2 controlado mediante
el pH - metro (5.5) vertiendo gota a gota sin agitación el ácido clorhídrico 0,1
M (4.4)
4.6 Solución de elución. Mezcle 650 ml de agua de pH = 2 (4.5), 280 ml de
metanol (4.3) y 7 ml de tetrahidrofurano (4.2)
Observación: es igualmente posible utilizar otros solventes de elución, por
ejemplo 80% de una solución de acetato de amonio 0,005M (0,38 g/l)
ajustada a pH = 4 con ácido acético puro + 20% de acetonitrilo.
4.7 Ácido sórbico puro
4.8 Ácido benzoico puro
4.9 Ácido salicílico puro
4.10 Alcohol puro
4.11 Solución hidroalcohólica al 50 % vol. Coloque 500 ml de alcohol puro (4.10)
en un matraz de 1 l completado con agua destilada (4.1)
4.12 Solución madre de los ácidos de 500 mg/l. Disolver 50 mg de los ácidos
sórbico (4.7), benzoico (4.8) y salicílico (4.9) en 100 ml de la solución
hidroalcohólica de 50 % vol. (4.11)
4.13 Solución hija de los ácidos sórbico, benzoico y salicílico. Diluya la solución
madre (4.12) en la solución hidroalcohólica (4.11) para obtener las
concentraciones finales deseadas. Por ejemplo, para una solución a
- 200 mg/l, coloque 20 ml de la solución madre (4.12) en un matraz de 50 ml
y complete hasta enrasado con 4.11.
- 1 mg/l, coloque 2 ml de solución madre 4.12 en un matraz de 50 ml y
complete hasta enrasado con 4.11.
Pueden realizarse soluciones intermedias del mismo modo según las
necesidades de calibrado.
5. Material
5.1 Vidriería de laboratorio, en particular pipetas y matraces aforados
5.2 Baño de ultrasonidos
5.3 Dispositivo de filtrado al vacío para volúmenes grandes (1 l) que utilice
membranas filtrantes de diámetro de poro inferior a 1 µm (generalmente,
0,45 µm)
5.4 Minifiltro para muestra (1 a 2 ml) que utilice membranas filtrantes de
diámetro de poro inferior a 1 µm (generalmente, 0,45 µm)
5.5 pHmetro
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5.6 Cromatógrafo en fase líquida que funcione en modo isocrático provisto de un
dispositivo de inyección para volúmenes bajos (por ejemplo, válvula de bucle
de 10 o 20 µl).
5.7 Detector que pueda funcionar en la luz ultravioleta a 235 nm provisto de una
cubeta de circulación para CLHP (por ejemplo, de 8 µl para 1 cm de trayecto
óptico)
5.8 Columna para CLHP de fase estacionaria de 5 µm tipo sílice con grupos
octadecilos (C18) ligados químicamente injertados de 20 cm de longitud y 4
mm de diámetro interior.
5.9 Sistema de adquisición de datos
6. Preparación de las muestras y del solvente de elución
6.1 Filtre las muestras a analizar mediante el minifiltro (5.4)
6.2 Desgasifique el solvente de elución (4.6) durante 5 minutos mediante el baño
de ultrasonidos 5.2
6.3 Filtre el solvente mediante el dispositivo 5.4
7. Modo de operar
7.1 Acondicionamiento de la columna. Antes de la inyección, ponga en marcha la
bomba y limpie la columna con el solvente durante al menos 30 minutos
7.2 Inyecte una de las soluciones hija (4.13) para asegurarse de la sensibilidad
del sistema y de la correcta resolución de los picos de las sustancias a
analizar.
7.3 Inyecte la muestra a analizar y, eventualmente, analice una muestra idéntica
a la que se hayan añadido los ácidos buscados (adapte la adición a la cantidad
eventualmente descubierta durante el análisis anterior; para 1 mg presente,
añada también 1 mg…)
Asegúrese de la correcta resolución de los picos de los ácidos buscados con los
picos del vino (normalmente, no existen en esta zona)
8. Cálculo
Una vez identificados los picos de los ácidos a cuantificar en la muestra, compare
el área de los picos con las de los ácidos de una solución hija (4.13) de
concentración C conocida.
Por ejemplo, sea s el área del pico del ácido a cuantificar y S el área del pico de la
solución (4.13) de concentración C
X
en la muestra
= C×
s
S
en mg/l
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9. Características del método:
Acido sórbico
Acido benzoico
Acido salicílico
0 à 200 mg/l
0 à 200 mg/l
0 à 200 mg/l
> 90 %
> 90 %
> 90 %
Repetibilidad: r*
2%
3%
8%
Reproductibilidad : R*
8%
9%
12%
Límite de detección
3 mg/l
3 mg/l
3 mg/l
Límite de cuantificación
5 mg/l
6 mg/l
7 mg/l
11%
12%
13%
Rango de linearidad
Recuperación
Incertidumbre
Bibliografía
- Dosage de l'acide sorbique dans les vins par chromatographie en phase gazeuse. 1978.
BERTRAND A. y SARRE Ch., Feuillets Verts O.I.V., 654-681.
- Dosage de l'acide salicylique dans les vins par chromatographie en phase gazeuse.
1978. BERTRAND A. y SARRE Ch., Feuillets Verts Ol.V., 655-682.
- Dosage de l'acide benzoïque, dans les sodas et autres produits alimentaires liquides,
par chromatographie en phase gazeuse. 1978. BERTRAND A. y SARRE Ch. Ann. Fals.
Exp. Chim. 71, 761, 35-39.
- Application de la chromatographie liquide à l’analyse des vins et des moûts. 1979,
SALAGOITY-AUGUSTE M.-H. Doctorat de l’Université de Bordeaux 2
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