SEROPOSITIVIDAD CONTRA EL VIRUS DE ANEMIA INFECCIOSA EQUINA EN 13 MUNICIPIOS DEL DEPARTAMENTO DE CASANARE, CREACIÓN DE UN MAPA DE RIESGOS. Jorge Alejandro Rodríguez Palacios, Silvana Paerez Carvajal TRABAJO DE GRADO Presentado como requisito parcial Para optar el titulo de Microbiólogo Agrícola y Veterinario PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS CARRERA DE MICROBIOLOGÍA AGRÍCOLA Y VETERINARIA Bogota D.C 14 Agosto de 2007 NOTA DE ADVERTENCIA Artículo 23 de la Resolución N° 13 de Julio de 1946 “La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en sus trabajos de tesis. Solo velará por que no se publique nada contrario al dogma y a la moral católica y por que las tesis no contengan ataques personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo de buscar la verdad y la justicia”. II SEROPOSITIVIDAD DE ANEMIA INFECCIOSA EQUINA EN 13 MUNICIPIOS DEL DEPARTAMENTO DE CASANARE CREACION DE UN MAPA DE RIESGO JORGE ALEJANDRO RODRIGUEZ, SILVANA PAEREZ CARVAJAL APROBADO ________________________ ________________________ GUSTAVO ARBELAEZ RENDON LAUREN ELIANA MESA MESA Medico veterinario Zootecnista Director ________________________ ADRIANA PULIDO, Bacterióloga Jurado Bacteriologa Codirector ________________________ FREDY GAMBOA, Bacteriólogo Jurado III SEROPOSITIVIDAD CONTRA EL VIRUS DE ANEMIA INFECCIOSA EQUINA EN 13 MUNICIPIOS DEL DEPARTAMENTO DE CASANARE CREACION DE UN MAPA DE RIESGO JORGE ALEJANDRO RODRÍGUEZ PALACIOS, SILVANA PAEREZ CARVAJAL APROBADO ________________________ ANGELA UMAÑA MUÑOZ Decano Académico ________________________ DAVID GÓMEZ MENDEZ, Director de Carrera IV DEDICATORIA Esta tesis es una parte de nuestra vida y comienzo de otras etapas por esto y más, se la dedicamos a Dios y principalmente a nuestros padres que nos dieron la vida y que han estado con nosotros en cada momento, gracias por todo papa y mama por darnos una carrera para nuestro futuro y por creer en nosotros, este trabajo que nos llevo 1 año y medio hacerlo es para ustedes y es solamente una forma de devolver toda lo que nos han dado. A nuestros profesores por confiar en nosotros, a David Gómez por apoyarnos en los momentos difíciles y por tenernos la paciencia necesaria, agradecemos el haber tenido unos profesores tan buenas personas como lo son ustedes, nunca los olvidaremos. AGRADECIMIENTOS V Damos gracias a Dios por habernos dado la posibilidad de seguir con los estudios de pregrado, habernos bendecido y dado la sabiduría necesaria. A nuestros padres que nos dieron el apoyo necesario para poder llevar a cabo esta carrera. Al Instituto Colombiano Agropecuario “ICA” Seccional Casanare, lugar de pasantia por 6 meses, en el cual hemos tenido la oportunidad de laborar y nos aportaron todo lo necesario para este estudio. Al doctor Gustavo Arbelaez, por dirigir nuestra tesis y aportarnos toda su experiencia laborar y su preparación académica. A la Doctora Lauren Eliana Mesa, bacterióloga egresada de la Pontificia Universidad Javeriana, por su colaboración y aporte de experiencia en Anemia Infecciosa Equina. Al Doctor Edgar Augusto Lozano, veterinario egresado de la Universidad Unillanos, por su aporte en epidemiologa animal y en la terminación de la tesis. A los docentes de la Carrera, por el tiempo dedicado y todos los conocimientos que dieron de la forma más profesional y con una calidad humana que los caracterizó. En general a todas las instituciones, organismos, archivos, bibliotecas, que de alguna manera contribuyeron a facilitar el acceso a la información requerida para alcanzar los objetivos trazados en la tesis. Finalmente, a todas aquellas personas, colegas y amigos que nos brindaron su apoyo tiempo e información para el logro de nuestros objetivos. 14 de agosto 2007 VI TABLA DE CONTENIDOS 1. RESUMEN ......................................................................................................... IX 2. INTRODUCCION .................................................................................................1 3. MARCO TEÓRICO Y REVISIÓN DE LITERATURA...........................................2 3.1. Generalidades del departamento de Casanare.........................................2 3.2. Anemia Infecciosa Equina ..........................................................................5 3.3. Retrovirus ....................................................................................................6 3.3.1 Estructura Genetica ..............................................................................7 3.3.2 Ciclo de replicacion...............................................................................7 3.3.3 Reservorios del virus ............................................................................9 3.3.4 Patogenesis ...........................................................................................9 3.4. Poblacion hospedadora............................................................................10 3.5. Formas de Presentación Clínica ..............................................................11 3.6. Transmision ...............................................................................................12 3.6.1 Transmision natural ............................................................................13 3.6.2 Transmision mecanica........................................................................13 3.6.3 Otras vias ............................................................................................14 3.7 Diagnostico de laboratorio ........................................................................15 3.7.1 Test de coogins ...................................................................................16 3.8. Medidas de prevención y control.............................................................19 3.8.1 aplicación de medidas de prevención ...............................................19 3.9. Epidemiologia en programas de Salud ...................................................20 3.10. Sistemas de Informacion Geografica ....................................................22 3.11. GPS...........................................................................................................24 4. FORMULACIÓN Y JUSTIFICACION ................................................................25 5. OBJETIVOS GENERALES Y ESPECÍFICOS...................................................27 5.1. OBJETIVO GENERAL................................................................................27 5.2. OBJETIVO ESPECÍFICOS .........................................................................27 6. HIPOTESIS........................................................................................................28 7. MATERIALES Y METODOS .............................................................................28 7.1. Diseño de la investigacion .......................................................................29 7.2. Poblacion de estudio y muestra ..............................................................29 7.3. Variables del estudio.................................................................................30 7.4. Metodos......................................................................................................31 7.4.1 Toma y Conservación de muestras ...................................................31 7.4.2 Procesamiento de los sueros ............................................................31 7.4.3 Obtención de muestras y preparación para el análisis....................32 7.4.4 Colocación del suero y el antigeno en los pocillos..........................33 7.4.5 Medicion de resultados......................................................................35 7.5. Recoleccion de la informacion.................................................................35 7.5.1 Identificación de las muestras ...........................................................36 7.6. Análisis de la informacion ........................................................................36 8. RESULTADOS Y DISCUSION ..........................................................................37 8.1. Dificultades durante la toma de muestras ..............................................37 8.2. Resultados de porcentaje de seropositividad ........................................39 8.3. comparacion de animales muestreados y seropositivos ......................39 8.4. Muestras seropositivas según sexo ........................................................42 8.5. Influencia de vectores...............................................................................43 8.6. Observación de sintomatologia ...............................................................44 8.7. Análisis del mapa de riesgos ...................................................................44 9. CONCLUSIONES ..............................................................................................46 10. RECOMENDACIONES....................................................................................47 11. BIBLIOGRAFIA ...............................................................................................49 12. ANEXOS..........................................................................................................52 12.1.Resolucion AIE .........................................................................................50 12.2. Protocolo de toma de muestras.............................................................52 12.3. Mapa de riesgos ......................................................................................53 2 1. RESUMEN Se realizó un estudio serológico sobre la Anemia Infecciosa Equina en 13 municipios del departamento del Casanare, a fin de conocer la seropositividad de los animales. Para ello se recolectaron 4400 muestras de sueros de equinos. Se procesaron utilizando el test de Coggins para detectar la presencia de anticuerpos específicos para la proteína p26, la cual hace parte de la nucleocapside del virus y se creo un mapa de riesgos para determinar áreas susceptibles y endémicas; detectándose un promedio de porcentaje de positividad del 18.4%, siendo mayor al 20% en los municipios de Nunchia, Trinidad, Orocue y Monterrey, Se observó que no existe una relación directa entre los municipios de mayor población de animales y las proporciones de seropositivos, al igual que mas hembras seropositivas; además se encontró que en los municipios Nunchia, Pore, Hato corozal existe un alto riesgo de enfermedad. Estos resultados y el sistema cartográfico sugieren que la mayoría de las poblaciones de los municipios muestreados han estado expuestas a este virus y la positividad indica una infección activa en los equinos, formulando estrategias inmediatas de control y prevención de la diseminación del virus. Palabras clave: Anemia infecciosa equina, sistema de ubicación geográfica, seropositividad. ABSTRACT A serological study of the equine infectious anemia was performed in 13 municipalities of the Casanare region of Colombia, in order to assess the seropositivity of the illness. For this purpose, 4400 samples from equine serums were collected. These were processed using the Coggins test to detect the presence of specific antibodies for the p26 protein, which is part of the virus nucleocapsid, and a risk map was layed in order to determine areas 3 of susceptibility and endemicity. An average positivity of 18.4 % was detected. Being more than 20%in the municipalities of Nunchia, Trinidad, Orocue and Monterrey. There is not an relationship was observed between the municipalities with the biggest animal populations and the proportions of seropositivas, wich likewise has more seropositive females. It was also found that in the municipalities have been exposed to this virus and prevention strategies for the virus dissemination were formulet. Key words: equine infectious anemia, seropositivity, Geographic system information. 4 2. INTRODUCCIÓN La Anemia Infecciosa Equina (AIE) es una enfermedad viral de baja mortalidad, extremadamente contagiosa y potencialmente fatal que ataca a especies de equidos como: caballos, mulas, y asnos. El virus de la AIE está clasificado como un retrovirus: contiene ácido ribonucleico, material genético con el cual produce el ácido desoxiribonucleico. Este RNA luego se incorpora dentro del mapa genético de las células infectadas. A la AIE se le conoce también como fiebre de los pantanos, fiebre malaria, fiebre de la montaña, fiebre lenta, fiebre baja, fiebre tifoidea de los caballos, anemia perniciosa de los equinos o zurra americana, entre otros nombres. Se caracteriza por una evolución crónica con períodos de agudización con fiebre, abatimiento, anemia y edemas. La transmisión de la enfermedad se realiza principalmente por medio de picaduras producidas por artrópodos hematófagos (Tabanus, Stomoxys, Aedes y Anopheles), o mediante agujas e implementos quirurgicos entre otros. La enfermedad se puede presentar de distintas formas, desde una sobreaguda, donde la enfermedad se desarrolla súbitamente y culmina con la muerte del animal, hasta una forma inaparente que no presenta síntomas y persiste toda la vida. La AIE es históricamente importante porque es la primera enfermedad equina, la cual se ha comprobado que es causada por un "virus filtrable," y que puede sobrevivir y mantenerse infeccioso aún pasándolo a través de un procedimiento de filtro especial de laboratorio. De acuerdo con los médicos veterinarios, la solución es sacrificar los animales que resulten positivos en el test de Anemia Infecciosa Equina, teniendo en cuenta que no existe una vacuna que proteja contra este mal; sin embargo, el valor económico o sentimental que los dueños le profesan a los animales impide esta práctica, así sean fuentes de infección para otros ejemplares sanos. 1 Las acciones reglamentarias principales para controlar a la AIE en País son llevadas a cabo por el Instituto Colombiano Agropecuario (ICA). Regidas por la RESOLUCION 001096 del 4 Abril del 2005; Por la cual se establecen medidas sanitarias para la prevención y control de la anemia Infecciosa Equina en la República de Colombia. Sin embargo no se sabe con exactitud si todas estas acciones para controlar la diseminación de la enfermedad han sido satisfactorias; pues no se ha realizado un estudio para medir la presencia de esta enfermedad en el Departamento, siendo muy importante para determinar si es necesario facilitar la creación de un programa de control contra la AIE y para permitir el transporte de caballos entre un Departamento y otro, incluyendo la movilización de los equinos dentro de este. El estudio que se realizó muestra la importancia que tiene este tipo de animales en los municipios analizados, ya que para muchos son el único sustento y medio de transporte de familias enteras, que viven en predios con un tamaño considerable y zonas alejadas de los municipios y que dependen de ellos para sostenerse y para poder sobrevivir día a día. Por ello el objetivo de este estudio fue analizar la seropositividad de Anemia Infecciosa equina en los municipios de Yopal, Aguazul, Paz de Ariporo, Pore, Nunchia, Villanueva, Tauramena, Monterrey, Orocue, Mani, Trinidad, San Luis de Palenque y Hatocorozal en el Departamento de Casanare y establecer un mapa de riesgos. 3. MARCO TEÓRICO Y REVISIÓN DE LITERATURA 3.1 Generalidades del Departamento del Casanare 2 Ubicación y localización geográfica: Departamento situado en el oriente del país, región de la Orinoquia, localizado entre los 04º 17' 25" y 06º 20' 45" de latitud norte y los 69º 50' 22" y 73º 04' 33" de longitud oeste. Extensión y límites: La superficie es de 44.640 km2, y limita por el norte, con el río Casanare, que lo separa del departamento de Arauca; por el este, con el río Meta que lo separa del departamento de Vichada; por el sur, con los ríos Upía y Meta, el último de los cuales lo separa del departamento del Meta; y por el oeste, con los departamentos de Boyacá y Cundinamarca. Geografía física: El territorio está constituido por tres conjuntos fisiográficos. La parte montañosa, en el occidente, comprende áreas desde el límite con el piedemonte hasta los 4.000 metros sobre el nivel del mar; se caracteriza por sus cumbres montañosas, con pajonales y frailejones y vertientes abruptas fuertemente disectadas. El área de piedemonte, conformada por abanicos, terrazas disectadas y colinas, se caracteriza por su relieve plano a ondulado. La llanura aluvial, que se extiende desde el fin de piedemonte hasta límites con los departamentos de Vichada y Meta, está conformada, a su vez, por sabanas inundables, bosques de galería en los grandes ríos Pauto, Cusiana, Casanare, y llanura eólica en el centro y sur. La red hidrográfica integrada por los grandes ríos, quebradas, caños y lagunas, desagua en dirección del Orinoco por intermedio del río Meta, el cual recibe las aguas de la totalidad del Departamento, y tiene como principal afluente el río Casanare que, a su vez, recoge las aguas del río Ariporo y otras corrientes menores. Además de los afluentes mencionados, se destacan los ríos Upía, Túa, Cusiana, Cravo Sur, Guanápalo, Pauto, Guachiría y Agua Clara. Clima: Los vientos alisios del nordeste y del sureste, la Zona de Convergencia Intertropical (ZCIT) y la presencia de la cordillera Oriental, son los factores principales que determinan el comportamiento climático del 3 Departamento. El área más lluviosa está ubicada entre el piedemonte y la vertiente baja de la cordillera; una franja de lluvias intermedias se sitúa en las vertientes medias de la cordillera y en el área central del Departamento; el área menos húmeda, al este del Departamento y en las cumbres de la cordillera. El régimen de lluvias es básicamente monomodal con una temporada lluviosa que comprende los meses de abril a octubre. Actividades económicas: La economía de Casanare se basa principalmente en la producción ganadera vacuna. La agricultura se practica en áreas de piedemonte, de forma comercial y tecnificada, y en áreas de laderas, siguiendo sistemas tradicionales. El petróleo se proyecta como la actividad de mayor generación de ingresos. Existen explotaciones mineras de oro, manganeso, fósforo y níquel. En el Departamento existen establecimientos industriales dedicados principalmente a la transformación de la materia prima agropecuaria, los cuales se concentran en Yopal y Villanueva, principalmente. Vías de comunicación: El Departamento cuenta con una red de carreteras y carreteables que conectan a las cabeceras municipales entre sí; las principales vías son la transversal Yopal - Aguazul - Sogamoso, y la troncal o marginal del llano que atraviesa el Departamento de sur a norte, por el piedemonte; de esta troncal se desprenden varios ramales que conducen al interior del territorio. La navegación fluvial constituye un medio de comunicación y transporte de carga entre los poblados menores. El transporte aéreo se realiza a través de 15 aeródromos y varias pistas de aterrizaje. Cultura y turismo: El Departamento cuenta con bibliotecas, una emisora de AM, una de FM y varios escenarios deportivos. En toda la región de los llanos y particularmente en Casanare, el canto, la música, las danzas, mitos y leyendas autóctonas, constituyen la manifestación cultural de la población; el 4 joropo es su música, y el coleo, su fiesta tradicional. Los contrastes entre montaña y llanura ofrecen al visitante paisajes de singular belleza; al noroeste los páramos cargados de fuentes de aguas cristalinas, e imponentes montañas; en el centro y este, la llanura con su flora y fauna exótica. 3.2 Anemia Infecciosa Equina La AIE es una enfermedad históricamente importante, pues ha sido la primera enfermedad en los equinos, en la cual se ha comprobado que el virus que la produce puede ser sometido a un proceso de filtrado en un laboratorio. El virus puede seguir activo y con capacidad infecciosa (Valle y Carre, 1904). La Anemia Infecciosa Equina (AIE) es una enfermedad que como su nombre lo indica, ataca específicamente a la población equina y es causada por un retrovirus de la familia retroviridae, subfamilia lentivirinae. Esta enfermedad ha causado estragos desde mediados del siglo XIX, época en la cual se le dio el nombre de enfermedad del pantano. Su estudio ha sido lento y los mecanismos de prevención y transmisión no han sido ajenos a la falta de herramientas para estudiar el virus; sin embargo, durante los últimos veinte años se han intensificado los esfuerzos para hallar una solución a esta enfermedad que comparte muchas características del virus de inmunodeficiencia humana (VIH). (La anemia infecciosa equina fue identificada en Francia en 1843 y en Estados Unidos en 1888.), en Colombia ha sido una enfermedad diagnosticada por el ICA y se ha comprobado la existencia en gran parte del pais. La AIE es una enfermedad, caracterizada por una variedad de síntomas relacionados a la anemia, que termina variablemente en la muerte del 5 animal. La duración del plazo de incubación (tiempo que transcurre entre el ingreso del virus y la aparición de síntomas) es variable, de 5 a 45 días y en oportunidades hasta varios meses. Esto depende ante todo de la cantidad y calidad de la dosis infectante, si bien esto no ejerce ninguna influencia sobre el nivel de gravedad y el posterior curso clínico seguido por la enfermedad. El curso dependerá mas de la predisposición y respuesta inmunitaria del animal infectado que de factores debilitadores de la resistencia. Una vez infectado, el equino es portador del virus a por el resto de su vida (Carpenter et al, 1987) Según Barlatay 1990, esta enfermedad infecciosa es la de mayor importancia sanitaria y económica. Por tal motivo optimizar los recursos de manejo sanitario y minimizar errores de diagnóstico, son operaciones necesarias. Muchas veces las técnicas de diagnóstico serológico pueden dar resultados inespecíficos. En el caso del test Coggins que es la prueba nacional aplicada para el diagnóstico de Anemia infecciosa equina, la posibilidad de resultados de “falsos positivos” implicaría importantes dificultades ya que, de no probarse lo contrario, esos equinos deben ser segregados y sacrificados, según reglamentación vigente. 3.3 Retrovirus Los retrovirus son una familia de virus animales con ARN como material genético del virion, que se replica a través de un intermediario de ADN en las células que parasitan. El genoma de los retrovirus puede ser tanto ADN como ARN. Esto es posible gracias a la enzima ADN polimerasa ARN dependiente, denominada transcriptasa inversa RT. (Temin & Mitzutani, 1970). El genoma de todos los retrovirus está integrado por tres genes principales, gag, pol y env que codifican las proteínas internas, enzimas y las proteínas 6 de envoltura. Los extremos del ARN genómico tienen sólo una pequeña repetición terminal denominada “R”, pero durante la infección de la célula y como consecuencia de la trascripción inversa, se origina el ADN de doble cadena viral, flanqueado a ambos lados por las secuencias repetitivas largas terminales ó LTR, quienes juegan un papel muy importante en la inserción del ADN celular, control de la trascripción (Dahlberg, 1988). 3.3.1 Estructura genética El genoma de los retrovirus consta de 2 moléculas de ARN de cadena simple y polaridad positiva. Las moléculas de ARN están físicamente unidas mediante puentes de hidrógeno en sus extremos 5´, lo que hace que sea difícil la encapsidación de más de 2 moléculas en un provirus. La organización genómica es siempre la misma 5´-Gag-pol-env-3´ y, además dependiendo del tipo de retrovirus, hay genes accesorios que solapan con los genes principales. A pesar de la inmensa variabilidad entre los distintos tipos de retrovirus, podemos decir que la partícula viral se compone de: A) una envuelta formada por una glicoproteína de superficie (SU), y una proteína de transmembrana (TM) B) una cápside viral o core que incluye las proteínas de la matriz (MA), Cápside (CA) y nucleocápside (NC); C) enzimas como la transcriptasa inversa (RT), proteasa (PR), integrasa (IN) que son muy importante para la replicación del virus, D) otras proteínas no esenciales para el virus (Dahlberg, 1988). 3.3.2 Ciclo de replicación El ciclo de replicación comprende varias etapas comunes a todos los retrovirus. En una fase inicial o temprana, el virus se une a receptores 7 específicos de la célula gracias a la glicoproteína de superficie. Las membranas vírica y celular se fusionan y la cápside viral entre en la célula. Las enzimas víricas permanecen asociadas al ARN genómico formando una complejo nucleoproteico. La síntesis de ADN vírico, incluyendo las LTR, se produce en el citoplasma a través de la RT. La actividad ARNasa H de la RT degrada la hebra de ARN y casi simultáneamente emplea la del ADNc como molde para sintetizar una segunda hebra de ADN, convirtiéndolo en bicatenario. Este permanece unido al complejo nucleoproteico, con el que pasa al núcleo celular y, mediante la Integrasa (IN), el ADN viral se integra (provirus) en el genoma celular, donde puede permanecer por un tiempo indefinido. Luego viene la fase de trascripción de los genes, originando ARN que sirven como genoma del nuevo virión y ARN mensajeros para las poliproteínas. Las proteínas de gag y pol se asocian con el ARN viral formando un “core” intracelular, mientras que las proteínas de env se insertan en la membrana plasmática de la célula. Tras el ensamblaje, se produce la salida de la célula por gemación, durante la cual el virus adquiere la dobla capa lipídica de su envoltura. Estudios recientes sugieren que la salida de la partícula viral se produce en lugares determinados de la célula. Parece ser que Gag migraría hacia zonas de la membrana ricas en determinados lípidos; son las llamadas balsas o raft. Las proteínas asociadas a estos raft que se incorporan a la envuelta del virus desempeñarían también un papel importante en la replicación viral. Finalmente se produce la maduración de las partículas gemadas mediante el procesamiento de las poliproteínas por la Proteasa (PR) viral que corta las poliproteínas precursoras. Los principales productos son las proteínas de la matriz (p17), cápside (p24), nucleocápside (p7) y la p6 (proteína). La maduración del VIH constituye un mecanismo importante para el diseño de antirretrovirales. 8 3.3.3 Reservorios del virus El virus está muy adaptado a los equinos y tiene como reservorio única y exclusivamente a las poblaciones equinas infectadas. Independientemente de que la enfermedad se manifieste clínicamente o no, está presente en todo portador del virus - por tanto positivo al test siendo de esta forma una potencial fuente de diseminación por las vías de transmisión vistas. (Heisecke,S..1993) 3.3.4 Patogénesis La forma de ataque del virus es causar una lenta, progresiva, e incluso fatal enfermedad. Este tipo de mecanismo viral de ataque sirvió para mostrar que el virus de la AIE está estrechamente relacionado con el virus HIV. Estos dos lentivirus muestran muchas características estructurales y bioquímicas similares. El virus de la AIE ha servido como modelo para múltiples estudios sobre el VIH, específicamente para conocer los mecanismos de control inmunológico (Issel, 1993). Básicamente la patología se explica por un fenómeno de autoinmunidad en que los anticuerpos dirigidos contra el virus también van a unirse con los antígenos virales ubicados en la células. Hay destrucción intravascular de eritrocitos y una baja en la producción de eritrocitos por depresión de la médula ósea. La destrucción de eritrocitos tiene una base autoinmunitaria. La formación de complejos antígeno-anticuerpo provoca vasculitis y glomerulonefritis. El virus infecta monocitos/macrófagos y células de Kupffer, a partir de donde el provirus puede ser transportado a todo el cuerpo. A pesar de una vigorosa respuesta inmune al antígeno viral, el virus persiste como provirus en las 9 células infectadas, lo que ocasiona que los síntomas se presenten en tiempos distintos. (Heisecke, S.1993). Tal como en otros retrovirus, se producen muchas variantes del virus debido a la tendencia al error en el proceso de replicación. En el caso de la AIE la liberación de estas variantes puede relacionarse con periodos febriles intermitentes. La respuesta humoral a la presencia del antígeno viral estimula la producción de anticuerpos no neutralizantes. Estos anticuerpos se unen al antígeno viral formando complejos inmunes. Una vez formados, los complejos inmunes activan la vía clásica de la cascada del complemento, que a su vez lleva a la producción de fiebre, anemia, trombocitopenia y glomerulonefritis. La anemia es el resultado de los efectos combinados de hemólisis, fagocitosis de los eritrocitos, y disminución en la producción de las células sanguíneas de la línea eritropoyética. 3.4 Población hospedadora Todos los solípedos son igualmente susceptibles, independientemente de cuál sea su especie, raza, edad o sexo. Una vez infectado el animal susceptible, en virtud de la persistencia típica de este lentivirus, el équido, a pesar de generar anticuerpos, se convierte en un portador de virus por el resto de su vida. En la infección natural, tanto en la enfermedad clínica como en la latente, los anticuerpos formados no garantizan ninguna protección inmunitaria, por lo que los animales infectados pueden enfermar gravemente y morir al cabo de meses o años, tras largos períodos asintomáticos; hasta el presente, no ha sido posible disponer de una vacuna eficaz, ni de una terapia efectiva (Carpenter et al, 1987). 10 El hecho de que en los territorios enzoóticos, casos con la forma aguda se presenten con menor frecuencia que la enfermedad latente o inaparente, no puede atribuirse, por consiguiente, a la falsa creencia de que un gran número de animales superaron la enfermedad (Oliva et al, 1982). 3.5 Formas de Presentación clínica Un equino infectado puede evidenciar una de las cuatro siguientes formas: Sobreaguda: presentación no frecuente. Es una presentación de infección en la cual el animal puede morir súbitamente antes de presentar signos clínicos. Solo es detectable postmortem (mediante necropsia y análisis de laboratorio). Aguda: Los principales síntomas son fiebre alta e intermitente, incremento de la frecuencia cardiaca, incoordinación en algunos casos, mucosas de tonalidad entre roja oscura o ictérica (amarillenta) con hemorragias difusas, edemas subcutáneos y pérdida de condición corporal pese a conservar el apetito. En esta sintomatología la carga viral en sangre se vera elevada por lo cual la enfermedad podrá ser transmitida mas fácilmente a otros caballos. Subaguda a crónica: Se observan los mismos signos clínicos descritos para la forma aguda pero de una manera más atenuada, pudiendo ocurrir la muerte del animal luego de una corta agudización de los signos. El equino infectado entra y sale de esta forma clínica hacia la forma aguda o crónica de manera cíclica, presentando períodos de normalidad entre episodios. (Issel, 1993). Este comportamiento cíclico, generalmente dilata la consulta profesional y la imprescindible confirmación del laboratorio; si bien la detección de algún 11 síntoma, como la pérdida de peso y la apatía debieran provocar siempre la sospecha (Orrego, 1999). Los equinos que se encuentran en esta etapa tienen generalmente un nivel moderado de virus circulante pero constituyen igualmente muy buena fuente de virus (De la sota, 2005). Subclínica o inaparente: Solo es detectable por medio del test de laboratorio aplicado rutinariamente, es otra forma de presentación muy frecuente de la enfermedad. En esta etapa el caballo luce sano y nadie advierte su enfermedad pudiendo mantenerse así gran parte de su vida. Otros en cambio, regresan a la forma subaguda a crónica a causa de estrés, excesivo trabajo, a otras enfermedades o parasitosis, a ciertas medicaciones como los corticoides o por la reversión del virus a formas más dañinas dentro del propio organismo del equino (Heisecke, S 1993). 3.6 Transmisión 3.6.1 Transmisión natural El virus de la AIE es el primer retrovirus que induce una enfermedad y en el cual se ha comprobado su transmisión por picaduras de insectos (Stein et al., 1942). Se ha comprobado fehacientemente que los distintos tipos de tábanos y moscas hematófagos como la mosca del caballo, tábanos de la especie Stomyxis calcitrans y los zancudos (Anopheles psorophora), son los principales insectos que transmiten el virus de la Anemia Infecciosa Equina. Para que esta forma de transmisión sea posible, es preciso que el acto alimentario del insecto, iniciado sobre un equino portador del virus, quede incompleto por algún motivo (defensas del animal), entonces este debe concluir su alimentación sobre otro equino sano en el menor tiempo posible (De la sota, 2005). Se ha comprobado que el virus va perdiendo su capacidad infectante en la boca de estos insectos sobreviviendo en ella entre 15 minutos a 4 horas 12 (Orrego 1999). Algunos investigadores citan la probabilidad de que algunas especies de mosquitos lo hagan - en particular los de gran tamaño - pero en menor grado y siempre de manera mecánica. (De la sota, 2005). Por lo tanto, la probabilidad y el grado de transmisión son altos cuando en una población de equinos se dan simultáneamente estas tres condiciones: 1. alta carga de tábanos sobre el lugar (región, época del año, etc.). 2. distancias estrechas entre los equinos (factor que adquiere mucha importancia en lugares de estabulación o de alta concentración). 3. un nivel infectivo suficiente en la sangre de el/los portador/es, mencionado anteriormente es muy alto cuando se presentan síntomas clínicos. 3.6.2 Transmisión mecánica Las agujas e instrumentos quirúrgicos infectados son responsables de la transmisión del virus en los corrales. El uso de instrumentos no esterilizados también es otra fuente de infección. Se afirma que el virus puede sobrevivir varios meses a temperatura ambiente en sangre o suero seco infectado (Jacobo et al 1992). Esta es la razón para afirmar que involuntariamente la mano del hombre es en muchos casos la principal forma de diseminación, y para ello bastará la presencia de tan solo un portador de virus para iniciar una diseminación masiva dentro de un establecimiento (Cartemper et al, 1987). A nivel rural, entre los elementos de uso común con cierto riesgo de vehiculizar el virus, se citan los frenos, espolines, mordazas, cinchas, sudaderas, rasquetas y demás elementos relacionados al equino, cuando sin una buena higiene y desinfección previa, son compartidos por distintos equinos. Es así como estos enseres tan familiares y conocidos para el hombre de a caballo, se transforman en vehículos sanitariamente peligrosos. (Jacobo et al 1992). 13 Son igualmente considerados de alto riesgo, la omisión de cambio de aguja al efectuar tratamientos, vacunaciones o desparasitaciones colectivas, extracciones de sangre y/o las esterilizaciones o desinfecciones imperfectas de agujas, jeringas, sondas gástricas y todo tipo de instrumentos o material cortopunzante utilizado en maniobras quirúrgicas, odontológicas, terapéuticas (infiltraciones), diagnósticas, de identificación (tatuajes), han sido los responsables de los mayores brotes ocurridos. También está descrito en algunos trabajos, que los saches o frascos multidosis (vacunas, vitaminas, terapéuticos, etc.), al ser compartidos por más de un caballo están expuestos a quedar contaminados con el virus, siendo una excelente vía de diseminación (Oliva et al, 1982). En definitiva, todo aquello que pueda vehiculizar sangre infectada de un portador enfermo (aún estando seca, en la cual según algunos autores el virus persiste varios meses) a un receptor sano, debe ser considerado de alto riesgo. 3.6.3 Otras vías de transmisión En niveles menos frecuentes, se describe la transmisión del virus desde la yegua infectada al potro (forma vertical), aún cuando este aspecto no está absolutamente claro, si el contagio tiene lugar por vía intrauterina o post partum a través de la leche materna. También se contempla la posibilidad de contagio por medio del coito, puesto que se ha conseguido la transmisión experimental del virus mediante inyección subcutánea de esperma de un semental enfermo con signos clínicos. La infección congénita puede ocurrir y los potrillos nacerán infectados. Es importante tener en cuenta que el animal infectado será portador durante toda su vida. Además el virus está presente en todos los fluidos y secreciones del cuerpo. (Issel, 1991) 14 Por ser eliminado el virus con excreciones y secreciones, algunos consideran posible la transmisión oral al beber agua o pienso infectados, si bien esta circunstancia únicamente desempeñaría un papel importante si se acompaña de la existencia de microlesiones en la boca o en el tracto digestivo del receptor susceptible que actuarían como puerta de entrada a dosis infectantes suficientes ( P. Sarmiento et al 2005). 3.7 Diagnóstico de Laboratorio. En la mayoría de las infecciones virales los anticuerpos en animales positivos contra las glicoproteínas de cápside, se detectan después de 45 días de exposición al virus; sin embargo, el test inmunoblot como el ELISA y el ACID, han mostrado una mejor eficiencia en campo y en la detección de animales positivos (Issel, C.; Cook S.; Cordes, T., 1999). El cuadro clínico de la enfermedad es muy variable pero al menos permite la sospecha en muchos casos. Por este motivo, ante la presencia de cuadros febriles, incremento de la frecuencia del pulso, apatía, pérdida de condición corporal aún con apetito conservado, resulta imprescindible la práctica del test diagnóstico específico para descartarla y para esto se han propuesto distintos tests serológicos para la identificación de anticuerpos ya que la detección de los mismos indican invariablemente que ese animal tuvo contacto con el virus, en consecuencia ha contraído la enfermedad. La Organización Internacional de Epizootias (OIE) recomienda hasta hoy como método diagnóstico de elección la prueba de inmunodifusión en gel de agar (AGID), desarrollada por Leroy Coggins en 1972, por ser la prueba que descubre con máxima seguridad manifestaciones clínicas. 15 a los portadores de virus sin 3.7.1 Test de coggins El antigeno purificado del virus de la anemia Infecciosa Equina (EIAV) puede utilizarse en el test de inmunodifusión en gel agar (AGID) a fin de detectar la presencia de anticuerpos contra el EIAV en el suero de caballos infectados. El uso de antigenos de EIAV altamente purificados prácticamente elimina las líneas de precipitina no específicas del test AGID. Dichas líneas pueden interferir con la lectura del test y aumentar el número de resultados incorrectos. Descripción El desplazamiento de anticuerpo hacia sus respectivos antigenos en un gel de agar puede dar lugar a la formación de líneas de precipitina. Mediante la aplicación de este principio, se ha demostrado que el test de AGID es un análisis fiable para detectar anticuerpos específicos formados entre 10 y 30 dias después de una infección con EIAV. En sueros fuertemente positivos, pueden visualizarse líneas de precipitina de identidad como una continuación de la línea entre el suero de control y el pocillo de antigeno central. En los sueros débilmente positivos la línea de suero es negativo, no se forma ninguna línea de precipitina de identidad. Si el resultado del test de Coggins es claramente positivo en los équidos adultos, el diagnóstico se considera confirmado, independientemente de la ausencia o existencia de signos clínicos y de cuál sea la gravedad de los mismos, y aun cuando existan indicios presuntivos de estarse desarrollando además otras patologías no infecciosas.( Coggins,L et al 1972). Para poder detectar la enfermedad hay que tener en cuenta el llamado efecto “ventana”, el cual es el período comprendido entre el momento en que se produce la infección o ingreso del virus al organismo y la probabilidad 16 cierta de que el test diagnóstico de laboratorio detecte los anticuerpos como para dar un resultado positivo, confirmando de esta forma la condición de portador. Este período es para la AIE de 1 a 3 o más meses. En razón de lo dicho, es que para confirmar un diagnóstico negativo, se recomienda que siempre se ratifique esa condición mediante otra prueba efectuada a los 60 días de la primera, sobretodo cuando se incorporan nuevos equinos a una población controlada. Es decir que antes de incorporarlos definitivamente al predio, se los mantenga separados del resto de la población residente hasta conocer el resultado de esta prueba confirmatoria. Durante este período se pondrá especial cuidado en prevenir las formas potenciales de transmisión. Estudios actuales han revelado que en el estado de provirus, que es parte en la replicación del virus de la AIE, no hay una reacción entre el antígeno y los anticuerpos. En el test de Coggins, los anticuerpos pueden no detectarse o desaparecer y los animales crónicamente infectados pueden presentar reacciones negativas, después de una prueba diagnóstica; estos animales que son falsos negativos pueden desarrollar la enfermedad debido a algún cambio en la rutina de trabajo o, bien en forma espontánea; esto explicaría cómo se pueden afectar los datos de prevalencia del virus en determinadas zonas. Es por esto que se deberían efectuar pruebas diagnósticas periódicas para obtener datos mucho más precisos (Sarmiento, P.; Quijano, M., 2005). Precisión de los test diagnósticos y divergencias más frecuentes. No siempre en el laboratorio pueden obtenerse resultados precisos. Algunas veces se presentan discordancias como resultado de diferencias de test a test, por ejemplo: entre la técnica de ID y la de ELISA, de un laboratorio a otro, de lectura a lectura usando el mismo método y realizándolo en el mismo laboratorio, o entre dos muestras de un mismo animal. Esto puede suceder 17 en presencia de muestras de sangre que están cerca del límite técnico que tienen las pruebas en si mismas para poder detectar los anticuerpos, a diferencias relacionadas a un fenómeno biológico o simplemente a diferencias en el desempeño humano. (De la sota, 2005). La razón biológica de divergencia más frecuente es que el equino en cuestión tenga muy bajos niveles de anticuerpos contra el virus de AIE. El equino puede haber estado recientemente expuesto y recién está comenzando a producir anticuerpos. Otras veces, los portadores inaparentes tienen un nivel consistentemente bajo de anticuerpos contra el virus de AIE, lo que sugiere un bajo nivel de replicación viral y una baja estimulación. Afortunadamente, este tipo de reacciones se observan en muy baja proporción, pero en ambos casos el resultado final es el mismo: el nivel de anticuerpos es tan bajo que la reacción de la prueba escapa a la detección de algunos de los test de rutina o es de difícil o débil lectura. La presentación de resultados débilmente positivos en el test de Coggins puede presentarse: 1. En potros sanos que poseen todavía anticuerpos maternos persistentes. Un segundo análisis realizado 2 meses después del destete arrojará resultado claramente negativo. 2. En équidos infectados que están aún en período de incubación. En este caso el segundo análisis efectuado 30-60 días después arrojará resultado claramente positivo. 3. En animales con la infección latente. El segundo análisis da por lo regular el mismo resultado débilmente positivo. En el procesamiento del test y en el reporte de resultados, pueden ocurrir errores humanos en múltiples aspectos. Primero, podría haber ocurrido un error técnico en el procesamiento de la muestra. Por ejemplo, en el test de 18 Coggins, errores en la preparación del agar y placas y el uso de sacabocados más pequeños que los recomendados, o el lavado de los pozos para ELISA, pueden dar resultados incorrectos. Segundo, el técnico puede sentirse incómodo o poco dispuesto para interpretar y reportar como positiva una muestra con una reacción a la ID muy débil. Tercero, puede ocurrir una pérdida en la integridad de la muestra por contaminación o mal rotulado. No obstante lo dicho, las falsas reacciones negativas en el test de AIE son extremadamente raras y además puede afirmarse que el impacto de estos equinos diagnosticados como falsos negativos es considerado significativamente bajo con respecto a los cientos de miles que nunca han sido testeados. 3.8 Medidas de Prevención y control Dentro de las sustancias conocidas como inmunoestimulantes o inmunopotenciadoras se destaca el levamisol, compuesto químico con gran capacidad para incrementar la inmunidad mediada por células, fundamentalmente mediante el restablecimiento de las funciones efectoras de los linfocitos T y los macrófagos (Bruner y Muscoplat, 1980; Babiuk y Mirsa, 1981). Funciona de forma similar a la hormona tímica (timopoyetina). Produce sus mayores efectos en animales con función de las células T deprimidas (Rahway, 1993). Vistas las características de la enfermedad, todas las medidas preventivas y de lucha y control que se aplican en los distintos países del mundo, se concentran en: a) La detección de los portadores mediante el test diagnóstico de laboratorio. b) La eliminación de los mismos, mediante sacrificio o envío a faena. El objetivo de lo expresado es evitar la difusión territorial del virus y el incremento de equinos portadores. El sostenimiento de este sistema, permite en algunos casos y regiones que, en condiciones ecológicas favorables y con 19 la participación responsable y activa de todos los actores ligados al caballo y al ámbito rural y ecuestre, pueda ser controlado o erradicado paulatinamente. Si bien son conceptualmente iguales, las medidas de prevención pueden ser modificadas según se hable de países o regiones libres de la enfermedad, o de territorios con presencia enzoótica de la misma, pudiéndose en éstos territorios diferenciar a su vez zonas o regiones según el nivel de prevalencia de la enfermedad. 3.8.1 Aplicación de las medidas de control y prevención. Puede decirse de manera general que respecto a la implementación de estas medidas, las acciones de control están más relacionadas con la aceptación y aplicación de las reglamentaciones establecidas por la autoridad sanitaria, y las acciones de prevención recaen en manos de productores y propietarios, siendo por lo tanto de su propia y exclusiva responsabilidad el disponerlas en defensa del patrimonio propio o de terceros. En este sentido, para el éxito en el control de la enfermedad debe sumarse el accionar de las entidades oficiales, la participación imprescindible del usuario mediante el conocimiento y cumplimiento de las normas, el requerimiento de asesoramiento técnico profesional privado, la aceptación y aplicación responsable de las medidas y recomendaciones que son de su exclusiva competencia. 3.9 Epidemiología en programas de salud Una de las principales aplicaciones de la epidemiología es facilitar la identificación de áreas geográficas y grupos de población que presentan mayor riesgo de enfermar o de morir prematuramente y que por tanto requieren de mayor atención ya sea preventiva, curativa o de promoción de la salud animal. La epidemiología también permite reconocer que la 20 distribución y la importancia de los factores que operan en el aumento de un riesgo determinado no son necesariamente los mismos en todos los grupos de población, aunque también se pueden identificar algunos grupos similares con respecto a los determinantes de riesgo a la salud que comparten (Castillo, 1993). El reconocimiento de estos grupos supone a su vez la selección de intervenciones sociales y sanitarias ad hoc para disminuir o eliminar los factores específicos de riesgo. Esto implica una reorganización de los servicios de salud para dar respuesta a esas necesidades insatisfechas. Luego de aplicadas las intervenciones, se requiere evaluar el impacto de las medidas en los niveles de salud de la población. Esta evaluación tiene como propósito determinar si es necesario hacer ajustes en las intervenciones, sea porque las metas fueron o no cumplidas, o bien si es conveniente continuar con ellas hasta alcanzar las metas propuestas. Este proceso dinámico de diagnóstico-acción-evaluación-adecuación forma parte de la metodología que se conoce como estratificación epidemiológica (Plata, 1997). Actualmente, la limitación de recursos y el proceso de descentralización de los servicios de salud animal que ocurren en la mayoría de los países, exigen que los programas de salud sean más efectivos y eficientes en su toma de decisiones. Para ello, los programas de salud requieren de un sistema de información ágil que les permita identificar áreas y/o poblaciones con mayores necesidades insatisfechas de salud, de manera que les permita focalizar hacia esos grupos prioritarios sus intervenciones. Con el advenimiento de las computadoras personales y las avenidas de la informática y las comunicaciones, ahora es más factible lograr que los sistemas de información de los servicios de salud operen de manera más eficiente (Plata, 1997). 21 3.10 Sistemas de información Geografica Sistema de Información Geográfica (SIG o GIS según las siglas inglesas), es un conjunto de herramientas informáticas que captura, almacena, transforma, analiza, gestiona y edita datos geográficos (referenciados espacialmente a la superficie de la Tierra) con el fin de obtener información territorial para resolver problemas complejos de planificación, gestión y toma de decisiones apoyándose en la cartografía. Un SIG es un sistema geográfico porque permite la creación de mapas y el análisis espacial, es decir, la modelización espacial; es un sistema de información porque orienta en la gestión, procesa datos almacenados previamente y permite eficaces consultas espaciales repetitivas y estandarizadas que permiten añadir valor a la información gestionada; y es un sistema informático con hardware y software especializados que tratan los datos obtenidos (bases de datos espaciales) y son manejados por personas expertas (Parra, 1997). Los Sistemas de Información Geográfica (SIG) son sistemas para la recopilación, almacenamiento, integración, análisis y presentación de datos referenciados en el espacio. A esto último se le denomina georreferenciación. Una de las áreas de mayor aplicación de los SIG es en el estudio de problemas ambientales, la epidemiología ambiental. Los SIG permiten la rápida representación gráfica de mapas de patologías y de las exposiciones ambientales. Por sí solos los SIG pueden ser considerados como un potente sistema de gestión de bases de datos. La facilidad de su manejo permite generar colecciones de mapas que pueden sugerir nuevas líneas de trabajo. Sin embargo, hay que estar preparados para recibir críticamente las sugerencias que proporciona la observación de los mapas. Los mapas han de ser sometidos sistemáticamente a pruebas estadísticas que traten de transformar la percepción visual en algo objetivo. Los SIG por 22 sí solos son un instrumento francamente útil, pero es cuando los unimos a las técnicas de análisis espacial, cuando muestran todas sus posibilidades. O quizás mejor, las técnicas de análisis espacial tienen un complemento extraordinario cuando se apoyan en un SIG, dado que en la actualidad, la capacidad de análisis espacial de los SIG son muy limitadas, al menos, en el ámbito de la epidemiología (Bonham, 1994). La presencia de diferentes eventos en salud animal, sean estos positivos o negativos, no ocurren por casualidad. A través del tiempo se ha observado una estrecha relación entre estos eventos y el medio ambiente, las condiciones sociales y otros determinantes. Todos ellos tienen características comunes: su aparición en estrecha relación con su entorno espacial, esto es, en un marco geográfico, en un tiempo determinado y en una población especifica. La epidemiología permite definir la distribución y frecuencia de eventos en salud animal y su determinante dentro de la población. La determinación de los patrones de distribución de eventos que ocurren en el tiempo y espacio es útil para identificar los factores que participan en esa distribución. Estos patrones permiten, a su vez, proponer acciones apropiadas para disminuir o evitar la ocurrencia de los eventos negativos en la salud animal y por ende en la población (Bosque, 1994). La integración de los métodos y técnicas de la epidemiología y los Sistemas de Información Geográficos (SIG) permite visualizar los patrones epidemiológicos de eventos y procesos en salud animal, así como reconocer la importancia de los factores que los determinan, facilitando la toma de decisiones sobre posibles acciones en salud pública (Bonham, 1994). 23 3.11 GPS El Global Positioning System (GPS) o Sistema de Posicionamiento Global, es un Sistema Global de Navegación por Satélite (GNSS) que permite determinar en todo el mundo la posición de un objeto, una persona, un vehículo o una nave, con una precisión hasta de centímetros usando GPS diferencial, aunque lo habitual son unos pocos metros. El sistema fue desarrollado e instalado, y actualmente es operado, por el Departamento de Defensa de los Estados Unidos (Parra, 1997). El GPS funciona mediante una red de 24 satélites (21 operativos y 3 de respaldo) en órbita sobre el globo a 20.200 km con trayectorias sincronizadas para cubrir toda la superficie de la tierra. Cuando se desea determinar la posición, el aparato que se utiliza para ello localiza automáticamente como mínimo cuatro satélites de la red, de los que recibe unas señales indicando la posición y el reloj de cada uno de ellos. Con base en a estas señales, el aparato sincroniza el reloj del GPS y calcula el retraso de las señales, es decir, la distancia al satélite. Por "triangulación" calcula la posición en que éste se encuentra. La triangulación en el caso del GPS, a diferencia del caso 2-D que consiste en averiguar el ángulo respecto de puntos conocidos, se basa en determinar la distancia de cada satélite respecto al punto de medición. Conocidas las distancias, se determina fácilmente la propia posición relativa respecto a los tres satélites. Conociendo además las coordenadas o posición de cada uno de ellos por la señal que emiten, se obtiene la posición absoluta o coordenada real del punto de medición. También se consigue una exactitud extrema en el reloj del GPS, similar a la de los relojes atómicos que desde tierra sincronizan a los satélites (Parra, 1997). 24 OTROS ESTUDIOS El sida equino se ha convertido en uno de los principales enemigos de la actividad equina del país. Durante el primer semestre de 1997 el Instituto Colombiano Agropecuario –ICA- reportó sólo en Bogotá catorce casos confirmados de esta enfermedad. En Centroamérica se han presentado brotes de la enfermedad en zonas pantanosas bajas y regiones de pastoreo con cobertura de bosque tropical, que favorecen la transmisión y perpetuación de la enfermedad. En Colombia se reportó por primera vez hace cuatro años en el departamento del Magdalena, y en la costa atlántica. 4. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIÓN: La Anemia Infecciosa Equina constituye un grave problema para el hato equino casanareño, ya que los equinos tal vez sean tan importantes como los bovinos. El caballo ha tenido mucha importancia a lo largo de toda la historia, desde la antigüedad y hasta nuestros días es uno de los pocos medios de transporte y de carga, siendo además una importante herramienta para el trabajo; con mayor razón si tenemos en cuenta que el departamento objeto de este estudio presenta aun hoy en día lugares a los cuales es imposible acceder por un medio de transporte diferente al equino. En un campo ganadero en el departamento, para cada persona que trabaja en una hacienda hay 4 equinos montados. Si trabajan 4 peones en un campo y si tienen que hacer rotación de caballos, con que trabaje cada uno una semana se necesitan 4 caballos al mes, esto quiere decir que si los caballos han sido infectados con el virus entonces se necesitaran 4 caballos mas por cada caballo enfermo para poder realizar las labores diarias; esto representa un 25 problema de gran importancia para los ganaderos ya que esto incidiría de una forma directamente proporcional en sus costos de producción. De otro lado es importante resaltar que en departamento existen diferentes asociaciones (Fedequinas, Troyanos, Liga Nacional de Coleo y otras) de actividades deportivas realizadas con frecuencia, que se encuentran altamente susceptibles a contraer la enfermedad, en donde los ejemplares por raza, destreza, condición física y de adiestramiento alcanzan precios considerables, presentando dificultad en sus condiciones de manejo en caso de ser seropositivos. La severidad de la enfermedad ratifica la importancia de mantener controles sanitarios permanentes, buscando la forma de que sean asumidas las decisiones pertinentes en el destino de los equinos positivos, a fin de poder controlar la enfermedad, minimizando su efectos en la población de caballos de trabajo y su posibilidad cierta de constituirse en fuente de infección para equinos de mayor valor económico, como los deportivos. Los animales susceptibles a la enfermedad o positivos a la prueba de coggins no tienen tratamiento ni vacuna específica contra este mal. Un caballo infectado puede ser fatal para toda la población equina, teniendo como única solución su sacrificio. Por lo tanto resulta de gran importancia para el sector Pecuario Departamental contar con métodos que, en el contexto, permitan el control y erradicación de esta enfermedad. Por este motivo, es necesario realizadas estudios en los lugares donde se haya presentado la enfermedad; con el fin de determinar el grado de positividad de equinos con el retrovirus, para establecer su distribución en el Departamento, establecer los factores y áreas de riesgo y, por ultimo, intervenir en el manejo a fin de controlar la enfermedad. 26 5. OBJETIVOS GENERALES Y ESPECIFICOS 5.1 Objetivo General Analizar la seropositividad del virus de Anemia Infecciosa Equina en los Municipios de Yopal, Aguazul, Paz de Ariporo, Pore, Nunchia, Villanueva, Tauramena, Monterrey, Orocue, Mani, Trinidad, San Luis de Palenque y Hatocorozal en el Departamento de Casanare y establecer un mapa de riesgos. 5.2 Objetivos Específicos • Realizar un análisis de seropositividad de 4400 muestras para anemia Infecciosa Equina durante el año 2006, en los municipios de Yopal, Aguazul, Paz de Ariporo, Pore, Nunchia, Villanueva, Tauramena, Monterrey, Orocue, Mani, trinidad, San Luis de Palenque y Hatocorozal del Departamento del Casanare. • Georeferenciar los predios positivos de los 13 municipios muestreados para determinar un mapa de riesgo. • Analizar el porcentaje de seropositividad entre hembras y machos equinos estudiados. • Elaborar una síntesis sobre los hallazgos. • Proponer la creación de plan de manejo a fin de controlar la enfermedad por medio de campañas educativas. 27 6. HIPÓTESIS La Anemia Infecciosa Equina en los municipios Aguazul, Paz de Ariporo, Pore, Nunchia, Villanueva, Tauramena, Monterrey, Orocue, Mani, Trinidad, San Luis de Palenque y Hatocorozal del departamento de casanare, supera el 15% de seropositividad, al analizar 4400 muestras divididas proporcionalmente entre los municipios según el ultimo censo equino, lo que convierte a esta región en un área de alto riesgo para la diseminación de esta enfermedad, demandando planes inmediatos de contingencia tanto de prevención como de control. 7. MATERIALES Y METODOS 7.1 Diseño de la investigación (experimental o de investigación): Esta investigación estuvo diseñada para evaluar la positividad contra la Anemia Infecciosa equina en 13 municipios del Departamento de Casanare, recolectando sueros provenientes de equinos en predios escogidos de forma aleatoria. Se midió el grado de positividad por municipio y luego se correlaciono mediante un mapa de riesgos; el estudio fue transversal ya que implico la recolección de datos en un solo corte en el tiempo y cuantitativo. 7.2 Población de estudio y muestra: El proyecto se llevo a cabo en el Departamento del Casanare presentando un clima tropical, siendo húmedo y lluvioso en invierno y seco y ardiente en verano, con temperaturas promedio 27°C. Se tomaron un total de 4400 muestras, distribuidas en los municipios Yopal, ciudad capital; Aguazul, Paz de Ariporo, Orocué, San Luis de Palenque, Monterrey, Nunchia, Hato Corozal, Pore, Maní, Tauramena, Trinidad, 28 Sabanalarga, Villanueva. El muestreo fue aleatorio y efectuado en diferentes tipos de equinos (caballos, burros y mulas). Se seleccionaron muestras aleatorias de la población de equinos, burros y mulas, teniendo en cuenta la población total de animales de los 13 municipios y asignando un porcentaje para cada municipio sobre el total según formula de proporción para tamaño de muestra. Para el proyecto se contaban con 11 kits de Anemia Infecciosa Equina, cada uno tiene la cantidad de suero positivo y antigeno para 400 muestras para un total de 4400 muestras para analizar, estas se distribuyeron acorde al porcentaje de cada municipio, obteniendo un muestreo proporcional del 4% para cada municipio, la distribución se observa en la Tabla .1. Con un nivel de confianza del 95 %, error porcentual del 5%. TABLA 1. Distribución de las muestras asignadas, en los municipios estudiados, porcentaje de muestreo para cada uno MUNICIPIO Yopal Nunchia San luis Trinidad Orocue Monterrey Villanueva Mani Tauramena Hato Corozal Paz de Ariporo Pore Aguazul total POBLACION PORCENTAJE ASIGNADO 8843 9% 4% 393 3240 3% 4% 144 9556 10% 4% 424 10590 11% 4% 470 5190 5% 4% 230 2429 2% 4% 108 2130 2% 4% 95 7521 8% 4% 334 6242 6% 4% 277 15612 16% 4% 693 18575 19% 4% 825 4494 5% 4% 200 4671 5% 4% 207 99093 100% 29 PORCENTAJE MUESTREADO MUESTRAS 4400 7.3 Variables del estudio: Se refiere a todas aquellas observaciones que se dan en la prevalencia de anemia infecciosa equina en los diferentes municipios del Departamento de Casanare; de los cuales se tomo muestras para analizar a través de la prueba de Coggins, tales como: edad, sexo, raza, presencia de vectores, en que época del año hay mayor presencia de estos de acuerdo a las condiciones climatológicas, manejo de accesorios etc. 7.4 Métodos: 7.4.1Toma y Conservación de muestras Las muestras de campo se obtuvieron por punción y sangría parcial abordando la vena yugular de sangre venosa periférica con tubos vacutainer de vidrio de 10 x 15 cm de 10 ml y utilizando agujas hipodérmicas descartables calibre 40x20; la sangre extraída se conservó a temperatura ambiente hasta las dos primeras horas de la extracción, y luego se mantuvo en neveras de hicopor las cuales contenían bolsas de hielo conservando una temperatura entre 4 y 8º C hasta la obtención del suero. Adicionalmente, los tubos fueron marcados con un numero y diligenciado el protocolo de recepción de muestras del ICA (anexo 1). Una vez tomada la muestra y diligenciado el respectivo protocolo, se transportaron las muestras al centro de diagnostico donde fueron procesadas. Para la obtención de suero, las muestras se sometieron a centrifugación a 2000 RPM por 10 minutos, trasvasando luego a tubos de vidrio con tapa del mismo material, conservándolos a -2º C hasta su procesamiento. 30 Preparación y análisis. Se uso solo suero proveniente de equinos para analizar las muestras. Se analizaron sueros con 5 días máximo de almacenamiento, y se congelaron los sueros positivos a - 2º C. Fueron descartadas las muestras con presencia de turbidez, hemólisis o indicios visibles de crecimiento bacteriano ya que podían interferir con el rendimiento y la exactitud del análisis. 7.4.2 Procesamiento de los sueros Para determinar la presencia de anticuerpos contra el virus de AIE, el diagnóstico de laboratorio se realizo por medio de la técnica de inmunodifusión en gel de agar (test de Coggins) 2 veces por semana durante 1 año. Para efectos de este trabajo, se utilizo el kit comercial IDEXX® (Figura 1). El cual contiene los siguientes reactivos: Reactivos para 180 test A. Antigeno de la Anemia Infecciosa equina (EIA), conservado con azida de sodio (tapa negra) 1 ampolla de 3,9 ml. B. B. Suero control positivo para la Anemia Infecciosa Equina (EIA), conservado con azida de sodio (tapa roja) 1 ampolla de 11,7 ml. Se tuvieron en cuenta las siguientes Precauciones: 1. El kit fue refrigerado entre 2 y 18 grados centígrados. 2. Se trataron todas las muestras y los reactivos como si fueran capaces de transmitir el EIAV. Además se eliminaron los componentes biológicos sobrantes y esterilizados los tubos por autoclave. 31 Figura 1. Kit comercial IDEXX®, para el análisis del virus de Anemia Infecciosa Equina. Procedimiento de análisis y preparación de las cajas de petri (AGID) Para el montaje del la prueba fue necesario preparar el agar unas horas antes del montaje de cada prueba. El procedimiento se observa a continuación: 1. Se preparo un litro de tampón con: 2 g de hidróxido de sodio (NaOH) 9 g de acido bórico (H3BO3) Se agrego 1 litro de agua destilada y se ajusto el pH a 8,6 2. Se preparo una solución de agar Noble al 1.0% en el tampón, se hirvio la suspensión para disolver el agar y se esterilizo el liquido por autoclave durante 7 minutos. 3. Luego se agregaron 15 ml de agar liquido a una caja de petri de 100mm de diámetro. 4. Las cajas se enfriaron durante una hora a temperatura ambiente y luego se almacenaron entre 2 y 8 grados centígrados en refrigerador. 32 5. Las celdas tuvieron un diámetro de 5,3 mm y una separación de 2,4 mm. Se utilizo un patrón de siete celdas, con la celda central rodeada de seis celdas. 6. En el momento previo a la colocación de los sueros para analizar, fue necesario crear las celdas en el agar. Estas celdas se obtuvieron perforando el agar con ayuda de un molde estandarizado (Fig 3), el cual hace unas muescas en el medio, retirándolas con ayuda de una aguja y dejando asi las celdas o pozos listos para ser utilizados. Se retiraron los tampones y exceso de humedad en las celdas antes de agregar las muestras y el reactivo. Figura 2. Molde para perforar los pozos en el medio. 7.4.4 Colocación del suero y el antigeno en las rosetas (Montaje de la Prueba). 1. Se llenaron los pozos con ayuda de una micropipeta y tomando 20µl de control positivo A, B, C, (Figura 2). alternadas con cada uno de los tres sueros de análisis, evitando que las soluciones se desborden sobre la superficie de agar. 33 2. Se lleno la celda central con antígeno purificado de la misma forma y la misma cantidad que para el suero y el control positivo ( 20µl.). 3. Se incubaron las cajas montadas entre 48 y 72 horas a temperatura ambiente, en una cámara húmeda.( Fig. 4) hasta su posterior lectura. Figura 3. Test de Coggins para análisis de anemia Infecciosa Equina A. suero a analizar 1, B. Suero a analizar 2 y C. suelo a analizar 3. Figura 4. Cámara húmeda para montaje de prueba. 34 7.4.5 Análisis de la prueba”Resultado”. Se tuvieron en cuenta 3 tipos de resultados según kit comercial IDEXX ®: a. Suero negativo. No se presento formación de banda. b. Suero débilmente positivo. Las líneas de precipitina de control se topan con la celda de muestra pero no se observa una formación clara de la línea. c. Suero fuertemente positivo. Las líneas de precipitina de control se observan claramente en frente de la celda del suero problema. (Figura 3). Este test busca anticuerpos precipitantes (anti p26 o anti-antígeno de Coggins) que aparecen en el suero de los animales infectados entre los 15 y 30 días posteriores a la infección. 7.5 Recolección de la información: La recolección de la información se llevo a cabo por medio del Instituto Colombiano Agropecuario ICA seccional Casanare, donde se logro conocer la información necesaria sobre veredas, predios y censo equino de los 13 municipios estudiados. Además se utilizaron los formatos estandarizados por el ICA para recolección de la información procedente de cada predio muestreado para la identificación de las muestras ( ver anexos). 7.5.1 Identificación de las muestras: Esta es de vital importancia para el laboratorio y la investigación; por lo tanto deben estar acompañadas del protocolo con la siguiente información: • Nombre, dirección, teléfono del Médico Veterinario. • Nombre, dirección, teléfono del propietario. 35 • Nombre del predio. • Nombre de la vereda. • Nombre del municipio. • Especie, raza, sexo y edad del animal. • Identificación o nombre del animal. • Número de animales en el predio. • Signos y síntomas (si los hay). • Observaciones. 7.6 Análisis de información: Para los principales indicadores de efecto: seropositividad de AIE en los 13 municipios de Casanare, se comparo el porcentaje de positividad entre los municipios, comparación de animales muestreados y animales seropositivos. Además se evaluaron factores como la raza, la edad y sexo para conocer factores de riesgo. Para la realización de los mapas de riesgo, una vez recolectada la información de los predios positivos, se procedió a utilizar el software ARC View 3.2, el cual analiza la información suministrada y construye un modelo espacial sobre el mapa del departamento. (Ver anexos). Para la toma de los datos necesarios en la construcción del mapa, fue necesario utilizar el GPS Garmin®, por medio del cual se toman las coordenadas de los predios en el mismo momento en el que se hizo el muestreo, una vez obtenidos los resultados de laboratorio, se procedió a descargar la información en el software y la construcción del modelo espacial. 36 8. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 8.1 Dificultades Encontradas Durante la Toma de Muestras. La primera dificultad que se presentó para poder realizar este estudio, fue concientizar a los ganaderos de la importancia que tenia la investigación y así permitieran tomar la muestra de sangre de sus equinos, ya que varios de estos conocían el reglamento del ICA donde considera que los equinos positivos a Anemia Infecciosa Equina deberán ser identificados con las letras AIE en el hombro o pierna izquierda, para evitar su indebida movilización y comercialización y acelerar su sacrificio. Por ello muchos opinaban que era una medida muy drástica y no se expondrían a sacrificar sus ejemplares en caso de ser positivos. Otra de las dificultades para la obtención de muestras fue, que los predios seleccionados no se encontraban en áreas pequeñas, por lo que se requirió de más tiempo y esfuerzo del estimado en realizar la toma de las muestras. Los problemas de orden público en algunas zonas del departamento impidieron igualmente, el muestreo de algunos municipios. 8.2. Porcentaje de seropositividad de las muestras analizadas durante el estudio. La Figura 5. Resume y compara los resultados obtenidos del porcentaje de muestras seropositivas a AIE en los 13 municipios estudiados. El 19% de estas resultaron positivas. Teniendo en cuenta la gravedad y diseminación de la enfermedad el porcentaje es alarmante, lo que nos da una idea de la despreocupación que existe en los municipios por evitar el contagio de sus ejemplares y por establecer medidas de control. Estudios realizados en años anteriores sobre la Anemia Infecciosa Equina en Colombia, como lo señala Ramírez en 1973, establece una prevalencia de 33% en el departamento de 37 Santander, 24.8% en el Meta, 18.8% en Cundinamarca, 17.5% en Córdoba, 12.6% en el Valle, 11.7% en Antioquia y 10.2% en el Tolima( Ramírez 1973), estos resultados son relativamente altos y teniendo en cuenta que en Casanare es uno de los primeros estudios que se realiza, nos proporciona una visión de la alta positividad de la enfermedad. PORCENTAJE DE MUESTRAS SEROPOSITIVAS 19% SEROPOSITIVOS NEGATIVOS 81% Figura 5. Porcentaje de muestras seropositivas a Anemia Infecciosa Equina (AIE) en el año 2006, en 13 municipios del Departamento de Casanare. Los estudios serológicos realizados sobre AIE, indican que el virus está actuando sobre la población equina en el Departamento del Casanare. El hecho de que gran cantidad de los animales examinados hayan mostrado un resultado positivo en los diferentes municipios, parecería indicar que la infección con el virus de AIE no es reciente, sino que ha venido actuando desde hace algún tiempo, Morales en 1953 afirma que la enfermedad “probablemente traída de Venezuela, existe desde hace mucho tiempo entre nosotros”. Además, la enfermedad podría estar distribuida en todo el Departamento. Otros estudios realizados en el país muestran igualmente que la enfermedad se encuentra inclusive en otros departamentos, lo que nos puede indicar que se encuentra distribuida en todo el país. (P. Sarmiento 2005). El porcentaje de animales seropositivos encontrados tras el análisis 38 de las muestras, aparece resumido por municipios en la Tabla 2. Los porcentajes de positividad en los municipios analizados muestran una similitud, lo que corrobora la diseminación de la enfermedad en gran parte del departamento. Sin embargo algunos municipios como Pore, Aguazul, Tauramena, Villanueva, y Yopal a pesar de tener una gran cantidad de animales seropositivos, porcentualmente no se observan muy elevados, esto podría deberse a la facilidad de diagnosticar y controlar la enfermedad gracias a la cercanía con Yopal ciudad capital y sede del ICA. En 1988 Jiménez et al.encontraron una prevalencia de 36.7% de reactores positivos en el municipio de Yopal, teniendo en cuenta que han pasado ya casi 20 años de este estudio, en el presente trabajo se encontró un porcentaje menor (17%) probablemente a que los métodos de control de la enfermedad hoy en día son un poco mas rigurosos, sin embargo, la enfermedad persiste, lo que indica que aun se necesitan medidas de control más efectivas. TABLA 2. Animales muestreados y seropositivos a AIE durante el año 2006. MUNICIPIOS ANIMALES ANIMALES MUESTREADOS SEROPOSITIVOS PORCENTAJE Yopal Nunchia 393 144 67 33 17% 23% San Luís de Palenque 424 83 20% Trinidad 470 101 21% Orocue 230 53 23% Monterrey 108 23 21% Villanueva 95 10 10% Mani 334 74 22% Tauramena 277 39 14% Hato Corozal 693 180 26% Paz de Ariporo Pore 825 200 140 19 17% 9% 39 Aguazul 207 32 16% TOTALES 4400 854 18.4% 8.3 Comparación de animales muestreados y seropositivos en cada municipio estudiado. Después de realizar el análisis de las muestras se encontró que el porcentaje de animales positivos no guardaba una relación proporcional con el numero de animales muestreados Figura 6 y 7, de esta forma vale la pena resaltar municipios como Paz de ariporo donde se muestrearon 825 animales y se registro un 17% de seropositividad y también en el municipio de Hato Corozal donde se analizaron 693 pruebas donde se encontró una positividad del 26% constituyéndose en la mas alta concentración dentro de los municipios estudiados. Los resultados que se obtuvieron, se resumen en la tabla 2. los porcentajes de positividad en los municipios muestreados señalan una similitud entre ellos. En la figura dos se observa graficamente la seropositividad de los municipios muestreados. 40 SEROPOSITIVIDAD POR MUNICIPIO ANIMALES SEROPOSITIVOS A guaz ul P ore H ato C oroz al P az de A riporo T auram ena M ani V illanuev a M onterrey O roc ue T rinidad S an Luis de N unc hia Y opal 900 800 700 600 500 400 300 200 100 0 ANIMALES MUESTREADOS Figura 6. Comparación de animales muestreados vs seropositivos al virus de la anemia Infecciosa Equina (AIE) en el año 2006, en 13 municipios del Departamento de Casanare. Porcentaje de Seropositividad por Municipio Yopal 30% Nunchia San Luis de Palenque 25% Trinidad Orocue 20% Monterrey Villanueva 15% Mani 10% Tauramena Hato Corozal 5% Paz de Ariporo Pore 0% Municipios Aguazul Figura 7. Porcentaje de Seropositividad de Anemia Infecciosa Equina (AIE) en 13 municipios del Departamento de Casanare. Para analizar el porcentaje de seropositividad en los municipios mencionados se dividieron estos en tres grupos observados en la tabla.4. En donde 3 de ellos se encuentran dentro del rango de menores al 15 % de seropositividad, 41 esto pudo deberse a que estos municipios son de fácil acceso y cercanos a la ciudad de Yopal, además se realizan controles sanitarios y conferencias educativas gracias al aporte de recursos económicos de las alcaldias municipales. Respecto a los municipios de Aguazul, Paz de Ariporo y Yopal que presentan porcentajes entre 15 % y 20 % puede deberse a la elevada movilizacion que presentan los equinos debido a eventos culturales como ferias y coleos que se realizan en repetidas ocaciones en el año. Por otro lado, en la mayoría de los municipios especialmente en los de acceso retringido Orocue, Nunchìa, Trinidad y Monterrey en donde se encontró el mas alto porcentaje de seropositividad la tasa de analfabetismo es bastante grande, lo cual influye en el desconocimiento de esta enfermedad, generando que los equinos infectados, puedan contaminar facilmente a otros ejemplares. Esto puede sustentarse igualmente en el trabajo realizado por Sarmiento en 2005, donde gracias a campañas educativas realizadas, se evidenció el completo desconocimiento de la enfermedad por parte de la población en general. Los implementos utilizados en el manejo de los ejemplares no se tratan con la suficiente asepsia en las zonas para evitar el contagio. TABLA 3. Porcentaje de Seropositividad de Anemia Infecciosa Equina (AIE) en los municipios estudiados. Menores al 15% Pore Tauramena Villanueva Entre 15% y 20% Aguazul Paz de Ariporo Yopal San Luis de Palenque Superior al 20% Nunchìa Trinidad Orocue Monterrey Porcentaje 9% 14% 10% Porcentaje 16% 17% 17% 20% Porcentaje 23% 21% 23% 21% 42 8.4 Análisis de muestras seropositivas según sexo Muestras Seropositivas Segun Sexo 500 Muestras 400 Numero de Muestras seropositivas 300 200 100 0 HEMBRAS MACHOS Figura 8. Muestras Seropositivas a Anemia Infecciosa Equina (AIE) según sexo. En la figura 8 se observan los resultados de las muestras seropositivas según sexo encontrados en los 13 municipios del Departamento de Casanare, se observa un mayor porcentaje de hembras que machos seropositivos en los predios, esto se puede encontrar sustentado en que los ejemplares hembras, además de ser utiles para las labores rutinarias de trabajo de llano, son vientres disponibles para la reproducción, entonces el número de yeguas que tiene cada macho es mayor y este si está, infectado con el virus, puede contagiar las hembras durante el servicio, diseminándose la infección a todas las hembras que son utilizadas para apareamiento. Sin embargo en el estudio realizado por sarmiento en el 2005 (P sarmiento 2005), se encontró que la relación entre machos y hembras seropositivas era igual, lo que corrobora que los dos sexos son igualmente susceptibles a padecerla. 43 8.5 influencia de vectores El departamento de Casanare en general presenta llanura aluvial, está conformada, a su vez, por sabanas inundables, bosques de galería en los grandes ríos Pauto, Cusiana, Casanare, y llanura eólica en el centro y sur, por tanto, la presencia de insectos voladores que puedan actuar como vectores de transmisión de la AIE es bastante alta y la incubación misma del virus es fácil (Almanza 1994), al tener una humedad constante y alta siendo posiblemente elevada en la temporada lluviosa que comprende la mayoría del año desde abril hasta octubre. Estas características hacen que la presencia de equinos positivos en el departamento sea confirmada. Sin embargo, al no tener datos de la positividad de los 6 municipios no estudiados, no se puede asegurar que estos estén exentos de la enfermedad. 8.6 Observación de sintomatología Autores como Cartemper opinan que la AIE es una enfermedad caracterizada por una variedad de síntomas y el tiempo de incubación varia de 5 a 45 días y en oportunidades hasta varios meses. No se logro observar formas de presentación clínica específica para AIE en los equinos muestreados. Debido a que la mayoría de los ejemplares no mostraban estado nutricional aceptable, observándose delgados y descuidados, posiblemente ligado a factores como el desarrollo de pastos pobres nutricionalmente, pocas fuentes de agua disponible, altas temperaturas y arduo trabajo al que son sometidos diariamente. Además el pasto que generalmente se encuentra en las extensas sabanas del departamento, es de la especie Brachiaria decumbens, muy utilizada por los ganaderos gracias a sus resultados nutricionales en la ceba de ganado; 44 pero desafortunadamente este pasto amargo no es apetecido por los equinos gracias a su poca palatabilidad (Martin & Concelion, 1993). Por este motivo los equinos gastan bastante energía y tiempo en la búsqueda de pasturas, agua y sombra. 8.7 Análisis del Mapa de riesgos La introducción en el sistema de salud de diversos software para computadoras como el sistema de información geográfica, el cual se utilizo en este trabajo, permitió analizar la información en forma de mapa lo que facilito la comprensión de la distribución espacial de la enfermedad. Para planificar las actividades de prevención y control de las distintas enfermedades, factores de riesgo o eventos de salud acorde con la prioridad establecida según los estratos correspondientes y aplicar los recursos disponibles en los lugares mas afectados. Para el análisis de la información cargada al SIG en el mapa de riesgo Anexo (ver anexos), Se procedió a la estratificación por colores en los puntos donde se encontraron los predios positivos para AIE tomando los siguientes parámetros: Puntos verdes: Predios con por lo menos 1 ejemplar positivo. Muy bajo nivel de riesgo. Puntos azules: Predios con por lo menos 2 ejemplares positivos. Bajo nivel de riesgo. Puntos amarillos: Predios con 3 a 4 ejemplares positivos. Medio nivel de riesgo. Puntos naranjas: Predios con 5 a 9 ejemplares positivos. Alto nivel de riesgo. Puntos Rojos: Predios con 10 a 36 ejemplares positivos. Critico nivel de riesgo. 45 Si se observa el comportamiento de la enfermedad en las muestras analizadas reflejadas en el mapa de riesgos, se puede constatar que en cada municipio hay diferencias marcadas en cuanto a su distribución, en donde se encuentran predios con bajo nivel de riesgos (puntos verdes) como Aguazul, Villanueva, y Tauramena pero gran numero de predios positivos, lo que indica una amplia distribución de la enfermedad en estos municipios. Los restantes tienen una distribución relativamente menos homogénea y presentan puntos críticos de alto riesgo como en los municipios de Nunchia, Paz de Ariporo y Hato corozal. Atendiendo a la distribución de la enfermedad en los 13 municipios del departamento de Casanare, se puede plantear que las áreas de salud que mas problemas presentan es en los municipios donde el acceso es restringido como Nunchia, Hatocorozal, Paz de Ariporo, Orocue, posiblemente debido a que en estos municipios las vías de acceso a los predios y el orden publico es alterado por grupos al margen de la ley que impiden el ingreso de las autoridades competentes, por lo que resulta de interés realizar un análisis integral de la situación de salud en estos municipios con el fin de hallar un método de control. Por otro lado, se observa que existen predios con bajo nivel de riesgo muy cercanos a los que presentaron niveles críticos de riesgo (puntos rojos) en los municipios de Nunchia y Trinidad; esto revela que existen gran cantidad de ejemplares reactores positivos y se encuentran muy cerca de animales negativos, teniendo una constante probabilidad de contagio y por lo tanto de diseminación de la enfermedad. Considerando que es la primera vez que se hace un estudio de esta magnitud sobre la enfermedad en el Casanare, el alto porcentaje de equinos seropositivos encontrados hace suponer que la AIE es un serio problema en los municipios y en el resto del departamento. 46 Por lo antes expuesto es necesario continuar estas investigaciones en otras regiones, ya que los trabajos realizados que se han llevado a cabo en el país, llevan varios años y se convierte en una necesidad actualizarlos, con el fin de aumentar las actividades orientadas al aislamiento de su agente causal, a fin de que se pueda implementar una medida preventiva, la cual es la forma más efectiva para su control. Por el momento es necesario acatar las normas y reglas establecidas por las autoridades sanitarias. 9. CONCLUSIONES Con base en los resultados obtenidos se puede deducir, que en los predios equinos ubicados en los 13 municipios muestreados del departamento de Casanare, existe la presencia del virus de la Anemia Infecciosa equina, y está ampliamente distribuida en los municipios, con mayor seropositividad cuyo acceso es restringido. Después de analizar las muestras se encontró que el porcentaje de animales seropositivos no guardaba una relación proporcional con el número de animales muestreados. Se encontraron más hembras seropositivas que machos y no se observo sintomatología relacionada con el virus AIE. Los predios con nivel de riesgo crítico se encontraron en los municipios de Orocue, Nunchia, Hatocorozal y Paz de Ariporo. Los mapas de riesgo son una buena herramienta para obtener una ayuda visual sobre la enfermedad. Para este trabajo se pudo realizar el mapa, el cual es de gran utilidad y ayuda a la comprensión de la distribución de la enfermedad. 47 10. RECOMENDACIONES • Determinar la prevalencia de anemia infecciosa equina en el Departamento de Casanare. • Realizar control interno y mayor control en rutas y en lugares de concentración de caballos (cabalgatas, ferias, mangas de coleo, pesebreras, etc). Destinar mayores recursos para ejercer este control. Hacer participar a los Municipios (Direcciones de Ganadería, Umatas, etc) y municipalidades en el plan de control de la enfermedad (AIE). • Difundir entre los productores información sobre la forma de transmisión de la enfermedad y su respectivo control. • Hacer mayor difusión de la Industria del Caballo y su potencial económico. • Difundir entre los productores cómo se transmite y cómo se controla la AIE a ese nivel. • Establecer una unidad de Vigilancia Operativa, que se pueda usar para controlar rutas, acompañada de folletos o documentos educativos. • Participación de los veterinarios acreditados en el control de AIE (documentación) en eventos de coleo, ferias, pesebreras, etc. • Definir un proyecto de trazabilidad, con programas controlados, orientados y dirigidos con recursos para el recambio de positivos por negativos. • Posibilidad de que el ICA difunda información a los Colegios y Direcciones de Ganadería. • Lograr mayor apoyo del sector privado para lograr un control efectivo de la enfermedad. • Establecer la obligatoriedad del uso del Documento Único (carnet) que acredite propiedad y sanidad en todas las actividades ecuestres. • Solicitar los Controles Sanitarios en las rutas. • Solicitar a las autoridades del ICA que exija a las Municipalidades que comuniquen, con 20 días de anticipación, la realización de eventos de coleo, cabalgatas y Fiestas de Tradición. • Reunirse en 180 días para evaluar qué se pudo aplicar, qué se puede modificar, etc. 48 11. BIBLIOGRAFÍA • Almanza Jorge, 1994, la Anemia Infecciosa Equina, revisión de literatura. Revista del CEISA, vol 1 1994. • Barlatay,H.L..1990. Anemia Infecciosa Equina, su prevalencia en el nordeste de la provincia de Corrientes. Publ.Soc.Rural Ctes.Nº9:2-3. • Babiuk, A. Y T.Mirsa, 1981: Levamisol and Bovine Immunity in vitro and in vivo Effects in Inmune Response to Herpes Virus Inmunization, Canadian Journal of Microbiology, Canada, 27: 1312−1319. • Bonham-Carter, G. (1994). Geographic Information Systems for Geoscientists. Ed. Pergamon, 398 PP. Ontario • Bosque Sendra, Joaquín. 1994. Sistemas de información geográfica. Madrid: Ra-Ma, Librería y Editorial Microinformática, pp 34-39. • Brunner, T. Y C. Muscoplat: Inmunomotulatory 1980. Effects of Levamisol, Journal of the American Veterinary Medical Association, USA, 176. 1159− 1169. • Coggins,L.;Nocross,N.L.;Nusbaum,S.R. 1972. Diagnosis of equine infectious anemia by inmunodiffusion test . American Journal of veterinary Research 33 (1): 11-18 • Castillo-Salgado C. Estratificación epidemiológica de la malaria en la región de las Américas. Mem Inst Oswaldo Cruz, 1993. • Carpenter,S.;Evans,L.H.;Sevoian,M.;Chesebro,B. 1987. Role of the host immune response in selection of equine infectious anemia virus variants. J.Virol. (61):3783-3789. • Dahlberg J. 1988 An overview of retroviruses replication and classification. Adv Vet Sci Comp Med; 32: 1-35. • Dietrich U. 2001,HIV-1 entry inhibitors. AIDS Rev, 3:4-12 49 • Gaskin,J.M.;Neal,F.C.;Rubin,H.L. 1977. Equine antibody to bovine serum by several equine vaccinesas a source of extraneous precipitin lines in the Agar Gel Immunidiffusion test for Equine Infectious Anemia. Amer.J.Vet.Res.,38 • (3):373-377 • Heisecke,S..1993. Anemia Infecciosa Equina: Signos clínico, transmisión y procedimientos diagnósticos.1º Parte. Therios, Vol.22 (107):136-143. • Issel,Ch.J.;Cook,F.R. 1993. A review of techniques for the serologic diagnosis of equine infectius anemia. Journal of Veterinary Diagnostic Invest. 5 (1):137-141. • Issel,C.J.; Foil,L.D. 1999. Transmission of retroviruses by arthropods. Annual Review of Entomology 36:355-381 • Jacobo,R.A.;Barlatay,H.L.;González,J.A..1989. Anemia Infecciosa Equina: Estudio serológico en nueve departamentos de la provincia de Corrientes. Vet.Arg.,Vol.VI (58):532-535. • Jacobo,R.A.;Macarrein,O.H.;González,J.A.;Storani,C.A.;Yáñez,E.A..19 92. Anemia Infecciosa Equina: Manejo sanitario en una epizootia. Correo Veterinario, Abril 1992:10-12. • Jacobo,R.A.; Anderson,L.O.; Storani,C.A.; Stamatti,G.M.; Cipolini,M.F. 2000. Diagnóstico serológico de brucelosis bovina: Variaciones de resultados postvacunales. Revista Veterinaria-FCV-UNNE. • Jacobo,R.A.; Storani,C.A.; Miranda,A.O.; Stamatti,G.M.; Cipolini,M.F.; Resoagli,J.P.; Deco,M.E.; Alfonzo,D.I.; Juri Chagra,G. Anemia Infecciosa equina en la región noroeste de la provincia de Corrientes. Com.Cient. y Tecnol. De la SGCyT-UNNE. Octubre 2001. • Jiménez, R. 1988. prevalencia de anemia infecciosa equina mediante la prueba de Coggins ene l municipio de Yopal, Casanare. Tesis de grado Med.Vet. Universidad Nacional de Colombia. Bogotá col. • Martin-Rosset, W. Concellón, A.1993 “Alimentación de los caballos” Aedos Editorial 75-89. 50 • Martínez Casasnovas, José Antonio. Cuaderno de prácticas de sistemas de información geográfica y teledetección. Parte I. Teledetección. Lleida: Martínez Casasnovas, 1995. • Morales, C.E. 1953. Anemia infecciosa equina en Colombia. Rev.Fac. Med. Vet. Y Zoot. Universidad Nacional de Colombia. 21 (106) 147170 • Oliva,G.A.;Etcheverrigaray,M.E. 1982. Reacciones inespecíficas en la prueba de Coggins para Anemia infecciosa equina .Rev. Med. Vet.,Vol.63 (2):83-89. • Orrego Uribe,A..1999.El diagnóstico de la Anemia infecciosa equina. Vet. Arg., Vol.XVI (156):458. • Overbaugh J, Miller A, Eiden M.2001 Receprot and entry cofactors for retroviruses include singe and multiple transmembrane-spanning proteins as well as newly described glycophosphatidylinositolanchored and secreted proteins. Microbiol and Mol Biol Rev; 65: 37189 • Parra, R, Marulanda, S, 1997. Sistemas de Información Geográfica, base de la gestión ambiental. Universidad Nacional Sede Medellín. Bogotá, 958-628. • P. Sarmiento, M. Quijano-Pinzón. 2005 Prevalencia Del Virus De La Anemia Infecciosa Equina (Aie) En Dos Poblaciones De Caballos De Trabajo De Los Departamentos Del Chocó Y La Guajira, UNIVERSITAS SCIENTIARUM Vol. 10, N° 2, 55-60. • Ramirez, J. 1973. Anemia infecciosa equina en Colombia. Tesis M.Sc. programa de graduados Instituto Colombiano Universidad Nacional de Colombia. Bogotá. 80 p. 51 Agropecuario. ANEXOS PROTOCOLO RECEPCIÓN DE MUESTRAS INSTITUTO COLOMBIANO AGROPECUARIO CENTRO DE DIAGNOSTICO VETERINARIO KILÓMETRO 1 VÍA PAZ DE ARIPORO RECEPCIÓN DE MUESTRAS PARA ANEMIA INFECCIOSA EQUINA FECHA ---------------------------------------------------- Nº DE ORDEN-------VEREDA MUNICIPIO ---------------------------------------------------- ---------------------------FINCA PROPIETARIO ---------------------------------------------------- CEDULA ----------------------------------------------------- Nº DE MUESTRAS --------------------------------------------------- --------------------------TELÉFONO ------------------------M.V. -------------------------- IDENTIFICACIÓN PROPIETARIO EDAD 52 SEXO COLOR RAZA RESULTADOS ANEXO 2 MAPAS DE RIESGOS DE LA ENFERMEDAD 53 ANEXOS 54 55 56 57